胃癌miRNAs表达谱及胃癌组织miR-21表达临床意义探讨

目的:筛选胃癌miRNAs表达谱,探讨miR-21在胃癌组织中的表达情况及其临床病理意义.方法:收集手术切除新鲜胃癌标本共65例,包括胃癌组织及相应胃正常上皮组织,随机选取其中6例,应用miRNA芯片技术研究胃癌的miRNAs表达谱.采用实时定量PCR验证芯片结果并检测miR-21在65例胃癌组织标本及相应胃正常上皮组织的表达水平,探讨其表达与胃癌临床病理参数间的关系.结果:与胃正常上皮组织相比,胃癌组织中表达上调超过2倍的miRNAs有7个(miR-374b*、miRPlus-E1212、miR-338-5p、miR-297、miR-21、miR-135b和miR-18a),表达下调超过2倍的miRNAs有9个(miR-29b-2*、miR-1260、miRPlus-E1241、miR-S1-5p、miR-148a、miR-29c、miR-647、miR-196b×和ebv-miR-BART5).46例(70.8％)胃癌组织中miR-21表达水平明显高于胃正常上皮组织,且与肿瘤的分化程度(x2=6.257,P=0.012)、浸润深度(x =5.705,P=0.017)和有无淋巴结转移(x2=7.107,P=0.008)有关.结论:筛选出的差异表达miRNAs可能参与胃癌的发病;miR-21与胃癌生物学行为密切相关,可能成为胃癌诊断和治疗的潜在生物学指标.     

miR-93-5p和miR-27a-3p在直肠癌组织中的表达及其意义

目的 探讨在直肠癌组织中呈现出特异性表达的miRNA与临床病理分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移等参数之间的关系及其可能的意义。方法 用微阵列基因芯片技术分析未经任何术前放化疗的71例直肠癌患者癌组织与癌旁组织间miRNA表达的区别,筛选出上调的miR-93-5p和下调的miR-27a-3p,扩大样本量后进行qRT-PCR验证,随后进行多种临床病理参数分析并探讨其可能存在的意义。结果 miR-27a-3p的表达在芯片检测中呈现出低表达,但在PCR验证时呈现出了高表达,且数据较为离散;miR-93-5p在两种检测方法中均显示出高表达的特性(癌组织表达量是癌旁组织的3.165倍,P=0.006),并与肿瘤体积(P=0.004)、治疗前癌胚抗原水平(P=0.001)及淋巴结转移数目(r=0.534,P=0.005)具有相关性,其中与治疗前癌胚抗原水平及淋巴结转移阳性组受侵数目存在正相关。结论 在直肠癌组织中存在特异性表达的miRNA。根据miR-93-5p和miR-27a-3p在直肠癌组织中的表达特点,miR-93-5p有望作为新型生物标记物,为直肠癌的临床诊疗提供参考价值。     

结肠癌组织和癌旁组织miRNA表达谱研究

目的探讨结肠癌癌组织和癌旁组织中miRNA的表达差异,寻找潜在的结肠癌特异表达谱。方法miRNA表达芯片检测手术切除未发生转移的原位结肠癌组织和癌旁组织标本中miRNA表达水平,并采用Real-time PCR对差异表达的miRNA进行验证。结果miRNA表达芯片分析发现肿瘤细胞中24种miRNA表达下调,27种表达上调。miR-145、miR-143在癌组织中表达显著下调,miR-451在癌组织中表达显著上调,并被Real-time PCR方法进一步证实。结论结肠癌癌组织和癌旁组织中miRNA的表达存在差异,miR-145、miR-143在结肠癌组织中表达下调,miR-451表达上调,结肠癌组织具有特异miRNA表达谱,可作为结肠癌潜在诊断芯片进行开发。     

鼻咽癌相关成纤维细胞miRNA表达差异

[目的]研究人鼻咽癌微环境癌相关成纤维细胞(CAF)与正常成纤维细胞(NF) miRNA表达的差异.[方法]运用1型胶原酶消化法处理正常鼻咽黏膜组织标本,原代分离培养NF细胞,与TGF-β1共孵育后获得鼻咽癌CAF细胞;利用Transwell实验比较CAF与NF细胞的侵袭能力;利用miRNA芯片分析CAF与NF细胞miRNA表达的差异.[结果]成功分离得到原代培养的CAF与NF细胞,与NF细胞相比,CAF细胞的侵袭能力明显增强;miRNA芯片分析结果显示,CAF有13个异常表达miRNA (P＜0.05),其中miR-221-5p、miR-155、miR-210上调表达,10个下调表达(miR-205、miR-200b、miR-342-3p、miR-329、miR-487a、miR-455-3p、miR-301a、miR-652、miR-432、let-7g).[结论]人鼻咽癌微环境CAF的miRNA表达谱发生显著变化.     

miR-6883-3p靶向CHD1L抑制肝癌细胞的恶性表型

目的:寻找可靶向调控恶性肿瘤相关染色质解旋因子CHD1L的miRNAs分子,确证该调控模式对肝癌细胞恶性表型的影响。方法:通过生物信息学分析预测并筛选可靶向结合CHD1L的miRNAs,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）及蛋白印迹分析（Western Blot）方法验证所筛选的miRNAs 对肝癌细胞CHD1L表达的影响,明确可转录后调控CHD1L表达的关键miRNA分子;qRT-PCR检测肝癌组织中miRNAs和CHD1L的表达,并对其表达进行相关性分析;MTS、细胞划痕、Transwell迁移实验验证目标miRNA分子对肝癌细胞恶性表型的影响。结果:生物信息学分析结果显示miR-6883-3p可显著下调肝癌细胞CHD1L表达。双荧光素酶报告实验检测结果证明miR-6883-3p可直接靶向结合CHD1L 3' UTR端。临床肝癌组织样本qRT-PCR检测及统计学分析结果显示CHD1L高表达于肝癌组织,而miR-6883-3p则高表达于癌旁组织,二者表达呈负相关。miR-6883-3p 模拟物（mimic）可明显抑制肝癌细胞增殖、促进细胞凋亡、抑制细胞迁移;而miR-6883-3p抑制剂（inhibitor）可显著促进肝癌细胞增殖、促进细胞迁移。 与对照组（Mock）相比,miR-6883-3p mimic组肝癌细胞内ALB表达则随着CHD1L表达的下调而增加,HNF-4α及AFP随着CHD1L表达的下调而减少,反之亦然。结论:miR-6883-3p通过靶向调控CHD1L表达,抑制肝癌细胞的恶性表型。     

miR-658和miR-492的差异表达与宫颈鳞状细胞癌盆腔淋巴结转移的关系

目的 寻找宫颈鳞癌盆腔淋巴结转移相关的microRNAs。方法 采用Affymetrix miRNA 4.0 芯片筛查宫颈鳞癌淋巴结转移组（n=8）和未转移组患者（n=16）癌组织中差异表达的microRNAs;并选择表达差异较大的2种microRNAs,采用实时定量RT-PCR法进行验证。结果 miRNA芯片筛查出两组间有5个microRNA存在差异表达,分别为miR-5585-3p、miR-6735-5p、miR-8073、miR-658和miR-492。且淋巴结转移组均为表达上调,其中以miR-658和miR-492的上调倍数最大,分别为4.24和5.43。实时定量RT-PCR检测miR-658和miR-492组间差异与miRNA芯片筛查结果基本一致。结 论 miR-658和miR-492表达上调可能与宫颈鳞癌盆腔淋巴结转移有关。     

小鼠支气管肺泡干细胞miRNAs表达谱的鉴定

[目的]检测并验证正常成年小鼠肺内支气管肺泡干细胞（BASCs）的miRNAs表达情况。[方法]流式细胞仪分选小鼠BASCs和其对照细胞（CD45-CD31-Sca-1-CD34-细胞）;将分选出的细胞常规提取RNA后,经YM-100（Millipore）微离心过滤柱抽提小于300核苷酸长度的小RNA;微阵列法检测BASCs和其对照细胞的miRNAs表达谱,筛选出差异miRNAs;构建miRNAs特异性TaqManMGB探针,qRT-PCR法验证所选差异miRNAs在两种细胞的表达。[结果]微阵列法检测显示BASCs和对照细胞有116个miRNAs的表达有显著性差异（P〈0.01）,其中有56个miRNAs在BASCs高表达,60个miRNAs在BASCs低表达。在这些差异miRNAs中选取了10个与细胞周期、干细胞分化、肿瘤发生相关的miRNAs,通过qRT-PCR法检测其在BASCs和对照细胞中的表达,qRT-PCR的检测结果与miRNAs芯片检测结果一致。[结论]研究通过微阵列法鉴定了小鼠BASCs的miRNAs表达谱,与对照细胞相比,发现116个miRNAs的表达具有显著性差异（56个高表达,60个低表达）。     

miR-1301-3p与甲状腺乳头状癌中央区淋巴结转移的相关性探讨

目的:研究miR-1301-3p在甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma,PTC）中表达的变化,分析miR-1301-3p与PTC中央区淋巴结转移的关系。方法:选取2018年08月至2019年08月在我院诊断为“甲状腺肿瘤”的患者60例,其中PTC 30例。qRT-PCR检测miR-1301-3p在良、恶性肿瘤组织,及PTC术前、术后血清中的表达。分析miR-1301-3p与中央区淋巴结转移的关系。ROC曲线分析miR-1301-3p对甲状腺肿瘤、中央区淋巴结是否转移的诊断价值。结果:miR-1301-3p在PTC组织中表达降低（P＜0.000 1）,在PTC患者术后血清中表达上升(P=0.045 5)。超声对甲状腺肿瘤的诊断效能为0.726（CI:0.627~0.810,P＜0.001）;miR-1301-3p对甲状腺肿瘤的诊断效能为0.788（CI:0.695~0.864,P＜0.001）;miR-1301-3p联合超声对甲状腺肿瘤的诊断效能为0.827（CI:0.738~0.895,P＜0.001）。miR-1301-3p在有中央区淋巴结转移的PTC中表达降低。超声对中央区淋巴结是否转移的诊断效能为0.571（CI:0.410~0.723,P=0.033 9）;miR-1301-3p对中央区淋巴结是否转移的诊断效能为0.813（CI:0.662~0.916,P＜0.001）;miR-1301-3p联合超声对中央区淋巴结是否转移的诊断效能为0.872（CI:0.733~0.955）,P＜0.001）。结论:miR-1301-3p在PTC组织中表达降低,与中央区淋巴结转移相关;miR-1301-3p可提高超声对甲状腺肿瘤、中央区淋巴结是否转移的诊断效能,可能为PTC潜在的肿瘤标志物。     

miR-142-5p靶向转录因子YY1调控非小细胞肺癌上皮间质转化

目的:探究miR-142-5p靶向转录因子YY1调控上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）抑制非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞体外转移的机制。方法:qRT-PCR检测肺癌细胞系中YY1和miR-142-5p表达水平;利用生物信息学软件预测并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-142-5p与YY1的结合位点;Transwell实验和划痕愈合实验分析YY1和miR-142-5p过表达对肺癌细胞迁移、侵袭的影响;Western blot与qRT-PCR检测各组细胞内EMT相关蛋白的表达变化。结果:YY1在不同肺癌细胞系中均表达上调,miR-142-5p表现为表达下调;双荧光素酶报告基因实验结果进一步验证了YY1与miR-142-5p的靶向结合相关性;抑制miR-142-5p表达水平能显著提高细胞中YY1表达,而miR-142-5p过表达能显著抑制肺癌细胞中YY1的表达水平,两者表达水平呈负相关;Transwell和划痕实验表明,YY1过表达能够促进肺癌细胞转移,而miR-142-5p过表达会抑制肺癌细胞转移;YY1过表达促进EMT相关蛋白的表达,而miR-142-5p作用相反。结论:miR-142-5p负向调控YY1作用于EMT相关分子表达,进而在体外抑制NSCLC细胞的转移。     

hsa＿circ＿0006404、miR-151-3p在胰腺癌组织中表达及其临床诊断价值

目的 探讨胰腺癌组织中hsa＿circ＿0006404(circFOXO3)、微小RNA(mir)-151-3p表达水平及其与临床病理特征的关系,以及血清circFOXO3、miR-151-3p诊断胰腺癌的效能。方法 以行手术治疗的100例胰腺癌患者为PC组,对照组为90例体检健康者。采用qRT-PCR技术检测癌组织及血清中circFOXO3、miR-151-3p表达变化,并分析与其临床病理特征的关系;比较血清miR-151-3p、circFOXO3诊断胰腺癌的效能。Pearson法分析circFOXO3与miR-151-3p的相关性。结果 癌组织中circFOXO3表达水平(0.72±0.14)显著低于癌旁组织(1.01±0.17),miR-151-3p表达水平(1.89±0.36)显著高于癌旁组织(1.03±0.15)(P<0.05);低分化、Ⅲ期、淋巴结转移的胰腺癌癌组织circFOXO3表达水平低于中高分化、Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移者,而miR-151-3p表达水平高于中高分化、Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移者(P<0.05)。PC组血清circFOXO3表达水平(0.76±...