mRNA差异显示技术及其在肿瘤研究中的应用

mRNA差异显示技术是目前用于分析基因表达差异的方法，近年来发展迅速，广泛应用于肿瘤等生物学各领域。现综述mRNA差异显示技术的新发展及其在肿瘤研究中的应用。     

以mRNA差异显示方法克隆与鉴定小细胞肺癌新的相关基因cDNA片段

mRNA 差异显示方法是分离、克隆基因的先进技术。我们采用mRNA 差异显示方法克隆并鉴定了小细胞肺癌新的相关基因cDNA片段 ,现报告如下。一、材料与方法1.材料 :标本来源于中国医科大学第一临床学院胸外科一例小细胞肺癌患者。2 .方法 :应用mRNA差异显示技术克隆与鉴定出 3个差异cDNA片段 ,在国际互联网上应用blastsimilaritysearchingsystem进行同源性比较和分析。二、结果1.mRNA差异显示结果 :锚定引物和随机引物所得的差异显示结果显示出多条cDNA条带 ,选择其中 3条cDNA差异带用于分析 (其中差异带A为癌组织所特有 ,差异带B、…     

人高、低转移肺大细胞癌细胞系的mRNA差异显示研究

目的 通过研究人高、低转移肺大细胞癌细胞系基冈差异表达谱，克隆与肿瘤转移相关的基因。方法 应用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)对高、低转移人肺大细胞癌细胞系的mRNA进行差异显示，切胶回收差异表达cDNA，克隆测序后与GenBank数据库进行Blast比对。结果 获得差异表达cDNA50条，其中已知功能基因18条，末知功能基因16条，DNA来源16条，EST4条。结论 人高、低转移肺大细胞癌细胞系的基因表达差异较大，转移的过程受基因的表达与调控的影响。应用DDRT-PCR技术有单找到调控肿瘤转移的基因，为肿瘤的诊断和治疗提供新的线索。     

羧肽酶E的高表达与肿瘤的生长和转移相关

羧肽酶E(Carboxypeptidase E,CPE)是多种激素肽和神经递质生物合成过程中最主要的羧肽酶.GEO数据分析显示,羧肽酶E作为激素原处理酶,在不同类型的肿瘤中表达.在肺神经内分泌肿瘤、垂体瘤等中,CPE mRNA表达升高.微阵列分析显示,在很多转移性非神经内分泌肿瘤中,CPE mRNA的表达水平也显著升高,例如:结直肠癌,肾癌,尤文氏肉瘤,但CPE mRNA的表达在其相应的正常组织中缺如.研究显示,不仅野生型CPE在肿瘤中表达,其变异体也与肿瘤相关,在一些较大或侵袭性肿瘤中,CPE 变异体mRNA的基因拷贝数非常高.总之,CPE可能在促进肿瘤生长、侵袭及转移中发挥重要作用,能够成为不同类型转移癌诊断及预后判断潜在的生物标志物.     

人胃癌差异表达基因片段的分离与测序

目的:肿瘤差异表达基因在肿瘤的发生发展中起重要作用,胃癌在我国全部恶性肿瘤死亡构成比中居第一位,本文拟钓取人胃癌差异表达基因片段,探讨胃癌发生发展的机制.方法:应用最新分离差异基因的mRNA差异显示技术,优化反应条件对人胃癌组织中差异表达的基因片段进行分离,测序和Northem验证.结果:获得经Northem杂交证实的在胃癌组织中表达的两个cDNA片段scg1和scg2,序列分析表明长度分别为194bp和343bp,同源性比较结果显示scg1和scg2与GenBank中已发表基因序列均无同源性.结论:本研究初步证实scg1和scg2可能是人胃癌组织中表达的新基因片段,推测与人胃癌发生发展相关.检测全长cDNA序列的深入工作正在进行中.     

口腔黏膜鳞癌线性梯度切缘组织p53和c-erbB-2及EGFR表达对切除范围的指导意义

目的:检测口腔黏膜鳞癌(OS-CC)原发灶线性梯度外科切缘组织中p53、c-erbB-2和EGFR的表达情况,寻找肿瘤手术安全切缘的分子标志.方法:应用荧光定量RT-PCR对18例首次外科治疗的OSCC患者20组线性梯度标本(肿瘤组织、0、0.5、1.0、1.5以及2.0 cm切缘组织)中p53、c-erbB-2和EGFR的mRNA表达水平进行检测,并采用配对t检验进行统计学分析.结果:在p53 mRNA表达水平上各组切缘组织与肿瘤组织相比差异有统计学意义,P<0.01;0.5 cm切缘组与0 cm切缘组相比差异有统计学意义,P<0.01.在c-erbB-2 mRNA表达水平肿瘤组织、0、0.5、1.0和1.5 cm切缘组分别与2.0 cm切缘组相比差异有统计学意义,P<0.05.在EGFR mRNA表达水平各组切缘组织与肿瘤组织相比差异有统计学意义,P<0.01.结论:荧光定量RT-PCR技术在p53、c-erbB-2和EGFR的表达水平上,对于鉴定肿瘤组织与安全切缘组织的差异具有敏感性.联合p53、c-erbB-2和EGFR在梯度组织基因表达差异上分析提示2.0 cm的手术切缘已达到安全边界.     

mRNA差异显示方法筛选卵巢癌相关基因

人和动物肿瘤的发生发展就细胞而言,是由于原癌基因的激活和抑癌基因的失活而造成的,所以癌基因与抑癌基因的研究对探索肿瘤发病机理,寻找预防和治疗肿瘤的新措施都具有重要意义.卵巢癌在妇科恶性肿瘤中以难治著称,不易早期发现,且存活率低.目前人类对卵巢癌的遗传基础认识仍然不很清楚,许多研究表明卵巢癌的发生涉及一系列基因的变化,包括显性癌基因、错配修复基因和众多的肿瘤抑制基因.mRNA差异显示方法因其简单、敏感、高效、快速等     

多发性骨髓瘤骨髓单个核细胞PTEN mRNA的表达

目的观察PTEN mRNA在多发性骨髓瘤单个核细胞中的表达,探讨不同免疫球蛋白分型的多发性骨髓瘤患者PTEN基因mRNA表达的差异,了解PTEN基因在MM患者中的表达和意义.方法 RT-PCR法扩增多发性骨髓瘤患者单个核细胞中和非肿瘤对照者的PTEN mRNA,以β-actin作为内参照,用图像分析软件测定电泳条带的光密度值,并计算PTEN/β-actin比值.结果多发性骨髓瘤患者单个核细胞PTEN mRNA表达与非肿瘤患者之间差异无显著性.不同免疫球蛋白类型的多发性骨髓瘤患者之间差异无显著性.结论多发性骨髓瘤患者单个核细胞PTEN基因mRNA表达未见异常,其在多发性骨髓瘤中的意义待定.     

应用FISH 和组织芯片方法研究肺癌组织Ets1 mRNA的表达及意义

 目的 用荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization, FISH）方法检测肺癌组织芯片（tissue microarray, TMA）中Ets1 mRNA表达情况,并探讨其在肺癌发生、发展中的作用和意义. 方法 利用mRNA FISH方法和组织芯片技术,检测肺癌Ets1 mRNA的表达情况. 结果 肺癌组中有70.4%表达Ets1 mRNA,而正常肺标本中未见Ets1 mRNA表达,差异有统计学意义（P〈0.05）;Ets1 mRNA的表达与肺癌的分化程度、淋巴结转移和临床分期显著相关（P〈0.05）. 结论 组织芯片技术可以使实验简便、经济和标准化;FISH方法敏感性强,稳定性高,荧光染色保存时间长,可以较好地反映mRNA在细胞中的定位和含量.本研究发现Ets1 mRNA表达与肺癌的侵袭转移有关,因而Ets1基因可能成为肿瘤患者预后判断和指导临床治疗的重要指标.     

贲门癌组织中Ebp1 mRNA的表达及其临床意义

背景与目的:Ebpl是近年发现的-种新型蛋白质,为表皮生长因子受体ErbB-3胞内近膜区结合蛋白,影响细胞增殖与分化.本研究旨在探讨人贲门癌组织中Ebpl mRNA表达及其与临床参数的关系.方法:采用实时荧光定量PCR对120例贲门癌患者的癌组织和癌旁至少5 cm处的正常贲门组织Ebpl mRNA的表达水平进行测定.结果:73(60.83%)例贲门癌样本中Ebpl mRNA表达下调,单因素分析显示,与贲门癌中Ebpl mRNA的表达高度相关的临床参数包括年龄、淋巴结转移、家族史、肿瘤体积、病理分级和临床分期.多因素分析显示,年龄、家族史、肿瘤体积、病理分级及临床分期均是Ebpl表达的保护因素,而性别是Ebpl mRNA表达的危险因素,即女性中Ebpl mRNA表达高于男性.结论:Ebpl在贲门癌发展过程中起重要作用,可作为贲门癌病情进展的监测、转移潜能及预后评估方面的-个靶基因.