地黄饮子含药脑脊液对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤即早基因c-fos和c-jan表达的影响

目的 探讨古方地黄饮子对β淀粉酶Aβ25-35所致PC12细胞损伤时即早基因c-fos和c-jun表达的调控作用.方法 把离体培养的进入对数生长期的PC12细胞分为空白组、模型组、VitE脑脊液对照组、地黄饮子脑脊液低、中、高剂量组,待24h细胞贴壁后吸去培养液,6组分别加入正常培养液、正常脑脊液、VitE脑脊液、地黄饮子脑脊液低、中、高剂量,加培养液补至等量,37℃孵育2h.然后除正常组加入等量培养液外,其他各组加入经老化处理的Aβ25～35(终浓度为10μmol/L),继续孵育24h,然后离心收集细胞,提取总RNA.应用RT-PCR二步法和琼脂糖凝胶电泳方法测定c-fos和c-jun基因的表达.结果 地黄饮子能下调c-fos和c-jun基因的表达,并呈一定的剂量依赖性.结论 地黄饮子脑脊液能明显降低PC12细胞受Aβ25～35刺激时即早基因c-fos和c-jun的过度反应,说明地黄饮子能提高PC12细胞对外界不良刺激的应激性.     

地黄饮子含药脑脊液对Aβ25—35诱导PC12细胞损伤即早基因c—fos和c—jun表达的影响

目的探讨古方地黄饮子对β淀粉酶Aβ25~35所致PC12细胞损伤时即早基因c-fos和c-jun表达的调控作用。方法把离体培养的进入对数生长期的PC12细胞分为空白组、模型组、VitE脑脊液对照组、地黄饮子脑脊液低、中、高剂量组,待24 h细胞贴壁后吸去培养液,6组分别加入正常培养液、正常脑脊液、VitE脑脊液、地黄饮子脑脊液低、中、高剂量,加培养液补至等量,37℃孵育2 h。然后除正常组加入等量培养液外,其他各组加入经老化处理的Aβ25~35(终浓度为10μmol/L),继续孵育24 h,然后离心收集细胞,提取总RNA。应用RT-PCR二步法和琼脂糖凝胶电泳方法测定c-fos和c-jun基因的表达。结果地黄饮子能下调c-fos和c-jun基因的表达,并呈一定的剂量依赖性。结论地黄饮子脑脊液能明显降低PC12细胞受Aβ25~35刺激时即早基因c-fos和c-jun的过度反应,说明地黄饮子能提高PC12细胞对外界不良刺激的应激性。     

地黄饮子对海马神经元AD模型细胞凋亡的调控作用

目的 :探讨古方地黄饮子含药脑脊液对 β 淀粉样蛋白 (Aβ2 5～ 35)所致海马神经细胞AD(Alzheimer’sDisease)模型凋亡基因bcl 2、bax和caspase 3表达的影响。方法 :运用中药脑脊液药理学的方法把体外培养成熟的大鼠海马神经细胞分为空白组、模型组、VitE对照组、地黄饮子脑脊液低、中、高剂量组。 6组分别加入正常培养液、正常脑脊液、VitE脑脊液、中药脑脊液低、中、高剂量 ,继续孵育 2h。然后除空白组加入等量培养液外 ,其它各组加入经老化处理的Aβ2 5～ 35(终浓度为 1 0 μmol/L)共同孵育 2 4h ,胰蛋白酶消化 ,离心收集细胞 ,提取总RNA。应用RT PCR和琼脂糖凝胶电泳方法测定bcl 2、bax和caspase 3基因的表达。结果 :地黄饮子脑脊液能剂量依赖性地增强受损海马神经元bcl 2基因的表达 ,降低bax和caspase 3基因的表达。说明对Aβ2 5～ 35所致离体海马神经细胞凋亡有抑制作用 ,其作用机理可能与地黄饮子升高bcl 2 /bax的比值 ,抑制线粒体释放细胞色素C ,控制caspase 3的激活有关     

加减地黄饮子对糖尿病大鼠海马CA1区神经元c-fos表达的影响

目的:观察加减地黄饮子对糖尿病大鼠海马CA1区神经元c-fos表达的影响。方法:腹腔内注射链脲佐菌素(STZ)制作糖尿病大鼠模型,于造模4周后以免疫组化法观察加减地黄饮子对糖尿病大鼠海马CA1区神经元c-fos表达的影响。结果:加减地黄饮子防治组大鼠海马CA1区神经元c-fos阳性细胞密度和平均光密度(8.13±1.70,0.46±0.08)较糖尿病组(9.25±2.36,0.56±0.06)均降低(P<0.05)。结论:加减地黄饮子可以有效防治糖尿病大鼠海马神经元退行性变化。     

地黄饮子对海马神经元缺氧损伤的保护机制

目的 观察地黄饮子(熟地黄、巴戟天、山茱萸、石斛、肉苁蓉等)对缺血缺氧损伤海马神经细胞的保护作用并探讨机制.方法 将培养细胞分为对照组,模型组及药物保护组;其中,损伤组采用Na2S2O4 I mmol/L加低糖作用3h;药物保护组在加入损伤因素同时加入不同浓度含地黄饮子血清.通过比色法测定培养液中乳酸脱氢酶含有量(LDH),采用MTT法测定脑海马神经细胞存活率,利用线粒体内琥珀酸脱氢酶(SDH)含有量来分析地黄饮子的保护作用及其作用的有效浓度;测定缺血缺氧损伤下海马神经细胞内超氧化物歧化酶(SOD) 与丙二醛(MDA)含有量.结果 含地黄饮子血清与空白血清比例在1∶3～3∶1之间,均对缺氧神经细胞具有保护作用.降低损伤细胞LDH释放,细胞膜损伤程度减轻.MTT值不同程度升高,提示细胞活力状态提高、细胞能量代谢过程有所改善;地黄饮子可以保护缺血缺氧环境中海马神经细胞内SOD的活力,降低MDA的含有量,而且随剂量的增加而增加.结论 地黄饮子对缺氧损伤脑海马神经细胞有明显保护作用;其作用机制可能与降低氧自由基损伤有关.     

地黄饮子脑脊液对离体神经元AD模型自由基损伤的保护作用及其相关酶的影响

目的 :探讨地黄饮子对β -淀粉样蛋白 (Aβ2 5- 35)诱导体外原代培养海马神经元AD模型自由基损伤的保护作用。方法 :把实验用兔分成三组 ,分别灌胃给服地黄饮子水煎剂 (生药比 :2∶1)、VitE水溶剂和等体积的生理盐水 1h后抽取脑脊液。把离体培养的海马神经元分为 6组 :空白对照组、模型组、VitE组、中药脑脊液低剂量组、中药脑脊液中剂量组和中药脑脊液高剂量组。各组分别加入培养液 10 μl、正常脑脊液 10 μl、VitE脑脊液 10 μl和中药脑脊液低剂量 5 μl、中剂量 10 μl、高剂量 2 0 μl,每组 8孔 ,加培养液补至 10 0 μl,37℃孵育 2h后各组加入经老化处理的Aβ2 5- 35,终浓度为 10mmol·L- 1,空白对照组添加等体积的无血清培养液 ,继续 37℃孵育 2 4h ,然后分别测定细胞培养液中脂质过氧化产物丙二醛 (MDA)含量及超氧化物歧化酶 (SOD)、过氧化氢酶 (CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH -Px)活性 ,观察中药地黄饮子脑脊液对受损神经元抗氧化能力的影响。结果 :地黄饮子能明显降低Aβ2 5- 35诱导的海马神经元细胞培养液中MDA含量 ,提高SOD、CAT和GSH -Px等抗氧化酶活性。结论 :地黄饮子能对抗Aβ2 5- 35诱导的海马神经元自由基损伤 ,表现出对海马神经元一定的保护作用。     

地黄饮子对快速老化小鼠SAMP8学习记忆能力及海马神经元结构的影响

目的研究地黄饮子对快速老化小鼠P8(SAMP8)学习记忆能力及海马组织病理形态的影响,探讨其治疗老年性痴呆的药效及作用机制。方法运用小鼠跳台行为学实验检测地黄饮子对SAMP8小鼠的学习记忆能力的影响;HE染色和电镜观察检测SAMP8小鼠海马形态结构和超微结构。结果模型组SAMP8小鼠跳台实验潜伏期缩短(第1天208.19±65.42,第2天254.76±48.99),与空白组SAMR1小鼠(第1天248.17±27.59,第2天296.35±3.17)比较有非常和/或显著差异(P<0.05,P<0.01)。给药后,地黄饮子组潜伏期(第1天277.06±7.86,第2天295.36±5.17)与模型组(第1天208.19±65.42,第2天254.76±48.99)比较非常显著性延长(P<0.01)。相同组的第2天潜伏期与第1天比较,除模型组以外,其他各组均非常显著延长(P<0.01)。模型组与空白组比较,伴有海马锥体细胞形态结构、超微结构的改变。给药后,地黄饮子减轻SAMP8小鼠的海马病理损伤状况。结论地黄饮子对SAMP8小鼠的学习记忆能力有改善作用。     

地黄饮子对老年性痴呆大鼠记忆功能及神经元计数的影响

目的：观察地黄饮子对老年性痴呆大鼠记忆功能及神经元的保护作用。方法：采用多媒体图文分析系统进行海马CAI区神经元计数；采用大鼠跳台实验来观察地黄饮子对老年性痴呆大鼠记忆功能的影响。结果：地黄饮子可以改善痴呆大鼠的记忆障碍，减少神经元的损伤。结论：地黄饮子对AD有一定的预防和治疗作用。     

地黄饮子含药脑脊液对受损PC12细胞钙离子内流的影响

目的:探讨古方地黄饮子含药脑脊液对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)所致PC12细胞损伤的保护作用.方法:依据中药脑脊液药理学的方法,把PC12细胞分为空白组,模型组,西药对照组,地黄饮子脑脊液低、中、高剂量组六组,分别加入正常培养液、正常脑脊液以及含药脑脊液中,孵育后,加入钙离子荧光剂flou-3/AM负载后,于激光共聚焦显微镜下观察钙离子在细胞内的含量.结果:含有脑脊液各组加入Aβ25-35后虽然荧光强度升高,但荧光强度达到峰值的平均强度与模型组比较明显降低,差异有统计学意义(P<0.01),而且中、高剂量组与西药对照组比较,荧光强度降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论:地黄饮子脑脊液可以降低Aβ引起的钙离子内流.     

地黄饮子含药脑脊液对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤凋亡基因bax bcl-2和caspase-3表达的影响

目的：探讨古方地黄饮子对B淀粉样蛋白（Aβ25-35）所致PC12细胞损伤时凋亡基因bax、bcl-2和caspase-3表达的调控作用。方法：把离体培养的进入对数生长期的PC12细胞分为6组：空白对照组、模型对照组、VitE脑脊液组、地黄饮子脑脊液低、中、高剂量组。待24h细胞贴壁后吸去培养液，分别加入空白培养液、正常脑脊液、VitE脑脊液、中药脑脊液低、中、高刺量，加培养液补至等量，37℃孵育2h。然后除空白组之外的各组加入经老化处理的AB25—35（终浓度为10μmol／L），建立AD细胞模型。空白组加入等量的培养液，继续孵育24h后离心收集细胞，提取总RNA。应用RT-PCR二步法和琼脂糖凝胶电泳方法测定bax、bcl-2和easpase-3基因的表达。结果：地黄饮子能下调bax、easpase-3基因的表达，对bcl-2基因的表达有上调作用。结论：地黄饮子脑脊液能有效降低bax、easpase-3基因表达，提高bcl-2的表达，从而抑制、延迟细胞凋亡过程，阻止细胞凋亡，促进PC12细胞存活。     

广东海风藤提取物对体外培养海马神经元的影响

目的:研究不同剂量广东海风藤提取物(HS_2)对体外培养新生大鼠海马神经元的生长发育的影响。方法:采用体外培养的新生大鼠海马神经细胞,在血清培养液中加入低、中、高剂是HS_2,使之终浓度分别为0.2、1、8mg/ml,通过细胞形态学观察,神经元突起和胞体生长状况的定量比较,不同培养期细胞存活数和培养液中乳酸脱氢酶(LDH)渗漏量的测定,分析研究了HS_2对海马神经细胞生长发育的影响。结果:培养36 h后与对照组比较,中剂量HS_2组海马神经元的突起数目增多,突起长度增加,胞体长径没有显著性变化;低剂量HS_2组与对照组比较,各项指标没有显著差别;高剂量HS_2则明显抑制神经细胞分化。培养4 d、8 d,中剂量HS_2组细胞存活数明显高于对照组,LDH渗漏量明显低于对照组。结论:一定量的HS_2能促进海马神经细胞的生长发育。     

高效液相色谱法测定六味地黄汤中梓醇含量

目的:利用高效液相色谱法分离、测定六味地黄汤中梓醇,完善质量控制方法。方法:用krom asil ODS-1柱(200 mm×4.6 mm)色谱柱,0.5%的乙腈溶液为流动相,检测波长为210 nm,柱温25℃。结果:梓醇在0.0673~1.346μg范围内呈良好的线性关系,平均回收率为97.95%,RSD=0.96%(n=5)。结论:该法方便简便、快速,准确可靠。     

地黄饮子近20年的研究

综述地黄饮子在方剂研究、临床应用研究、实验研究等方面近20年的资料。认为该言应筛选、精简药物,研制成高效、方便的现代新剂型;对该方益智作用的实验研究尚待进一步深入进行。     

补脾通络方对老年大鼠脑组织海马神经细胞线粒体超微结构的影响

目的：观察补脾通络方对老年大鼠脑组织海马神经细胞线粒体超微结构的影响。方法：将72只sD大鼠,随机分为老年对照组、补脾通络方大剂量组、补脾通络方小荆量组、补脾对照组、通络对照组、维生素E对照组,每组12只。补脾通络方大剂量组按2．0g／300g,每天灌胃1次;补脾通络方小剂量组按0．5g／300g,每天灌胃1次;补脾对照组和通络对照组按1．0g／300g,每天灌胃1次;维生素E组按5ml／kg,每天灌胃1次;共60d;老年对照组每天灌生理盐水作对照。结果：补脾通络方大剂量组、通络对照组和维生素E组与老年对照组相比,线粒体比表面有显著性升高（P〈0．05）;补脾对照组、补脾通络方小剂量组与老年对照组相比,线粒体比表面无显著性差异（P〉0．05）;补脾通络方大剂量组与补脾对照组、通络对照组、维生素E对照组相比,线粒体比表面无显著性差异（P〉0．05）。结论：补脾通络方大剂量组、通络对照组和维生素E组可明显改善老年大鼠线粒体肿胀的程度,补脾通络方大剂量组和通络对照组、维生素E组的治疗效果相当。     

穴位埋线对衰老模型大鼠慢性应激下海马神经元结构的影响

目的:通过观察穴位埋线对衰老模型大鼠慢性应激下海马神经元结构的影响,探讨慢性应激对衰老机体的促衰老作用及穴位埋线的抗衰机制。方法:雄性SD大鼠随机分为空白组、衰老组、应激组、埋线组,每组12只。采用D-半乳糖溶液腹腔注射制作衰老模型,采用长期制动应激造成慢性应激,埋线组分别于"百会""肾俞""内关""肝俞"交替埋线8次,1次/周。HE染色,于光镜下对大鼠海马锥体细胞进行计数,并于电镜下观察海马神经元细胞结构的变化。结果:光镜下空白组大鼠海马锥体细胞排列整体密集,形状规则;衰老组大鼠海马锥体细胞排列较稀疏;应激组海马锥体细胞排列稀疏,形态不规则;埋线组大鼠海马锥体细胞排列较密集。衰老组、应激组大鼠海马锥体细胞数量明显少于空白组(P0.05,P0.01),应激组与衰老组相比,其海马锥体细胞数量减少更为显著(P0.01),而埋线组海马锥体细胞数量明显升高(与应激组比较P0.01)。电镜下观察,空白组神经元形态正常,衰老组神经元体积明显缩小,应激组神经元呈现极度不规则形态,埋线组的神经元异常形态得到明显改善。结论:衰老模型大鼠的海马神经元数量和结构呈现增龄性老化现象,慢性应激可加重对海马神经元的损害,加速脑衰老;穴位埋线可拮抗应激性衰老机体海马神经元的进一步损害,从而延缓脑衰老。     

人参皂苷Rb1对缺血大鼠海马神经元持续性钠电流的影响

目的:探讨人参皂甙Rb1对培养的大鼠海马神经元缺血损伤的保护作用。方法:采用全细胞膜片钳技术,观察不同浓度Rb1对大鼠海马神经元缺血后持续性钠电流变化率的影响,并与未用药时持续性钠电流缺血前后电流变化率进行比较。结果:在模拟缺血5min后,持续性钠电流幅度由缺血前的(87.8±10.1)pA变为(169.9±18.4)pA,升高(94.5±4.4)%(P<0.01)。在模拟缺血液中分别加入3种不同浓度(20,60,100μmol.L-1)Rb1,5min后电流变为(147.2±12.9),(140.2±8.9),(110.6±4.6)pA,与缺血前比较分别增加(70.8±4.5)%,(44.6±3.9)%,(49.5±4.2)%(P<0.01),与缺血对照组比较具有显著性差异。结论:人参皂甙Rb1在缺血时可抑制神经元持续性钠电流的增大幅度。     

犀角地黄汤治疗儿童过敏性紫癜45例

以清热凉血为主,采用犀角地黄汤加减治疗儿童过敏性紫癜45例,治愈39例,好转4例,无效2例,有效率95.6%,疗效满意。     

生地黄连液对四氧嘧啶小鼠影响的实验研究

观察生地黄连水煎液对四氧嘧啶小鼠空腹血糖、血清胰岛素、胰腺组织形态等指标的影响。以四氧嘧啶腹腔注射方法模拟糖尿病小鼠 ,并测量空腹血糖、血清胰岛素。结果 ,生地黄连水煎液可明显降低四氧嘧啶小鼠的空腹血糖值(P<0 .0 5 ) ;增加血清胰岛素的分泌量 (P<0 .0 5 ) ;改善胰岛素细胞的形态结构。生地黄连水煎液可显著降低四氧嘧啶小鼠的空腹血糖 ,增加血清胰岛素的分泌 ,并能修复胰岛内分泌细胞。