黄芪在同种移植排斥中对CD4+ CD25+ T细胞及Foxp3的影响

探讨黄芪(AST)在同种移植排斥中对CD4+CD25+T细胞动态变化及Foxp3表达的影响。方法：C57BL/6和BALB/c小鼠分别为供体和受体,建立皮肤移植模型。对照组：术后注射生理盐水;AST组：术后给予黄芪注射液;AST+脾细胞(SP)组：术前输注供体鼠脾细胞,术后给予黄芪注射液,CsA+SP组：术前输注供体鼠脾细胞,术后给予环孢素A（CsA）。术后逐日观察移植皮肤存活情况及小鼠一般状况;免疫荧光染色流式细胞术检测脾组织中CD4+CD25+T细胞动态变化;RT PCR检测Foxp3mRNA表达情况。结果：与对照组相比,AST组、AST+SP组、CsA+SP组移植皮片存活时间明显延长（P＜0.05）,移植后14?d,CD4+CD25+T细胞数量及Foxp3的相对表达量显著增多（P＜0.05）。结论：黄芪体内用药可延长同种移植物的存活时间,上调CD4+CD25+T细胞及Foxp3的活性。     

黄芪对哮喘小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞及IL-4IFN-γIL-10的影响

目的探讨黄芪对哮喘小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞及IL-4、IFN-γI、L-10的影响。方法将BALB/c小鼠30只随机分为对照组、哮喘组和黄芪组。以卵蛋白（OVA）致敏激发法制备小鼠哮喘模型。酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中IL-4、IFN-γ、IL-10及血清中IL-10的含量;流式细胞术（FCM）、反转录聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测小鼠脾脏中CD4＋CD25＋调节性T细胞数量及FoxP3 mRNA表达情况。结果哮喘组小鼠BALF中IL-4含量明显高于对照组（P〈0.01）而低于黄芪组（P〈0.01）。与对照组相比,哮喘组小鼠BALF中IFN-γI、L-10、血清中IL-10含量及脾脏中CD4＋CD25＋调节性T细胞数量、FoxP3 mRNA表达水平明显降低（P〈0.01）;而黄芪组的上述改变较哮喘组显著增加（P〈0.05）。结论 CD4^＋CD25^＋调节性T细胞参与了支气管哮喘的发病过程,黄芪可通过上调CD4^＋CD25^＋调节性T细胞、FoxP3 mRNA的表达及增加IL-10含量减轻哮喘炎症。     

转化生长因子-β1与CD4^＋CD25^＋调节T细胞

转化生长因子-β1（transforming growth factor betal,TGF—β1）是一种高度保守且具有多功能生物学活性的细胞因子,不仅在调节细胞的生长、分化、凋亡、组织损伤和修复等方面发挥功效,而且在免疫调节中也有重要作用。CD4^＋CD25^＋调节T细胞（CD4^＋CD25^＋ regulatory T cells,CD4^＋CD25^＋Treg）是一种免疫调节细胞,     

左归丸对小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的影响

目的：观察左归丸制剂对小鼠脾细胞中Treg亚群及其相关细胞因子表达的影响。方法：Balb/c小鼠给予不同剂量左归丸处理后，利用流式细胞术检测小鼠脾细胞中Treg亚群（CD4^＋／CD25^＋）的变化；采用RT-PCR法检测小鼠脾细胞中IL-10、TGF-β、IFN-γ及Foxp3的表达水平；采用ELISA法检测小鼠外周血中IFN-γ的分泌水平。结果：小剂量左归丸对小鼠脾脏Treg亚群及相关细胞因子的表达没有显著影响；中剂量左归丸可明显上调小鼠脾脏Treg亚群比例（P〈0．05），提高Treg特异性胞内信号Foxp3及相关细胞因子IL-10、TGF-β的转录水平，同时抑制，IFN-γ的表达；大剂量左归丸可显著降低Treg细胞亚群比例，对Foxp3、IL-10、TGF-β、IFN-γ的表达均有明显的抑制作用（P〈0．05）。随着中、大剂量左归丸处理小鼠IFN-γ的转录下调，血清中IFN-γ的水平也明显下降（P〈0.05）。结论：左归丸可上调Treg细胞及相关细胞因子的表达水平，抑制IFN-γ的表达，但这种免疫效应有剂量限制性，大剂量应用时显示抑制作用，提示左归丸对Treg亚群有剂量依赖性的双向调节作用。     

CD4＋CD25＋FOXP3＋调节性T细胞和PD-1＋CD4＋T细胞对宫颈内皮细胞瘤预后的作用

目的：研究宫颈内皮细胞瘤（CIN）皮损处的CD4＋ CD25＋ FOXP3＋调节性T细胞（Tregs）和 PD‐1＋ CD4＋ T细胞及其转归之间的关联性。方法用细胞刷从CIN患者收集宫颈淋巴细胞,并用 FACS分析这些细胞中的CD4＋ CD25＋ FOXP3＋T regs和PD‐1＋CD4＋ T细胞。比较CIN消退者和未消退者之间CD4＋ CD25＋ FOXP3＋ T regs和 PD‐1＋ CD4＋ T 细胞群的差异。结果宫颈淋巴细胞中CD4＋CD25＋ FOXP3＋ T regs占11．8％,而PD‐1＋CD4＋ T细胞占30．3％。与未消退者组比较,CIN消退组CD4＋CD25＋ FOXP3＋ Tregs和 PD‐1＋ CD4＋ T 细胞均明显较低（P＜0．05）。结论宫颈 CD4＋ CD25＋ FOXP3＋ Tregs的产生与CIN自发消退成负相关,表明Tregs在人乳头瘤状病毒（HPV）相关的肿瘤免疫逃逸中起重要作用。     

小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的分离纯化及鉴定

目的:调节性T细胞(Treg)是近年来免疫学研究的热点.文中研究获取高纯度Treg的方法及其表型的鉴定.方法:流式细胞术(FACS)分析正常小鼠脾脏中CD4+、CD4+CD25+、CD4+CD25-3个细胞亚群的表型;采用二步磁性细胞分选法(MACS)纯化小鼠脾细胞中CD+CD25+Treg,并对分离后的细胞表型进行鉴定.结果:①依CD25表达水平不同将小鼠天然CD4+T细胞划分为3群,转录因子Foxp3、细胞毒T淋巴细胞相关分子-4( CTLA-4/CD152)、糖皮质激素诱导肿瘤坏死因子受体(GITR )、CD69在CD4+CD25+细胞亚群呈显著性高表达(P<0.01),CD4+CD25+T细胞主要存在于CD45RB低表达细胞亚群,CD28的表达在CD4+CD25+细胞亚群明显下降(P<0.05).②使用二步MACS法从正常小鼠脾脏中分离CD4+CD25+T淋巴细胞的得率为1%～1.2%,纯度为87.29%～92.04%.FACS分析结果显示,Foxp3优先表达于CD4+CD25+T细胞亚群,表达率为(66.60±1.03) %,而在CD4+和CD4+CD25-T细胞亚群呈低水平表达,分别为( 23.97±2.00)%和(16.78±3.24%).CTLA-4在CD4+CD25+T细胞亚群表达率为(77.37±1.67) %,明显高于在CD4+ 和CD4+CD25-T细胞亚群的表达[(21.97±2.39)%和(18.04±3.16)%].纯化的CD4+CD25+T细胞亚群表现为CD127的低表达.结论:MACS阴性加阳性二步分选法避免激惹CD4分子,可获得高纯度且具有天然CD4+CD25+ Treg细胞表型及功能特征的细胞.     

TGF-β1诱导的新生儿脐带血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞增殖动力学研究

目的：探讨转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）诱导的新生儿脐带血CD8^＋CD25^＋调节性T细胞增殖活性。方法：新生儿脐带血单个核细胞经羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯（carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester,CFSE）标记后,加入TGF-β1,同时用CD3mAb激活和IL-2培养扩增。培养第4、6、8天收集细胞,用流式细胞术检测活化增殖后的CD4^＋CD25^＋、CD8^＋T细胞增殖动力学变化。结果：培养后第6、8天,实验组CD4^＋CD25^＋T细胞增殖指数分别为11.52、23.04,高于对照组CD4^＋CD25^＋T细胞（6.68,10.46）及实验组CD8^＋T细胞（4.23,5.43）。培养后第8天,实验组CD4^＋CD25^＋T细胞第8代到第10代所占的比例为52.74%,在各代中以第8代所占比例最高,而对照组CD4^＋CD25^＋T细胞第8代到第10代所占的比例为36.26%;实验组CD8^＋T细胞第8代到第10代所占的比例为13.54%,在各代中所占比例最高的为第2代,而对照组CD4^＋T细胞第8代到第10代所占的比例为29.44%。结论：TGF-β1诱导的新生儿脐带血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞增殖活性明显强于CD8^＋T细胞。     

NOD小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞功能变化研究

目的：观察NOD小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的功能变化。方法：流式细胞仪分析NOD小鼠胰腺引流淋巴结（PLN）CD4^＋CD25^＋T细胞频率,CD4^＋CD25^＋T细胞中FoxP3^＋细胞的比例,CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋T细胞的FoxP3平均荧光强度（MFI）;检测CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的抑制功能。结果：在不同的年龄阶段,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞数量未发生明显变化,而随时间的推移,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞中FoxP3表达水平降低,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的功能也下降。结论：CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的抑制功能降低可能是NOD小鼠糖尿病发作的根本原因。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的研究进展

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞是目前免疫学领域研究的热点，对于维持机体免疫耐受和免疫应答稳态具有非常重要的作用。本文就近年在其产生、作用机制及与疾病关系等方面的研究进展进行综述。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞在严重烧伤等应激状态下对免疫系统的影响

严重烧伤后可诱发脓毒症及多器官功能障碍综合征(mul-tiple organ dysfunction syndrome,MODS),是目前大面积烧伤患者的主要死亡原因,而严重烧伤后免疫功能的紊乱则对脓毒症和MODS的发生和发展具有重要作用[1]。CD4+CD25+调节性T(regulatory T,Treg)细胞,是免疫系统中具有抑制活性的T细胞亚群,它在肿瘤免疫、感染免疫及移植耐受等自身免疫性疾病中发挥着重要作用[2-4]。在感染免疫中,CD4+CD25+     

褪黑素对哮喘大鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的影响及抗炎作用

目的:研究褪黑素对哮喘大鼠CD4 CD25 调节性T细胞的影响及抗炎作用。方法:32只SPF级SD大鼠随机分成4组造模,哮喘组、MT组、地塞米松组、正常组,每组8只。各组于最后一次雾化激发后取外周血涂片染色,计数外周血中嗜酸性粒细胞(EOS)百分比;收集肺泡灌洗液(BALF),计数炎症细胞总数;制作肺组织石蜡切片,HE染色计数气道周围EOS数目;用免疫增强浊度法检测血清中IgE水平;用流式细胞术检测外周血中CD4 CD25 Tr数目变化。结果:①哮喘组外周血中CD4 CD25 Tr/CD4 T细胞比值与气道周围EOS细胞数呈现高度负相关(r=-0.73,P<0.05),与BALF细胞总数亦高度负相关(r=-0.78,P<0.05),与血清IgE水平未见显著相关;②CD4 CD25 Tr/CD4 T细胞比值哮喘组显著高于其他各组(均为P<0.01),其他三组差异无统计学意义;③MT组气道周围EOS计数、外周血EOS比例、BALF细胞总数及IgE水平明显低于哮喘组(均为P<0.01)。结论:CD4 CD25 Tr参与了哮喘的发病。褪黑素能显著降低哮喘大鼠CD4 CD25 Tr的数目,有效减轻哮喘大鼠气道炎症和血清IgE上升水平。     

支气管哮喘患者外周血CD4＋CD25＋T淋巴细胞的变化和干预意义

目的探讨支气管哮喘患者外周血CD4＋CD25＋T淋巴细胞的变化和干预意义。方法应用流式细胞仪测定并比较支气管哮喘急性发作期治疗前后、缓解期,健康体检者外周血中的CD4＋CD25＋T淋巴细胞数量变化。结果急性发作期患者治疗前外周血CD4＋CD25＋T淋巴细胞比值为15.5%±2.1%,缓解期患者为12.3%±1.3%,正常组为11.6%±1.5%,急性发作期患者治疗后为14.3%±1.6%。急性发作期患者治疗前高于缓解期和正常组（P〈0.05）,缓解期与正常对照组差异无显著性（P〉0.05）,急性发作期治疗前后有下降,但差异无显著性（P〉0.05）。结论CD4＋CD25＋T淋巴细胞可能是哮喘急性发作期治疗的干预目标。     

哮喘小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞与气道炎症反应的关系

目的 观察哮喘小鼠外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋Treg）数量的改变及其与气道炎症反应的关系。方法健康6周龄SPF级BALB/c小鼠20只,随机分为2组：正常对照组（A组）、哮喘模型组（B组）,B组以卵白蛋白（OVA）致敏激发方法建立小鼠哮喘模型;流式细胞术检测小鼠外周血CD4^＋CD25^＋Treg占淋巴细胞的比例;检测小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）炎症细胞数;BALF炎症细胞总数、嗜酸性粒细胞数分别与外周血CD4^＋CD25^＋Treg作相关分析。结果A组、B组小鼠外周血CD4^＋CD25^＋Treg占淋巴细胞比例分别为（5．81±0．76）％、（3．21±0．74）％,差异有统计学意义（P〈0．05）BALF炎症细胞总数、嗜酸性粒细胞数与外周血CD4^＋CD25^＋Treg呈负相关,相关系数分别为-0．929和-0．920。差异有统计学意义（P〈0．001）结论哮喘小鼠外周血CD4^＋CD25^＋Treg占淋巴细胞比例较正常对照组显著减少。且与哮喘小鼠气道炎症反应密切相关。     

复方苦参注射液对肺癌患者CD4^＋CD25^＋调节性T淋巴细胞的影响

目的研究复方苦参注射液的抗肿瘤作用机制。方法采用流式细胞计数仪,检测30例健康人、60例肺癌患者及65例复方苦参注射液治疗的肺癌患者,其外周血CD4^＋CD25^＋调节性T淋巴细胞（CD4^＋CD25^＋ Treg）的变化。结果通过与健康对照组及肺癌对照组的比较,发现肺癌患者外周血CD4^＋CD25^＋Treg显著增高,而使用复方苦参注射液治疗后,可显著降低肺癌患者外周血CD4^＋CD25^＋Treg水平。结论肺癌患者外周血CD4^＋CD25^＋Treg水平增高与肿瘤的发生密切相关。而复方苦参注射液有显著降低肺癌患者CD4^＋CD25^＋Treg水平的作用,该作用可能与其抗肿瘤效应机制相关。     

非小细胞肺癌外周血CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋调节T细胞分析

目的分析非小细胞肺癌（NSCLC）患者外周血CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋调节T细胞（Treg）占CD4^＋T细胞的比例变化,探讨其临床意义。方法采用流式细胞仪检测32例非小细胞肺癌患者和15例正常健康者（对照组）外周血中CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋Treg占CD4^＋T细胞的比例。结果健康对照纽外周血CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋Treg占CD4^＋T细胞比例为（0．54±0．51）％;NSCLC患者外周血CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋Treg占CD4^＋T细胞比例为（1．40±0．98）％。两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论NSCLC患者外周血CD4^＋CD25^＋FoxP3^＋Treg占CD4^＋T细胞的比例明显升高,提示与肺癌免l癌逃逸有美。     

不同发作期儿童哮喘CD4^＋CD25^＋调节性T细胞表达的研究

目的:通过对不同发作期儿童哮喘CD4^ CD25^ 调节性T细胞抗原表达的测定，探讨CD4^ CD25^ 调节性T细胞在哮喘不同发作期的作用。方法:用流式细胞仪检测哮喘患者外周血淋巴细胞表面CD4^ CD25^ 调节性T细胞抗原的表达。结果:发现急性发作期CD4^ CD25^ 调节性T细胞明显低于非急性发作期、非急性发作期患者明显低于健康对照组。结论:提示CD4^ CD25^ 调节性T细胞在哮喘的疾病活动中起着重要作用，是导致哮喘患者细胞免疫失调的重要原因。     

ITP病人外周血CD4^＋CD25^＋CD127^-调节T细胞的检测及临床意义

目的：探讨特发性血小板减少性紫癜（ITP）病人外周血CD4^＋CD25^＋CD127^-调节T细胞（Tregulatory cells,Treg）表达水平的变化及意义。方法：观察32例ITP病人及20例正常对照,应用流式细胞仪检测外周血CD4^＋CD25^＋CD127^-Treg细胞的表达水平。结果：ITP病人治疗前CD4^＋CD25^＋CD127^-Treg细胞表达水平明显降低（2．90±1．00）,与治疗恢复期（7．36±1．46）及正常对照组（4．52±0．94）比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。治疗恢复期病人CD4^＋CD25^＋CD127^-Treg细胞表达水平明显高于正常对照组（P〈0．05）。结论：ITP病人外周血CD4^＋CD25^＋CD127^-Treg细胞表达水平下降,激素的有效治疗能提高病人机体内CD4^＋CD25^＋CD127^-Treg细胞表达水平。     

皮肌炎患者外周血CD4^＋ T细胞中TGF-β1 mRNA表达及意义

目的：检测活动期皮肌炎（dermatomyositis,DM）患者外周血CD4^＋T细胞中转化生长因子β1（transforminggrowth factor-β1,TGF-β1）以及血清磷酸肌酸激酶（CK）含量。初步探讨CD4^＋T细胞TGF-β1在皮肌炎发病机制中的作用。方法：收集12例活动期皮肌炎患者和12例健康对照者外周血,采用免疫磁珠分离法获得CD4^＋T细胞,通过RT-PCR方法检测出各组TGF-β1表达水平。观察CD4^＋T细胞中TGF-β1表达与CK含量的相关性。结果：活动期皮肌炎患者外周血CD4^＋T细胞中TGF-β1相对表达量为0.751±0.107,显著高于健康对照0.438±0.170（P〈0.05）。CD4^＋T细胞TGF-β1表达量与CK含量呈中度正相关（r=0.67,P〈0.05）。结论：活动性皮肌炎患者外周血CD4^＋T细胞中TGF-β1 mRNA表达显著升高,可能与皮肌炎疾病发生有关。     

体外分化的CD4+CD25+调节性T细胞可减轻小鼠皮肤移植急性排斥反应

目的 利用转化生长因子-β 1(TGF-β 1)体外诱导CD4 +CD25 -T细胞分化为CD4 +CD25 +调节性T细胞,通过体内输注延长小鼠皮肤移植物存活时间,并研究其相关机制.方法 分选获取CD4 +CD25 -T细胞,根据诱导条件不同分为3组:对照组、无TGF-β 1刺激组和TGF-β 1组.检测CD4 +CD25 +T细胞比例,并用RT-PCR检测Foxp3 mRNA的表达水平.建立小鼠皮肤移植模型,于0、1、2、3 d输注上述细胞,观察皮肤移植物存活时间,并检测移植物的病理改变和受鼠外周淋巴细胞的增殖能力.结果 TGF-β 1组中CD4 +CD25 +T细胞比例与无TGF-β 1刺激组相近,但高表达Foxp3 mRNA(P ＜0.05).将培养的细胞输注给受鼠后发现,输注无TGF-β 1刺激组细胞的受鼠其移植物平均存活时间(mean survival time,MST)为(7.3±1.6)d,低于对照组(P ＜0.05);而输注TGF-β 1组细胞小鼠MST为(24.1±2.5)d,较对照组和无TGF-β 1刺激组明显延长(P ＜0.05).病理检测亦显示TGF-β 1组受鼠移植物结构完整,无明显淋巴细胞浸润.用Alamar Blue法检测受鼠外周淋巴细胞增殖活性显示,TGF-β 1组受鼠淋巴细胞增殖能力被明显抑制,低于对照组.进一步检测外周血中IL-4和IFN-γ的表达水平,结果显示TGF-β 1组小鼠体内IL-4和IFN-γ均明显低于对照组和无TGF-β 1刺激组.结论 TGF-β 1可诱导CD4 +CD25 -T细胞分化为CD4 +CD25 +调节性T细胞,将诱导后的调节性T细胞进行过继输注可延长小鼠皮肤移植物存活时间.     

Graves病患者外周血CD4^＋、CD25^＋调节性T细胞的定量及功能分析

目的：检测Graves病患者外周血CD4^＋、CD25^＋免疫调节性T细胞（Tregulatory cells,Tregs）数量并对其进行免疫抑制功能分析,探讨Tregs细胞在其发病机制中的作用。方法：利用不同荧光标记的鼠抗人CD3、CD4、CD25单克隆抗体标记患者及对照组外周血淋巴细胞,流式细胞仪定量检测Tregs细胞占CD4^＋T细胞的百分比。用CD4细胞阴性选择磁珠分离CD4细胞,用抗CD25的磁珠分选CD25^＋Tregs和CD25-Tregs的效应性T细胞（T responder cells,Treps）,用体外细胞培养和3H-thymidine掺入法测定Tregs细胞对Treps细胞的免疫抑制功能。结果：36例Graves病患者与20例健康对照组外周血CD4^＋T细胞中Tregs细胞分别为（6.96±1.98）%及（8.22±2.78）%,两者差异无统计学意义（P〉0.01）。Graves病患者的Tregs细胞可以抑制自身Treps细胞的体外增殖,1∶1、1∶2、1∶4、0∶1比例平均抑制率分别为（48.2±4.9）%、（29.6±7.1）%、（17.7±5.6）%、0,健康对照组的平均抑制率分别为（73.1±5.3）%、（51.5±5.8）%、（29.6±6.3）%、0。Graves病组与健康对照组相比平均抑制率降低,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：Graves病患者外周血中Tregs细胞的数量与对照组没有差异,但其免疫抑制功能明显降低,提示Tregs细胞功能的降低与Graves病的致病机制存在关联。