促性腺激素释放激素(GnRHs)及其Ⅰ型受体在哺乳动物中的研究进展

促性腺激素释放激素(GnRHs)是调节动物繁殖的关键激素,在哺乳动物中主要以2种形式存在.GnRHⅠ调节促性腺激素,GnRHⅡ则具有神经调节和促进性行为作用.GnRHs可通过自/旁分泌在生殖组织和肿瘤中发挥作用.但GnRH Ⅰ和GnRHⅡ似乎仍有信号的差异,通过Ⅰ型受体而产生不同的下游效应.配体受体的相互作用和受体构象变化参与受体激活原理已被部分确定.这些研究结果为选择新的促性腺激素释放激素类似物提供潜在的更广泛和更具体的应用前景.另外,通过合成新的促性腺激素释放激素类似物,可在生产中发挥更广泛和更具体的应用.     

促性腺素释放激素（GnRH）的作用机制

促性腺素释放激素（GnRH)通过受体机制对垂体促性腺细胞分泌促卵泡素／促黄体素（FSH／LH）进行调控。在整个细胞信号转导过程中，它与G蛋白结合受体家族Gq/11结合，导致一系列不同信号在细胞内传导，其中细胞内外Ca^2 的释放、PKC的激活、JNK激活以及小分子G蛋白（Ras)的激活起到了关键性的作用。最终引起细胞内GnRH受体合成、LH／FSH合成和分泌、细胞生长、分化和增殖等生物学效应。     

无脊椎动物促性腺激素释放激素研究进展

促性腺激素释放激素（gonadotropin-releasing hormone,_GnRH）是下丘脑-垂体-性腺（hypothalamic-pituitary-go-nad,_HPG）轴的关键信息分子,在脊椎动物的性腺发育、性成熟和繁殖功能的维持中起着重要作用。用免疫组织化学、酶联免疫吸附测定以及高效液相色谱等方法在多种无脊椎动物中也检测到了其存在,主要分布于中枢神经以及生殖系统。可见,GnRH在无脊椎动物中具有普遍存在性。目前已至少发现28种类型的GnRH,15种来自脊椎动物,13种来自无脊椎动物。目前,无脊椎动物中除被囊动物外,仅有真蛸、海兔和商乌贼已经获得了GnRH的mRNA序列,其肽链分子结构与脊椎动物的类似。GnRH在无脊椎动物中具有广阔的研究空间,将为无脊椎动物的生殖调控的研究提供参考。     

鸡促性腺激素释放激素对卵泡膜分泌雌二醇的影响

本实验选用性成熟的京白种蛋鸡,从同一产蛋顺序中取其发育不同阶段的各级卵泡(F_1～F_4),分离膜层,消化为单个的膜细胞,进行短期细胞培养,着重观察鸡促性腺激素释放激素(GnRH)对培养过程中膜细胞雌二醇分泌的影响.用放射免疫法测定细胞培养液中雌二醇的含量,得到以下结果:①未加外源激素处理的对照组细胞,随着卵泡从小到大的发育成熟过程,膜细胞雌二醇的分泌量逐渐降低;②适当剂量的鸡 GnRH-Ⅱ对各级卵泡膜细胞雌二醇的分泌均有促进作用,其中 F_4,F_3,F_2比 F_1更敏感;③加前体物(孕酮或雄烯二酮)之后,再加鸡 GnRH-Ⅱ比单加前体物或单加鸡 GnRH-Ⅱ,膜细胞雌二醇的分泌量增加更明显.实验结果提示,在体外细胞培养的条件下,GnRH-Ⅱ对膜细胞雌二醇的分泌不仅有促进作用,还可能促进雌二醇的合成。     

促性腺素释放激素(GnRH)的作用机制

促性腺素释放激素(GnRH)通过受体机制对垂体促性腺细胞分泌促卵泡素/促黄体素(FSH/LH)进行调控.在整个细胞信号转导过程中,它与G蛋白结合受体家族Gq/11结合,导致一系列不同信号在细胞内传导,其中细胞内外Ca2+的释放、PKC的激活JNK激活以及小分子G蛋白(Ras)的激活起到了关键性的作用.最终引起细胞内GnRH受体合成、LH/FSH合成和分泌、细胞生长、分化和增殖等生物学效应.     

促性腺激素释放激素主动免疫公鸡的研究

将１３日龄的石歧杂公鸡分成６组，第１组于７８日龄进行人工阉割，第２、３、４、５组分别以促性腺激素－ＢＳＡ偶联物作抗原加佛氏佐剂乳化后按不同程序免疫公鸡，第６组单以ＢＳＡ免疫作对照，结果表明：与ＢＳＡ免疫组相比，第４、５组及阉鸡组血清睾酮水平均发生显著下降，各免疫去势组公鸡睾丸，鸡冠及肉垂都有不同程度的萎缩，睾丸曲细精管发育不良或受到抑制，６０日龄免疫去势效果明显比２０及４０日龄免疫的差，以相同的抗     

促性腺激素释放激素对小鼠繁殖性状的影响

通过给不同性别小鼠皮下注射不同浓度的促性腺激素释放激素类似物(GnRH-a),观察小鼠从合笼到分娩的时间、产仔总数、仔鼠性别比例情况,探讨了GnRH-a对小鼠繁殖性状的影响。结果表明,短效注射GnRH-a对小鼠从合笼到分娩的时间、产仔数量不存在差异。在雄性注射组中,注射低浓度水平的GnRH-a对小鼠后代性别比例的影响在0.05水平显著高于其他各注射组及对照组。可见GnRH-a对雄性小鼠的精液有一定的作用,且具有剂量的依赖性。     

促性腺激素释放激素(GnRH)引起的初产母牛促黄体激素(LH)释放——妊娠期营养的影响

对妊娠后6个月的杂种青年母牛进行试验,测定营养对促性腺激素释放激素(GnRH)引起的促黄体激素(LH)释放的影响。试验母牛58头,在妊娠90天时分成3组并喂以同一该验日粮,饲喂量分别按体重的1％、1.5％、或2％给予,以使三组母牛的体重在分娩时呈减少、维持或增加的状态。22头母牛在产前第1～14天之间一次注射(肌注)100ugGnRH,另32头在产后第8～21天进行同样注射。在注射GnRH之前由颈静脉采取血样,注射后4小时内每隔30分钟采一次血样。体重减少组(-17.6%)、维持组(-6.0％),增加组(7.0％)三组母牛间的体重变化最小均方差异显著(P<0.01)。基础血浆LH浓度未受营养处理的影响,并且各该验组的基础血浆LH浓度在分娩前与分娩后近似。但作为对注射GnRH反应的血浆LH浓度峰值在分娩前比分娩后为大(P<0.01)。分娩前,减重组和维持组母牛的平均LH峰值约为增重组的两倍(P<0.01)。分娩前LH释放与母牛体重变化呈负相关(r=-0.64)并随妊娠期体重渐次减少而增大(P<0.01)。分娩后,平均LH峰值和反应曲线下的面积,在减重组和维持组平均比增重组小50％(P<0.01)。妊娠期营养限制对分娩前后垂体对注射GnRH的反应有微妙而又不同的影响。     

促性腺激素释放激素在不同品种母牛垂体中的免疫组化定位

为了掌握促性腺激素释放激素（GnRH）及其受体在不同品种母牛垂体中的变化规律,采用免疫组化SP染色法分别对广西沼泽型水牛、摩拉杂交水牛、荷斯坦奶牛、广西本地黄牛垂体中GnRH的分布表达进行对比研究。结果表明,不同品种母牛垂体中均发现有呈棕黄色或黄褐色的GnRH阳性物质存在,经Image-Pro Plus 6.0软件统计发现,摩拉杂交母水牛的GnRH免疫阳性细胞较其他3个品种的大（P〈0.05）,而平均光密度值介于荷斯坦母奶牛和广西本地母黄牛之间（P〉0.05）。在神经垂体中仅发现GnRH免疫阳性纤维,而未发现GnRH免疫阳性细胞;在腺垂体远侧部的细胞均呈GnRH免疫反应阳性,阳性物质主要分布在腺垂体远侧部嫌色细胞和嗜色细胞胞质内。说明GnRH对腺垂体激素分泌的调节可能是直接通过神经调节,而神经垂体可能只是GnRH调节过程的通路。     

奥利亚罗非鱼促性腺激素释放激素cDNA的克隆及原核表达

促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)是下丘脑分泌产生的神经激素,对脊椎动物生殖的调控起重要作用。本研究通过RT-PCR方法从奥利亚罗非鱼丘脑中扩增出长约400 bp的目的序列GnRH,并将其克隆到T载体中,经酶切鉴定、序列测定分析后表明其与尼罗罗非鱼和乌颊海鲷具有较高的同源性,处于同一个进化分支上;而与日本青、金鱼、拟鲤、壁虎等的同源性较低。将此cDNA片段定向克隆到表达载体pMAL-c2x中构建重组表达质粒pMAL-GnRH,转化到大肠杆菌TB1中,0.3M IPTG诱导4 h后成功表达出与预期大小相符的约56 kD的融合蛋白。表明大肠杆菌表达系统可以成功地体外表达奥利亚罗非鱼GnRH,为进一步制备抗体了解其免疫调节作用奠定基础。     

DHP及其核受体诱导斑马鱼促性腺激素释放激素mRNA表达

为了明确17α,20β双羟孕酮(DHP)及其核受体调控促性腺激素释放激素mRNA在雄性斑马鱼脑组织中的表达机制,采用实时荧光定量PCR方法、类固醇激素活体和离体暴露方法进行试验。结果表明,野生型雄性斑马鱼活体暴露于100 nmol/L DHP水溶液,伴随暴露时间的延长,gnrh2和gnrh3 mRNA表达量呈逐渐升高趋势,24 h出现表达最高峰;野生型雄性斑马鱼活体分别暴露于10和100 nmol/L DHP水溶液24 h。与对照组相比,100 nmol/L DHP试验组gnrh2和gnrh3 mRNA表达量升高,差异显著(P<0.05),而10 nmol/L DHP试验组无显著变化(P>0.05);野生型雄性斑马鱼活体暴露于100 nmol/L DHP与100 nmol/L RU486混合水溶液24 h,试验组gnrh2和gnrh3 mRNA表达量与对照组相比无显著变化(P>0.05);野生型和孕酮核受体敲除型(pgr~(-/-))雄性斑马鱼活体分别暴露于100 nmol/L DHP水溶液24 h,与野生型试验组相比pgr~(-/-)型试验组gnrh2和gnrh3 mRNA表达量显著降低(P<0.05);野生型和pgr~(-/-)型雄性斑马鱼脑组织离体暴露于含100 nmol/L DHP的L-15培养液24 h,与野生型试验组相比pgr~(-/-)型试验组gnrh2和gnrh3 mRNA表达量显著降低(P<0.05)。由此可见,DHP与核受体结合可直接调控雄性斑马鱼脑组织中促性腺激素释放激素gnrh2和gnrh3 mRNA表达。     

促性腺激素释放激素在不同品种水牛卵巢中的免疫组化定位

【目的】了解促性腺激释放激素（GnRH）在广西沼泽型水牛与摩拉杂交水牛卵巢中定位表达的异同点,为深入阐明GnRH调节卵巢功能的机制提供理论依据。【方法】采用免疫组化SP染色法对广西沼泽型水牛和摩拉杂交水牛卵巢中GnRH及其受体的分布表达进行对比研究。【结果】两种不同品种水牛卵巢中均存在大量的GnRH阳性细胞,且主要位于颗粒层细胞和黄体粒细胞的胞质内;通过比较显示,两种不同品种水牛卵巢GnRH阳性细胞个数差异极显著（P〈0．01）,但GnRH阳性细胞大小及其平均光密度的差异均不显著（P〉0．05）。【结论】不同品种水牛卵巢的GnRH分布差异可能与繁殖性能有关,但主要分布于巢卵颗粒层细胞和黄体粒细胞的胞质内。     

促性腺激素释放激素激动剂长短方案在体外受精胚胎移植中的比较

目的:比较促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)长短方案在体外受精胚胎移植(IVF-ET)中的效果。方法:2002年2月~2004年5月行IVF和单精子卵胞浆注射(ICSI)患者105名,其中长方案组65名于促性腺激素(Gn)治疗周期的前个黄体中期使用GnRH-a(0.9 mg/d),垂体完全降调后于月经d3开始应用Gn;短方案组40名于月经d3同时应用GnRH-a(0.9 mg/d)和Gn。2组均在优势卵泡达18 mm当晚肌注人绒毛膜促性腺激素(hCG),36 h后取卵行IVF或ICSI。结果:短方案组Gn用量明显减少[(31.4±12.1)vs(39.5±16.2)支,P<0.01],用药时间缩短[(11.4±1.5)vs(12.7±2.0)d,P<0.01];长方案组在经降调节后Gn使用前(启动日)血清促卵泡素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)水平明显低于短方案组[(4.5±2.0)vs(6.4±2.0)IU/L,(3.2±1.9)vs(4.8±2.3)IU/L,(121.8±81.0)vs(182.8±64.2)pmol/L,P<0.01];hCG注射日患者血清LH、E2、黄体酮(P)水平及MII卵子数、卵子受精数、卵裂数和优质胚胎数,2组差异均无显著性(P>0.05);但长方案组患者妊娠率高于短方案组(30.8%vs12.5%),P<0.05)。结论:GnRH-a短方案能获得与长方案相同的控制性超排卵效果,且Gn用量明显减少,但临床妊娠率低于长方案。     

奥利亚罗非鱼促性腺激素释放激素cDNA的克隆及原核表达

促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)是下丘脑分泌产生的神经激素,对脊椎动物生殖的调控起重要作用。本研究通过RT-PCR方法从奥利亚罗非鱼丘脑中扩增出长约400 bp的目的序列GnRH,并将其克隆到T载体中,经酶切鉴定、序列测定分析后表明其与尼罗罗非鱼和乌颊海鲷具有较高的同源性,处于同一个进化分支上;而与日本青、金鱼、拟鲤、壁虎等的同源性较低。将此cDNA片段定向克隆到表达载体pMAL-c2x中构建重组表达质粒pMAL-GnRH,转化到大肠杆菌TB1中,0.3M IPTG诱导4 h后成功表达出与预期大小相符的约56 kD的融合蛋白。表明大肠杆菌表达系统可以成功地体外表达奥利亚罗非鱼GnRH,为进一步制备抗体了解其免疫调节作用奠定基础。     

促性腺激素释放激素在不同品种公牛睾丸中的免疫组化定位

为了掌握促性腺激素释放激素（GnRH）及其受体在不同品种公牛睾丸中的变化规律,采用免疫组化SP染色法分别对广西沼泽型水牛、摩拉杂交水牛、荷斯坦奶牛、广西本地黄牛睾丸中GnRH的分布表达进行对比研究。结果表明,不同品种公牛睾丸生精细胞和间质细胞中均有GnRH免疫阳性物质存在,经Image-Pro Plus 6.0软件统计发现,荷斯坦奶牛睾丸的GnRH阳性细胞个数最多、胞体最大,而广西本地黄牛睾丸的GnRH阳性细胞数量最少、胞体最小,说明GnRH在不同品种公牛睾丸的分布差异可能与生产性能有关,也提示GnRH在生殖调控中除能刺激垂体分泌FSH、LH外,可能直接与生殖器官发生作用,通过旁分泌、自分泌、神经分泌等多种方式调节蛋白类、多肽类激素的分泌及类固醇激素的产生,进而调节这些靶细胞和靶器官的功能活动。     

鸡促性腺激素释放激素对鸡卵泡颗粒细胞孕酮分泌的影响

用不同剂量鸡促性腺激素释放激素(cGnRH-Ⅰ和 cGnRH-Ⅱ)单独或与鸡 LH(cLH)协同处理短期(3h)培养的鸡卵泡颗粒细胞,以观察鸡 GnRH 对颗粒细胞孕酮分泌的影响。结果表明:随着卵泡的成熟,孕酮分泌量逐渐增加,到 F_1卵泡时增加最明显;在本实验所用剂量范围内,鸡 GnRH 对颗粒细胞孕酮分泌有促进作用,其中 GnRH-Ⅰ对 F_1至 F_4卵泡颗粒细胞孕酮分泌都有明显促进作用,GnRH-Ⅱ使 F_2至 F_4卵泡颗粒细胞孕酮分泌量有增加,而对F_3卵泡颗粒细胞作用最明显,用鸡 GnRH 预处理30min 能加强鸡 LH 对鸡卵泡的颗粒细胞孕酮分泌的促进作用,其中 GnRH-Ⅱ的促进作用更明显。     

促性腺激素释放激素在中国荷斯坦奶牛卵巢的免疫组化定位

为探索促性腺激素释放激素( GnRH)在中国荷斯坦奶牛卵巢中分布特点,采用免疫组化技术对中国荷斯坦奶牛卵巢中GnRH进行检测.结果表明,中国荷斯坦奶牛卵巢中存在大量GnRH阳性细胞,且主要位于颗粒层细胞和黄体细胞的胞质内.     

促性腺激素释放激素类似物诱导产蛋母鸡换羽的内分泌特征

采用促性腺激素释放激素类似物诱导母鸡快速换羽已作为一种模式研究母鸡羽的内分泌机制，并与自然换羽进行比较，研究结果表明：（１）试验组血浆甲状腺素（Ｔ４）浓度显著高于对照组（Ｐ＜０．０１），而三碘甲状腺素（Ｔ３）浓度与对照组无明显区别：（２）给药期间血浆孕酮（Ｐ４）浓度明显低于对照组（Ｐ＜０．０１），而雌二醇（Ｅ２）浓度则高于对照组（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）；（３）两组鸡群体重无明显差异，但试验组