Alcalase和Flavourzyme协同修饰玉米蛋白制备抗氧化活性蛋白水解物

采用Alcalase和Flavourzyme对高底物浓度玉米蛋白单酶水解条件进行优化,并研究双酶协同水解玉米蛋白制备抗氧化活性蛋白水解物的工艺。结果表明:Alcalase的适宜水解条件为酶解温度50℃,p H 7.7,加酶量2%(V/m),反应时间75 min,该条件下玉米蛋白水解物的DPPH自由基清除率和还原力分别为74.34%和0.984;Flavourzyme适宜水解条件为酶解温度53℃,p H 6.4,加酶量5%(m/m),反应时间50 min,该条件下玉米蛋白水解物的DPPH自由基清除率和还原力分别为70.55%和0.715。双酶协同水解过程中Alcalase+Flavourzyme较Flavourzyme+Alcalase所得玉米蛋白水解物的抗氧化活性高,在110 min时Alcalase+Flavourzyme水解所得玉米蛋白水解物的DPPH自由基清除率与还原力达到整个水解过程中的最高值,分别为91.32%和1.341。     

海参内脏酶解工艺条件的优化

建立海参内脏酶解工艺条件,为海参内脏活性物质工业化生产提供参考。以蛋白水解度和清除DPPH自由基为指标,分析比较了碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶对海参内脏的酶解效果及产物的抗氧化活性,筛选出中性蛋白酶为最佳水解酶,以水解度为指标,通过响应面分析法优化海参内脏酶解工艺。结果表明:最优酶解条件为:酶添加量2000 U/g,料液比1∶12 g/m L,酶解温度50℃,酶解液p H7.0。在最优条件下,比较不同酶解时间酶解产物的抗氧化活性,发现第10 h时酶解产物具有较好的抗氧化活性,清除DPPH自由基和羟自由基的IC50值分别为1.26、5.33 mg/m L。中性酶对海参内脏酶解工艺优化合理、可行,酶解产物具有较好的抗氧化活性。     

响应面法优化龙须菜蛋白酶解工艺及酶解液的抗氧化活性

为获得高抗氧化活性的龙须菜蛋白酶酶解液,运用响应面(RSM)分析方法对龙须菜蛋白酶解工艺条件进行优化。经单酶筛选,在单因素实验基础上,以亚铁离子螯合率和DPPH自由基清除率为主要指标,水解度为辅助指标,研究酶解时间、p H、酶解温度、底物质量浓度、加酶量对龙须菜蛋白酶解液抗氧化活性和水解度的影响。结果表明:在所选的5种蛋白酶中,复合蛋白酶是龙须菜蛋白酶解的最适用酶;酶解液抗氧化活性的最优酶解条件为酶解时间8.1 h、酶解温度50.1℃、p H7.0、底物浓度10 g/L、加酶量0.1%(0.15 AU/g)。在此条件下,酶解液的亚铁离子螯合率为74.61%,DPPH自由基清除率为47.66%,水解度为17.58%。对比常用抗氧化剂,酶解液在亚铁离子螯合能力方面显著高于0.01%维生素C和0.01%BHA(p0.05),而在DPPH自由基清除能力和还原能力方面,酶解液低于0.01%维生素C和0.01%BHA(p0.05)。优化后的龙须菜蛋白酶酶解液具有一定的抗氧化活性。     

双酶水解玉米醇溶蛋白制备抗氧化肽的工艺优化

为了制备抗氧化活性肽,利用Alcalase碱性蛋白酶和中性蛋白酶分步酶解玉米醇溶蛋白。在单因素的基础上,以1.1-二苯基苦基苯肼(DPPH·)自由基清除率、羟基自由基清除率和水解度(DH)为响应值,采用响应面(RSM)中心组合实验,选取Alcalase碱性蛋白酶加酶量、中性蛋白酶与Alcalase碱性蛋白酶活力之比、底物浓度为自变量,探讨最佳酶解工艺条件。采用Design-Expert软件,通过响应面优化确定修正后各因素的最佳工艺条件为:Alcalase碱性蛋白酶加酶量12880 U/(g底物)、中性蛋白酶与Alcalase碱性蛋白酶活力之比为1∶4,底物浓度为3.4%。在此修正条件下,DPPH·自由基清除率为42.98%,水解度为32.18%,与预测值的相对误差为1.04%。浓度为20 mg/m L时,玉米醇溶蛋白的DPPH·自由基清除率和羟基自由基清除率分别为同浓度VC的85.8%和67.0%。     

大米蛋白抗氧化肽的酶法制备工艺研究及其优化

以大米蛋白粉为反应底物,采用酶解法制备大米蛋白抗氧化肽。以酶解液的水解度与对DPPH自由基的清除率为指标,从中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶3种蛋白酶中筛选出木瓜蛋白酶为最佳用酶。通过BoxBehnken响应面设计法优化木瓜蛋白酶酶解大米蛋白抗氧化肽的工艺条件为p H值5.25、酶解温度61.4℃、加酶量5.6 U/m L、底物质量浓度5.3 g/100 m L。其酶解液稀释5倍后对DPPH自由基的清除率为94.8%。     

金枪鱼骨抗氧化酶解物的工艺优化

为获得高抗氧化活性的金枪鱼骨粉酶解液。用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶4种蛋白酶对鱼骨粉进行酶解,以酶解液的DPPH自由基清除活性为主要指标,水解度为辅助指标进行分析,筛选出试验最适水解酶为中性蛋白酶。采用响应面设计方法对鱼骨粉酶解工艺进行优化。结果表明,骨粉最佳酶解工艺参数为:酶解温度56.22℃,酶解时间1.88 h,p H 6.15,液料比20.19∶1(m L∶g)。该条件下的鱼骨粉酶解液蛋白质浓度为9.30 mg/m L,水解度为12.34%,DPPH清除率为94.97%,羟基(·OH)自由基清除率为97.89%。骨粉酶解液显示出较强的抗氧化活性,且优于同浓度条件下的VC液抗氧化活性。     

栉孔扇贝酶解液制备条件优化及其抗氧化性研究

以栉孔扇贝为原料,以水解度和DPPH自由基清除率为指标,在单因素试验基础上,采用Box-Behnken方法,通过响应面试验优化酶解制备具有抗氧化性多肽的扇贝酶解液工艺,并对扇贝酶解液的DPPH自由基清除率、羟自由基清除率、总抗氧化活力和抗超氧阴离子活力进行测定。研究了蛋白酶种类、酶解时间、酶解温度、加酶量和固液比对栉孔扇贝酶解液抗氧化性的影响。结果表明:扇贝最佳酶解条件为选择中性蛋白酶、酶解时间4.7h、酶解温度43℃、加酶量3.5%、固液比(m/V)1∶5。在此条件下,DPPH自由基清除率达到68.21%,羟自由基清除率为33.74%,总抗氧化活力为0.086U/mg prot,抗超氧阴离子活力为106.27U/g prot。     

Alcalase蛋白酶水解花椒籽蛋白制备抗氧化肽的条件优化

本研究以花椒籽蛋白质抗氧化肽水解度(DH)和DPPH自由基清除率为指标,对酶解花椒籽蛋白制备抗氧化肽的水解用酶及其酶用量、底物浓度、酶解温度、时间等酶解条件进行研究,以期优化得到酶解法制备花椒籽抗氧化肽的最优条件。结果表明Alcalase蛋白酶水解花椒籽蛋白制备抗氧化肽效果最好,通过响应面分析法优化出该酶最佳酶解花椒籽制备抗氧化肽的条件为:底物浓度5%,温度55℃,pH 8.5,加酶量4%;该方法可用于花椒籽蛋白制备抗氧化肽,在此条件下花椒籽水解液DPPH自由基清除率可达到61.00%,水解度为12.00%。     

杏仁蛋白Alcalase水解工艺及其体外抗氧化活性的研究

为深入开发利用杏仁蛋白资源,采用Alcalase蛋白酶水解杏仁蛋白,以水解度为指标对酶解过程进行研究,在单因素试验基础上以水解度和DPPH自由基清除率为指标进行酶解正交试验.结果表明制备抗氧化能力较强的杏仁蛋白水解物的最佳条件为:pH 8.0,温度55 ℃,酶底比4%,底物浓度5%.在此条件下进行水解试验,水解度为21.02%,水解物对DPPH自由基的清除率为66.13%.     

椰肉蛋白酶解及其产物的抗氧化活性研究

将新鲜椰肉粉碎脱脂,利用碱溶酸沉法制备椰肉蛋白。用Alcalase碱性蛋白酶、Neutrase中性蛋白酶、菠萝蛋白酶、Papain木瓜蛋白酶酶解椰肉蛋白,以DPPH自由基清除能力和水解度为指标对酶解过程进行分析,筛选出最适合制备抗氧化酶解物的酶为Alcalase碱性蛋白酶。然后采用单因素及多指标正交实验设计优化Alcalase碱性蛋白酶酶解条件,其中酶解温度和底物浓度对DPPH自由基清除率影响最大。优化后的制备参数为:酶解温度50℃,pH值10.5,加酶量14000 U/g,酶解时间7 h,底物浓度2%,该条件下水解液中蛋白含量为15.8 mg/mL,水解度和DPPH.清除率分别为29.16%和89.07%,椰肉蛋白酶解物显示出较强的抗氧化活性,接近同一浓度下谷胱甘肽的抗氧能力,比同浓度Vc的DPPH自由基清除率高3.33倍。     

蛋白酶水解蟹腿残肉制备抗氧化肽的条件研究

以蟹腿残肉为底物,研究了不同预处理方式、蛋白酶种类、温度、pH、加酶量及料液比对酶解效果(酶解液水解度及DPPH自由基清除率)的影响,并采用响应面优化法对上述条件进行优化。结果表明:碱性蛋白酶水解脱脂烘干的蟹肉可得到DPPH自由基清除率较高的酶解液,酶解液的水解度及DPPH自由基清除率均受到温度、pH值、加酶量、料液比的显著影响;利用响应面优化得到的酶解条件为:温度55℃、料液比1:19.02 g/m L、加酶量3257.61 U/g、p H8.45、酶解时间3 h,所得水解液DPPH自由基清除率可达到86.36%。     

复合酶解牦牛乳酪蛋白工艺优化及抗氧化性的研究

为了优化牦牛乳酪蛋白酶解工艺,研究其产物抗氧化活性,选用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶,在其最适条件下酶解牦牛乳酪蛋白,以水解度(DH)、DPPH·自由基清除率和超氧阴离子清除率为评价指标,筛选出2种效果最优的单酶进行复配,采用单因素试验及L9(34)正交试验确定最优酶解工艺。结果表明:中性蛋白酶和胰蛋白酶比例为1:2效果最佳,最佳酶解工艺条件为底物浓度5%(w/v),温度42.5℃,p H值7.5,复合酶添加量3%,作用时间150 min,酶解产物抗氧化活性最高,DPPH·自由基清除率达到了64.26%±0.18%,超氧阴离子清除率达到40.34%±0.92%。     

羊血亚铁血红素的酶法制备及抗氧化活性研究

以新鲜羊血为原料，通过酶水解法制备亚铁血红素，并测定其体外抗氧化活性。以水解度为评价指标，对比分析中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、Alcalase2.4L碱性蛋白酶酶解效果，确定选用Alcalase2.4L碱性蛋白酶为水解酶。通过单因素实验及正交实验得到最优酶解工艺为：温度55℃、pH8.5、加酶量8000 U/g，酶解时间8 h。添加0.05%抗坏血酸抗氧化，最终血红素得率为94.65%，其中亚铁血红素纯度为83.87%。以Vc为阳性对照，通过测定亚铁血红素的DPPH自由基清除率、羟自由基清除率、ABTS自由基清除率研究其抗氧化活性，结果表明亚铁血红素有较好的抗氧化活性。     

响应面优化虾夷扇贝抗氧化肽酶解液工艺研究

为制备富含抗氧化肽的扇贝酶解液,以虾夷扇贝为原料,以水解度和DPPH自由基清除率为指标,应用响应面法优化扇贝蛋白的生物酶解工艺,并测定了富含活性肽酶解液的体外抗氧化性。结果表明:扇贝蛋白生物酶解适宜工艺参数为蛋白酶用量3.1%,酶作用温度45℃,作用时间4.5 h,此工艺参数下酶解液DPPH自由基清除率为82.06%,总抗氧化能力为0.11 U/mg prot,抗超氧阴离子活力为0.37 U/g prot,羟自由基清除率为55.31%。     

鸡骨酶解物的抗氧化活性研究

分别选用复合风味蛋白酶、Protamex复合蛋白酶、Alcalase蛋白酶、胰酶、胰蛋白酶、AS.1398中性蛋白酶和木瓜蛋白酶水解鸡骨泥,研究鸡骨酶解物(蛋白质含量3 mg/mL)对DPPH、羟自由基(OH·)的清除能力及其还原性.试验结果表明:Protamex复合蛋白酶酶解鸡骨产物的DPPH清除率最强,即81.44%;复合风味蛋白酶酶解物OH·清除率达30.32%,还原性测定的吸光值为0.3.总之,鸡骨酶解物的DPPH清除能力强于羟自由基清除能力和还原力.在研究不同浓度和水解度对鸡骨酶解物清除DPPH活性的影响时发现,随着酶解物蛋白质质量浓度的增大,酶解物的DPPH清除率升高.复合风味蛋白酶、Protamex复合蛋白酶的鸡骨酶解物蛋白质质量浓度分别为4、6mg/mL时,其DPPH清除率分别达91.49%、97.3%.但DPPH清除率与水解度不呈正相关性,只有在特定水解度下,使抗氧化肽含量最高时,水解物才表现出最强的抗氧化能力.例如复合风味蛋白酶、AS.1398中性蛋白酶、Protamex复合蛋白酶、胰酶的最佳水解度分别为12.59%、23.78%、14.45%、20.04%.     

酶法制备汉麻籽蛋白抗氧化肽

采用不同蛋白酶酶解汉麻籽蛋白,确定Alcalase 2.4L碱性蛋白酶是酶解汉麻籽蛋白制备抗氧化肽的优良酶源。通过单因素和响应面回归分析,得到Alcalase 2.4L碱性蛋白酶酶解汉麻籽蛋白的优化条件为:底物浓度50 mg/mL、水解时间2 h、温度50℃、加酶量2.2%、pH 9.4。优化酶解条件下,水解度约为20%,10 mg/ mL酶解产物的DPPH自由基清除率为82.65%,显示出较好的抗氧化活性。     

啤酒糟醇溶蛋白酶法水解及水解产物的抗氧化研究

用碱性蛋白酶(Alcalase)对啤酒糟醇溶蛋白进行水解,并使用正交试验设计以水解度为指标对酶法水解进行了优化。结果表明,啤酒糟醇溶蛋白的酶解最优条件为底物浓度2%,酶解温度60℃,pH9.5,酶浓度(E/S)0.096 AU/g,酶解时间3h。以DPPH自由基清除率和羟自由基清除率为指标,用抗坏血酸做对照,对酶解产物的抗氧化活性进行了分析。分别得到了两种自由基清除的最优酶解条件。啤酒糟醇溶蛋白酶解产物对不同自由基的最佳清除作用的水解条件不一致,可能与所产生的多肽对几种自由基的清除机理有关。     

扁杏仁抗氧化肽的制取工艺研究

研究了扁杏仁抗氧化肽的酶解制备工艺及其体外抗氧化活性。以羟基自由基的清除率和水解度为考察指标,用响应面分析法研究酶用量、底物浓度、温度和p H对扁杏仁抗氧化活性肽酶解工艺的影响。得出优化后的酶解条件为:碱性蛋白酶-风味蛋白酶的复合酶用量6725 U/g(碱性蛋白酶为3645 U/g,风味蛋白酶为2690 U/g)、底物质量分数为3%、温度60℃、p H8.28,在该条件下制备的扁杏仁抗氧化活性肽对羟基自由基的清除率和水解度分别为84.18%和20.87%。     

鸡肉蛋白的酶解特性及酶解产物的抗氧化性研究

利用碱性蛋白酶(Alcalase)酶解鸡肉蛋白,在单因素的基础上,运用响应面(RSM)以水解度为响应值对最佳工艺进行分析,探讨最佳酶解条件.结果表明:各因素对提高水解度的重要性依次为酶的添加量>酶解温度>酶解时间＞液固比;最佳实验条件为:酶的添加量5μL/g(鸡肉)、反应时间5h、温度47.3℃、pH=8.5、液固比=5,此时水解度为25.53%.对不同水解度的酶解液进行羟自由基(·OH)清除能力和抗氧化能力(AOV)研究,发现酶解产物具有明显的清除羟自由基(·OH)活性和较大的抗氧化能力(AOV),且在一定范围内抗氧化活性随着水解度的增加而增大.     

响应面试验优化裙带菜蛋白酶解工艺及酶解液抗氧化活性

运用响应面分析方法对裙带菜蛋白酶解工艺条件进行优化。经单酶筛选,在单因素试验基础上,以亚铁离子螯合率和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率为主要指标,水解度为辅助指标,研究酶解时间、酶解温度、p H值、底物质量浓度、加酶量对裙带菜蛋白酶解产物抗氧化活性和水解度的影响,并比较优化条件下的酶解液与常用天然抗氧化剂抗坏血酸、合成抗氧化剂丁基羟基茴香醚(butyl hydroxyanisole,BHA)的抗氧化活性。结果表明:复合蛋白酶是裙带菜蛋白酶解的最适用酶,酶解液螯合亚铁离子能力和清除DPPH自由基的最优条件为酶解时间8.1 h、酶解温度50℃、p H 7.0、底物质量浓度15 g/L、加酶量0.2%(0.3 AU/g裙带菜粉末)。在此条件下,酶解液的亚铁离子螯合率为88.58%,DPPH自由基清除率为59.22%,水解度为29.72%。对比常用抗氧化剂,在亚铁离子螯合能力方面,酶解液显著高于0.01%抗坏血酸和0.01%BHA(P0.05),而在DPPH自由基清除能力和还原能力方面,酶解液低于0.01%抗坏血酸和0.01%BHA(P0.05)。