乙酰肝素酶反义寡核苷酸对SGC-7901细胞MMP-2和TIMP-2表达的影响 Ⅰ.乙酰肝素酶反义寡核苷酸对SGC-7901细胞MMP-2和TMP-2表达的影响

目的:探讨乙酰肝素酶(HPA)反义寡脱氧核苷酸(AS-OND)对人胃癌细胞株SGC-7901细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及组织金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)表达的影响。方法:采用脂质体介导法将HPAAS-ODN转染SGC-7901细胞G用RT-PCR检测HPA-mRNA表达,用免疫细胞化学的方法检测细胞内MMP-2和TIMP-2的变化。结果:AS-ODN转染48h后GSGC-7901细胞内HPA-mRNA表达下降(P<0.01),MMP-2的表达量亦减少(P<0.01)。结论:HPAAS-ODN可以有效地抑制胃癌细胞MMP-2的表达。     

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对胃癌细胞侵袭和转移的影响Ⅰ.乙酰肝素酶反义寡核苷酸对SGC-7901细胞MMP-2和TIMP-2表达的影响

目的：探讨乙酰肝素酶（HPA）反义寡脱氧核苷酸（AS-OND）对人胃癌细胞株SGC-7901细胞基质金属蛋白酶-2（MMP-2）及组织金属蛋白酶抑制剂-2（TIMP-2）表达的影响。方法：采用脂质体介导法将HPA AS-ODN转染SGC-7901细胞,用RT-PCR检测HPA-mRNA表达．用免疫细胞化学的方法检测细胞内MMP-2和TIMP-2的变化。结果：AS-ODN转染48h后,SGC-7901细胞内HPA-mRNA表达下降（P〈0．01）,MMP-2的表达量亦减少（P〈0．01）。结论：HPAAS-ODN可以有效地抑制胃癌细胞MMP-2的表达。     

隐丹参酮对人胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响及其机制

目的探讨隐丹参酮(CPT)对人胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响及其机制。方法用不同浓度的CPT作用于人胃癌细胞SGC-7901,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖的活力;流式细胞术检测细胞凋亡的变化;Real Time RT-PCR法检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、p53和p21 mRNA表达的变化;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、p53和p21表达的变化。结果 CPT作用于人胃癌细胞SGC-7901 24 h后,可明显抑制细胞生长,诱导细胞发生凋亡;在转录水平上调促细胞凋亡蛋白Bax和p53 mRNA的表达,下调抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2 mRNA的表达;在翻译水平上调促细胞凋亡蛋白Bax和p53的表达,下调抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论 CPT对人胃癌细胞SGC-7901具有诱导凋亡的作用,其机制可能与线粒体途径相关。     

胃癌细胞SGC-7901中乙酰肝素酶基因和CD44v6表达的关系

目的:探讨乙酰肝素酶(HPA)反义寡核苷酸(AS-ODN)对CD44v6表达的影响。方法:采用脂质体介导HPAAS-ODN转染人胃癌细胞株SGC-7901,RT-PCR检测HPAmRNA的表达,采用免疫细胞化学SABC法观察细胞内CD44v6表达的变化。结果:脂质体介导转染HPAAS-ODN48h后MSGC-7901胃癌细胞内HPAmRNA表达下降MCD44v6阳性表达率转染前69.4%M转染不同浓度的AS-ODN后分别为56.5%,54.1%,46.5%和41.3%。转染后细胞CD44v6表达明显减少(P<0.01)。结论:HPAAS-ODN可以有效抑制胃癌细胞CD44v6的表达。     

新藤黄酸对人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制和诱导凋亡作用的研究

目的 观察不同浓度新藤黄酸（gambogenic acid,GNA）对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响。方法 倒置光学显微镜下观察不同浓度GNA处理SGC-7901细胞24 h后细胞形态的变化;采用MTT法检测不同浓度（0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0 μmol/L）GNA处理24 h后人胃癌SGC-7901细胞活力的变化;Annexin Ⅴ-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测凋亡相关蛋白p53和Caspase-9的表达水平。结果 MTT检测结果表明,GNA对人胃癌SGC-7901细胞的生长和增殖有抑制作用,并随着GNA浓度的增加细胞活力明显下降。流式细胞仪检测结果提示,GNA诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡,随着GNA浓度增加,凋亡率逐渐增加。Western blot表明p53和Caspase-9蛋白表达水平呈浓度依赖性升高。结论 GNA能诱导人胃癌SGC-7901细胞的凋亡。     

p73β基因转染对胃癌细胞的生物学影响

目的研究人p73β基因转染对人胃癌细胞SGC-7901的生物学影响,探讨p73β基因抑制SGC-7901细胞增殖的机制。方法用脂质体转染法瞬时转染SGC-7901细胞,转染重组质粒pcDNA3.1-p73β（SGC-7901-pcDNA3.1-p73β组）和空载质粒pcDNA3.1-N0（SGC-7901-pcDNA3.1-N0组）,并用未转染质粒具有相同遗传背景和代数的SGC-7901细胞作为空白对照（SGC-7901组）。逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞中P73β、p21、c-myc表达量变化,MTT法观察细胞增殖的活力,原位细胞凋亡检测TUNEL法观察细胞凋亡。结果RT-PCR检测发现SGC-7901-pcDNA3.1-p73β组细胞与SGC-7901-pcDNA3.1-N0和SGC-7901两对照组相比,其p73β表达明显增高,p21相对表达量明显增多,c-myc相对表达量明显减少。与两对照组相比,SGC-7901-pcDNA3.1-p73β组细胞增殖率明显减弱,细胞凋亡率明显增高（均P〈0.05）。结论p73β基因可以促进SGC-7901细胞内p21基因的表达,抑制c-myc基因表达。p73β基因可降低胃癌细胞增殖力,诱导胃癌细胞凋亡。     

Ⅱ．胃癌细胞SGC-7901中乙酰肝素酶基因和CD44v6表达的关系

目的：探讨乙酰肝素酶（HPA）反义寡核苷酸（AS-ODN）对CD44v6表达的影响。方法：采用脂质体介导HPAAS-ODN转染人胃癌细胞株SGC-7901．RT-PCR检测HPA mRNA的表达，采用免疫细胞化学SABC法观察细胞内CD44v6表达的变化。结果：脂质体介导转染HPA AS-ODN48h后．SGC-7901胃癌细胞内HPA mRNA表达下降，CD44v6阳性表达率转染前69．4％，转染不同浓度的AS-ODN后分别为56．5％，54．1％，46．5％和41．3％。转染后细胞CD44v6表达明显减少（P〈0．01）。结论：HPA AS-ODN可以有效抑制胃癌细胞CD44v6的表达。     

高迁移率族蛋白1对奥沙利铂诱导的SGC-7901胃癌细胞凋亡的影响

目的 构建pDsRED2-HMGB1重组质粒,探讨转染高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因对奥沙利铂诱导的SGC-7901细胞凋亡的影响.方法 用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增HMGB1 mRNA全编码序列,将PCR产物插入到pDsRED2-N1载体的Xho I和EcoR I位点,构建pDsRED2-HMGB1重组质粒;通过脂质体法转染SGC-7901胃癌细胞,荧光显微镜检测HMGB1红色荧光融合蛋白表达.Western blot鉴定HMGB1蛋白表达.应用流式细胞仪(Annexin-V/PI标记)分析HMGB1过表达对奥沙利铂诱导胃癌细胞凋亡的影响.结果 成功构建真核表达质粒pDsRED2-HMGB1,转染SGC-7901细胞后,荧光显微镜下可见细胞内有HMGB1红色荧光融合蛋白的表达;流式细胞术检测发现转染pDsRED2-HMGB1后SGC-7901细胞凋亡水平较转染pDsRED2-N1组下降22.4%.结论 HMGB1过表达可抑制奥沙利铂诱导的SGC-7901胃癌细胞凋亡.     

PUMA对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响

目的研究外源性p53正向细胞凋亡调控因子(p53up-regulated modulator of apoptosis protein,PUMA)基因对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响。方法制备PUMA基因并插入pcDNA 3.1(-)质粒,观察其转染胃癌SGC-7901细胞后PUMA蛋白的表达并用MTT法检测细胞的增殖力[实验设3组,分别为无转染空白胃癌细胞对照(SGC-7901)组,空载质粒转染胃癌细胞对照(SGC-7901-pcDNA3.1)组及重组PUMA质粒实验(SGC-7901-pcDNA3.1-PUMA)组]。结果 PUMA经限制性核酸内切酶切及测序分析,与预期结果吻合。转染质粒后,SGC-7901组与SGC-7901-pcDNA3.1组PUMA表达比较差异无统计学意义(P>0.05,相对表达量分别为0.24±0.01和0.23±0.01),SGC-7901-pcDNA3.1-PUMA组与另2组比较PUMA表达明显增高(P<0.05,相对表达量为0.39±0.01)。SGC-7901、SGC-7901-pcDNA3.1和SGC-7901-pcDNA3.1-PUMA组的A值分别为0.43±0.04、0.46±0.04和0.32±0.03,SGC-7901-pcDNA3.1-PUMA组与另2组比较明显下降(均P<0.01),SGC-7901组与SGC-7901-pcDNA3.1组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论外源性人类PUMA基因对胃癌细胞增殖有抑制作用。     

尼美舒利对人胃癌SGC-7901细胞凋亡影响的实验研究

目的:观察尼美舒利对人胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响并对其机制进行初步研究?方法:体外培养人胃癌SGC-7901细胞,并给予不同浓度尼美舒利干预,HE染色?电镜观察药物作用后细胞形态学变化;免疫组化?Western blot方法检测药物对人胃癌SGC-7901细胞COX-2?bcl-2?bax蛋白表达的影响?结果:HE染色检测结果显示随着给药浓度的上升及给药时间的延长,SGC-7901细胞逐渐变得稀疏,光镜及电镜下高浓度组可见核固缩?核碎裂?染色质边集等凋亡及坏死的形态学表现;免疫组化?Western blot结果显示尼美舒利作用48 h后人胃癌SGC-7901细胞COX-2?bcl-2表达逐渐下降,bax表达逐渐上升,具有剂量依赖性?COX-2与bcl-2之间蛋白表达率具有相关性(rs = 0.885 9;P < 0.001)?结论:尼美舒利可以促进人胃癌SGC-7901细胞凋亡,其促凋亡机制与促进bax表达及抑制bcl-2表达有关?     

腺病毒介导的ING4基因抑制胃癌细胞生长及其分子机制

目的:研究肿瘤生长抑制基因4(inhibitor of growth family4,ING4)体外对胃癌细胞SGC-7901的生长抑制及其分子机制。方法:将携带有人ING4基因的重组复制缺陷型腺病毒(Ad-hING4)感染胃癌细胞SGC-7901,RT-PCR法检测腺病毒介导的外源性hING4基因的转录,MTT法检测hING4基因对SGC-7901细胞的生长抑制作用,激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察hING4基因诱导SGC-7901细胞凋亡的形态学改变,流式细胞仪(FACS)检测hING-4基因诱导胃癌细胞SGC-7901的凋亡率及细胞周期改变,免疫细胞化学分析凋亡相关因子bcl-2和bax的改变。结果:Ad-hING4感染SGC-7901细胞后,RT-PCR结果提示有hING4目的基因的转录,该基因表达可以显著抑制SGC-7901细胞的生长,诱导S期减少、G2/M期阻滞和凋亡,hING4基因能使SGC-7901细胞中bcl-2的表达下调和bax的表达上调。结论:重组腺病毒Ad-hING4对胃癌细胞SGC-7901具有显著的生长抑制及凋亡诱导作用,其作用机制可能与下调bcl-2基因和上调bax基因的表达有关。     

PCDNA3/p33ING1、wt-p53转染对胃癌细胞株SGC-7901生长抑制及凋亡的影响

目的 研究p33^ING1基因与p53基因间的协同功能对胃癌细胞生长抑制和细胞凋亡的影响。方法 构建PCD—NA3／p33^ING1真核表达质粒（正义，反义）与wt—p53质粒，将其单、共转染至胃癌细胞株SGC-7901；应用流式细胞仪检测细胞生长周期曲线比例；TUNEL法、MG-P-MY法染色观察SGC-7901的凋亡情况。结果 p33^ING1单转染和wt-p53共转染的SGC-7901胃癌细胞株较反义组和转染空载体组细胞生长速度减慢。细胞周期G0／G1期延长，S期变短（P〈0．05），细胞调亡数增加（P〈0．05）。结论 p33 ING1具有抑癌功能及生物活性．与p53基因共同抑制胃癌细胞的生长，诱导细胞的凋亡，使细胞周期阻滞。二者呈协同依赖关系。     

Bcl-2shRNA稳定转染联合γ射线对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响

目的 观察Bcl-2shRNA稳定转染联合γ线照射对胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响.方法 构建针对Bcl-2基因的干扰质粒pGPH1/GFP/Neo,经脂质体介导转染SGC-7901细胞,G418筛选稳定表达的细胞株,γ线照射后形成4组细胞,分别命名为SGC-7901(A组)、照射/SGC-7901(B组)、Bcl...     

尼美舒利诱导胃癌细胞凋亡的作用

目的探讨选择性环氧化酶2(COX-2)抑制剂尼美舒利体外诱导胃癌细胞株SGC7901凋亡的作用和可能的细胞内信号转导机制。方法体外将选择性COX-2抑制剂尼美舒利作用于胃癌细胞株SGC7901,流式细胞仪检测尼美舒利对细胞凋亡的影响;Western blot法检测药物作用前后STAT3蛋白的磷酸化活性(P-STAT3)和bcl-2的表达。结果FCM显示SGC7901细胞经100、200μmol/L尼美舒利作用48h后与对照组相比细胞凋亡百分数增高,且在同一时间随药物浓度增加凋亡百分数增高;Western blot结果显示尼美舒利作用24、48h后P-STAT3、bcl-2蛋白的表达降低。结论尼美舒利体外可促进胃癌细胞凋亡,其机制可能与抑制STAT3信号通路相关蛋白P-STAT3、bcl-2表达有关。     

曲古抑菌素A对人胃癌细胞SGC-7901生长及bcl-2、caspase-3mRNA表达的影响

目的研究曲古抑菌素A（TSA）对人胃癌细胞的增殖、凋亡及bcl-2、caspase-3 mRNA表达的影响及其意义。方法体外培养人胃癌细胞株SGC-7901,MTT法检测不同浓度TSA作用不同时间后细胞的增殖情况;流式细胞术检测不同浓度TSA作用48 h后的细胞凋亡情况;RT-PCR检测胃癌细胞中bcl-2、caspase-3 mRNA表达情况。结果不同浓度TSA作用不同时间后,随着时间延长及浓度增高,细胞的增殖抑制明显,呈现明显时间-效应关系及剂量效应关系;与阴性对照组比较,随着TSA浓度的增加,胃癌细胞SGC-7901的早期凋亡率逐渐增高,差异有统计学意义（P〈0.05）;与阴性对照组比较,胃癌细胞中bcl-2 mRNA随TSA浓度的增高,表达逐渐下调,而caaspase-3mRNA随TSA浓度的增高表达逐渐上调,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 TSA对人胃癌细胞SGC-7901具有明显生长抑制作用,呈时间与剂量依赖性;能诱导人胃癌细胞SGC-7901发生早期凋亡能诱导胃癌细胞株SGC-7901细胞发生早期凋亡;TSA抑制人胃癌细胞SGC-7901增殖与诱导凋亡作用可能与bcl-2 mRNA表达下调、caspase-3mRNA表达上调有关。     

p53突变型胃癌细胞株细胞凋亡及基因调控机制的研究

目的研究顺铂作用于p53野生型AGS、p53突变型MGC-803、SGC-7901 3种胃癌细胞株后，引起细胞凋亡及p53下游基因表达的变化，探讨其发生机制。方法采用流式细胞技术(FCM)检测不同浓度顺铂（0、1、2μg/mL）作用24h后AGS、MGC-803、SGC-7901 3种胃癌细胞株，细胞周期和凋亡率的变化；RT-PCR法检测上述不同浓度顺铂分别作用于3种胃癌细胞株，p53下游基因p21、bax、puma、bcl-2、bcl-xl表达的变化。结果FCM显示，顺铂可引起3种细胞细胞周期发生改变：S+G2期比例均明显升高，同时3种细胞的凋亡率均明显增多（P<0.01）；RT-PCR结果显示，AGS细胞的p53、bax、p21表达均随顺铂剂量的增加而增加（P<0.05），puma变化不明显（P>0.05）；bcl-2、bcl-xl的表达随顺铂剂量的增加而降低(P<0.05)。MGC-803、SGC-7901细胞的bcl-2、bcl-xl表达均随顺铂剂量的增加而降低(P<0.05)，而bax、p21、puma的表达变化不明显。结论在p53突变细胞株中，DNA损伤可诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡，凋亡调控因子的表达也发生改变。其机制可能与p53突变的具体位点有关，亦可能与p53非依赖性途径的信号传递有关。     

靶向bcl-2基因短发卡RNA干扰真核质粒表达稳定株筛选和建立

目的构建针对bcl-2基因的短发卡RNA(shRNA)干扰真核质粒表达载体,转染到bcl-2基因高表达的胃癌细胞株SGC-7901中,并筛选出稳定低表达bcl-2基因的细胞株。方法针对bcl-2基因的mRNA序列设计、合成4对寡核苷酸序列,插入质粒载体pGPH1/GFP/Neo中,经脂质体介导转染SGC-7901细胞。RT-PCR检测bcl-2基因在mRNA水平的变化,MTT法检测bcl-2基因沉默后胃癌SGC-7901细胞的增殖情况。基因沉默效果最好的一组,经G418筛选以得到稳定表达株。结果与对照组相比,转染成功后的细胞bcl-2基因在mRNA水平均显著下降,细胞增殖速度明显降低(t=2.41,P<0.05);并筛选出稳定表达shRNA2质粒的阳性克隆。结论本研究成功利用针对bcl-2基因的shRNA质粒载体筛选出稳定低表达bcl-2基因的SGC-7901细胞,为胃癌的基因治疗研究奠定了基础。     

5-氟脲嘧啶诱导人胃癌细胞凋亡的研究

探讨５－氟脲嘧啶诱导人胃癌细胞凋亡的规律及在胃癌化疗中的意义。方法：应用细胞形态观察,琼脂糖凝胶电脉,流式细胞仪检测和观察５－ＦＵ对胃癌细胞ＳＧＣ－７９０１增殖周期的影响以及杀伤细胞的方式,并检测了ＳＧＣ－７９０１细胞表面ｂｃｌ－２、ｂａｘ蛋白的表达情况。