天花粉蛋白抑制肝细胞癌肺转移的实验研究

目的观察天花粉蛋白(TCS)抑制肝癌肺转移及可能机制。方法应用LCI-D20模型观察荷瘤裸鼠肺转移;采用MHCC97H细胞株观察TCS对瘤细胞粘附、运动及侵袭的干预。结果TCS组肺转移率为41·7%(5/12),对照组为100%(20/20),差别有显著统计学意义(P<0·01)。MHCC97H与纤连蛋白粘附力强,粘附百分比为74·3%。TCS降低粘附力,作用呈剂量依赖性。80μg/ml组粘附率仅相当于干预前的47·8%。MHCC97H运动力强,未干预组穿膜细胞数47·67±4·03/200倍视野。TCS抑制瘤细胞运动,作用呈剂量依赖性。10μg/ml组穿膜细胞数仅相当于干预前的51·0%(24·33±1·50/200倍视野)。MHCC97H侵袭力强,未干预组穿膜细胞数34·90±4·86/200倍视野。TCS抑制瘤细胞侵袭,作用呈剂量依赖性。5μg/ml组穿膜细胞数仅相当于干预前的53·8%(18·77±4·81/200倍视野),抑制明显。结论TCS通过干扰MHCC97H与细胞外基质粘附、抑制MHCC97H运动和侵袭力,减少LCI-D20肺转移。     

激光免疫疗法对小鼠肝癌的抗瘤及免疫效应

我们以小鼠肝细胞癌(H22)为实验对象，以波长630nm激光为光源，以血卟啉(HPD)为光敏剂。以糖基化聚氨基葡糖(GC)为免疫佐剂的激光免疫疗法的抑瘤作用和免疫效应，并探讨其作用机制。     

原发性胆囊癌抑癌基因P53蛋白表达及其意义

目的 探讨抑癌基因Ｐ＾５３蛋白在原发性胆囊癌的表达及意义。方法 采用免疫组织化学方法检测了６０例原发性胆囊癌抑癌基因Ｐ＾５３蛋白的表达。结果 胆囊癌肿瘤细胞Ｐ＾５３蛋白的阳性反应率为３３．３％（２０／６０）,慢性胆囊炎及癌旁正常粘阳性反应率均为０,两者比较差异有显著意义（Ｐ〈０．００５）。结论 Ｐ＾５３蛋白的表达与肿瘤的分化程度有一定的关系,低分化胆囊腺癌中Ｐ＾５３蛋白阳性表达率明显高于高分化腺襄     

榄香烯对小鼠肝癌腹水瘤细胞系Hca-F25/CL-16A3的视网膜母细胞瘤抑癌蛋白及腺病毒E2启动子结合因子表达的影响

目的：探讨榄香烯对小鼠肝癌腹水瘤细胞系Hca-F25/CL-16A3治疗的作用机制。方法：将22只小鼠分成两组，对照组12只，治疗组10只。从荷瘤次日起，治疗组用榄香烯腹腔注射治疗，对照组用生理盐水治疗。20d后取瘤组织用免疫组织化学染色方法观察荷瘤小鼠两组肿瘤组织的视网膜母细胞瘤抑癌蛋白（pRB）和腺病毒E2启动子结合因子（E2F－1）蛋白的表达情况。结果：对照组肿瘤组织pRB阳性率为50％（6／12），用药组阳性率为100％（10／10），两组间差异有显著性（P＜0．05）。对照组和用药组E2F－1均呈阳性表达，表达率均为100％（12／12）和（10／10），两组间差异无显著性（P＞0．05）。结论：榄香烯对小鼠肝癌腹水瘤细胞系Hca-F25/CL-16A3有明显的抑制作用。其作用机制与pRB蛋白表达有关，与E2F－1无关。     

分支杆菌Ag85B蛋白对小鼠膀胱癌抑癌效应的研究

目的:探讨分支杆菌Ag85B蛋白对小鼠膀胱癌的抑癌效应。方法:采用T739 可移植性膀胱癌模型,于移植瘤处局部注射分支杆菌Ag85B蛋白,并用卡介苗(BCG)和生理盐水(NS)作对照,观察治疗后各组的肿瘤重量和存活期。结果:分支杆菌Ag85B蛋白治疗组小鼠肿瘤瘤重(4.12±0.85) g,显著低于NS组(7.01±1.18) g(P<0.01),与BCG组(3.85±1.18) g比较差异无统计学意义(P>0.05),抑瘤率为41.23%;分支杆菌Ag85B蛋白治疗组小鼠存活天数为(28.75±2.71) d,显著长于NS组(23.50±2.45) d(P<0.05),与BCG组的(29.63±3.25) d比较差异无统计学意义(P>0.05),存活延长率为22.34%。结论:分支杆菌Ag85B蛋白对小鼠膀胱癌具有抑制作用,并能延长膀胱癌荷瘤鼠的生存期。     

光动力治疗裸小鼠胰腺移植癌的实验研究

目的 研究光动力治疗（ＰＤＴ）对胰腺癌的治疗效果,为胰腺癌寻找有效的治疗手段。方法 接种人胰腺癌细胞ＳＷ１９９０于裸小鼠皮下,建立移植癌模型,以血卟淋衍生物（ＨｐＤ）作为光敏剂,采用腹腔和瘤内局部注射两种不同方式给药,继以波长６３２．８ｎｍ的Ｈｅ－Ｎｅ激光照射肿瘤局部,观察光动力治疗后肿瘤的生长速度和组织形态学变化,并测定了肿瘤组织内脂质过氧化产物丙二醛（ＭＤＡ）的含量,对其治疗机制进行了初步探讨     

肝癌及癌旁组织中p16的表达及其临床意义

目的 探讨抑癌基因p16在肝癌及癌旁中的表达及意义。方法 应用免疫组化方法对50例肝细胞癌（HCC）及癌旁肝硬化组织（44例）手术切除石蜡包埋标本进行p16基因蛋白表达的测定，结合临床病理指标（Child分级、肿瘤大小、Edmondson分级、转移及生存期）进行分析。结果 p16基因在HCC中的阳性表达48％（24／50），癌旁91％（40／44）。p16基因表达与HCC的分化程度密切相关（p=0.014），在分化Ⅰ-Ⅱ级中P16阳性率59％（19／32）明显高于Ⅲ-Ⅳ级的27.8%（5／18）。结论 p16基因在HCC的发生及分化中起重要的调控作用，且P16的失活可能发生在HCC的早期。     

cyclinD1在膀胱移行细胞癌中的表达及与肿瘤增殖活性的关系

目的：研究cyclinD1在膀胱移行细胞癌（TCC）标本中的表达情况及其与肿瘤增殖活性的关系。方法：应用免疫组织化学SP法检测45例TCC和12例正常膀胱cyclinD1和Ki-67抗原的表达。结果：（1）正常膀胱组织无cyclinD1表达，Ki-67抗原的表达低于TCC（P=0.011)。（2）随着肿瘤分期。分级的增高，cyclinD1阳性率下降（P=0.014,P=0.034);(3)cyclinD1和Ki-67抗原的表达呈负相关（r=-0.4109,P=0.005)。结论：cyclinD1在TCC的早期起重要作用；Ki-67指数能准确地评估TCC的生物学行为，二者可作为TCC有重要意义的肿瘤标志物。     

区域性缺血对裸小鼠胰腺移植癌及癌周胰腺组织的影响

目的　为缺血疗法在胰腺癌的临床应用提供基础研究资料。方法　在建立人胰腺癌细胞株裸小鼠胰腺原位移植瘤模型的基础上 ,结扎荷瘤裸鼠胃十二指肠动脉、胰十二指肠下动脉及背胰动脉 ,诱导胰腺右叶区域性缺血 ,观察缺血对裸小鼠胰腺移植癌生长、移植癌及癌周胰腺组织病理形态学的影响。结果　缺血组移植癌生长缓慢 ,倍增时间延长 ,移植癌体积、癌细胞增殖指数及蛋白含量在术后第 3、7、14天均显著低于对照组 (P <0 .0 1)。光镜下缺血组移植癌呈大片凝固坏死 ,周围有渐进性坏死细胞及炎症细胞浸润 ;癌周胰腺组织腺泡萎缩破坏 ,可见广泛纤维化及淋巴细胞浸润。结论　区域性缺血对裸小鼠胰腺移植癌有确切的杀伤和抑制效应 ,癌周胰腺组织的缺血性改变可能不利于移植癌的生长。     

N—CWS与BCG对小鼠膀胱癌抑癌效应对比观察

ＮＣＷＳ与ＢＣＧ对小鼠膀胱癌抑癌效应对比观察（摘要）李黎明崔吉吉强万明王建宇韩树楠吴明明虞颂庭本课题受天津市２１世纪青年科学基金资助作者单位：３０００５２天津医科大学总医院泌尿外科红色诺卡菌细胞壁骨架（ＮＣＷＳ）是红色诺卡菌的细胞壁提取物，具有增...     

人内皮抑素基因转染对Hep3B肝癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用

目的研究腺相关病毒转染人内皮抑素基因对肝癌细胞体内致瘤作用的影响。方法用含人内皮抑素基因的重组腺相关病毒(rAAV2/ES)体外转染人肝癌细胞Hep3B,以空病毒(AAV2)转染作阴性对照,RT-PCR方法检测ES在mRNA水平的表达。将转染细胞接种裸鼠,通过ELISA方法检测裸鼠血液中人内皮抑素的的浓度。观察内皮抑素对移植瘤的生长抑制作用。结果RT-PCR结果显示腺相关病毒可介导内皮抑素基因高效转染Hep3B细胞;rAAV2/ES转染细胞接种裸鼠后内皮抑素的表达随时间逐渐升高,在第4周达到最高浓度(115·79±8·70)ng/ml;rAAV2/ES转染组8只裸鼠中6只成瘤,成瘤时间为(26·80±6·42)d,明显长于对照组(17·17±4·17)d(P<0·05);对裸鼠移植瘤检测显示瘤体重量和瘤内微血管密度(MVD)分别为(0·36±0·22)g、(3·50±1·05)个/视野,明显低于对照组(1·54±0·48)g、(12·67±1·97)个/视野(P<0·01)。结论腺相关病毒介导人内皮抑素基因转染可有效抑制Hep3B细胞在裸鼠体内的生长。     

反义局部粘着斑激酶抑制肝癌侵袭生长的研究

目的　观察反义局部粘着斑激酶 (FAK)脱氧寡核苷酸 (ODN)转染对Bel740 2肝癌移植瘤侵袭性生长的影响 ,并探讨其作用机制。方法　以LipofectAMINE介导的反义FAKODN转染Bel 740 2肝癌细胞株后 ,于 6只裸鼠双侧颈背部、髋部共 4处皮下接种 ,观察移植瘤生长情况 ,并行肿瘤微血管密度 (MVD)的免疫组织化学检测及MMP2与TIMP2表达的逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)检测。结果　反义FAKODN转染使裸鼠皮下移植瘤的生长受到显著抑制 ,抑瘤率为3 5 .7% ;MVD在反义转染组 ( 9.5 99± 1.2 84)显著低于对照组 [( 13 .915± 2 .618) ,P <0 .0 5 ] ;MMP2表达在反义转染组 ( 0 .199± 0 .0 61)显著低于对照组 ( 0 .42 1± 0 .118) ,TIMP2表达在反义转染组( 0 .461± 0 .15 3 )则显著高于对照组 [( 0 .2 98± 0 .10 4) ,P <0 .0 5 ]。结论　信号转导分子FAK表达阻断可显著抑制Bel 740 2肝癌细胞株在裸鼠体内的侵袭性生长 ,病理性肿瘤血管生成减少及MMP2、TIMP2表达改变与其抗肿瘤作用密切相关。     

人肝癌组织多药耐药特性裸鼠模型的建立

目的　在裸鼠肝脏建立人肝癌组织多药耐药(MDR)模型。方法　用组织学完整的原发性多药耐药人肝癌组织种植于裸鼠肝脏。然后分别用免疫组织化学方法(SP法)和逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)法检测瘤源及裸鼠种植瘤组织中MDR1、LRP蛋白及其mRNA的表达。结果　裸鼠原位种植瘤保持了人肝癌组织MDR特性。瘤源MDR1、LRP蛋白表达分别为3 1.2 6%和2 7.18% ;其mRNA量分别为61.47%和5 6.71%。裸鼠种植瘤MDR1、LRP蛋白表达分别为(2 9.2 0±2 .81) %和(2 5 .44±2 .43 ) % ;其mRNA量分别为(65 .42±13 .5 9) %和(5 8.63±9.3 7) % ,两种组织中MDR1、LRP蛋白及其mRNA表达量差异无统计学意义(P >0 .0 5 )。结论　人肝癌组织裸鼠原位种植瘤可保持瘤源的MDR生物学特征,是体内研究人肝细胞癌MDR、筛选敏感化疗药物的较理想模型     

L-精氨酸在人肝癌裸鼠肝脏移植瘤生长中的作用

目的 探讨L-精氨酸(L-arg)在人肝癌裸鼠肝脏移植瘤生长中的作用.方法 建立人肝癌裸鼠肝脏移植瘤模型,使用L-arg进行干预治疗,采用免疫组化方法 和图像分析技术检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,原位末端标记(TUNEL)法检测肿瘤细胞的凋亡情况.结果 (1)小剂量L-arg(0.5 g·kg~(-1)·d~(-1))组、大剂量L-arg(1g·kg~(-1)·d~(-1))组和对照组移植瘤重量分别为(985±76)mg、(328±35)mg、(586±56)mg;大剂量L-arg组移植瘤重量较对照组显著减少(P＜0.05);小剂量L-arg组移植瘤重量较对照组显著增加(P＜0.05).(2)大剂量L-arg组移植瘤PCNA的表达较对照组显著下调(P＜0.05),小剂量L-arg组和对照组比较无明显差异(P＞0.05).(3)大剂量L-arg组NO水平较对照组和小剂量组显著升高(P＜0.05),小剂量L-arg较对照组显著升高(P＜0.05).(4)大剂量L-arg组移植瘤凋亡指数(AI)明显高于对照组(P＜0.05);小剂量L-arg对移植瘤AI无明显影响(P＞0.05).结论 L-精氨酸对肝癌具有双重作用.小剂量L-精氨酸可促进肝癌生长;大剂量L-精氨酸抑制肝癌的生长.     

Genistein抑制裸鼠肝癌移植瘤侵袭性生长

目的　研究Genistein对裸鼠肾包膜下肝癌移植瘤侵袭性生长的作用及其作用机制。方法　10只裸小鼠分成2 组,每只裸小鼠均建立双侧肾包膜下肝癌移植瘤模型,予Genistein(5 mg/ml)腹腔内注射,共15 d。观察移植瘤生长及对肾实质侵袭能力变化,行肿瘤微血管密度(MVD)的免疫组化检测及MMP2与TIMP2表达的RT PCR检测。结果　Genistein治疗组瘤体积增加(63 .32±8. 96) mm3,显著小于对照组(79 .25±6. 85) mm3,P<0 .05,抑瘤率为20 1%;MVD在Genistein组(10 .422±0 .807)显著低于对照组(22 330±5 696),P<0. 05。MMP2 表达在Genistein组(0 .296±0. 132)显著低于对照组(0. 519±0 .158),P<0 .05;TIMP2 表达两组间并无显著差异,但MMP2/TIMP2比值在Genistein组(0. 498±0.214)显著低于对照组(1 .011±0. 319),P<0 .05。结论　Genistein显著抑制Bel 7402肝癌移植瘤在裸小鼠肾包膜下的侵袭性生长,病理性肿瘤血管生成减少及MMP2表达降低与其抗肿瘤侵袭作用密切相关。     

裸鼠原位肝细胞癌多药耐药模型的建立

目的建立裸鼠原位肝癌多药耐药模型。方法分别在开腹直视下将人肝癌细胞系 HepG2和多药耐药细胞系HepG2／ADM两种细胞种植于裸鼠的肝包膜下建立原位肝细胞癌多药耐药动物模型。用B超、剖腹探查检测两组肝脏肿瘤生长情况。利用长链PCR技术对耐药细胞系 HepG2／ADM和相应种植瘤组织MDR1基因全长进行扩增并测序,再分别用RT—PCR、免疫组化、 Western blotting方法检测两组肿瘤耐药基因MDR1mRNA和P—gp蛋白的表达。结果原位肝脏种植肿瘤成瘤率均为100％(30／30),耐药诱导成功率为95％(19／20);用长链PCR技术对耐药细胞系 HepG2／ADM和相应种植瘤组织进行MDR1基因扩增,均能扩增出全长为3．8 Kb的基因条带,双向 DNA测序结果均与Genebank报道一致。耐药组MDR1mRNA和P-gp蛋白的表达均明显高于对照组 (t1=3．72,t2=2．98,P<0．01)。耐药组P-gp蛋白表达为(42．6±1．7)％远高于对照组(2．6± 0．1)％,差异有统计学意义(t=6．43,P<0．01)。结论成功建立肝癌多药耐药动物模型并且为研究肝癌多药耐药逆转提供基础。     

反应停对人肝细胞癌生长侵袭的作用

目的 观察反应停对人肝细胞癌（HCC）血管生成和肿瘤生长侵袭的干预作用。方法 建立高转移潜能人肝癌裸鼠肝原位移植模型，随机分成4组。各组模型自建立次日起分别经腹腔注射0．5％羧甲基纤维素钠（CMC）、反应停（200mg／kg体重）、紫杉醇（13mg／kg体重）、反应停（200mg／kg体重）＋紫杉醇（13mg／d）。给药第30天处死裸小鼠，观察肿瘤生长、转移情况，分别用免疫组织化学和半定量逆转录．聚合酶链反应（RT—PCR）的方法检测癌组织CD34和血管内皮生长因子（VEGF）mRNA的表达并记录微血管密度（MVD）。结果 反应停组肿瘤重量、体积均与空白对照组差异无统计学意义（P〉0．05）。各药物处理组肺转移灶计数、MVD和VEGF均低于对照组，以联合用药组最为显著。结论 反应停对HCC生长无明显抑制作用，但能抑制肿瘤血管生成并降低肺转移。     

保持人肝癌生物学特性的人肝癌组织裸鼠肝内种植模型的建立

目的建立保持人肝癌特性的裸鼠肝内种植模型。方法用新鲜的人肝癌组织种植于裸鼠肝脏 ;B型超声观察种植瘤的体积变化 ;解剖及显微镜下观察种植瘤的转移情况及组织细胞病理特征 ;免疫组化和RT PCR法测定其MDR1和LRP ;SPECT检测荷瘤鼠骨转移情况。结果第 1代种植 8只裸鼠 ,2w后种植瘤 10 0 %存活 ,并分泌AFP ;8～ 10w内有肝内转移的占 75 0 % ,骨转移占37 5 % ,10w末处死模型鼠 ,有肺转移的占 37 5 % ;种植瘤的病理特征与瘤源患者肝癌一致 ;种植瘤与原肿瘤源组织MDR1、LRP蛋白及其mRNA表达差异均无显著性 (P >0 0 5 )。第 2和第 3代模型鼠各 8只 ,种植后 2w 10 0 %存活 ;10～ 14w裸鼠出现衰竭症状后其肝内、肺和骨均有转移。结论该模型保持了人肝癌生物学特性 ,可用于体内研究人肝癌的模型。     

雷帕霉素对人肝癌裸鼠原位移植瘤生长的抑制作用

目的探讨雷帕霉素对人肝癌裸鼠原位移植瘤生长的影响及其机制。方法建立人肝癌棵鼠肝原位移植瘤模型32只,随机分为空白对照组、FK506组、雷帕霉素常规剂量组和高剂量组。用药两周后观察肿瘤体积的变化,免疫组织化学法检测肝癌组织中增殖细胞核抗原(PCNA)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达。结果对照组、FK506组、雷帕霉素常规剂量组、高剂量组平均肿瘤体积分别为:(310．15±40．16)、(605．59±116．23)、(99．19±15．27)、(151．61±27．81) mm3。与对照组相比,雷帕常规剂量组及高剂量组肿瘤体积明显缩小,PCNA、VEGF的表达均显著下调(P<0．01);FKS06组肿瘤体积与对照组相比明显增大,差异有统计学意义(P<0．01),PC- NA、VEGF的表达与对照组相比差异无统计学意义(P>0．01)。结论雷帕霉素具有显著抑制肝癌生长的作用,其机制可能是抑制了肝癌细胞的恶性增殖及VEGF的产生。