己酮可可碱对糖尿病足皮肤角质形成细胞的影响

目的探讨己酮可可碱对角质形成细胞的影响及其用于糖尿病足溃疡治疗的可能机制。方法对糖尿病足患者下肢手术后剩余皮肤,采用皮肤器官培养法(浮游法)培养皮肤标本,观察己酮可可碱对角质形成细胞游走的影响。结果浓度为3×10~(-5)mg/mL的己酮可可碱,对皮肤角质形成细胞游走有显著的促进作用。经过120小时的培养,己酮可可碱其他各个浓度组角质形成细胞游走距离均略高于对照组,但未见具有统计学意义的显著性差异。结论一定浓度的己酮可可碱具有促角质形成细胞游走的作用,且可能是其治疗糖尿病足溃疡的作用机制。     

皮肤角质形成细胞的无血清培养方法

目的探索建立少量成年自体皮肤角质形成细胞体外无血清培养体系,为自体组织工程皮肤的构建与移植奠定物质基础。方法:无菌条件下,取2cm×2cm 兔耳皮肤组织块,Dispase 消化,分离真表皮,表皮以胰蛋白酶+EDTA 消化获得角质形成细胞,以含钙和不含钙的角质形成细胞培养液(K-SFM),按不同细胞密度接种于24孔板,观察细胞生长状况;免疫组化鉴定,MTT 法测定不同血清浓度对角质形成细胞增殖分化的影响。结果:在适当的 Ca~(2+)浓度下,少量自体角质形成细胞能够在无血清培养液 k-SFM 中培养扩增,最多可传4～6代。添加血清后可明显加速细胞分化。结论:无血清培养体系适用于少量成年自体角质形成细胞的体外连续培养扩增,培养的细胞可用于自体组织工程皮肤的构建。     

阿魏酸对人角质形成细胞的保护作用

目的探讨阿魏酸对人角质形成细胞（human keratinocytes，HKC）的保护作用及作用机制。方法用氯化钴（CoCl2）处理HKC，建立氧化应激所致HKC炎症损伤细胞模型，检测阿魏酸预处理HKC后的相关指标，以3 （4，5 二甲基噻唑 2） 2，5 二苯基四氮唑溴盐［3 （4，5 dimethylthiazol 2 yl） 2，5 diphenyltetrazolium bromide，MTT］法检测细胞生存率，用酶联免疫（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）法检测细胞培养液中肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α，TNF α）和白细胞介素8（interleukin 8，IL 8）的水平。结果正常对照组HKC细胞生存率100.00%，TNF α和IL 8含量分别为11.37和98.30 pg•mL 1。 0.03和0.3 mg•mL 1阿魏酸处理组中，HKC存活率（分别为96.15%和67.92%）亦显著高于模型组（46.20%，P＜0.01，P＜0.05），该作用呈剂量依赖性； TNF α含量（分别为12.95和17.46 pg•mL 1）显著低于模型组（29.54 pg•mL 1，P＜0.01，P＜0.05)； IL 8含量（分别为102.76和128.96 pg•mL 1）亦显著低于模型组（162.33 pg•mL 1，P＜0.01，P＜0.05)。0.003 mg•mL 1阿魏酸对HKC存活率和分泌TNF α和IL 8无明显影响。结论阿魏酸可能通过抑制TNF α和IL 8的释放发挥其对HKC的保护作用。     

人皮肤成纤维细胞库的构建

目的建立成纤维细胞系及细胞库。方法采用体外细胞培养技术进行皮肤成纤维细胞的分离、培养、传代、冻存、复苏及鉴定。结果人皮肤成纤维细胞传代至23代以上,此时的细胞数是原代培养的细胞数的数十万倍,经冻存、复苏后,人皮肤成纤维细胞仍具有增殖能力,生长状态与原代培养的人皮肤成纤维细胞相类似。结论酶消化法是培养人皮肤成纤维细胞简便、快捷的方法。     

银杏叶提取物对三氯乙烯诱导的人角质形成细胞凋亡的影响

目的研究体外培养条件下银杏叶提取物(ginkgo biloba leaf extracts,EGb)对三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)诱导的正常人表皮角质形成细胞(normal human epidernis keratinocyte,NHEK)凋亡的影响。方法体外培养条件下,用中性红吸附试验(NRU)测定TCE对NHEK的中性红吸附减少50%的质量浓度(NR50值)和EGb的最低有效保护质量浓度。用透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)观察细胞凋亡形态学改变,流式细胞仪(flow cytometer,FCM)测定细胞DNA含量并计算凋亡发生率。结果TCE对NHEK的NR50值为4.53(3.92~5.13)mmol/L;用10、50、100、150和200 mg/L EGb预孵育NHEK 2 h时,由2.0 mmol/L TCE引起的细胞活力的下降随EGb剂量的增加逐渐恢复,且150 mg/L为最低有效保护剂量。TCE可引起NHEK的超微结构呈凋亡改变,凋亡发生率呈剂量依赖式增加。与0.125、0.5和2.0 mmol/LTCE暴露组相比,150 mg/L EGb预孵育组,细胞超微结构恢复到正常对照组水平,凋亡发生率明显减少。结论体外培养条件下,EGb可以抑制TCE诱导的NHEK的细胞凋亡。     

玉屏风多糖组分对皮肤角质形成细胞的作用研究

目的 研究中药方剂玉屏风的多糖组分在体外对角质形成细胞的免疫调节作用。方法 利用Real-time PCR法检测玉屏风多糖组分对激活的皮肤角质形成细胞中各炎症因子表达的调控作用;分别用Real-time PCR法和Elisa法对聚角蛋白微丝蛋白（Filaggrin）在mRNA和蛋白水平的表达进行检测;用Western bolt法检测多糖组分对NF-κB信号通路的调节作用。结果 玉屏风多糖组分明显抑制激活的皮肤角质形成细胞分泌炎症因子,促进Filaggrin的表达,并对NF-κB信号通路有明显的抑制作用,该信号通路对炎症和免疫细胞的活化有重要作用。结论 玉屏风多糖组分在体外对皮肤角质形成细胞有免疫调节作用,能够减缓皮肤局部炎症的发展,为玉屏风方剂的进一步开发应用奠定理论基础。     

重组人角质细胞生长因子-1突变体表达载体的构建

目的构建重组人角质细胞生长因子-1突变体的表达载体。方法采用PCR突变方法,将rhKGF cDNA第40位的Cys密码子突变为Ser密码子,所得的突变片断插入表达载体的表达框架中。结果 DNA测序分别证实合成的基因序列克隆入pET-22b中。结论构建重组人角质细胞生长因子-1突变体的表达载体,得到突变体蛋白40位丝氨酸突变截短型角质细胞生长因子[Ser40]rhKGFdest-23。     

银屑病诱发药物对HaCaT角质形成细胞的影响

为了探讨锂盐、普萘洛尔和氯喹是否通过影响银屑病的细胞因子网络从而诱发或加重银屑病，以不同浓度的碳酸锂、盐酸普萘洛尔或二磷酸氯喹处理HaCaT角质形成细胞后加以TNF-α刺激，应用人类细胞因子抗体分析膜技术测定细胞培养液中多种细胞因子和生长因子的分泌情况；采用实时定量PCR法检测IL-8和IL-6 mRNA的表达。人类细胞因子抗体分析膜技术结果显示，碳酸锂明显促进IL-6和TNF-α的产生；盐酸普萘洛尔明显促进IL-6等多种细胞因子和生长因子的产生；二磷酸氯喹也明显促进IL-6的产生。实时定量PCR结果表明，TNF-α能刺激HaCaT角质形成细胞呈剂量依赖性增加IL-8和IL-6 mRNA的表达(P<0.01)；并对IL-8的调节作用更强(P<0.01)；1×10^-6 mol·L^-1盐酸普萘洛尔能显著上调IL-6 mRNA的表达(P<0.05)。碳酸锂、盐酸普萘洛和二磷酸氯喹对HaCaT角质形成细胞表达以及产生某些细胞因子和生长因子具有调节功能。     

母乳库研究的现状分析

我国对母乳库的认知及技术的研究仍处于起步阶段,母乳库的发展缺乏国家政府制度支持和完善的管理运作规范,孕妇对母乳捐献接受程度较低,对于母乳喂养越来越受重视的今天,目前的现状不能满足医学发展的需要。本文通过介绍母乳库概念、母乳喂养的重要性、母乳库建立的必要性和可行性、母乳库的发展前景等方面对母乳库的认知情况形成系统的回顾,旨在提高人们对母乳库的认知程度,为相关部门制订母乳库建立规范化流程提供参考,使母乳捐献成为有法律保障的行为,也让越来越多的早产儿或患病新生儿受益于母乳库母乳喂养。     

In vitro investigations of gold nanocages: Toxicological profile in human keratinocyte cell line

Gold nanocages (AuNCs) are comparatively novel nanostructures, as many of their characteristics are still to be exploited. The purpose of present study was to systematically investigate the toxicological effects of AuNCs on human keratinocyte cell line (HaCaT) utilizing Dark Field (DF)/Bright Field (BF) imaging and flow cytometry cell cycle techniques. We have applied surface modification, concentration, and incubation time of AuNCs as variables to investigate their effect on the cellular imaging and cell cycle response of HaCaT cells. The results indicate that the AuNCs interact with HaCaT cells in accordance to their surface charge and concentration. Cellular uptake is evident from DF images which lead to the cell cycle perturbations and apoptosis in HaCaT cells. AuNCs cause a prominent G2/M phase arrest after 24 h of incubation. To the best of our knowledge toxicological effects of AuNCs on cell cycle of HaCaT cell line in vitro are not reported previously.     

波谱解析试题库的建设

波谱解析在化学、生物、医药、材料、食品、卫生、环境等重要领域都有广泛的应用。波谱解析课程包括紫外光谱、红外光谱、核磁共振波谱以及质谱。波谱解析是药学专业重要的基础课程之一,是学习天然药物化学、药物化学的基础。编写试题库可有助于学生复习提高所学知识,本文通过详细例子阐述了波谱解析试题库的建设。     

新建主细胞库对水痘减毒活疫苗质量影响的分析

目的 基于细胞基质分析新建人二倍体细胞MRC-5主细胞库,并通过主细胞库变更前后所制的水痘减毒活疫苗（水痘疫苗）可比性研究,分析新建主细胞库对水痘疫苗质量和稳定性的影响。方法 对新建MRC-5主细胞库、工作细胞库和生产终末代细胞按照中国药典2015年版和企业质量标准进行抽样检定,并传代至超高代次细胞进行传代稳定性研究,对比细胞生长与细胞计数。用新建主细胞库连续试生产3批水痘疫苗并进行工艺验证,分析疫苗原液及成品的质量结果,并考察水痘病毒基因序列和产品稳定性。结果 新建主细胞库、工作细胞库及其他各代次细胞在传代过程中生长良好,细胞计数正常,检定结果均符合质量标准。试生产的水痘疫苗工艺合格,变更前后生产的疫苗水痘病毒基因序列无差异;病毒滴度均为4.0 lg噬斑形成单位（plaque-forming unit,PFU）/0.5 ml,热稳定性试验结果均为3.4 lgPFU/0.5 ml,水分含量均不高于1.5%,符合企业注册标准;质量稳定性趋势基本一致。结论  建立的人二倍体细胞MRC-5主细胞库各项检定结果合格。用新细胞库试生产的水痘疫苗质量和稳定性与变更前的一致。     

Protection of the flowers ofPrunus persica extract from ultraviolet B-induced damage of normal human keratinocytes

For an attempt to develop safe materials protecting solar ultraviolet (UV)-induced skin damage, plant extracts were evaluated for their inhibitory activities of free radical generation and arachidonic acid/metabolites release from UVB-irradiated normal human keratinocytes. From the results of these screening procedures, the ethanol extract of the flowers of Prunus persica (Ku-35) was selected for further study. It was found that Ku-35 (100-1,000 microg/ml) inhibited the amount of 14C-arachidonic acid/metabolites release from UVB-irradiated keratinocytes. It was also demonstrated that Ku-35 possessed the protective activity against UV-induced cytotoxicity of keratinocytes and fibroblasts. In addition, Ku-35 was revealed to protect UVB-induced erythema formation using guinea pigs in preliminary in vivo study. All these results indicate that the flowers of P. persica extract may be beneficial for protecting UV-induced skin damage when topically applied.     

Fullerene-based amino acid nanoparticle interactions with human epidermal keratinocytes

The functionalization of C₆₀ with such complexes as amino acids has the potential to provide greater interaction between the fullerene and the biological environment yielding potential new medical and pharmacological applications. Although scientific research in the past decade has revealed much about the chemical and physical properties of C₆₀, the biological activities of this compound and its derivatives are still relatively unclear. In an attempt to understand the biological activity of functionalized C₆₀, human epidermal keratinocytes (HEK) were exposed to fullerene-based amino acid (Baa) solutions ranging in concentrations of 0.4–0.00004 mg/mL in a humidified 5% CO₂ atmosphere at 37 °C. MTT cell viability after 48 h significantly decreased (p < 0.05) for concentrations of 0.4 and 0.04 mg/mL. In an additional study, human cytokines IL-6, IL-8, TNF-, IL-1β, and IL-10 were assessed for concentrations ranging from 0.4–0.004 mg/mL. Media was harvested at 1, 4, 8, 12, 24 and 48 h for cytokine analysis. IL-8 concentrations for the 0.04 mg/mL treatment were significantly greater (p < 0.05) than all other concentrations at 8, 12, 24, and 48 h. IL-6 and IL-1β activities were greater at the 24 h and 48 h for 0.4 and 0.04 mg/mL. No significant TNF- or IL-10 activity existed at any time points for any of the concentrations. These results indicate that concentrations lower than 0.04 mg/mL initiate less cytokine activity and maintain cell viability. In HEK, Baa concentrations of 0.4 and 0.04 mg/mL decrease cell viability and initiate a pro-inflammatory response.     

银屑病角质形成细胞凋亡抑制的机制研究进展

银屑病角质形成细胞存在的凋亡抑制现象是该病重要的病理特征之一,关于此现象的发生机制和治疗研究不断深入.本文从影响凋亡的膜死亡受体/配体、凋亡抑制蛋白分子的表达等方面对近期的相关研究成果进行综述,并对关键节点的治疗研究进行分析,以期为寻找治疗银屑病的新的药物作用靶点和方法提供参考.     

龋齿DNA疫苗pGJA-P/VAX1生产用菌种库的建立和检定

目的  建立用于龋齿DNA疫苗pGJA-P/VAX1制备的菌种库,并对建立的菌种库进行质量检定。方法  将质粒pGJA-P/VAX1转化大肠杆菌DH-5α,筛选后建立原始菌种库,扩大培养建立主菌种库和工作菌种库。对主菌种库和工作菌种库进行全面检定,包括革兰染色、生化试验、16S rRNA测序、抗生素抗性检测、外源噬菌体检测、质粒传代稳定性检测、质粒酶切分析。结果  种子菌的革兰染色、生化试验和16S rRNA测序结果均符合大肠杆菌检定要求,菌种库无噬菌体污染,质粒酶切结果与质粒构建图谱一致。结论  主菌种库和工作菌种库的检测结果均符合国家食品药品监督管理局相关指南要求,能用作龋齿DNA疫苗pGJA-P/VAX1的生产用菌种。