松果菊苷对过氧化氢损伤的PC12细胞的保护作用及机制研究

目的研究松果菊苷(echinacoside,ECH)对过氧化氢(H2O2)诱导的PC12细胞损伤的保护作用及机制。方法用终浓度为0.4 mmol.L-1的H2O2损伤PC12细胞,测定细胞存活率和Na+,K+-ATP酶的活性;用激光共聚焦法(LSCM)检测线粒体膜电位(MMP);用RT-PCR法检测Bcl-2和p53 mRNA表达量的变化。结果10 mg.L-1松果菊苷可以提高H2O2损伤的PC12细胞存活率和Na+,K+-ATP酶的活力、升高线粒体膜电位、降低p53 mRNA水平但增高Bcl-2 mRNA水平(P<0.05或P<0.01)。结论松果菊苷可保护H2O2诱导的PC12细胞损伤,升高MMP、下调p53mRNA和上调Bcl-2 mRNA可能是其作用机制。     

丁香酚诱导癌细胞PC-12凋亡的研究

目的 研究丁香酚诱导大鼠嗜铬细胞瘤PC-12的凋亡作用机制。方法 用不同浓度的丁香酚处理PC-12细胞,MTT法检测细胞相对存活率,荧光染色观察细胞凋亡情况;比色法检测Caspase-3酶活性;real-time PCR检测Bax和Bcl-2 mRNA水平的变化,Western blot检测蛋白水平的变化。结果 丁香酚能显著降低PC-12细胞存活率,促进Bax mRNA及蛋白表达,抑制Bcl-2 mRNA及蛋白表达,进而提高Caspase-3酶活性。结论 丁香酚可能通过上调Bax、下调Bcl-2表达,激活Caspase-3酶活性,诱导PC-12细胞凋亡。     

松果菊苷对TNFα诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的　探讨肉苁蓉提取物松果菊苷对TNFα诱导的SH SY5Y细胞凋亡的保护作用。方法　用MTT法检测细胞存活率,DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡的发生,以激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内活性氧的产生和线粒体膜电位的变化,并用荧光酶标仪测定caspase 3的活性。结果　100μg·L-1 TNFα处理细胞 36h显著降低细胞的存活率;诱导细胞发生凋亡,凋亡率达37%;细胞内活性氧水平及caspase 3的活性升高;而线粒体膜电位却明显降低,红 /绿荧光强度的比值由正常的 5 97降低为 0 35左右。而预先给予 1, 10或者 100mg·L-1浓度的松果菊苷处理细胞 2h,可提高细胞存活率;并可有效抑制DNAladder的发生;流式细胞仪检测凋亡率分别降低到25 9%, 18 3% 和 8 2%;激光共聚焦显微镜结果显示松果菊苷可明显抑制细胞内活性氧产生;并可逐渐恢复线粒体的高能量状态;caspase 3的活性不断降低,并呈现了一定的剂量依赖性。结论　松果菊苷能抑制TNFα诱导的SH SY5Y细胞凋亡,其神经细胞保护作用可能与降低细胞内活性氧水平,抑制caspase 3的活性和维持线粒体膜电位的高能状态有关。     

红景天苷对百草枯所致PC12细胞凋亡的抑制作用及相关机制

目的探讨红景天苷(salidroside)的神经保护作用及其可能的作用机制。方法采用百草枯(PQ)诱导的具有多巴胺神经元特性的PC12细胞凋亡作为帕金森病的体外模型。实验分对照组、PQ诱导组和红景天苷3个浓度(终浓度10,20和30μmol.L-1)预处理组。用MTT法测定细胞存活率,流式细胞术和Hoechst33258染色法测定细胞凋亡,比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3活性,免疫组化法检测细胞色素c(Cytc)的释放和Bcl-2蛋白的表达。结果PQ(800μmol.L-1)作用于PC12细胞24h后,与正常对照组比较,细胞存活率降低,细胞染色质固缩,细胞核呈致密浓染,细胞凋亡百分率升高;红景天苷3个浓度预处理后,细胞存活率增加,细胞核凝聚明显减少,细胞凋亡率降低,且具有量-效关系。另外,PQ可使PC12细胞caspase-3活性增强,Cytc的释放增加,Bcl-2的表达代偿性升高;红景天苷预处理后,PC12细胞增高的caspase-3活性和Cytc的释放明显降低,Bcl-2的表达进一步升高。结论红景天苷对PQ诱导的细胞凋亡具有浓度依赖性的抑制作用,其作用机制可能是促进Bcl-2的表达,抑制Cytc的释放和caspase-3的激活,提示红景天苷可能具有神经保护作用。     

地昔帕明对皮质酮诱导培养的PC12细胞凋亡的拮抗作用

AIM: To study possible action mechanism of a tricyclic antidepressant, desipramine (DIM). METHODS: Cultured PC12 cells were exposed to corticosterone in the absence or presence of DIM for 5 d. Agarose gel electrophoresis, flow cytometry, and electron microscopy were used to detect the apoptosis of PC12 cells. RESULTS: Corticosterone 10 micromol/L treatment for 5 d elicited typical apoptotic biochemical and morphological changes including condensed chromatin shaped like crescent moon, nuclear fragmentation, and DNA degradation. The highest percentage of apoptotic cells accumulated to 28 % +/- 9 %. Agarose gel electrophoresis showed typical DNA ladders pattern. While in the presence of DIM 1 or 5 micromol/L, apoptosis percentage was markedly decreased with lightened DNA ladder and ultrastructure of the cells was improved. CONCLUSION: DIM could antagonize the apoptosis in PC12 cells induced by corticosterone, which may be one of the cellular mechanisms of its antidepressant effect.     

松果菊苷对人肺癌HCC827细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的 探讨松果菊苷对人肺癌HCC827细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法 采用MTT法、以酶标仪分别检测松果菊苷(0,5,10,20,40,80,160μmol/L)和顺铂(0,5,10,20,40,80,160,320μmol/L)条件下HCC827细胞的生长情况,并计算细胞增殖率及半数致死浓度(LC₅₀);实验分为阴性对照组(等体积培养基)、阳性对照组(顺铂80μmol/L)及松果菊苷低、中、高剂量组(实验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,20,40,80μmol/L)。采用细胞划痕法检测细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链式反应法及Western blot法分别检测细胞中转化生长因子βⅠ型受体(TβRⅠ)、Smad 2和Smad 3 mRNA及蛋白表达水平。结果 松果菊苷和顺铂的LC₅₀分别为(47.50±6.21)μmol/L和(76.85±14.89)μmol/L。与阴性对照组比较,阳性对照组和实验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的细胞迁移距离均显著缩短,细胞凋亡率均显著升高,TβRⅠ、Smad 2和Smad 3 mRNA及蛋白表达水平均显著降低(...     

RP-HPLC法测定肉苁蓉总苷胶囊中松果菊苷的含量

采用 RP- HPLC法测定肉苁蓉总苷胶囊中松果菊苷含量。固定相为十八烷基键合硅胶柱 ;流动相为乙腈 -1.5 %乙酸溶液 ,其中乙腈浓度 11.5 %→ 2 0 % ,0～ 2 5 min线性梯度洗脱 ;检测波长为 335 nm。该方法线性范围为 0 .5～ 2 .5 μg(r =0 .9999) ,平均回收率为 99.85 % ,RSD =1.6 0 % (n =9)。     

HPLC法测定藤黄健骨丸中松果菊苷的含量

目的：建立藤黄健骨丸中松果菊苷含量的HPLC测定方法。方法：色谱柱：DiamonsilC18（250mm×4．6mm,5μm）,流动相：甲醇旬．1％甲酸（28．5：71．5）,流速：1．0ml·min^-1,柱温：25℃,检测波长：330nm。结果：松果菊苷线性范围为0．18—1．84μg,r=0．9999,平均回收率为98．36％,RSD为0．56％（n=6）。结论：本法操作简便,结果准确。     

松果菊苷对尿毒症大鼠肾损伤的影响及机制

目的 研究松果菊苷（ECH）对尿毒症（URE）大鼠肾损伤的影响及机制。方法 采用5/6肾切除法建立URE大鼠模型。建模成功的大鼠分为尿毒症（URE）组、ECH低剂量[10 mg/（kg·d）]组、ECH中剂量组[20 mg/（kg·d）]、ECH高剂量组[40 mg/（kg·d）]和ECH高剂量+茴香霉素[p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）信号通路激活剂]组[ECH-H+Ani组,40 mg/（kg·d）ECH+2 mg/（kg·d）茴香霉素],另设假手术组,每组12只。各药物组灌胃相应的ECH,ECH-H+Ani组再尾静脉注射茴香霉素,每天1次,连续给药8周。检测大鼠血清中肿瘤细胞因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、血尿素氮（BUN）、β2-微球蛋白（β2-MG）、血肌酐（Scr）、中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白（NGAL）、肾损伤分子1(KIM-1)、胱抑素C(Cys-C)水平,24 h尿蛋白（24 h UP）和肾组织中丙二醛（MDA）水平、超氧化物歧化酶（SOD）活性;观察肾组织病理学变化;检测大鼠肾组织中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E-上...     

HPLC法测定不同厂家锁阳固精丸中松果菊苷的含量

目的测定不同厂家锁阳固精丸中松果菊苷的含量。方法以松果菊苷为测定指标,HPLC法测定锁阳固精丸中松果菊苷含量的色谱条件：色谱柱为Kromasil C18（250mm×4．6mm,5μm）,流动相为乙腈-甲醇-0．2％磷酸（10：15：75）,检测波长为334nm,流速为1ml·min-1。结果不同厂家三个批次的含量分别为0．46、0．55、0．41mg·g-1。结论定量方法简便、准确、重复性好,可以作为锁阳固精丸的质量控制方法。     

HPLC法测定欧亚列当中松果菊苷的含量

目的:建立测定欧亚列当中松果菊苷含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为YMC-Pack ODS-A C18(250mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-甲醇-1%醋酸(10∶17∶73),流速为0.8 mL·min-1,检测波长为334 nm,柱温为室温,进样量为10μL。结果:松果菊苷进样浓度在0.1～1.0 mg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.999 5);平均加样回收率为98.83%,RSD=2.20%(n=9)。结论:本方法简便、重复性好,结果稳定可靠,可用于测定欧亚列当中松果菊苷的含量。     

高效液相色谱法测定鱼鳔补肾丸中松果菊苷的含量

目的:建立高效液相色谱法测定鱼鳔补肾丸中松果菊苷的含量.方法:采用shim-pack CLC-ODS(6 mm × 150 mm,5μm)色谱柱,流动相:甲醇-0.1%甲酸溶液(27:73),流速1.0 mL/min,柱温35℃,进样量10μL,检测波长334nm.结果:松果菊苷在进样量0.01017～0.05085 mg/mL范围内线性关系良好,回归方程为Y=976220X-2600.8(r=0.9998,n=5),平均加样回收率为101.09%,RSD为1.75%.结论:本方法快速、简便、结果准确,可用于控制该制剂的质量.     

一氧化氮诱导PC12细胞凋亡及芍药苷的保护作用

目的:探讨一氧化氮诱导PC12细胞凋亡及芍药苷保护作用的可能机制.方法:MTT和乳酸脱氢酶活性测定细胞存活率,DNA凝胶电泳观察DNA的断裂情况,流式细胞仪测定细胞凋亡率、检测线粒体跨膜电位.结果:500 μmol·L-1 硝普钠(SNP)可诱导PC12细胞凋亡,细胞线粒体跨膜电位明显下降.预先经过 0.1、1和10 μmol·L-1 等浓度芍药苷处理后, SNP诱导的PC12细胞凋亡明显减少,同时明显减弱一氧化氮对线粒体跨膜电位的影响.结论:芍药苷可抑制一氧化氮诱导PC12细胞凋亡,其作用机制可能与其稳定细胞线粒体跨膜电位有关.     

松果菊苷通过性别决定区Y框蛋白4对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响研究

目的:研究松果菊苷(Echinacoside)对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响.方法:胃癌AGS细胞分成对照组和Echi-nacoside组,对照组不用松果菊苷处理,Echinacoside组分别用5,10,20,40,80μmol·L-1的松果菊苷培养.CCK-8法检测细胞增殖,PI单染法检测细胞周期,Annexin...     

HPLC法测定管花肉苁蓉中松果菊苷和麦角甾苷的含量

目的：建立同时测定管花肉苁蓉药材及提取物中松果菊苷和麦角甾苷含量的HPLC法。方法：采用Hypersil ODS C18（200mm×4．6mm,5μm）色谱柱,甲醇-乙腈-1％醋酸溶液（15：10：75）为流动相,流速为0．8ml·min^-1,检测波长为334nm,柱温为30℃。结果：松果菊苷和麦角甾苷线性范围分别在3．65—234．00μg·ml^-1（r=0．9999）和2．74～175．20μg·ml^-1（r=0．9999）浓度范围内呈良好的线性关系,平均回收率分别为95．7％,95．8％,RSD分别为1．8％,2．7％（n=9）。结论：方法简便,精密度、重复性良好,结果准确可靠,可用于工业生产肉苁蓉药材、饮片及其制剂的含量测定。     

通便灵胶囊中松果菊苷的含量测定及质量情况分析

目的：建立通便灵胶囊中肉苁蓉有效成分松果菊苷的含量测定方法,了解通便灵胶囊的整体质量情况,保障公众用药安全有效。方法：采用高效液相色谱法(HPLC)测定松果菊苷的含量,流动相为甲醇-0.1%甲酸溶液,梯度洗脱,检测波长为340 nm。结果：松果菊苷在2.867～286.742 μg/mL 之间呈良好的线性关系(r=0.999 9),回收率为102.1%,RSD为0.8%。通过对45批次通便灵胶囊的松果菊苷含量测定,发现各批次之间质量状况存在差异,提示部分生产厂家存在少投或用劣质药材(饮片)投料的现象。结论：该方法操作简便、结果准确,为通便灵胶囊的全面质量控制提供了科学依据。     

醋酸铅对PC12细胞的增殖与凋亡研究北大核心CSCD

目的探讨醋酸铅(Pb(Ac)2)对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞的增殖与凋亡中低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α)与Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶(rho associated coiled coil forming protein kinase, ROCK)信号通路的关系以及潜在的作用机制。方法 (1)将体外培养的PC12细胞分为对照组和实验组。对照组加入含血清的培养基,低、中、高剂量实验组加入100,200,400μmol·L-1的Pb(Ac)2染毒,用噻唑蓝还原法测定药物对细胞增殖率的影响,以乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)漏出率试剂盒检测细胞损伤程度,用DCFH-DA探针染色法检测细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平,用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率,以蛋白质印迹法检测细胞内HIF-1α、 ROCK-1、ROCK-2、淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2)以及Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 Associated X Protein, Bax)的蛋白表达。(2)采用siRNA技术沉默PC12细胞HIF-1α基因技术,将细胞分为对照组、实验组、阴性对照组、干扰组,观察细胞中HIF-1α、ROCK-1,ROCK-2蛋白表达水平的变化。结果随着Pb(Ac)2剂量的增大,药物对PC12细胞的损伤作用加深。对照组和高剂量实验组的存活率分别为(100.00±3.22)%,(47.21±4.98)%,差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组相比,中、高2个剂量实验组细胞凋亡率差异有统计学意义(P<0.01),表明Pb(Ac)2诱导细胞凋亡。Pb(Ac)2可上调细胞内HIF-1α、ROCK-1、ROCK-2、Bax/Bcl-2的蛋白表达比例(均P<0.01)。当采用小RNA干扰HIF-1α后,发现醋酸铅对PC12细胞损伤的程度降低,HIF-1α、ROCK-1、ROCK-2的蛋白表达水平下降(均P<0.01)。结论 Pb(Ac)2诱导PC12细胞发生凋亡可能与HIF-1α和ROCK信号通路的表达以及自由基损伤有关。     

天麻多糖对皮质酮诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的:研究天麻多糖(polysaccharides from gastrodia elata blume,GEP)对皮质酮(corticosterone,CORT)诱导的PC12细胞损伤的保护作用.方法:采用水提醇沉法提取,经Sevag法脱蛋白及透析处理制得GEP.将培养好的细胞分为正常对照组、模型组(200 μmol·L-1 CORT)和GEP高(1 000 μg·ml-1)、中(500 μg·ml-1)、低(250 μg·ml-1)剂量组.GEP与CORT共孵PC12细胞48 h后,采用MTT比色法判断细胞损伤的程度;化学比色法测定乳酸脱氢酶的释放量;倒置显微镜和DAPI荧光染色法观察PC12细胞凋亡形态.结果:与正常对照组相比,模型组细胞存活率显著降低(P<0.01),LDH释放量增加,且凋亡细胞增多.当给予GEP后,各剂量组均能显著降低LDH释放量,细胞存活率增加,凋亡细胞显著减少(P<0.01).结论:GEP对皮质酮诱导PC12细胞损伤具有一定的保护作用,为GEP的临床应用提供试验依据.     

松果菊苷对帕金森病大鼠纹状体及海马细胞外液中单胺类神经递质的影响

目的研究松果菊苷(echinacoside,ECH)对帕金森病(Parkinson's disease,PD)大鼠纹状体及海马细胞外液中单胺类神经递质的影响,以探讨ECH对脑神经保护作用的可能机制。方法采用双点注射6-羟基多巴胺损毁术制作PD模型,各组大鼠腹腔注射相应的药物或生理盐水连续4周,进行双靶点微透析程序,将透析液注入高效液相-电化学检测器(HPLC-ECD),测定各组大鼠纹状体及海马细胞外液中多巴胺(DA)、3,4-二羟基苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA)、去甲肾上腺素(NE)及5-羟色胺(5-HT)的含量。结果与对照组相比,模型组大鼠纹状体及海马细胞外液中NE、DA、DOPAC、HVA、5-HT含量均明显降低(P<0.01);与模型组相比,各给药组大鼠的纹状体及海马细胞外液中5种物质的含量均明显升高(P<0.05,P<0.01);ECH高剂量组与阳性药MD组相差不大。结论 ECH对PD大鼠纹状体及海马细胞外液中的单胺类神经递质的含量减少具有改善作用,对于PD具有一定的治疗作用,这是ECH对PD大鼠脑神经保护作用的可能机制之一。