大鼠双下肢骨折合并失血对心肌细胞损伤的作用及其机制

目的：探讨双下肢骨折创伤失血反应可否诱导心肌细胞发生凋亡反应,为深入研究骨折创伤后心肌损伤机制奠定基础。方法：SD大鼠20只,随机分为对照组及创伤组（n=10）,制备双下肢骨折创伤失血模型;原代心肌细胞培养复制创伤模型。ELISA检测血清IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α水平;心肌组织HE染色、Tunel试验观察心肌受损、凋亡;Western blot及RT-PCR检测心肌组织凋亡调控基因Bcl-2/Bax表达变化。结果：创伤后血清炎性因子时间依赖性改变,IL-2（8 h）、IL-6、IL-10（4 h）、TNF-α（1 h）达到峰值,随后逐步回落;心肌HE染色发现心肌细胞肿大,排列紊乱,炎细胞浸润;Tunel试验证实大量核染成棕褐色的心肌细胞,凋亡指数增加（P<0.05）;Western blot及RT-PCR检测表明,无论在体及心肌细胞培养中,促凋亡基因Bax表达上调（P<0.05）,而抑凋亡基因Bcl-2表达下调（P<0.05）。结论：大鼠双下肢骨折创伤失血反应通过诱导心肌细胞凋亡进而造成心肌损伤。     

黄芪注射液对阿霉素性心肌细胞凋亡、内质网应激与缝隙连接蛋白表达的影响

目的：研究黄芪注射液对阿霉素（ADR）所致心肌病大鼠心肌细胞凋亡、内质网应激与缝隙连接蛋白表达的影响。方法：36只Wistar雄性大鼠随机分为3组（n=12）：对照组、ADR组及黄芪注射液组。对照组腹腔注射0.9% Nacl （10 ml/kg体重）;ADR组腹腔注射ADR 2 mg/kg体重;黄芪注射液组在每次腹腔注射ADR 2 mg/kg体重的同时,注射黄芪注射液10 g/kg体重,每周注射1次,共注射3次。实验第7周末,3组大鼠行心脏彩超检测左室舒张末期内径、左室收缩末期内径及左室射血分数;处死大鼠后取左心室组织行HE、Masson、醋酸铀及柠檬酸铅染色,于光镜及透射电镜下观察心肌病理及超微结构改变;采用TUNEL法检测大鼠心肌细胞凋亡,用免疫组化技术检测大鼠心肌细胞缝隙连接蛋白Cx43及p-Cx43表达,采用real time PCR检测大鼠心肌细胞内质网应激伴侣蛋白Grp78,ATF-4及CHOP表达。结果：与对照组比较,ADR组大鼠LVEDD、LVESD增大,LVEF减少;心肌纤维排列紊乱,心肌纤维间质水肿,大量淋巴细胞浸润;线粒体肿胀、破坏,呈空泡样;心肌细胞凋亡数明显增多（P<0.01）;内质网应激相关蛋白Grp78、ATF-4及CHOP表达明显增高（P<0.01）;缝隙连接蛋白Cx43表达减少,而p-Cx43表达增多。与ADR组比较,黄芪注射液组大鼠LVEDD、LVESD减少,LVEF增加;心肌病理及超微结构明显改善,同时心肌细胞凋亡数明显减少（P<0.01）;内质网应激伴侣蛋白Grp78、ATF-4及CHOP表达明显减少（P<0.01）;缝隙连接蛋白Cx43表达增多,而p-Cx43减少。结论：黄芪注射液可有效改善阿霉素导致的心肌损伤,其机制可能与黄芪注射液抑制ADR诱导的内质网应激及缝隙连接蛋白磷酸化有关。     

右美托咪定对肺缺血/再灌注损伤小鼠内质网应激相关分子Caspase-12表达的影响

目的：探讨右美托咪定（DEX）对肺缺血/再灌注（I/R）损伤小鼠内质网应激（ERS）相关分子天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-12（Caspase-12）表达的影响。方法：选用C57BL/6J小鼠复制在体左肺原位I/R损伤模型。随机将40只小鼠分为4组（n=10）：假手术组（sham组）,I/R损伤组（I/R组）,生理盐水对照组（NS组）,右美托咪定干预缺血/再灌注组（DEX组）。DEX组在夹闭小鼠左肺门30 min前经腹腔注射DEX 25 μg/kg,NS组为用同DEX组等体积的生理盐水替代DEX,其余操作同DEX组。3 h肺再灌注结束后,留取左肺。测定肺组织湿/干重比（W/D）及总肺含水量（TLW）,光镜观察肺组织形态学改变,对肺组织进行损伤评估（IQA）。原位末端标记（TUNEL）法检测组织细胞凋亡指数（AI）,蛋白免疫印迹法（Western blot）和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测Caspase-12、葡萄糖调节蛋白78（grp78）蛋白和mRNA表达水平。结果：与sham组比,I/R组和NS组肺W/D、TLW、IQA、AI均明显升高（P<0.01）,肺组织形态结构破坏明显,Caspase-12、grp78蛋白和mRNA表达量增加（P<0.01）;I/R组与NS组相比,两组Caspase-12、grp78蛋白和mRNA表达量无明显差异（P>0.05）。DEX组与I/R组比,W/D、TLW、IQA和AI均有下降（P<0.01或P<0.05）,肺组织形态学改变明显减轻,Caspase-12和grp78蛋白和mRNA表达量下降（P<0.01）。结论：DEX可有效缓解小鼠肺缺血/再灌注性损伤,其机制可能与其对抗ERS中Caspase-12引起的细胞凋亡有关。     

Nrf2/ARE通路介导右美托咪定减轻肢体缺血/再灌注损伤中的作用

目的：观察Nrf2/ARE通路在右美托咪定（DEX）预处理减轻大鼠肢体缺血/再灌注损伤中的作用。方法：28只成年雄性SD大鼠随机分为4组（n=7）：假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（I/R组）、I/R+右美托咪定预处理组（DEX组）、I/R+DEX+阿替美唑组（Atip组）。Atip组在麻醉后腹腔一次性给予Atip （250 μg/kg）和DEX （25 μg/kg）,Sham组和I/R组在麻醉后腹腔给予相应体积生理盐水,DEX组给予相应体积DEX和生理盐水,30 min后单侧股部切口,无创动脉夹夹闭股动脉,侧支循环用橡皮筋以恒定张力结扎,缺血3 h后去除动脉夹及橡皮筋,开放2 h后,取大鼠血清测乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）;取部分腓肠肌,测量丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）以及Western blot检测胞核核因子E2相关因子2（Nrf2）、胞浆HO-1蛋白;免疫组化检测胞核Nrf2、胞浆HO-1蛋白和光镜观察骨骼肌形态;同时切取少量腓肠肌进行湿干比检测。结果：与Sham组相比,I/R组湿干比、MDA、LDH、CK、Nrf2、HO-1蛋白表达明显升高（P<0.05）,SOD活性显著降低（P<0.05）;与I/R组相比,DEX组湿干比、MDA、LDH、CK明显降低（P<0.05）,SOD、Nrf2、HO-1蛋白表达显著增多（P<0.05）;与DEX组相比,Atip恰能扭转DEX的这种作用,Atip组各指标与DEX组有显著差异（P<0.05）。结论：Nrf2蛋白存在于大鼠的骨骼肌中并且DEX可以通过α2受体上调核内Nrf2水平,使Nrf2下游的HO-1保护蛋白增多,起到抗氧化的作用。     

辣木叶对糖尿病大鼠认知功能及海马神经细胞凋亡的影响*

目的:探讨辣木叶对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病模型大鼠认知功能障碍及海马神经细胞凋亡的影响。方法:选取健康SD雄性大鼠50只,随机选取10只作为对照组,40只大鼠给予腹腔注射25 mg/kg STZ构建糖尿病大鼠模型。40只大鼠随机分为模型组、辣木高、中、低剂量组,分别每日灌胃给药2.0 g/kg、4.0 g/kg、8.0 g/kg辣木叶,对照组和模型组每日灌胃给药等量生理盐水,1次/日,持续给药8周。Morris水迷宫实验评价大鼠学习记忆能力;HE染色及免疫组化染色对大鼠海马神经元切片进行染色,观察各组大鼠海马神经元病理改变的情况及Bax、caspase-3及Bcl-2蛋白表达情况;酶联免疫法(ELISA)检测大鼠海马组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)。结果:与对照组相比,模型组大鼠血糖值明显提高(P＜0.01),血胰岛素水平明显降低(P＜0.05);与模型组相比,辣木组血糖值显著降低(P＜0.05,P＜0.01),辣木中、高剂量组血胰岛素水平显著升高(P＜0.05,P＜0.01)。不同剂量组辣木组间比较,给药后3组大鼠FBG及INS无统计学差异(P＞0.05);Morris水迷宫实验的第4-5日,与模型组相比较,辣木各剂量组潜伏期均明显缩短(P＜0.05);辣木不同剂量组目标象限停留时间明显延长(P＜0.05)。炎症因子变化结果,与模型组相比较,辣木低、中、高剂量组TNF-α、IL-6含量及蛋白表达水平显著降低(P＜0.05)。HE染色及免疫组化染色结果显示,与模型组相比较,辣木中剂量组中阳性表达,呈棕黄色,细颗粒状。辣木叶中剂量组(53.21±7.19)能显著减少神经元细胞凋亡的数目(P＜0.01);辣木组中剂量组大鼠海马组织中Bax、caspase-3的蛋白表达及Bax/Bcl-2比例显著降低(P＜0.05)。结论:辣木叶能改善糖尿病大鼠认知功能障碍其作用机制可能与调节Bax、Bcl-2、caspase-3的蛋白表达,降低炎症因子TNF-α及IL-6含量相关。     

急性冷暴露对大鼠肺组织中水通道蛋白AQP-1和AQP-5表达的影响

目的：探讨急性冷暴露后肺组织超微结构变化以及对水通道蛋白-1（AQP-1）和AQP-5表达的影响。方法：12只健康雄性Wistar大鼠随机分为室温（23℃±2℃）对照组和-25℃ 2 h冷暴露组（n=6）;记录冷暴露后大鼠直肠温度;透射电镜观察肺组织超微结构改变;RT-PCR法和Western blot法测定大鼠肺组织AQP-1和AQP-5基因和蛋白的表达水平。结果：急性冷暴露后大鼠的体心温度与对照组相比,明显降低（P<0.05）;肺组织超微结构亦发生改变,基底膜明显增厚,肺泡I上皮细胞（AT-I）核固缩,肺泡Ⅱ上皮细胞（AT-Ⅱ）胞浆空泡化增多;冷暴露后大鼠肺组织AQP-1的基因和蛋白表达未见明显变化,AQP-5的基因和蛋白表达均显著降低（P<0.05）。结论：急性冷暴露肺组织AQP-5基因和蛋白表达降低与寒冷暴露引发肺组织结构损伤可能存在一定因果关系。     

格列齐特对糖尿病大鼠心肌的保护作用及其机制*

目的: 观察格列齐特对糖尿病大鼠心肌保护作用及其可能的机制。方法: 将60只健康SD大鼠随机分为正常组(NC,n=10),造模组(n=50)给予高糖高脂饲料4周后,腹腔注射STZ(45 mg/kg)建立糖尿病大鼠模型,随机抽取以FBG≥16.7 mmol/L作为糖尿病模型建立成功。将造模成功的38只糖尿病大鼠随机分为模型组(MC,n=9)、格列齐特组(Glic,80 mg/kg,n=10)、格列本脲组(Glib,2.5 mg/kg,n=10)、法舒地尔组(Fas,10 mg/kg,n=9);NC组和MC组灌胃等容积蒸馏水,Glic组和Glib组灌胃给药,Fas组采用腹腔注射。各组大鼠每天给药一次,每周记录体质量及空腹血糖(FBG),持续8周。实验结束时取血并测定心脏质量,计算心脏质量指数(HWI);测定各组糖化血红蛋白(HbA1c)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)含量以及血清丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性;通过HE和Masson染色,观察心肌病理变化和组织胶原纤维水平;TUNEL染色观察并计算心肌细胞凋亡率;Western blot法检测心肌组织中RhoA、ROCK1、eNOS、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果: 与NC组比较,MC组FBG、HWI、HbA1c、TC、TG、LDL-C、MDA水平,心肌组织胶原沉积和心肌细胞凋亡率以及心肌组织中RhoA、ROCK1、Bax蛋白明显升高,SOD活性及HDL-C、eNOS、Bcl-2和体重显著降低(P＜0.01);与MC组相比,Glic组FBG、HWI、HbA1c、TC、TG、LDL-C和MDA等指标明显下降,心肌组织胶原沉积及心肌细胞凋亡减轻,心肌组织RhoA、ROCK1、Bax蛋白表达下调(P＜0.01或P＜0.05),大鼠体重和血清中SOD活性,HDL-C升高,eNOS、Bcl-2蛋白水平升高(P＜0.01或P＜0.05)。与Glic组相比,Glib组与Fas组体重、血脂、FBG、HWI、MDA以及心肌纤维化和心肌细胞凋亡水平升高,SOD和Bcl-2降低,Glib组心肌组织RhoA、ROCK1、Bax蛋白表达上调(P＜0.01或P＜0.05)。结论: 格列齐特可改善糖尿病大鼠心肌损伤并减轻心肌细胞凋亡水平,其机制可能与降低血糖,改善氧化应激状态,调控RhoA/ROCK1/eNOS信号通路有关。     

瑞舒伐他汀对颈动脉粥样硬化患者单个核细胞CCR2表达的影响及机制

目的：探讨瑞舒伐他汀对颈动脉粥样硬化患者单个核细胞CC类趋化因子受体2（CCR2）表达的影响及上游机制。方法：选择颈动脉粥样硬化患者20例。予瑞舒伐他汀5~20 mg/d治疗。在基线、3月时采集血标本,测定单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）及血脂水平;分离单个核细胞,流式细胞学检测单个核细胞上的CCR2表达;荧光定量逆转录PCR法检测CCR2、过氧化物酶体增生物激活受体（PPAR）β mRNA的表达;Western印迹法检测PPAR β蛋白的表达。结果：瑞舒伐他汀治疗3个月后,患者低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平明显降低（P<0.01）,MCP-1及单个核细胞CCR2表达显著下降（P<0.05）,PPAR β mRNA及蛋白表达均较前增加（P<0.05）。结论：瑞舒伐他汀可能通过PPAR β途径降低MCP-1,抑制单个核细胞CCR2的表达。     

促红细胞生成素通过JNK通路对再灌注损伤肺细胞凋亡的影响

目的：探讨促红细胞生成素（EPO）后处理是否通过抑制C-Jun氨基末端激酶（JNK）活化来减轻再灌注损伤肺细胞的凋亡。方法：雄性SD大鼠40只,随机分成5组（n=8）：对照组（C组）、肺缺血/再灌注组（I/R组）、促红细胞生成素干预组（EPO组）、促红细胞生成素+溶剂对照组（P组）、促红细胞生成素+SP600125组（SP组）。各组分别于再灌注2 h留取左肺组织,电镜检测超微结构损伤;免疫组化法测定Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果：与C组相比,I/R组肺组织超微结构损伤明显,Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax比值明显降低,Bax蛋白表达明显升高（P<0.01）;EPO组、P组、SP组与I/R组相比,组织损伤有所减轻,Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax比值明显升高,Bax蛋白表达明显降低（P<0.01）;SP组与EPO组相比,组织损伤明显减轻,Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax比值明显升高,Bax蛋白表达明显降低（P<0.01）。结论：I/R通过激活JNK导致大鼠肺泡结构严重破坏,肺内细胞大量凋亡;EPO可通过抑制JNK的激活而减轻I/R损伤。     

硫化氢对1型糖尿病大鼠肾脏的保护作用

目的：观察硫化氢（H₂S）对1型糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其机制。方法：32只雄性SD大鼠随机分为4组：正常对照（NC）组、糖尿病（DM）组、糖尿病治疗（NaHS+DM）组和NaHS对照（NaHS）组（n=8）。DM组和NaHS+DM组大鼠采用链脲佐菌素（STZ）55 mg/kg腹腔注射诱导1型糖尿病模型。造模成功后,NaHS+DM组和NaHS组采用腹腔注射NaHS溶液56 μmol/kg干预治疗。8周后,测定大鼠24 h尿蛋白含量、肾重指数、空腹血糖、尿素氮、肌酐等指标;HE染色观察肾脏组织形态学变化;测定肾脏组织脂质过氧化物丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）和Caspase-3的活性;Western blot检测肾脏组织Bcl-2和Bax蛋白表达。结果：与NC组相比,NaHS组各项指标均无显著差异,DM组,24 h尿蛋白含量、肾重指数、空腹血糖、尿素氮和肌酐水平均明显升高;HE染色结果显示肾小球基底膜增厚、系膜基质增多;MDA含量、Caspase-3活性和Bax蛋白表达明显增高;SOD活性和Bcl-2蛋白表达显著降低。与DM组相比,NaHS+DM组肾功能损伤明显减轻,肾脏组织形态学变化明显改善,MDA含量、Caspase-3活性和Bax蛋白表达明显下降,SOD活性和Bcl-2蛋白表达显著增高。结论：H₂S对1型糖尿病大鼠肾脏具有保护作用,其机制可能与抑制氧化应激和细胞凋亡有关。     

Protective effects of circulating microvesicles derived from ischemic preconditioning on myocardial ischemia/reperfusion injury in rats by inhibiting endoplasmic reticulum stress

Microvesicles (MVs) have been shown to be involved in pathophysiology of ischemic heart diseases. However, the underlying mechanisms are still unclear. Here we investigated the effects of MVs derived from ischemic preconditioning (IPC-MVs) on myocardial ischemic/reperfusion (I/R) injury in rats. Myocardial IPC model was elicited by three cycles of ischemia and reperfusion of the left anterior descending (LAD) coronary artery. IPC-MVs from the peripheral blood of the above animal model were isolated by ultracentrifugation and characterized by flow cytometry and transmission electron microscopy. IPC-MVs were administered intravenously (7 mg/kg) at 5 min before reperfusion procedure in I/R injury model which was induced by 30-min ischemia and 120-min reperfusion of LAD in rats. We found that total IPC-MVs and different phenotypes, including platelet-derived MVs (PMVs), endothelial cell-derived MVs (EMVs), leucocyte-derived MVs and erythrocyte-derived MVs (RMVs) were all isolated which were identified membrane vesicles (<?1 µm) with corresponding antibody positive. The numbers of PMVs, EMVs and RMVs were significantly increased in circulation of IPC treated rats respectively. Additionally, treatment with IPC-MVs significantly alleviated damage of myocardium, and restored cardiac function of I/R injury rats, as evidenced by increased heart rate, and decreased the elevation of ST-segment. The size of myocardial infarction, lactate dehydrogenase activity, and the number of apoptotic cardiomyocytes were also reduced significantly with IPC-MVs treatment, coincident with the above function amelioration. Moreover, IPC-MVs decreased the activity of caspase 3, and the expression of endoplasmic reticulum stress (ERS) markers, GRP78, CHOP and caspase 12 indicating the involvement of ERS-specific apoptosis in I/R injury, and cardioprotective effects of IPC-MVs. In summary, our study demonstrated a novel mechanism of IPC in which circulating IPC-MVs could protect hearts from I/R injury in rats through attenuation of ERS-induced apoptosis. These findings provide new insight into therapeutic potential of IPC-induced MVs in cardioprotection against I/R injury.     

下肢骨骼肌缺血后处理对兔缺血/再灌注心肌坏死和凋亡的影响

目的:探讨在体情况下,骨骼肌缺血后处理对兔缺血/再灌注心肌坏死和凋亡的影响。方法:新西兰大白兔36只,随机分成3组(每组随机选取6只进行梗死范围的测定,另外6只进行凋亡测定):①假手术组(Sham组);②缺血/再灌注组(I/R组);③远端后处理组(RPostC组)。在缺血前、后及再灌注60 min、120 min分别抽血测定肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)的活性。采用伊文思兰(evans blue)和三苯基氯化四氮唑(TTC)染色方法确定心肌缺血区范围以及心肌坏死区范围。用Tunel法检测兔心肌缺血区细胞凋亡情况,免疫组织化学方法检测心肌缺血区蛋白caspase-3、Bcl-2及Bax的表达。结果:RPostC组心肌坏死程度、再灌注末CK活性较I/R组明显减低。RPostC组缺血区心肌Tunel阳性指数显著低于I/R组(21.79%±1.07%vs35.81%±1.10%,P<0.05)。而RPostC组缺血区心肌细胞caspase-3阳性指数显著低于I/R组(25.03%±1.16%vs39%±2.43%,P<0.05)。与Sham组比较,I/R组及RPostC组Bax蛋白表达指数、Bcl-2蛋白表达指数均升高;但RPostC组的Bax/Bcl-2比值降低,而I/R组的Bax/Bcl-2比值升高。与I/R组相比较,RPostC组Bax蛋白表达指数及Bax/Bcl-2比值显著降低,Bcl-2表达指数显著升高,差异均有统计学意义。结论:远端后处理能够明显的减少缺血/再灌注心肌细胞的坏死和凋亡,其减轻心肌细胞凋亡的机制可能与抑制促凋亡基因caspase-3的活化及Bcl-2表达的上调有关。     

心肌梗死大鼠钙敏感受体表达与心肌细胞凋亡的变化

目的:观察大鼠急性心肌梗死后不同时间心肌钙敏感受体(CaSR)的表达和心肌细胞凋亡的变化情况。方法:健康Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham)和心肌梗死(AMI)组,通过结扎左侧冠状动脉前降支的方法,建立大鼠心肌梗死模型,分别在手术后1、2、4周(每组成功存活n=5)检测心脏形态学和血流动力学的改变,检测心肌组织中CaSRmRNA和蛋白的表达,以及Bax、Bcl-2、caspase-3和caspase-9蛋白的表达,检测血清中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)活性和肌钙蛋白(cTnT)水平,观察心肌细胞凋亡情况。结果:和Sham组相比,随着心肌梗死的发展,AMI组大鼠心肌组织CaSR的mRNA和蛋白的表达、细胞凋亡指数均明显增加(P<0.05),心肌细胞超微结构损伤严重;左心室收缩压(LVSP)、左心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)(mmHg/s)和最大下降速率(-dp/dtmax)(mmHg/s)减少,左心室舒张末期压(LVEDP)明显增大(P<0.05);AMI组血清cTnT水平、CK和LDH活性均升高(P<0.05),随着心肌梗死的发展,cTnT水平和CK活性逐渐降低,LDH变化不明显。心肌组织中促凋亡相关蛋白Bax、caspase-3、caspase-9表达增多,抑制凋亡的相关蛋白(或因子)Bcl-2表达减少(P<0.05)。结论:随着AMI的发展,AMI组大鼠心肌组织中CaSR的mRNA和蛋白的表达增多,细胞凋亡数增加,表明CaSR参与了心肌梗死的发展,其机制可能与促进细胞凋亡有关。     

间歇运动对心梗大鼠心肌氧化应激和炎症的影响及其机制

目的: 探讨间歇运动激活心肌梗死(MI)大鼠SIRT1-Nox4-ROS通路抑制心脏氧化应激和炎症的作用。方法: 选取雄性SD 大鼠30 只,随机分为假手术对照(C)组,心肌梗死(MI) 组和心梗+间歇运动(ME)组,每组10 只。MI 组采用心脏左冠状动脉前降支(LAD) 结扎法,建立MI 模型。C组大鼠实施假手术,ME 组大鼠在MI 手术后1 周进行4 周跑台运动。第一周为适应性训练(10～15 m/min,30 min/d,共5 d)。正式训练起始训练速度10 m/min,时间为10 min。速度逐渐增至25 m/min,运动7 min后,间歇3 min,其速度为15 m/min,之后依次交替进行,运动总时间为60 min,5 d/周 ×4 周。训练结束后测定各组大鼠心电图变化,开胸摘取心脏。HE染色检测心肌组织结构,紫外分光光度法测定心脏MDA含量和SOD活性,微量酶标法测定心脏LDH活性,RT-qPCR 检测心肌SIRT1 mRNA表达,Western blot 检测心肌SIRT1、Nox4、TNF-α和IL-1β蛋白表达,DHE 法检测心肌活性氧(ROS)水平。结果: 与C组比较,MI组大鼠心肌组织出现代替性纤维化,心脏Nox4蛋白表达显著增加 (P＜0.01),MDA含量、LDH活性和ROS水平显著升高(P＜0.01),SOD活性显著降低 (P＜0.01),TNF-α和IL-1β蛋白表达显著增加 (P＜0.01),SIRT1 mRNA和蛋白表达显著降低 (P＜0.01)。与MI组比较,ME组大鼠心肌纤维化降低,心脏Nox4蛋白、MDA含量、LDH活性和ROS水平显著降低 (P＜0.01),SOD活性显著增强 (P＜0.01),TNF-α和IL-1β蛋白表达显著降低 (P＜0.01),SIRT1 mRNA和蛋白表达明显增多 (P＜0.01)。且发现SIRT1与Nox4及ROS 水平均呈显著负相关(r分别为-0.925和-0.899,P均＜0.01)。结论: 间歇运动抑制心梗心脏氧化应激和炎症反应,改善心功能,其机制与SIRT1-Nox4-ROS信号通路激活密切相关。     

归脾汤对大鼠心肌缺血的干预作用*

目的:观察归脾汤(GPT)对心肌缺血大鼠的保护作用。方法:将40只SD大鼠随机分为5组(n=8):空白对照组(Control),模型组(Model)、归脾汤低剂量组(Gpt 7.52 g/kg)、归脾汤高剂量组(Gpt 15.04 g/kg),阳性对照药曲美他嗪组(Trimetazidine,2 mg/kg)。应用饲喂高脂饮食联合注射异丙肾上腺素(ISO)的方法建立大鼠心肌缺血模型,灌胃给药15 d后,各组再次腹腔注射ISO 3 d,随后大鼠进行心电图检测,取材,检测血液中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)和葡萄糖(GLU)的变化,HE及Masson染色观察心肌病理改变,Western blot检测心肌组织中CollagenⅠ和CollagenⅢ的蛋白表达。结果:与正常对照组相比,模型组大鼠心电图出现S-T段下移,血清TC、AST、CK、LDH和GLU水平显著升高(P＜0.05),心肌组织CollagenI和CollagenIII蛋白表达显著升高(P＜0.05),心肌受损严重。TG,HDL-C,LDL-C和ALT变化不显著(P＞0.05)。与模型组相比,归脾汤低、高剂量组和曲美他嗪能抑制心肌缺血大鼠心电图S-T段下移,降低血清中TC、AST、CK、LDH和GLU水平(P＜0.05),降低心肌组织CollagenⅢ的表达(P＜0.05),减轻心肌病理损伤程度,归脾汤高剂量组可显著降低CollagenⅠ的蛋白表达(P＜0.05)。结论:归脾汤具有改善心脏功能,减轻心肌缺血损伤的作用,尤以高剂量效果更为显著。     

蒙药绍沙-7味丸防治大鼠心肌缺血/再灌注损伤的作用

目的:探讨蒙药绍沙-7味丸对心肌缺血/再灌注损伤大鼠的防治作用及机制.方法:60只大鼠随机分成6组:假手术组、模型组、蒙药绍沙-7味丸低、中、高剂量组以及阳性药对照组,每组10只;蒙药绍沙-7味丸低、中、高剂量组分别灌胃0.4 g/kg、0.8 g/kg、1.6 g/kg蒙药绍沙-7味丸,阳性药对照组灌胃0.3 g/k...     

Luteolin limits infarct size and improves cardiac function after myocardium ischemia/reperfusion injury in diabetic rats

Background

The present study was to investigate the effects and mechanism of Luteolin on myocardial infarct size, cardiac function and cardiomyocyte apoptosis in diabetic rats with myocardial ischemia/reperfusion (I/R) injury.

Methodology/Principal Findings

Diabetic rats underwent 30 minutes of ischemia followed by 3 h of reperfusion. Animals were pretreated with or without Luteolin before coronary artery ligation. The severity of myocardial I/R induced LDH release, arrhythmia, infarct size, cardiac function impairment, cardiomyocyte apoptosis were compared. Western blot analysis was performed to elucidate the target proteins of Luteolin. The inflammatory cytokine production were also examined in ischemic myocardium underwent I/R injury. Our results revealed that Luteolin administration significantly reduced LDH release, decreased the incidence of arrhythmia, attenuated myocardial infarct size, enhanced left ventricular ejection fraction and decreased myocardial apoptotic death compared with I/R group. Western blot analysis showed that Luteolin treatment up-regulated anti-apoptotic proteins FGFR2 and LIF expression, increased BAD phosphorylation while decreased the ratio of Bax to Bcl-2. Luteolin treatment also inhibited MPO expression and inflammatory cytokine production including IL-6, IL-1a and TNF-a. Moreover, co-administration of wortmannin and Luteolin abolished the beneficial effects of Luteolin.

Conclusions/Significance

This study indicates that Luteolin preserves cardiac function, reduces infarct size and cardiomyocyte apoptotic rate after I/R injury in diabetic rats. Luteolin exerts its action by up-regulating of anti-apoptotic proteins FGFR2 and LIF expression, activating PI3K/Akt pathway while increasing BAD phosphorylation and decreasing ratio of Bax to Bcl-2.     

消痰化瘀利窍中药组方对改善慢性间歇性低氧大鼠心肌纤维化的作用及其机制*

目的: 探讨转化生长因子-β(TGF-β)信号通路在消痰化瘀利窍中药组方(XC)对改善慢性间歇性低氧(CIH)大鼠心肌纤维化中的作用。方法: 40只SD 大鼠,随机分为常氧组(Normoxia)、常氧+中药干预组(TCMC)、慢性间歇性低氧模型组(CIH)、CIH +中药干预组(TCMC+CIH),每组10只。通过向舱内充入氮气,使舱内氧体积分数在90 s内从21%下降到9%,随后90 s再充氧气使舱内氧体积分数逐渐上升到21%为一循环建立CIH模型。CIH 与 TCMC+CIH 组大鼠置于CIH装置, Normoxia 和TCMC组大鼠置于正常氧舱。此外TCMC+CIH 与 TCMC 组大鼠于每日XC生药(24 g/kg)煎制灌胃,而 CIH 组与 Normoxia 组大鼠给予等体积生理盐水。造模结束后,天狼星红染色观察大鼠心肌间质内胶原沉积情况;Western blot 法检测大鼠心肌间质中 CollagenⅠ、Collagen Ⅲ、Fibronectin、TGF-β、p-Smad2、p-Smad3的蛋白表达水平。采用Q-PCR法检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶抑制因子 2 (TIMP-2) 的 mRNA表达水平。结果: 与正常组比较,CIH大鼠心肌组织出现明显胶原的沉积,CollagenⅠ、Collagen Ⅲ和Fibronectin蛋白表达明显增多(P均＜0.01),TGF-β、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达水平也明显增高(P均＜0.01);CIH大鼠心肌组织TIMP-2 mRNA上调导致MMP-2 mRNA明显减少(P均＜0.01)。给予XC干预后,CIH大鼠心肌组织胶原沉积明显减少,CollagenⅠ、Collagen Ⅲ和Fibronectin蛋白表达明显降低(P＜0.05,P＜ 0.01,P＜0.05);CIH大鼠心肌组织中TGF-β、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达水平明显降低(P＜0.01,P＜0.05,P＜ 0.01)。心肌组织中TIMP-2明显基因减少致MMP-2增多(P均＜0.05)。 结论: 消痰化瘀利窍中药组方可抑制CIH大鼠心肌纤维化的形成,进而改善CIH大鼠心肌功能。其机制与该中药组方下调TGF-β/ Smad2/3信号通路及下调TIMP-2mRNA有关。