神经生长因子对氧合血红蛋白诱导小鼠脑细胞Bcl-2和Bax表达的影响

[目的]研究神经生长因子(NGF)对氧合血红蛋白(0xyHb)诱导的小鼠脑细胞Bcl-2和Bax表达的影响,进一步探讨OxyHb诱导细胞凋亡及NGF对神经元保护作用的可能机制。[方法]雄性健康ICR小鼠随机分为损伤组(24只)、损伤给药组(24只)及对照组(6只),脑皮层局部蛛网膜下腔注射OxyHb建立蛛网膜下腔出血的动物模型,尾静脉注射神经生长因子,使用免疫组织化学法检测Bcl-2、Bax表达的情况。[结果]注射OxyHb后,Bcl-2表达降低,Bax表达增加,在NGF给药组,Bcl-2表达增加,而Bax表达则明显降低。[结论]注射入小鼠局部脑组织蛛网膜下腔的OxyHb可引起小鼠神经细胞Bax表达增加,可能是诱导凋亡的一个主要原因,而静脉注射NGF可以抑制OxyHb诱导的Bax表达增加,其机制可能是通过与受体结合,从而增加Bcl- 2蛋白表达,降低Bax表达水平以实现其保护作用。     

神经生长因子及其受体在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的:研究神经生长因子(NGF)及其受体P75NGFR和TrkA在胰腺癌组织中的表达及其与临床病理学指标间的关系.方法:采用免疫组化技术检测NGF、P75NGFR和TrkA在65例胰腺癌、18例癌旁正常胰腺及慢性胰腺炎组织中的表达和分布,并分析其表达与临床病理学指标间的关系.结果:NGF及TrkA在胰腺癌组织中的表达较癌旁正常胰腺及慢性胰腺炎组织高;而P75NGFR的表达无显著性差异.NGF的表达与肿瘤大小密切相关,与淋巴结转移也有关;而P75NGFR和TrkA两者的表达只与淋巴结转移密切相关.NGF的表达与胰腺癌组织学分型、肿瘤分期、肿瘤大小、淋巴结转移都有关,而与肿瘤大小的关系最为密切;P75NGFR的表达仅与淋巴结转移有关;而TrkA的表达与淋巴结转移和肿瘤分期有关.淋巴结转移和TrkA的阳性表达与预后密切相关.结论:NGF、P75NGFR和TrkA在胰腺癌的发展中有一定的作用,TrkA与胰腺癌的关系尤为密切,可作为重要的靶标分子用于胰腺癌的基因治疗.     

神经生长因子在炎性疼痛中的作用及机理研究进展

神经生长因子是一种高分子量的肽,广泛存在于机体各种组织、器官,能够结合TrkA受体和p75NTR受体,在中枢神经系统和周围神经系统的发展和维持中起着重要作用。神经生长因子的失调与多种病理学的疼痛有关,神经生长因子及其受体在疼痛的产生及维持中担任重要角色。而神经生长因子在炎性疼痛中的作用及机理尚不清楚。本文对其现在的研究情况做一综述。     

胰腺癌组织中神经生长因子受体的表达意义

目的:研究神经生长因子(NGF)高亲和受体TrkA与低亲和受体p75在胰腺癌中的表达意义.方法:应用实时定量PCR法检测56例胰腺癌组织中TrkA及p75的表达并进行临床病理及预后分析.结果:所有组织标本中均可检测出TrkA及p75的表达呈负相关.p75与TrkA的表达水平与患者的腹背部疼痛和神经浸润程度有关 (P均＜0.05).Cox单变量分析揭示,高p75表达患者较高TrkA患者的总生存时间延长(P＜0.05),Cox多变量分析揭示,p75及TrkA均为影响预后的独立因素.结论:胰腺癌中TrkA的表达促进肿瘤的恶性进展,而p75则相反,NGF刺激增长或抑制胰腺癌的双重作用可能与TrkA及p75的表达比率相关.     

神经生长因子受体TrkA和p75在乳腺肿瘤中的表达及意义

目的观察神经生长因子(NGF)受体TrkA和p75在乳腺肿瘤和不同乳腺癌细胞株的表达情况,分析它们与乳腺肿瘤的相关性及TrkA/p75比值对NGF诱导增殖效应的影响。方法采用免疫组化技术检测15例正常乳腺组织、28例乳腺良性肿瘤和62例乳腺恶性肿瘤中TrkA和p75的表达及乳腺癌细胞株MCF-7和SKBR3中NGF、TrkA和p75的表达,采用实时荧光定量PCR技术检测2种细胞株中TrkA和p75的mRNA表达水平,采用MTT检测2种细胞株对NGF诱导增殖的反应。结果 TrkA在乳腺恶性肿瘤中的表达高于乳腺良性肿瘤和正常乳腺组织(χ2=39.98,P<0.01);p75仅在正常乳腺的肌上皮细胞和结缔组织中高表达,随着肿瘤的恶性程度增高,p75的表达逐渐减少最终缺失(χ2=50.96,P<0.01);SKBR3乳腺癌细胞分泌的NGF,表达的TrkA和p75 mRNA及蛋白水平均高于MCF-7细胞(均P<0.05),并且SKBR3细胞表达的TrkA/p75比值高于MCF-7细胞(P<0.05);相对于空白对照组,NGF可诱导SKBR3和MCF-7细胞的增殖(均P<0.05),并在各时点,NGF对SKBR3细胞诱导的增殖率均高于MCF-7细胞(均P<0.05)。结论 TrkA和p75的表达与乳腺肿瘤的恶性程度有关,有可能作为乳腺癌治疗的分子靶点。     

神经生长因子及受体在结直肠肿瘤中的表达及临床意义

目的探讨神经生长因子NGF及其受体TrkA和P75在结直肠癌中的表达及其与临床病理学指标间的关系。方法运用免疫组化技术SABC法检测NGF、TrkA和P75在80例结直肠癌和I6例结直肠癌旁正常组织中的分布和表达情况。结果NGF在结直肠癌组织中表达的阳性率57．5％,在癌旁正常组织中表达的阳性率25％;TrkA在结直肠癌组织中表达的阳性率55％,在癌旁正常组织中表达的阳性率3I3％;P75在结直肠癌组织中表达的阳性率47．5％;在癌旁正常组织中表达的阳性率625％,NGF及TrkA在结直肠癌组织中的表达较癌旁正常结直肠组织高,而P75的表达无显著差异。NOF和TrkA的表达与结直肠癌细胞分级、临床分期、淋巴结转移有关。P75只与淋巴结转移有关。结论NGF、TrkA和P75与结直肠癌的淋巴结转移有关,NGF和TrkA两者在结直肠癌的细胞分化、浸润及淋巴结转移中有协同作用。     

神经生长因子对大鼠脑缺血再灌注小脑神经细胞凋亡的影响

目的 观察神经生长因子(NGF)对大鼠全脑缺血再灌注小脑皮层神经细胞凋亡的影响。方法 采用闭塞大鼠四动脉建立全脑缺血模型，应用光镜、电镜及末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL染色法)观察模型组和NGF治疗组动物脑缺血30min再灌注7d小脑皮层神经细胞凋亡的情况。结果 模型组小脑皮层神经细胞有明显形态学损伤，蒲肯野细胞凋亡明显。NGF组(1000u／kg，2000u／kg)神经细胞结构损伤明显减轻，凋亡细胞明显减少。结论 NGF对大鼠全脑缺血再灌注小脑皮层神经细胞凋亡有明显抑制作用。     

盆痛灵方对子宫内膜异位症大鼠神经生长因子及其受体表达的影响

目的:探讨盆痛灵方对子宫内膜异位症(EMs)大鼠异位内膜神经生长因子(NGF)及其受体酪氨酸激酶受体A(TrkA)和神经营养因子受体p75(p75NTR)表达的影响。方法:采用自体内膜移植法建立大鼠EMs模型。取造模成功的大鼠随机分为模型组、消炎痛组和盆痛灵低、中、高剂量组,每组10只;另设假手术组10只(仅切除单侧结扎段子宫)。消炎痛组大鼠给予3 mg·kg~(-1)·d~(-1)消炎痛混悬液,盆痛灵低、中、高剂量组大鼠分别给予10.2、20.4、40.8 g·kg~(-1)·d~(-1)盆痛灵方水煎液,各组均采用直肠给药方式,每日1次,连续4周;模型组和假手术组给予等体积0.9%NaCl溶液。末次给药后,采集各组大鼠的子宫内膜组织。PCR检测各组大鼠异位内膜NGF、p75NTR、TrkA的mRNA表达,Western blot和免疫组化法检测异位内膜NGF、p75NTR、TrkA蛋白表达。结果:①PCR检测显示,模型组大鼠内膜组织NGF、TrkA、p75NTR的mRNA表达较假手术组显著升高(P0.01);与模型组相比,消炎痛组和盆痛灵中、高剂量组NGF和TrkA的mRNA表达明显降低(P0.05,P0.01),消炎痛组和盆痛灵高剂量组p75NTR的mRNA表达亦明显降低(P0.01);与盆痛灵低剂量组相比,高剂量组大鼠的内膜组织NGF、TrkA、p75NTR的mRNA表达均显著降低(P0.01),中剂量组TrkA mRNA表达亦明显降低(P0.05);与盆痛灵中剂量组相比,高剂量组p75NTR mRNA表达明显降低(P0.01)。②Western blot检测显示,模型组大鼠内膜组织NGF、TrkA、p75NTR蛋白表达水平较假手术组显著升高(P0.01);与模型组相比,消炎痛组及盆痛灵高、中、低剂量组NGF、TrkA、p75NTR蛋白表达水平均明显降低(P0.01);与盆痛灵低剂量组相比,中、高剂量组大鼠子宫内膜NGF、TrkA、p75NTR蛋白表达水平均显著降低(P0.01);与盆痛灵中剂量组相比,高剂量组NGF、TrkA、p75NTR蛋白表达水平亦显著降低(P0.01)。③免疫组化检测显示,与假手术组相比,模型组NGF及其受体p75NTR、TrkA在异位内膜的腺上皮细胞与间质细胞胞浆呈高表达,仅少量表达于胞核;与模型组相比,消炎痛组及盆痛灵中、高剂量组NGF、p75NTR、TrkA的阳性表达明显减弱;与盆痛灵低剂量组相比,盆痛灵中、高剂量组NGF、p75NTR、TrkA的阳性表达明显减弱。结论:盆痛灵方可能通过降低异位内膜NGF及其受体p75NTR、TrkA的表达,对子宫内膜异位症起治疗作用,且其作用具有一定的剂量依赖性。     

外源性神经生长因子对三叉神经感觉神经细胞凋亡的影响

目的：探讨三叉神经下颌支损伤后外源性神经生长因子(NGF)对感觉神经元细胞凋亡及神经电生理的影响。方法：制作大鼠三叉神经下颌支离断硅胶管桥接动物模型，采用TUNEL法观察NGF局部应用三叉神经感觉核区神经元细胞凋亡的变化；采用肌电位仪观察三叉神经感觉核区感觉神经元电生理（动作电位潜伏期Lat，波幅Amp，传导速度CV）的变化。结果：外源性NGF治疗组三叉神经感觉核神经元细胞的凋亡数量明显少于单纯桥接吻合对照组。术后30d，NGF治疗组与单纯桥接吻合对照组相比，感觉神经元动作电位潜伏期短、波幅度、传导速度快。结论：外源性NGF在损伤局部应用，可在一定程度上抑制神经元细胞凋亡，促进神经电生理的恢复，从而对三叉神经损伤后神经的修复具有一定的促进作用。     

中药复方962胶囊对老年大鼠海马神经生长因子及其受体表达的影响

目的 我们以往的实验证明：中药复方962胶囊（含何首乌、石菖蒲等六味中药）能显改善老年大鼠学习记忆功能。本研究观察962胶囊对自然衰老大鼠模型海马区神经生长因子（NGF）及其受体TrkA表达的影响,探讨962胶囊改善学习记忆功能的作用机理。方法 雌性Wistar大鼠,老年为TrkA表达的影响,探讨962胶囊改善学习记忆功能的作用机理。方法 雌性Wistar大鼠,老年为22月龄,青年为5月龄。962胶囊高剂量1.8g/kg,962胶囊低剂量0.9g/kg,每日灌胃给药一次,连续灌胃2个月,ABC法行NGF和TrkA免疫组化染色。VISILOG5.0图像分析系统对组织切片进行分析。海马CAI区锥体细胞层连续摄取3个视野,这3个视野包括了整个CAI区,记数3个视野内总阳性细胞数量、阳性细胞总面积（象素单位）及阳性细胞灰度积分值（灰度单位）。海马CA2区连续摄取2个视野,海马CA3区连续摄取2个视野,海马CA4区摄取齿状回包含的1个视野,包括了完整的CA2、CA3、CA4区;结果（1）老年大鼠海马CA1、CA2、CA3、CA4区NGF和TrkA阳性细胞数,阳性细胞总面积和阳性细胞灰度积分值较青年对照组明显减少,以CA2、CA3区的减少最严重。（2）962胶囊能提高老年大鼠海马CA1、CA2、CA3、CA4区NGF和TrkA阳性细胞数量,阳性细胞总面积和阳性细胞灰度积分值,962胶囊高剂量组基本恢复青年对照组水平。结论 老年大鼠神经生长因子（NGF）及其受体TrkA在海马区表达明显减少,可能与其学习记忆能力下降有关;962胶囊能够明显促进老年大鼠海马区NGF及受体TrkA表达,可能是改善其学习记忆功能的药理学基础。增强内源性神经营养物质的表达对老年性痴呆的治疗有重要意义。     

Cotransfection of TrkA and p75NTR in neuroblastoma cell line (IMR-32) promotes differentiation and apoptosis

Objective To assess the effects of both TrkA and p75NTR on nerve growth factor (NGF)-induced differentiation of neuroblastoma cells.Methods Retroviral vectors were constructed to express the high affinity NGF receptor (TrkA) and low affinity NGF receptor ( p75^NTR). Neuroblastoma cell line IMR-32 was transfected by the vectors expressing either TrkA or p75^NTR or both by using lipofectmine^TM reagent separately or cotransfected at the same time. Southern blot, Northern blot, RT-PCR and flow cytometry were used to determine the success of the transfection. MTT technique was to monitor the cell proliferation. Colony formation in soft agar and tumor forming assay in nude mice were used to test the biological characteristics of the tumor cells. Terminal-deoxynucleotidytransferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL)assay was used to test the apoptosis of the tumor cells.Results Stable transformant cell lines expressing TrkA, p75^NTR or both genes were established.Studies on these transformant cell lines have shown different NGF responses. The p75^NTR transfection only resulted in the mild differentiation response, and transfection of TrkA gene caused remarkable neurite extension, up-regulation of neurofilament and decreased expression of N-myc oncogene after NGF treatment. The cotransfection of the two genes into this cell line resulted in the more rapid and more apparent morphological changes than single TrkA transfected cells after NGF treatment. The cotransfected cells underwent apoptosis after withdrawal of NGF.Conclusions The results indicate that coexpression of both low-and high-affinity NGF receptors are not only more efficient in restoration of NGF-induced differentiation pathway, but also be able to activate the pro-apoptotic activity of low-affinity NGF receptor and make the tumor cells become NGF-dependent and irreversibly differentiated.     

Cotransfection of TrkA and p75~(NTR) in neuroblastoma cell line (IMR-32) promotes differentiation and apoptosis of tumor cells

Objective To assess the effects of both TrkA and p75NTR on nerve growth factor (NGF)-induced differentiation of neuroblastoma cells.Methods Retroviral vectors were constructed to express the high affinity NGF receptor (TrkA) and low affinity NGF receptor (p75NTR). Neuroblastoma cell line IMR-32 was transfected by the vectors expressing either TrkA or p75NTR or both by using lipofectmine?reagent separately or cotransfected at the same time. Southern blot, Northern blot, RT-PCR and flow cytometry were used to determine the success of the transfection. MTT technique was to monitor the cell proliferation. Colony formation in soft agar and tumor forming assay in nude mice were used to test the biological characteristics of the tumor cells. Terminal-deoxynucleotidytransferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL) assay was used to test the apoptosis of the tumor cells.Results Stable transformant cell lines expressing TrkA, p75NTR or both genes were established. Studies on these transformant cell line     

乌头汤对DPN大鼠NGF受体TrkA、p75NTR表达的影响

[目的] 通过观察乌头汤对糖尿病周围神经病变（DPN）大鼠胫神经神经生长因子（NGF）受体、酪氨酸蛋白激酶A（TrkA）和p75神经营养因子受体（p75NTR）表达及血清NGF含量的影响,探索该方改善DPN的可能机制。[方法] Wistar大鼠腹腔注射链尿佐菌素（STZ）建立糖尿病模型,观察乌头汤对胫神经纤维组织TrkA、p75NTR及血清NGF的影响。[结果] 干预前后模型组和乌头汤组均较空白组FBG显着升高（P<0.01）,各组内FBG在干预前后无统计学差异（P>0.05）;与模型组比较,乌头汤组血清NGF含量明显升高（P<0.05）,神经组织p75NTR明显降低（P<0.05）.乌头汤组p75NTR免疫组化染色阳性表达程度较模型组明显降低。[结论] 乌头汤改善DPN的作用可能与其能够调节神经纤维p75NTR含量和血清NGF含量有关。     

全脑缺血大鼠海马CA1区神经元凋亡和神经生长因子的保护作用

目的：研究大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区P75NTR、Bcl-2、Bax表达及细胞凋亡的变化及神经生长因子（NGF）对它们的影响，进一步探讨该区神经元短暂脑缺血后产生凋亡及NGF对神经元保护作用的可能机制。方法：通过四血管闭塞法建立大鼠全脑缺血-再灌注模型，侧脑室注射NGF，免疫组织化学法检测P75NTR、Bcl-2、Bax表达的情况，TUNEL法检测神经元凋亡。结果：对照组海马CA1区无P75NTR、Bcl-2阳性染色和凋亡细胞，可见少量Bax表达，再灌注后该区Bcl-2始终阴性表达，Bax则表达增加，出现P75NTR阳性表达和细胞凋亡；在NGF给药组，再灌注后海马CA1区Bcl-2出现阳性染色，而Bax及P75NTR的表达则明显降低，细胞凋亡亦明显减少。结论：再灌注后海马CA1区P75NTR、Bax的表达增加可能是神经元产生凋亡的机制之一，NGF抑制脑缺血后细胞凋亡的作用可能是通过对其受体的调节，从而调节Bcl-2和Bax的表达来实现的。     

NGF及其受体在涎腺腺样囊性癌中的表达及与神经周侵袭关系的探讨

目的：探讨涎腺腺样囊性癌（SACC）浸润性生长和神经周侵袭之间的关系.方法：应用免疫组织化学方法检测21例涎腺腺样囊性癌及8例正常涎腺组织标本中神经生长因子（NGF）及其受体酪氨酸激酶（TrkA）和p75NTR的表达情况.结果：正常涎腺组织的腺泡细胞中未见NGF,p75和TrkA阳性染色,在导管细胞中NGF75%阳性染色.在SACC肿瘤细胞胞浆中NGF81%阳性染色,p75NTR76%阳性染色,未见TrkA阳性染色.在癌周组织及神经纤维中发现NGF的阳性表达.NGF和p75NTR在腺样囊性癌的各病理分型中表达无明显差异.结论：NGF和p75NTR的分泌在SACC肿瘤细胞的浸润性生长和神经周侵袭的过程中扮演重要的角色.     

EGb761对谷氨酸诱导海马神经元兴奋毒性损伤中p75NTR表达的影响

目的：观察谷氨酸诱导海马神经元兴奋毒性损伤中神经营养因子受体p75（p75neurotrophin receptor,p75NTR）表达水平的变化,探讨银杏叶提取物（EGb761）抗兴奋毒性神经保护作用与p75NTR的相关性.方法：建立谷氨酸诱导的新生大鼠海马神经元兴奋毒性损伤模型,观察25200mg/L剂量下EGb761的神经保护作用;RT-PCR,Western Blot及细胞免疫荧光染色方法检测p75NTR的表达变化.结果：100mg/LEGb761预处理给药的神经保护效果最明显;谷氨酸刺激后,p75NTR在mRNA和蛋白质水平的表达较对照组明显增高（P〈0.01）;EGb761本身对p75NTR表达无影响,而EGb761预处理组p75NTR在mRNA和蛋白质水平的表达较谷氨酸组均显著降低（P〈0.05）.结论：p75NTR在谷氨酸诱导兴奋毒性神经损伤中起着重要作用,EGb761抗兴奋毒性神经保护作用可能与抑制p75NTR的表达有关.