HOXA10在子宫内膜组织周期性表达与调控机制

HOXA10基因是多基因家族的转录调节基因之一,参与生殖道发育、胚胎植入的调控、细胞定向分化和增殖.近年来研究发现,HOXA10通过激活或抑制下游靶基因的转录来诱导子宫内膜成熟,并指导胚胎着床,在决定子宫内膜容受性方面起重要作用,且在子宫内膜异位症(EM)及其相关不育发病中发挥作用,EM患者子宫内膜容受性(endometrial receptivity)发生改变可能是其发生不育的原因之一.     

小剂量米非司酮对分泌中期人子宫内膜HOXA11基因表达的影响

通过口服米非司酮 ( RU486)改变子宫内膜的发育进程 ,观察内膜 H OXA11基因表达量的变化 ,以及与孕酮受体 ( PR)和白血病抑制因子 ( L IF)表达的相互关系。 13例月经周期正常志愿者观察两个周期。于对照周期的分泌中期取内膜。实验周期排卵前或后一次性口服 RU48610 mg,分泌中期取内膜 ,用原位杂交和免疫组织化学方法检测H OXA11、PR及 LIF的表达。结果 :对照周期内膜腺上皮 H OXA11和 PR呈阴性或弱阳性表达。服药后 ,腺上皮 H OXA11和 PR表达强度大多增加 ,而 LIF的表达强度大多下降 ;基质细胞的表达量变化无明显规律。提示 H OXA11基因的表达与孕激素及其受体密切相关 ;分泌中期腺上皮 H OX A11和 PR表达下降或消失是内膜分化成熟的重要标志 ;也是 L IF分泌达高峰的前提。     

孕酮对培养人子宫内膜腺上皮细胞HOXA11基因表达的影响

目的研究孕激素对人子宫内膜腺上皮HOXA11基因表达的影响,初步探讨其影响机制。方法6例增殖期子宫内膜腺上皮细胞进行原代培养,在细胞生长汇合时,分别加入孕酮或孕酮+17β-雌二醇;米非司酮(RU486)预处理后加入孕酮或孕酮+17β-雌二醇培养4、68、d,提取细胞总RNA。用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测HOXA11基因表达量。结果在原代培养的人子宫内膜腺上皮细胞中加入孕酮或孕酮+17β-雌二醇,第4天时HOXA11基因表达量增加,第6天达高峰,第8天时有所下降;孕酮+雌激素的作用无叠加效应;经RU 486预处理后,上述作用消失。结论孕酮对原代培养的人子宫内膜腺上皮细胞HOXA11基因的表达具有正调控作用,这种作用由孕酮受体介导。     

HOXA11基因在生殖过程中的作用

同源框基因是一类控制胚胎发育和细胞分化的调节基因。其家族成员之一HOXA11参与雌性生殖系统的发育,构建正常形态的子宫内膜,影响子宫内膜容受性,并与雄性不育相关。     

表皮生长因子受体在人子宫内膜、蜕膜和绒毛的免疫组化定位

表皮生长因子受体在人子宫内膜、蜕膜和绒毛的免疫组化定位桂耀庭王介东王弘毅罗宏志程捷许如华于波李伯南表皮生长因子（ＥＧＦ）对子宫内膜细胞的生长和分化有着十分重要的作用，有关表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）的报道结果不一［１］。本试验以ＡＢＣ免疫组织化学方法...     

HOXA10基因在多囊卵巢综合征患者子宫内膜的表达

目的了解同源框基因A10（HOXA10）和胰岛素（INS）在多囊卵巢综合征（PCOS）患者子宫内膜的表达,探讨PCOS患者子宫内膜功能异常的机制。方法采集PCOS患者50例（PCOS组）子宫内膜,分为高胰岛素组（bINS,25例）和高睾酮组（hT,25例）;对照组20例取自月经周期规律妇女的增殖期子宫内膜。采用免疫组化、Western-blot和逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测HOXA10、INS蛋白及mRNA在两组子宫内膜的表达。结果（1）免疫组化结果显示,HOXA00在PCOS组的表达较对照组明显减弱（P〈0．01）;而INS表达却均明显增高（P〈0．01）。（2）Western-blot结果也显示,HOXA10在PCOS组（包括hINS组和hT组）的表达显著低于对照组（P均〈0．01）,而INS的表达显著高于对照组（P均〈0．01）。hINS组与hT组比较,HOXA10表达更显著降低（P〈0．05）;而INS的表达水平在两组之间无显著差异（P〉0．05）。（3）RT-PCR结果显示,HOXA10mRNA的表达在PCOS组（包括hINS组和hT组）显著低于对照组（P均〈0．01）,而INSmRNA表达显著高于对照组（P均〈0．05）。结论PCOS患者的子宫内膜呈现HOXA10表达降低和INS表达增高的状态,可能是该类患者子宫内膜功能异常的原因之一。     

不明原因复发性流产患者子宫内膜/早孕蜕膜组织HOXA-1O基因的表达

目的探讨不明原因复发性流产（URSA）与子宫内膜／早孕蜕膜组织HOXA-10基因表达的关系。方法采用原位杂交技术，以HOXA-10反义核苷酸为探针检测51例URSA患者及38例正常生育（NF）组的分泌期子宫内膜／早孕蜕膜组织HOXA-10mRNA的表达水平，并以灰度阳性单位（PU值）表示。结果NF组子宫内膜分泌早期HOXA-10mRNA表达的PU值腺体为（6．66±0．11），间质为（6．76±0．15）；分泌中期分别为（10．95±0．90）及（11．46±1．08）；分泌晚期分别为（11．05±1．12）及（11．54±1．10）；蜕膜组织分别为（11．55±1．14）及（11．93±1．92）；分泌中晚期及蜕膜组织的Pu值显著高于分泌早期。URSA组不同时期子宫内膜及早孕蜕膜组织中HOXA-10mRNA的表达水平基本一致，无明显的分泌中晚期及早孕期峰，并且分泌中晚期及早孕蜕膜组织的PU值明显低于NF同期组。两组各期腺体和间质的PU值无显著差异。结论子宫内膜HOXA-10基因在分泌中晚期及早孕蜕膜组织中的高表达可能和孕卵着床及妊娠维持密切相关，其表达缺陷可能是导致URSA发生的重要原因之一。     

Luminex液相蛋白芯片用于研究着床窗期子宫内膜和早孕蜕膜基质细胞的细胞因子的表达谱

目的探索着床窗期子宫内膜和早孕期蜕膜基质细胞的细胞因子谱表达及其对胚胎着床和早期妊娠的可能影响。方法获取着床窗期子宫内膜基质细胞(ESC)和早孕期蜕膜基质细胞(DSC)进行体外培养,采用Luminex液相蛋白芯片技术检测细胞培养上清液中15种细胞因子:肿瘤坏死因子(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、颗粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、颗粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、巨噬细胞炎症蛋白-1α(MIP-1α)、单核细胞趋化蛋白因子-1(MCP-1)、受调节激活的正常T细胞排泌的因子(RANTES)和γ干扰素诱导蛋白10(IP-10)的含量变化,比较两者表达的差异。结果DSC分泌多种细胞因子,与ESC相比,其中TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IP-10、GM-CSF、G-CSF、MIP-1α、RANTES表达下调,有极显著差异(P<0.001);IL-4表达上调,有显著差异(P<0.01);MCP-1、IL-2和IL-12表达无明显变化。不同时期表达的细胞因子之间存在复杂的相关关系。结论从着床窗期子宫内膜到早孕期蜕膜基质细胞表达的细胞因子谱的水平发生变化,可能对调控胚胎着床和维持早期妊娠起着重要作用。     

不明原因复发性流产患者子宫内膜/早孕蜕膜组织HOXA-10基因的表达

目的探讨不明原因复发性流产(URSA)与子宫内膜/早孕蜕膜组织HOXA-10基因表达的关系。方法采用原位杂交技术,以HOXA-10反义核苷酸为探针检测51例URSA患者及38例正常生育(NF)组的分泌期子宫内膜/早孕蜕膜组织HOXA-10 mRNA的表达水平,并以灰度阳性单位(PU值)表示。结果NF组子宫内膜分泌早期HOXA-10mRNA表达的PU值腺体为(6.66±0.11),间质为(6.76±0.15);分泌中期分别为(10.95±0.90)及(11.46±1.08);分泌晚期分别为(11.05±1.12)及(11.54±1.10);蜕膜组织分别为(11.55±1.14)及(11.93±1.92);分泌中晚期及蜕膜组织的PU值显著高于分泌早期。URSA组不同时期子宫内膜及早孕蜕膜组织中HOXA-10 mRNA的表达水平基本一致,无明显的分泌中晚期及早孕期峰,并且分泌中晚期及早孕蜕膜组织的PU值明显低于NF同期组。两组各期腺体和间质的PU值无显著差异。结论子宫内膜HOXA-10基因在分泌中晚期及早孕蜕膜组织中的高表达可能和孕卵着床及妊娠维持密切相关,其表达缺陷可能是导致URSA发生的重要原因之一。     

精液对子宫内膜蜕膜化及胚胎发育的影响

目的探讨精液成分对子宫内膜蜕膜化及胚胎发育的影响。方法(1)子宫内膜细胞蜕膜化后分别加入人精子及精浆共培养,观察蜕膜化的间质细胞生长情况并测定培养液中泌乳素(PRL)含量。(2)内膜培养8 d后,加入小鼠2-细胞期胚胎继续培养,观察胚胎的发育情况及内膜细胞生长情况。(3)建立假孕鼠模型,观察精液在胚胎移植中的作用。结果(1)精浆组子宫内膜间质细胞蜕膜化程度明显优于精子组和对照组,PRL分泌量有显著性差异(P<0.05),而精子组和对照组无明显差异。(2)精浆能促进8细胞以后的胚胎在子宫内膜细胞上的卵裂、囊胚形成、孵化、粘附和扩展性生长(P<0.05)。(3)胚胎移植过程中精子对植入率没有影响。结论(1)精浆能促进子宫内膜间质细胞蜕膜化,促进PRL的分泌。(2)精浆能促进胚胎在子宫内膜细胞共培养体系中的发育。(3)精浆与精液对囊胚着床作用可能相同,而精子在胚胎植入过程中没有作用。     

Genetic analysis of HOXA11 gene in Chinese patients with cryptorchidism

Cryptorchidism is the most common congenital anomaly in male children. Its aetiology remains unknown in the majority of cases. Because HOXA11 plays a vital role in regulating testicular descent, genetic variants in HOXA11 genes may contribute to the risk of cryptorchidism. In this study, mutation analysis was performed on the HOXA11 gene in a cohort of 89 patients with cryptorchidism. Furthermore, an association analysis of the HOXA11 tag single nucleotide polymorphism rs6461992 was performed in 168 patients with unilateral cryptorchidism and 193 controls. No pathogenic mutations were found. A significant difference in genotype and allele distribution was detected between cases and controls (p = .029 and .022 respectively). These results suggest that mutations in the coding sequence of HOXA11 might not be a common cause of cryptorchidism, while common polymorphisms in the HOXA11 gene might contribute to the risk of developing unilateral cryptorchidism.     

Long non-coding RNA HOXA11-AS contributes to the formation of keloid by relieving the inhibition of miR-182-5p on ZNF217

BackgroundLong non-coding RNA (lncRNA) dysregulation is demonstrated to be associated with disease progression. Mounting studies show that lncRNA promotes or inhibits the development of keloid. We aimed to disclose the role of homebox A11 antisense RNA (HOXA11-AS) in the formation of keloid.MethodsQuantitative real-time PCR (qPCR) was adopted for expression analysis of HOXA11-AS, miR-182-5p and zinc finger protein 217 (ZNF217) mRNA, and the expression of ZNF protein and marker proteins was detected by western blot. Cell proliferation, cell migration and cell apoptosis were investigated using CCK-8 assay, wound healing assay and flow cytometry assay, respectively. The potential interplay between miR-182-5p and HOXA11-AS or ZNF217 was verified by dual-luciferase reporter assay, RIP assay and pull-down assay. The role of HOXA11 in vivo was studied by establishing animal models.ResultsHOXA11-AS was highly expressed in tissues and fibroblasts of keloid. Deficiency of HOXA11-AS blocked the proliferation and migration of keloid fibroblasts and induced fibroblast apoptosis. HOXA11-AS directly combined to miR-182-5p whose downregulation reversed the effects of HOXA11-AS knockdown. ZNF217 was a target of miR-182-5p, and HOXA11-AS indirectly promoted ZNF217 expression by binding to miR-182-5p. MiR-182-5p enrichment also blocked keloid fibroblast proliferation, survival and migration, while further ZNF217 overexpression abolished these effects. HOXA11-AS knockdown also hindered the growth of keloid in mouse models.ConclusionHigh expression of HOXA11-AS promoted the formation and growth of keloid through the upregulation of ZNF217 by targeting miR-182-5p, and the inhibition of HOXA11-AS might be a novel strategy to prevent keloid development.     

子宫内膜热休克蛋白表达与不明原因不育症的相关性研究

目的 :探讨不明原因不育症与热休克蛋白 ( HSP)表达的关系。方法 :对 72例不明原因不育症 (不育症组 )和 3 4例 (对照组 )子宫内膜作常规染色 ,行组织学分类 ;酶联免疫吸附测定 ( EL ISA)法检测血清抗精子抗体 ( As Ab) ;免疫组织化学染色 ( S-P法 )标记HSP70和 HSP90α在子宫内膜中的表达。结果 :HSP70阳性表达在不育症及对照组子宫内膜分别为 65 %及 3 8% ( P<0 .0 5 ) ;血清 As Ab阳性及阴性患者中分别为 81 %及 3 0 %( P<0 .0 1 )。 HSP90α阳性表达在不育症及对照组子宫内膜分别为 5 4%及 47% ( P>0 .0 5 ) ;血清 As AB阳性及阴性患者中分别为 69%及 2 4% ( P<0 .0 1 )。结论 :不明原因不育症患者子宫内膜 HSPs的高表达可能是一种自身免疫应激反应     

Mutational analysis of HOXA10 gene in Chinese patients with cryptorchidism

Cryptorchidism is one of the most common congenital anomalies and affects 2–4% of full‐term new born boys. Its aetiology is poorly understood at present. HOXA10 plays a pivotal role in regulation of testicular descent. Male mice mutant for Hoxa10 exhibit unilateral or bilateral cryptorchidism as a result of impaired development of the gubernaculums. In this study, we performed mutation analysis of HOXA10 gene in a cohort of 98 cryptorchid patients. And we found a mutation (N27K) in a boy with unilateral cryptorchidism. The mutation was not detected in 106 healthy controls. Both in silico analyses and functional studies showed that the mutation affected the function of HOXA10. The results demonstrated that mutation in HOXA10 gene contributes to the pathogenesis of cryptorchidism, but may not be a common cause.     

雌、孕激素及肝素结合生长因子对Ishikawa细胞HOXA10基因表达的调节

目的通过体外实验研究雌激素、孕激素、肝素结合表皮生长因子(HB-EGF)对Ishikawa细胞中HOXA10基因表达的调节,探讨HOXA10基因在胚胎种植中的意义。方法体外培养高分化子宫内膜癌细胞Ishikawa,按实验目的分别加入雌激素、孕激素、雌孕激素联合、雌孕激素RU486联合、HB-EGF刺激48 h后,采用免疫荧光、逆转录聚合酶链反应、免疫印迹三种方法测定各个条件下Ishikawa细胞中HOXA10基因的表达。结果雌、孕激素单独或联合作用48 h后都可以显著提高Ishikawa细胞中HOXA10基因的表达(P<0.05),同时加RU486后HOXA10基因表达的上调趋势减弱。加HB-EGF刺激48 h后HOXA10基因的表达量增高(P<0.05)。结论雌、孕激素、HB-EGF对HOXA10基因的表达具有上调作用,RU486能够抑制孕激素的上调作用。