三种固定液对眼球组织固定效果的比较研究

目的从甲醛-戊二醛混合液、Davidoson液和10％福尔马林三种固定液中优选一种,用于对眼球组织的固定。方法取SD大鼠和新西兰兔的双侧眼球,分别用三种固定液固定,然后做成5μm厚的切片并HE染色,观察各自的组织结构及染色效果。结果用甲醛一戊二醛混合液固定的眼球组织,大鼠眼球切片厚度5μm,而新西兰兔切片时厚度8μm,才能切出完整的切片;Davidoson液和10％福尔马林固定的眼球,切片厚度5μm即可。HE染色后,10％福尔马林固定的眼球组织结构不完整,而Davidoson液固定后的眼球,结构清晰、组织完整。结论Davidoson液对大鼠和新西兰兔的眼球固定效果均佳,甲醛-戊二醛混合液对大鼠眼球固定效果也较佳。     

三种固定液对神经纤维冰冻切片固定效果之比较

目的:观察比较10%甲醛、丙酮和Bouin三种固定液对神经纤维的固定效果,为临床做出更好的神经纤维的快速冰冻切片提供实验基础.方法:取健康大鼠双侧坐骨神经,冰冻切片后分别用三种固定液固定,然后做HE染色,观察各自的组织结构及染色情况.结果:10%甲醛固定的神经纤维组织结构较清楚但是组织发生收缩;丙酮固定的神经纤维染色效果较好,组织没有发生收缩;Bouin固定液固定的神经纤维结构和染色都比较好但是组织收缩最明显.结论:三种固定液都可用于固定神经纤维,但丙酮效果最好.     

两种固定液对肺组织固定效果的比较

目的:比较Bouin和10%甲醛两种固定液对正常肺组织的固定效果。方法:取正常小鼠肺组织,分别用Bouin和10%甲醛两种固定液,按料液比1∶20固定24 h,常规制备肺组织石蜡切片,HE染色;光镜下分别在100倍和400倍比较两种切片的组织结构和染色情况并统计高倍镜下清楚细胞数;应用t检验进行统计分析。结果:Bouin固定的肺组织在低倍镜下见解剖结构无分离,组织着色均匀,细胞内外结构清晰,高倍镜下支气管上皮细胞核与质界限分明,Ⅰ型、Ⅱ型肺泡细胞清晰且易于辨别;10%甲醛固定的肺组织切片染色后,在低倍镜下观察效果与Bouin固定的肺组织切片无显著差异,高倍镜下支气管上皮细胞核与质界限不清,Ⅰ型、Ⅱ型肺泡细胞结构模糊,经t检验两者差异有统计学意义(P<0.001)。结论:Bouin固定的肺组织其HE染色效果较好,为肺组织切片的制备提供参考。     

自制人血清中期角膜保存液对兔角膜的保存效果

目的 研制一种适合我国国情的人血清角膜中期保存液.方法 配制人血清浓度分别为10%(A组)、20%(B组)、30%(C组)、0%(D组)的角膜保存液保存兔角膜,用Optisol-GS角膜保存液作对照组,分别在保存第3、7、10、14天进行角膜内皮细胞活性率检测、HE染色、扫描电镜超微结构观察,并检测角膜保存液的理化性质...     

环保型无醛固定液与甲醛固定液对免疫组化染色的效果比较

目的观察环保型无醛固定液对不同组织免疫组化染色的效果,探讨其取代甲醛固定液的可行性。方法25例新鲜手术标本分别用环保无醛固定液(无醛组)和甲醛固定液(甲醛组)固定1、3、7、14、30、60、120 d,免疫组化检测两组组织的抗原表达情况。结果固定时间在1、3、7和14d时两组免疫组化表达结果差异无统计学意义(均>0.05);甲醛组固定60 d和120 d时两组免疫组化表达结果差异有统计学意义(均<0.05);无醛组固定1 d的免疫组化结果与固定120 d差异无统计学意义(>0.05),甲醛组固定60 d的免疫组化结果与固定1 d差异有统计学意义(<0.05)。结论环保型无醛固定液组织固定效果好,安全环保,可以取代甲醛固定液作为病理工作中的组织固定液。     

不同固定液固定豚鼠视网膜效果的比较

<正>近视是常见的眼科疾病^[1],高度近视眼底病变是致盲的主要原因,随着近视屈光度的增加和眼轴的增长,眼底病发生率升高,如后巩膜葡萄肿、黄斑劈裂、黄斑出血、豹纹状眼底等^[2]。因此近视防控是社会关注的焦点,也是研究的热点。而豚鼠是建立近视模型中最常用的实验动物,其视网膜组织的病理切片在实验中有着重要作用,但因视网膜结构复杂,在制作视网膜组织病理切片时,易出现视网膜断裂折叠、细胞固缩、胞核不清等问题,影响实验研究。     

三种不同固定液对小鼠组织过碘酸雪夫染色效果比较

目的 比较小鼠肝脏、肾脏、小肠三种组织在质量分数4％多聚甲醛液、Carnoy's液、Bouin,s液三种固定液不同固定时间下的制片质量和过碘酸雪夫染色(PAS)效果,筛选出一种最为适用的固定方法.方法 取成年雄性C57BL/6小鼠肝脏、肾脏、小肠,分别固定于三种固定液,固定时间分别是质量分数4％多聚甲醛液:24h、48 h、72 h;Camoy's液:4h、8h、12 h;Bouin's液:12 h、24 h、48 h,充分固定后,常规制作石蜡切片,然后进行PAS染色,对比观察染色效果.结果 三种固定液对不同组织、不同固定时间下PAS染色结果存在差异.肝脏、肾脏、小肠经Camoy's液处理12h后PAS效果最佳,质量分数4％多聚甲醛液固定24 h基本满足观察检测效果,而经Bouin's液固定组织染色效果相对较差.结论 PAS反应对固定液和固定时间具有选择性,Camoy's液是组织进行PAS染色的理想固定液,但从固定效果、重复性、安全性、成本等多因素综合考虑,在PAS反应中,质量分数4％多聚甲醛液可以替代Camoy's液.     

三种方法对大鼠视网膜固定效果的比较研究

目的研究三种不同方法对大鼠视网膜石蜡切片的固定效果。方法根据离体眼球的不同固定方法,将9只SD大鼠随机分为A组(改良固定液固定,n=3)、B组(4%多聚甲醛固定,n=3)和C组(4%多聚甲醛心脏灌注法固定,n=3)。24 h后制作标本进行苏木精-伊红染色,分析比较固定效果。结果 A组固定的眼杯不变形,B组固定的有少许变形,C组固定的基本不变形。显微镜观察显示A组眼球视网膜各层组织结构完整,B组和C组视网膜均有断层、分离和脱片等现象。结论改良固定液固定眼球的方法优于单纯4%多聚甲醛和4%多聚甲醛心脏灌注固定的方法,适用于视网膜石蜡切片的后期研究。     

4种固定液对快速冷冻切片的制片效果的影响

目的通过研究固定液对冷冻切片质量的影响,筛选出理想的固定液,为寻找新型固定液提供新思路,从而提高快速冷冻切片成片质量。方法收集新鲜鸭肝组织30例,冷冻切片取材后用不同的固定液进行固定,然后进行HE染色,显微镜观察。结果经乙醚酒精固定的鸭肝组织和细胞结构清晰,核浆颜色对比度适宜,染色鲜艳。结论乙醚酒精最适宜用于快速冷冻切片的固定,进行HE染色。     

三种固定剂对氯化金染色大鼠运动终板效果的比较

目的 对比分析25%甲酸、25%乙酸和4%甲醛3种固定剂对氯化金染色运动终板的效果。方法 选用30只SD大鼠,体重180～220 g,雌雄不拘。进行10次实验,每次实验随机选取3只,取右侧肱二头肌,分别置于25%甲酸、25%乙酸和4%甲醛溶液中固定后,行氯化金镀金法,光学显微镜下观察运动终板的形态结构和背景颜色。结果 3种固定剂固定的运动终板边缘整齐,中央颜色浅于周围,部分运动终板中央呈空泡状。甲酸固定的肌纤维排列有序,横纹清晰,呈紫红色;乙酸固定的肌纤维排列有序,无清晰的横纹,呈紫蓝色,但染色较浅,与运动终板形成的反差较小;甲醛固定的肌纤维排列杂乱,无横纹,呈紫红色、粉红色、紫黑色和蓝色等多种颜色。结论 甲酸固定的运动终板氯化金染色效果优于乙酸和甲醛,甲酸固定的肌组织需要的还原时间少于乙酸和甲醛。因此,进行运动终板染色选择固定剂时,25%甲酸在3种固定试剂中可作为最佳选择。     

淫羊藿甙对小鼠主要器官结构和功能的影响研究

目的 以淫羊藿甙（ICA）为供试药物,研究其对小鼠主要器官结构和功能的影响.方法 100只6周龄健康雌性SPF级昆明系小鼠随机分为两组,分别灌服ICA和生理盐水,在试验第0、1、4、7、10、13、16、19天采血取血清,进行血清生化指标（AST、ALT、ALP、LDH）的检测;剖杀后取心、肝、肺、肾进行组织学观察.结果 ICA对小鼠血清生化指标具有一定的调节作用,表现为使血清中AST和ALT水平升高,降低血清中的ALP和LDH水平,但组织学观察则未见异常.结论 ICA对小鼠主要器官功能与组织结构影响较小.     

Systematic assessment of microneedle injection into the mouse cornea

Background

Corneal intrastromal injection is an important mode of gene-vector application to subepithelial layers. In a mouse model, this procedure is substantially complicated by the reduced corneal dimensions. Furthermore, it may be difficult to estimate the corneal area reached by the volume of a single injection. This study aimed to investigate intrastromal injections into the mouse cornea using different microneedles and to quantify the effect of injecting varying volumes. A reproducible injection technique is described.

Methods

Forty eyes of 20 129 Sv/J mice were tested. India ink was intrastromally injected using 30° beveled 33 G needles, tri-surface 25° beveled 35 G needles, or hand-pulled and 25° beveled glass needles. Each eye received a single injection of a volume of 1 or 2 μL. Corneoscleral buttons were fixed and flat mounted for computer-assisted quantification of the affected corneal area. Histological assessment was performed to investigate the intrastromal location of the injected dye.

Results

A mean corneal area of 5.0 ±1.4 mm² (mean ± SD) and 7.7 ±1.4 mm² was covered by intrastromal injections of 1 and 2 μL, respectively. The mean percentage of total corneal area reached ranged from 39% to 53% for 1 μL injections, and from 65% to 81% for 2 μL injections. Injections using the 33 G needles tended to provide the highest distribution area. Perforation rates were 8% for 30° beveled 33 G needles and 44% for tri-surface beveled 35 G needles. No perforation was observed with glass needle; however, intrastromal breakage of needle tips was noted in 25% of these cases.

Conclusions

Intracorneal injection using a 30° beveled 33 G needle was safe and effective. The use of tri-surface beveled 35 G needles substantially increased the number of corneal perforations. Glass needles may break inside the corneal stroma. Injections of 1 μL and 2 μL resulted in an overall mean of 49% and 73% respectively of total corneal area involved.     

三种不同冷冻保护剂对小鼠附睾冷冻效果的比较

目的 探讨三种不同冷冻保护剂对C57BL/6J小鼠附睾冷冻的效果。方法 性成熟并交配过的6-8周龄C57BL/6J雄鼠附睾，分别用3种不同冷冻保护剂二甲基亚砜 (DMSO)、丙二醇 (PROH)、R18S3进行玻璃化冷冻、复苏和精子采集，观察比较三个实验组的复苏精子形态、存活率以及生殖能力。结果 三组冷冻复苏分离后的精子形态完整，具有镰刀头状结构；荧光染色后PROH组精子存活率为 (88.17±3.43)%，明显高于DMSO组：(61.17±10.65)% 和R18S3组(16.83±6.49)%（P<0.05）；经辅助体外受精后均具有受精能力。获得的胚胎移植后可得到正常子代小鼠 (DMSO : PROH : R18S3 = 13 : 8 : 17）。结论 3种冷冻保护剂均适用于C57BL/6J小鼠附睾冷冻，但PROH冷冻效果较好。     

固定液对恒冷箱切片组织结构与染色效果的比较观察

对Ｗｉｓｔａｒ大鼠６种器官进行恒冷箱新鲜冰冻切片,采用９种固定液分别固定切片,在同等条件下做Ｈ．Ｅ染色,观察不同固定液对器官组织结构与染色效果的影响,以寻找适用于恒冷箱切片的最佳固定液．结果表明：１０％中性甲醛固定的切片,器官的组织结构清晰,染色好,镜下与石蜡切片相似,我们推荐在恒冷箱切片Ｈ．Ｅ染色时选用１０％中性甲醛作为固定液,这对提高恒冷箱切片染色技术和临床病理快速诊断的准确性,有一定指导意义。     

磷酸镁骨黏合剂生物学固定强度及组织学的实验研究

目的研究磷酸镁骨黏合剂(MPC)植入家兔骨内的生物学固定强度,并作组织学观察。方法①生物力学部分:双侧股骨髁上钻孔后,分别植入MPC和磷酸钙骨水泥(CPC),术后分别饲养1、2、3、4、6和8 周后取出股骨下段作推出试验。②组织学部分:家兔右股骨髁上钻孔后填入MPC,术后分别饲养24 h、1、2周和 1、2、3个月,分批处死后取出标本,作不脱钙病理切片。结果①生物力学部分:在不同时间,MPC组的生物学固定强度均显著大于CPC组(P<0．05)。②组织学部分:2周时MPC开始吸收,2个月时MPC已完全吸收,骨孔愈合良好。结论 MPC的生物学固定强度比CPC大,且MPC可降解,可用于骨折黏合固定。     

不同放射治疗方法及组织学类型对皮肤恶性肿瘤生存率的影响

为了探讨不同治疗方法及组织学类型对皮肤恶性肿瘤治疗效果的影响。对我院１９７７年到１９９２年治疗的可供分析的７２例皮肤及附件恶性肿瘤就治疗方法,组织学类型,照射总剂量及分割剂量,照射野大小等与５年,１０年生存病例数及生存率的关系进行分析研究。结果表明：皮肤恶性肿瘤总的放射治疗失败率为２６．４％（１９／７２）,１４例基底细胞癌采用单次剂量３．０～３．５Ｇｙ组５年,１０年生存率分别为７８．５％。７０．０％;常规剂量组５年,１０年生存率分别为７９．８％,６２．９％。在４９例基底细胞癌中,５年,１０年生存率综合治疗组为８６．４％,５０％,单纯放疗组为８５．２％,４８．０％;照射野超过肿瘤边缘大于２ｃｍ组分别为６９．２％,４０．４％;超边小于２ｃｍ组为８８．０％,２９．２％。基底细胞癌生存率较其他肿瘤高,单次剂量以３．０～４．０Ｇｙ治疗效果较好,综合治疗组与单纯放疗组以及照射野超过肿瘤边缘大于２ｃｍ组和超边小于２ｃｍ组５年,１０年生存率经统计学处理,无显著性差异。基底细胞癌放疗照射总剂量以５１～６０Ｇｖ最佳。     

吡格列酮抗实验性小鼠主动脉粥样硬化的作用

目的　观察停高脂喂饲或同时加吡格列酮干预对实验性小鼠主动脉壁脂质沉积及代谢紊乱的影响,探讨药物干预的时机及其血管保护作用的机制。方法　将经高脂喂养14周,血脂、血糖、胰岛素水平升高及主动脉内膜出现明显局灶性脂质沉积的成模型C57BL/6小鼠随机分为吡格列酮干预组(PIO组,予盐酸吡格列酮10 mg·kg-1·d-1灌胃)和动脉粥样硬化组(AS组)。分组后所有小鼠均改予普通饲料继续喂养8 周,前、后共22周。于实验第22周末再次测定血脂、血糖、胰岛素水平。采血同时取主动脉,采用油红“O”整体染色法观察其病理学变化。结果　与8周前相比,AS组血脂、血糖水平仅轻度下降(P>0.05),胰岛素水平无明显下降,主动脉血管处仍可见内膜有明显局灶性红染;PIO组血脂及胰岛素水平显著下降(P<0.05)、血糖轻度下降(P>0.05),主动脉血管分叉处内膜着色明显变淡。PIO组小鼠死亡数明显少于AS组。结论　经吡格列酮干预后,主动脉壁上沉积的脂质消退,吡格列酮这种血管保护的作用机制与其全面改善糖、脂代谢紊乱及胰岛素抵抗作用有关。     

角膜脱细胞基质的特性研究

目的采用适当的角膜脱细胞方法获得角膜脱细胞基质,并对其进行特性研究。方法采用胰酶-冰冻法对新鲜兔角膜(全层和分层)进行脱细胞处理,再进行组织学检测及生物学特性力学特性、含水率、膨胀率分析。结果用胰酶-冰冻法获得的兔角膜全层和分层脱细胞基质未见细胞成分,细胞外基质的结构未见明显破坏,脱细胞基质在生物力力学特性、含水率、膨胀率上与正常角膜接近,透光率低于新鲜角膜。结论用胰酶-冰冻法获得的脱细胞基质与自然角膜接近,可作为组织工程角膜支架材料和角膜替代物。     

碱性离子液对小鼠抗疲劳功能的研究

目的探讨碱性离子液体的抗运动性疲劳作用。方法选用雄性ICR小鼠,设3个剂量组和阴性对照组,给不同剂量的碱性离子液体30d后,观察小鼠负重游泳时间、肝糖原储备、疲劳小鼠血清尿素以及游泳前后血乳酸含量的变化。结果与对照组比较,实验组小鼠负重游泳时间延长（P〈0．05）,肝糖原储备增加（P〈0．05,P〈0．01）,血清尿素含量降低（P〈0．05）,运动前后血乳酸水平与对照组无明显差异（P〉0．05）。结论碱性离子液体有维持小鼠运动时正常机能,延缓运动疲劳发生的功能。