肿瘤坏死因子和干扰素上调大肠癌Fas配体的表达

我们曾用聚合酶链反应 (ＰＣＲ)发现人大肠癌细胞株表达功能性Ｆａｓ配体 (ＦａｓＬ) ,诱导人Ｆａｓ转基因淋巴细胞进入凋亡[1] 。为探讨内源性细胞因子对大肠癌ＦａｓＬ表达水平的调控作用 ,作者用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法测定了细胞因子处理后大肠癌细胞的ＦａｓＬ表达水平。一、材料和方法1.细胞和药物 :ＲＰＭＩ 4788,ＨＣＴ 116 ,ＤＬＤ 1,ＬｏＶｏ,ＷｉＤｒ和ＳＷ6 2 0均是美国组织培养库 (ＡＴＣＣ)收录的人大肠癌细胞株 (日本冈山大学第一外科田中纪章教授惠赠 ) ,人外周血单核细胞 (ＰＢＭＣ)以Ｆｉｃｏｌｌ混合液常规连续密度梯度离…     

Fas及Fas配体在盘状红斑狼疮皮损中的表达

目的 研究细胞凋亡与红斑狼疮发病的关系。方法 采用免疫组化法检测了30例盘状红斑狼疮（DLE）患者皮损及5例正常对照皮肤Fas及Fas配体（FasL）的表达。结果 DLE皮损中表皮角质形成细胞、真皮血管周围及部分皮肤附属器周围浸润淋巴细胞可见较多的Fas、FasL阳性表达。少数毛囊、汗管可见Fas阳性表达。正常对照的Fas及FasL表达弱阳性或阴性。结论 Fas、FasL途径诱导的细胞凋亡可能与红斑狼疮发病有关。     

Fas及Fas配体在盘状红斑狼疮皮损中的表达

目的　研究细胞凋亡与红斑狼疮发病的关系。方法　采用免疫组化法检测了 30例盘状红斑狼疮 (DL E)患者皮损及 5例正常对照皮肤 Fas及 Fas配体 (Fas L )的表达。结果　 DL E皮损中表皮角质形成细胞、真皮血管周围及部分皮肤附属器周围浸润的淋巴细胞可见较多的 Fas、Fas L阳性表达。少数毛囊、汗管可见 Fas阳性表达。正常对照的 Fas及 Fas L表达弱阳性或阴性。结论　 Fas、Fas L途径诱导的细胞凋亡可能与红斑狼疮发病有关。     

肿瘤坏死因子和干扰素对大肠癌Fas配体表达的调控作用

目的 :探讨不同细胞因子对大肠癌细胞 Fas配体 (Fas L )表达水平的调控作用。方法 :采用 Western印迹法测定了两种细胞因子 (1× 10 6 U / L TNF-α或 IFN-γ)处理后大肠癌细胞 Fas L表达水平的变化。结果 :所检测的 6株大肠癌细胞全部表达 Fas L蛋白 ;TNF-α和 IFN-γ处理 DL D- 1细胞 10 h,显著上调其 Fas L蛋白的表达水平 ;TNF-α和 IFN-γ以及 PMA +离子霉素 (ionomycin)处理 SW6 2 0细胞 10 h,也显著上调 SW6 2 0细胞的 Fas L蛋白表达水平。 TNF-α和 PMA +离子霉素处理SW6 2 0细胞 48h进一步增加 SW6 2 0的 Fas L 蛋白表达 ,IFN- γ处理 SM6 2 0则表达增加不明显。结论 :TNF- α和 IFN- γ等细胞因子具有上调某些大肠癌细胞 Fas L 表达的作用     

Fas基因转导大肠癌细胞株的表达

目的：建立表达外源性Fas基因的大肠癌细胞株，观察Fas基因在转导前后的表达，方法：采用分子克隆技术将Fas基因插入真核表达载体pBK-CMV的多克隆位点之间，以脂质体介导法将Fas基因导入受体细胞LoVo ,用G418筛选克隆细胞，以dot blotting,Westting blotting检测转导细胞Fas基因的表达，结果：成功建立了Fas基因表达株，转导株在RNA及其蛋白水平表达均明显高于非转导株，转导细胞增殖速度，倍增时间，对数生长期等均比非转导株更为缓慢，但无显著性差异，在Fas抗体作用下，转导株细胞生长明显受到抑制，有非常显著性差异，结论：Fas基因在大肠癌细胞中处于低表达状态，通过真核表达载体介导，Fas基因在RNA及其蛋白水平能有效表达，Fas表达株在Fas抗体作用下可明显抑制体外培养的大肠癌细胞的生长增殖。     

Fas基因转导大肠癌细胞株的表达

目的建立表达外源性Fas基因的大肠癌细胞株,观察Fas基因在转导前后的表达。方法采用分子克隆技术将Fas基因插入真核表达载体pBK-CMV的多克隆位点之间,以脂质体介导法将Fas基因导入受体细胞LoVo,用G418筛选克隆细胞。以dot blotting,Western blotting检测转导细胞Fas基因的表达。结果成功建立了Fas基因表达株。转导株在RNA及其蛋白水平表达均明显高于非转导株,转导细胞增殖速度、倍增时间、对数生长期等均比非转导株更为缓慢,但无显著性差异,在Fas抗体作用下,转导株细胞生长明显受到抑制,有非常显著性差异。结论Fas基因在大肠癌细胞中处于低表达状态;通过真核表达载体介导,Fas基因在RNA及其蛋白水平能有效表达。Fas表达株在Fas抗体作用下可明显抑制体外培养的大肠癌细胞的生长增殖。     

大肠癌组织Fas抗原表达的临床生物学意义

目的：探讨凋亡相关基因Fas抗原在大肠癌组织中的表达与临床病理特征的关系。方法：采用SABC免疫组化方法对32例大肠癌和16例正常大肠组织中的Fas抗原进行检测,结果L大肠癌中Fas抗原阳性率降低53．1％,与正常组织比较差异有显著性（P＜0．01）,Fas抗原表达阳性率与大肠癌组织学分类及肝转换相关（P＜0．05）。结论：Fas抗原可能是反映大肠癌临床病理特征、生物学行为和预后的重要标记物。     

Kupffer细胞Fas配体的表达及其对移植肝内淋巴细胞的杀伤作用

目的 观察移植肝脏中Kupffer细胞(KCs)和T淋巴细胞(T lymphocytes,TLCs)中Fas、FasL基因和蛋白的表达,以及KCs对侵入肝脏内的淋巴细胞的细胞毒性作用.方法 肝移植后0、48 h分离肝移植组、氯化钆(GdCl3 )组动物肝脏的KCs和TLCs,并对TLCs进一步分类;用RT-PCR法测定KCs和TLCs中Fas、FasL基因表达,用免疫组化、激光扫描共聚焦显微镜和Western blot蛋白印迹等方法测定KCs和TLCs中Fas、FasL蛋白质表达;观察不同培养条件下淋巴细胞凋亡与KCs的相互作用.结果 GdCl3 组分离出的KCs显著少于肝移植组,淋巴细胞数量及CD8 T细胞显著多于肝移植组(P<0.05),免疫组化和激光共聚焦显微镜显示GdCl3 组FasL阳性KCs显著少于肝移植组(P<0.05),2组Fas阳性淋巴细胞无显著差异(P>0.05);RT-PCR和Western blot显示KCs中 FasL mRNA及蛋白表达GdCl3 组较弱(P<0.05),2组淋巴细胞中Fas、FasL mRNA无显著差异(P>0.05).GdCl3组中分离出的KCs对TLCs杀伤率明显低于肝移植组(P<0.05),抗FasL抗体对KCs杀伤力有抑制作用.结论 KCs能表达FasL蛋白,并通过Fas、FasL途径杀伤移植肝脏中的淋巴细胞,诱导移植肝脏产生免疫耐受.GdCl3能阻止KCs中FasL基因和蛋白表达,抑制肝移植中免疫耐受的产生.     

5-氟尿嘧啶对大肠癌Fas蛋白表达的调控作用

目的：探讨5-氟尿嘧啶（5-Fu）对大肠癌细胞Fas蛋白表达水平的调控作用。方法：采用流式细胞术检测了培养的9株细胞（6株为大肠癌细胞）Fas蛋白的表达情况,并观察了5-Fu（260mol/L）处理后大肠癌细胞Fas蛋白表达水平的变化。结果：在检测的6株人大肠癌细胞中,有5株肿瘤细胞表面表达Fas蛋白;用临床浓度的5-Fu处理后,HCT-116和WiDr的Fas蛋白的表达水平显上调。结论：5-Fu可上调肿瘤细胞Fas表达水平,由此可能增加其对Fas介导的机体免疫监视作用的敏感性。     

结肠癌患者CK19的表达及意义

目的：研究红细胞角蛋白19（CK19）mRNA在结肠癌患者外周血中的表达,以及其与肿瘤病理特征的相关性,探讨CK19与结肠癌的关系。方法分析2012年3月至2014年5月在该院接受手术治疗的结肠癌患者的临床资料,共纳入研究对象160例,其中结肠癌患者52例（结肠癌组）,结肠息肉患者55例（结肠息肉组）,健康者53例（对照组）,比较3组外周血CK19 mR‐NA表达差异,分析CK19 mRNA表达情况与结肠癌的肿瘤病理特征间的关系,并比较CK19 mRNA与CEA和CA199对于结肠癌的诊断价值。结果3组受试者外周血的CK19 mRNA阳性表达率差异有统计学意义（χ2＝54．53,P＜0．01）,结肠癌患者CK19 mRNA阳性表达最高;不同Dukes分期（χ2＝16．14,P＜0．01）、分化程度（χ2＝8．155,P＝0．017）、肝转移情况（χ2＝13．68, P＜0．01）所对应的结肠癌患者的CK19 mRNA阳性并不相同,差异均有统计学意义;CK19 mRNA对于结肠癌的诊断价值ROC曲线分析结果提示曲线下面积为0．947,其敏感性和特异性均高于CEA和CA199。结论 CK19 mRNA在结肠癌中的表达显著升高,且其表达水平与肿瘤的分期、分级及转移有着重要的相关性,其对于结肠癌的诊断价值优于CEA和CA199。     

胃粘膜癌变过程中Fas、FasL的表达及意义

目的:通过检测胃粘膜癌变过程中凋亡相关蛋白、的表达,探讨其在胃癌发生发展中的作用。FasFasL方法:采用免疫组化法检测例慢性浅表性胃炎()、例慢性萎缩性胃炎伴肠化生()、例异型增生()和例SP41CSG19CAGIM22Dys37胃癌()。GC结果:在、、和组中的阳性表达率依次下降,的阳性表达率则逐渐升高;、FasCSGCAGIMDysGCFasLFasFasL在高中分化组的阳性表达率均显著高于低分化组。GCGC结论:、的阳性表达率在胃癌发生过程中呈现不同的变化趋FasFasL势,提示由诱导的胃粘膜细胞凋亡异常与胃癌形成可能有密切关系。在胃癌患者,与癌细胞分化有关的、表Fas/FasLFasFasL达的一致性有助于判断肿瘤的恶性程度和预后。     

Arsenic trioxide up-regulates Fas expression in human osteosarcoma cells

Background Osteosarcoma is a common primary malignant tumor of bone with a poor prognosis due to its propensity for metastasis. The prognosis of patients is highly dependent on the presence or absence of lung metastasis and on the effectiveness of treatment against it. It has been reported that low level expression of Fas protein in human osteosarcoma cell is closely associated with lung metastasis. A large number of studies have shown that arsenic trioxide （ATO） can inhibit proliferation and induce apoptosis of many cancer cell lines; however, its effects on human osteosarcoma cells （Saos-2 cell line） remains unknown. The aim of this study was to investigate the effects of ATO on Saos-2 cells and to characterize its mechanism of Fas-expressing. Methods A group of Saos-2 cells was treated with or without 0.5, 1, 2, 4 and 8 pmol/L ATO for three successive days, and the cytotoxicity of ATO was determined by an 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide （MTT） assay. Morphological changes in cells were studied by acridine orange/ethidium bromide （AO/EB） double staining. Flow cytometry （FCM） was used to assay cell DNA distribution. Another group of cells was pretreated with 10 nmol/L matrix metalloproteinase 7 （MMP-7） for 3 hours. They were then incubated with or without 2 pmol/L ATO for 24, 48 and 72 hours. Cytotoxicity, Fas protein and mRNA levels were systematically studied using MTT, Western blotting and real-time PCR, respectively. Cell proliferation, cell cycle progression and apoptosis were examined in this study. Results Proliferation of Saos-2 cells was inhibited by ATO in both a dose- and time-dependent manner. The IC50 values at 24, 48 and 72 hours were 9.30, 5.54 and 3.49 pmol/L, respectively. The survival rate of Saos-2 cells in the MMP-7 and ATO co-treated group was significantly higher than the ATO group, but it was lower than the control group. ATO induced G1 phase arrest of the cell cycle and very efficiently stimulated apoptosis in Saos-2 cells, as evidenced by flow cytometric detection of sub-G1 DNA content and AO/EB staining. Western blotting results indicated that Fas （FasL） protein expression in osteosarcoma cultures markedly increases in a time dependent manner after exposure to ATO. Compared with control, treatment with ATO 2 IJmol/L and 4 pmol/L for 48 hours, resulted in increase of Fas gene expression to 28.31% and 56.74%, respectively. Our results indicated that ATO induced-apoptosis of Saos-2 cells may be mediated through the Fas pathway. Conclusions ATO suppressed cell proliferation of Saos-2 cell in a dose- and time-dependent manner and increased Fas protein expression. However, Fas-mediated apoptosis was incompletely interrupted by MMP-7, which suggested that other molecular mechanisms may mediate this process.     

MAPK信号通路对人胆管癌细胞Fas配体基因表达的调节及其机制的初步探讨

目的观察MAPK/ERK kinase(MEK)抑制剂PD98059对人胆管癌细胞Fas配体(Fas ligand,FasL)表达的影响及其作用机制。方法用RT-PCR和Western bolt检测PD98059处理组及未处理组人胆管癌细胞(QBC939)中c-Myc、p-c-Myc和FasL的表达;构建含FasL基因启动子的荧光素酶报告基因质粒,瞬时转染人胆管癌细胞,用PD98059处理后,检测荧光素酶相对活性,比较启动子活性的变化情况;染色质免疫共沉淀(ChIP)技术分析p-c-Myc和FasL基因启动子的结合情况。结果PD98059处理组胆管癌细胞磷酸化c-Myc(p-c-Myc)和FasL的表达均明显降低,而c-Myc未见明显变化;人胆管癌活细胞中p-c-Myc与FasL基因启动子有结合;PD98059处理组胆管癌细胞荧光素酶活性与对照组相比下降约80%。结论PD98059通过抑制MAPK/ERK kinase(MEK)的活性,降低c-Myc磷酸化水平,进而下调FasL基因启动子活性,从而抑制人胆管癌细胞FasL基因的表达。     

Fas/FasL系统在人子宫内膜增生过长和子宫内膜癌中的表达

目的：探讨Fas和Fas配体（FasL）在人子宫内膜增生过长和子宫内膜癌发病中的作用．方法：采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶染色法（SP法）检测加例子宫内膜增生过长的异位内膜与18例子宫内膜癌内膜中Fas和FasL蛋白的表达;采用原位杂交方法检测FasLmRNA水平．设正常子宫内膜25例为对照组．结果：Fas蛋白在正常子宫内膜的阳性表达率为68％,在子宫内膜增生过长与子宫内膜癌组的阳性表达率分别为58％和22％,差异具有统计学意义（P〈0．05）．FasL蛋白在子宫内膜增生过长与子宫内膜癌组中的阳性表达率分别为68％和94％,明显高于对照组32％,差异具有统计学意义（P〈0．05）．FasLmRNA的表达强度在子宫内膜增生过长与子宫内膜癌组亦明显高于对照组,差异具有统计学意义（P〈0．05）．结论：Fas与FasL蛋白表达失调,可能是子宫内膜增生过长的发病机制之一,对子宫内膜癌组织逃避免疫系统监视具有重要作用．     

子宫内膜异位症在位及异位子宫内膜Fas、FasL的表达

目的：检测子宫内膜异位症（EM）患者在位及异位内膜中Fas，FasL蛋白的表达， 探讨其在子宫内膜异位症免疫发病机制中的作用。方法：采用免疫组织化学（SP）法分别测定了EM患者在位和异位内膜及正常对照子宫内膜中Fas，FasL蛋白的表达。 结果：1、EM患者在位内膜及正常对照子宫内膜中Fas及FasL的表达均呈周期性改变，增生期呈低水平表达，分泌期表达增高， 两组间同期别比较增生期无显著差异，分泌期EM患者在位内膜的Fas及FasL表达均低于正常对照组；2、异位子宫内膜中的Fas及FasL的表达都呈现低水平或不表达。结论：子宫内膜异位种植可能与Fas及FasL的表达障碍有关。     

子宫内膜异位症不孕与血清和腹腔液中可溶性Fas和可溶性Fas配体的关系

目的:分析可溶性Fas及可溶性Fas配体在子宫内膜异位症所致不孕中的可能意义.方法:采用酶联免疫吸附双抗体夹心法,检测20例Ⅰ～Ⅱ期子宫内膜异位症不孕患者血清及腹腔液中可溶性Fas及可溶性Fas配体溶液,并与14例慢性盆腔炎致不孕者和16例健康生育者比较.结果:子宫内膜异位症不孕患者血清和腹腔液内溶性Fas配体浓度(分别为175.09±80.50pg/nl和284.50±152.38pg/ml),显著高于健康生育对照(血清16.13±11.75pg/ml;腹腔液8.84±2.31pg/ml)及慢性盆腔炎致不孕者(血清88.47±43.55pg/ml;腹腔液17.30±9.62pg/ml).其可溶性Fas抗原水平(血清828.60±429.65Ppg/ml;腹腔液349.6±288.89pg/ml)与盆腔炎组(血清868.75±570.48pg/ml;腹腔液181.76±157.78pg/ml)及健康生育组(血清822.26±129.12pg/ml;腹腔液318.42±145.16pg/ml)相比,均无统计学显著差别.结论:可溶性Fas配体与子宫内膜异位症所致不孕具有显著相关性,可能在其盆腔局部微环境改变致不孕中具重要意义.     

Oral administration of insulin to female nonobese diabetic mice inhibited diabetes and induced Fas ligand expression on islets of Langerhans

Objective To detect oral administration of recombinant human insulin to nonobese diabetic (NOD) mice for preventing them from diabetes and insulitis and to detect the effects of oral administration of insulin on Fas and Fas ligand expression on islet of Langerhans. Methods Sixty-four female NOD mice were divided into two groups.One group (34) was orally administered recombination human insulin 1 mg in 500 μl PBS and the other (30) 500 μl PBS only at age of 5 weeks old, twice a week for the first week, then weekly until 30 weeks of age. Results Oral administration of insulin to female NOD mice can significantly suppress diabetes and insulitis.The insulitis was less severe in the group fed with insulin than that in the control group (score of insulitis: 1.25±0.45 vs 3.0±0.76 at 16 weeks of age, P&lt;0.01).We examined Fas ligand and Fas expression on islets of Langerhans in both groups of NOD mice by using immunohistochemical techniques.We find that Fas only expressed on islets when the mice suffered the diabetes, whereas Fas ligand expressed on islets of the mice fed with insulin at 16 and 20 week of ages.We did not find Fas ligand positive staining on the islet feeding with PBS. Conclusion We speculated that oral insulin may induce Fas ligand expression on the islets and plays a role in protecting the pancreatic β-cell from autoimmune destruction.These results show that oral insulin affected autoimmune diabetes and insulitis in NOD mice.The immune mechanism of oral tolerance is closely related to the change of Fas ligand and Fas system.     

FasL在膀胱移行细胞癌中的表达及意义

目的：探讨膀胱移行细胞癌中Fas配体（FasL）的表达情况和临床意义。方法：对42例膀胱移行细胞癌组织及10例正常膀胱粘膜组织石蜡包埋标本应用免疫组化SP法检测FasL。结果：42例膀胱移行细胞癌细胞中FasL阳性32例（76．2％）,而正常膀胱粘膜FasL呈阴性表达（P＜0．01）,FasL阳性率与膀胱移行细胞癌的分级分期有关（P＜0．05）。结论：FasL的异常表达可能参与 膀胱肿瘤的免疫逃逸机制,并在膀胱肿瘤的发生发展过程中起重要作用。