自体肺组织修补胸内食管缺损

背景:食管切除术需要行食管替代修补,在常规腹腔脏器不能使用的情况下,临床上缺乏有效的食管替代修补物。目的:探寻自体带血运的肺组织瓣修补胸内食管不规则缺损的新方法,为临床应用提供动物实验依据。设计:观察性动物实验。单位:中国医科大学附属第二医院胸外科。材料:实验于2003-01/2004-06在中国医科大学附属第二医院动物实验室完成。选用健康成年杂种犬14只,体质量12￣18kg,雌雄不限,由中国医科大学附属第二医院动物实验室提供(许可证号:SYXK辽2003-0019)。方法:14只实验犬麻醉后行右肺中叶游离,结扎切断右肺中叶支气管,不损伤肺动静脉,制成肺组织瓣作为修补物。将实验犬的胸内食管行全层侧壁切除,缺损长4cm,环1/2￣2/3管腔。将肺组织瓣覆盖于食管缺损处,与食管断面相吻合。术后3d静脉输液维持营养,术后第7天经口进全流食,2周过渡为半流食。观察实验犬能否正常经口进食及其存活情况。术后2,4,6,8,10周各处死2只实验犬,观察食管修补处愈合情况,并行光镜、透射电镜、食管钡餐及内镜检查。主要观察指标:①术后实验犬的存活和进食情况。②实验犬食管修补处的愈合情况。结果:14只实验犬存活11只,其余3只犬于术后1周内死亡。①术后实验犬的存活和进食情况:实验犬11例存活,最长存活时间超过170周;存活犬均能正常经口进食。②实验犬食管修补处的愈合情况:术后2周,光镜下见替代物管腔表面有胶原及炎性渗出物,两端近吻合口处见少许上皮形成,为一两层鳞状上皮细胞,排列欠规则。术后4￣6周,光镜下见替代物管腔表面为复层鳞状上皮细胞,分3￣5层。术后8￣10周,肉眼观察食管缺损处完全被具有正常外观的食管黏膜所覆盖。光镜示食管替代物的管腔表面可见6￣8层复层鳞状上皮细胞覆盖。肺组织瓣的病理改变主要为肺泡萎陷,肺组织纤维化,可见散在的炎性细胞。透射电镜见食管缺损处肺组织瓣的表面有新生的分层的鳞状上皮细胞。术后8周食管钡餐检查发现钡剂顺利通过食管缺损处。术后10周食管内镜见食管缺损处管腔内完全覆盖着正常外观的食管黏膜。结论:应用自体肺组织瓣修补胸内食管不规则缺损可作为一种简便易行的新方法。     

肺组织瓣内衬壳聚糖管用于修补食管缺损的实验研究

目的:探讨肺组织瓣内衬壳聚糖管修补食管缺损的可行性.方法:取15只日本大耳白兔,分为两组,实验组10只,行自体肺组织瓣修补中段食管部分缺损(内衬壳聚糖管支架);对照组5只,无内衬支架.术后第2、4、8周时.大体及组织学观察缺损修补处肺组织瓣情况,术后10周对存活兔钡餐透视观察食管通畅情况.结果:10只实验动物存活超过2周以上,肺组织瓣与食管缺损处牢固愈合,肺组织瓣表面有鳞状上皮化生.术后10周,食管钡餐检查见实验组食管钡剂通过顺利,无明显狭窄及反流,蠕动尚可,对照组轻度狭窄,无明显梗阻及反流.结论:肺组织瓣修补食管缺损是一种可行的方法,壳聚糖管可以作为内衬支架防止狭窄.     

壳聚糖管状支架联合肌瓣修补颈段食管部分缺损

背景：多年来使用肌肉、皮肤、骨骼肌瓣及胃、肠等管腔组织等作为人工食管修补食管缺损,但效果都不甚理想。目的：探讨壳聚糖管状支架联合肌瓣修补颈段食管部分缺损的可行性。方法：取30只大耳白兔,制作颈段食管部分缺损动物模型,实验组20只破损处植入壳聚糖管状支架,外覆自体颈部肌瓣修补;对照组10只直接覆盖自体颈部肌瓣修补。于植入后第2,4,8周观察支架吸收及破损处组织学变化;植入后第10周行食管钡透,观察有无狭窄发生及食管蠕动。结果与结论：植入后2周,实验组及对照组均见肌肉组织结构,细胞肿大,炎性细胞浸润,表现为急性炎症反应。植入后4周,实验组替代物肌瓣组织结构清晰,炎性反应减弱,无明显纤维组织增生;对照组缺损处肌组织结构可见,肌肉组织表面可见纤维组织细胞生长,伴有少许炎性细胞。植入后8周,实验组肌肉组织瓣表面大部分鳞状上皮化,可见食管黏膜组织,黏膜下伴有慢性炎性反应,较4周时明显减轻;对照组为慢性炎症反应,伴有明显纤维组织增生,表面无鳞状上皮化生及黏膜再生。钡餐透视显示实验组食管通畅无狭窄,蠕动减弱;对照组食管部分狭窄,无蠕动。表明壳聚糖管状支架联合肌瓣可较好修补颈段食管部分缺损。     

犬食管双瓣修补气管缺损实验研究

目的:观察食管壁双瓣修补气管缺损术局部的大体改变、组织病理学改变及愈合情况,为临床上治疗获得性食管气管瘘的术式选择及进一步改进此种术式提供理论依据.方法:犬28只,随机分为3组,A组(12只)和B组(12只)建立犬食管气管瘘模型,行食管双瓣修补术,A组剔除、B组保留长瓣黏膜层及黏膜下层,C组(4只)正常犬作为空白对照,术后1、2、8周处死动物,观察实验动物存活情况、修补局部的组织病理学改变,测定气管狭窄指数及修补瓣羟脯氨酸含量.结果:A、B组动物均存活至预定时间,修补瓣和气管问愈合良好,修补瓣血供良好;A组均未出现气管狭窄,B组8周后狭窄指数较对照组显著升高;A组双瓣间愈合良好,未形成囊肿,B组2只动物8周后双瓣间形成囊肿;A组较B组羟脯氨酸含量增加及胶原染色增强出现更早更显著.结论:食管双瓣修补术效果良好,剔除长瓣的黏膜和黏膜下层更有利于双瓣间愈合及防止气管狭窄和囊肿的发生.     

脱细胞猪主动脉基质重建犬颈段食管的实验

目的:探索用脱细胞猪主动脉基质重建食管缺损的可行性。方法:实验于2005-02/2006-02在解放军第二军医大学长海医院胸心外科研究所完成。选用健康杂种犬7只,清洁级,雌雄不拘,体质量16.5～19.4kg,采用酶消化法制备脱细胞猪主动脉基质,以脱细胞猪主动脉基质置换7只犬颈段2cm的食管缺损。分别于术后1,2,3个月各处死实验犬1只,取出新生食管。大体观察新生食管愈合、肉芽生长及黏膜爬行再生情况,常规法行光镜检查和扫描电镜检查,观察食管再生和改建情况。结果:7只实验犬除实验犬1因化脓性腹膜炎术后3d死亡外,其余6只均存活。①大体观察结果:所有实验犬术后未出现吻合口瘘,存活犬术后45～60d出现不同程度的狭窄症状,3只术后狭窄经扩张治疗后进食改善,体质量恢复到术前水平,1只在行狭窄扩张治疗时新生食管撕裂死亡。②食管再生和改建情况:脱细胞猪主动脉基质能诱导新生血管的形成,达到生物学固定;实验犬术后1个月新生食管完全上皮化,并可见血管平滑肌再生;术后2个月时黏膜上皮分化为8～10层,上皮下可见有序排列的胶原纤维;术后3个月时上皮进一步分化为8～12层,上皮下有序排列的胶原纤维较前增厚,并可见横纹肌岛状再生。脱细胞猪主动脉基质逐步降解吸收。结论:①脱细胞猪主动脉基质原位替代食管后未因排异反应和假体感染而脱落。②诱导了宿主食管组织上皮细胞、平滑肌和横纹肌细胞的再生,有望成为人工食管的理想替代材料。     

脱细胞猪主动脉基质重建犬颈段食管的实验

目的：探索用脱细胞猪主动脉基质重建食管缺损的可行性。 方法：实验于2005-02／2006-02在解放军第二军医大学长海医院胸心外科研究所完成。选用健康杂种犬7只，清洁级，雌雄不拘。体质量163-19Akg，采用酶消化法制备脱细胞猪主动脉基质，以脱细胞猪主动脉基质置换7只犬颈段2cm的食管缺损。分别于术后1。2，3个月各处死实验犬1只，取出新生食管。大体观察新生食管愈合、肉芽生长及黏膜爬行再生情况，常规法行光镜检查和扫描电镜检查。观察食管再生和改建情况。 结果：7只实验犬除实验犬1因化脓性腹膜炎术后3d死亡外，其余6只均存活。①大体观察结果：所有实验犬术后未出现吻合口瘘，存活犬术后45—60d出现不同程度的狭窄症状。3只术后狭窄经扩张治疗后进食改善，体质量恢复到术前水平，1只在行狭窄扩张治疗时新生食管撕裂死亡。②食管再生和改建情况：脱细胞猪主动脉基质能诱导新生血管的形成，达到生物学固定；实验犬术后1个月新生食管完全上皮化，并可见血管平滑肌再生；术后2个月时黏膜上皮分化为8-10层。上皮下可见有序排列的胶原纤维；术后3个月时上皮进一步分化为8-12层，上皮下有序排列的胶原纤维较前增厚，并可见横纹肌岛状再生。脱细胞猪主动脉基质逐步降解吸收。 结论：①脱细胞猪主动脉基质原位替代食管后未因排异反应和假体感染而脱落。②诱导了宿主食管组织上皮细胞、平滑肌和横纹肌细胞的再生，有望成为人工食管的理想替代材料。     

记忆合金材料弹力金属支架在犬肺组织瓣重建气管缺损中的应用

背景:生物相容性好的内衬支架是肺组织瓣成功修补气管缺损的关键,记忆合金支架成为目前研究热点。目的:探讨应用自体肺组织瓣内衬金属弹力支架替代气管缺损的可行性。方法:由中国医科大学附属盛京医院动物实验室提供杂种成年犬14只,雄性8只,雌性6只,体质量12~26kg,气管整段切除3cm或5cm,采用自体肺组织瓣内衬金属弹力支架替代气管缺损方法行胸段气管重建。结果与结论:4只犬死亡,死于并发症及其他原因,10只成活,吻合口愈合良好,食管钡透通畅。结果表明自体肺组织瓣内衬金属弹力支架替代气管缺损是一种可行的气管重建方法。     

自体肺组织瓣内衬记忆合金支架替代长节段气管缺损:动物实验及临床观察

背景:气管代替物的研究处于实验研究阶段,临床上对于那些长节段的气管病变尚缺乏有效的治疗方法.目的:观察应用自体肺组织瓣内衬记忆合金支架替代长节段气管缺损的可行性.设计、时间及地点:观察性动物实验,于2002-03/2003-09在中国医科大学第二临床学院动物实验室完成.病例分析,于2004-06/2005-06在中国医科大学附属盛京医院胸外科进行.材料:①选用12只健康成年杂种犬,犬龄1.0～2.0岁,体质量10～18kg.②患者,男性,40岁,经CT及三维重建检查显示气管中上段近7cm长肿物,纤维支气管镜检查示管腔堵塞近2/3.方法:将犬的右肺上叶支气管结扎,保护肺动、静脉,排出肺内气体,制成肺组织瓣,包裹记忆合金支架,形成复合人工气管,替代长节段胸内气管缺损.同期应用此方法完成1例患者长7cm的气管切除并气管重建手术.主要观察指标:呼吸状态,自体肺组织瓣内衬记忆合金支架替代长节段气管缺损后动物管腔内病理学表现,患者支气管镜下表现.结果:①12只犬存活8只,存活犬无呼吸困难表现,术后8周吻合口愈合良好,新生上皮已越过吻合口7mm.②患者术后呼吸困难迅速缓解,胸CT显示替代物管腔通畅,中间部分略狭窄,金属支架位置固定良好;随访12个月胸CT显示替代物处气管通畅,纤维支气管镜下已看不见金属网架,中间部分狭窄未见加重,14个月死于大咯血.结论:应用自体肺组织瓣内衬记忆合金支架替代长节段气管缺损能保障重建气管的管腔通畅,并支持气管上皮的再生.     

体外构建犬组织工程化食管的初步试验

背景:近年来组织工程技术的发展为人工食管的研究开辟了新的思路,有研究者应用体外培养的食管黏膜上皮细胞接种于复合高分子材料上,构建组织工程食管获得成功.目的:探讨应用体外培养的犬食管黏膜上皮细胞种植于猪的主动脉脱细胞基质支架上,构建组织工程化人工食管的可行性.设计:观察实验.单位:泰山医学院中心实验室.材料:实验于2004-06/2004-12在泰山医学院中心实验室完成,选用3只出生24 h内杂种犬,由泰山医学院动物园提供. 实验过程中对动物的处置过程符合动物伦理学标准.二氧化碳培养箱MCO-15AC(SANYO),RC-26低温高速离心机(杜邦).胰蛋白酶、转铁蛋白、Ⅱ型胶原酶(GIBCO);DMEM、DispaseⅡ分离酶、鼠抗人角蛋白单克隆抗体(Sigma).方法:用酶-去污剂法对猪主动脉进行脱细胞处理,体外分离、培养、扩增新生杂种犬的食管黏膜上皮细胞,接种于去细胞基质支架体外培养,种植后3天、1周通过组织学及电镜观察食管黏膜上皮细胞在脱细胞基质支架上的生长情况.主要观察指标:体外培养的食管黏膜上皮细胞的形态;脱细胞基质与犬食管上皮细胞的生物相容性.结果:酶化学除垢剂法能使猪主动脉细胞脱落,基质三维结构变疏松.体外扩增的犬食管黏膜上皮细胞可以种植在脱细胞基质上并能生长,增殖.结论:脱细胞的基质与犬食管上皮细胞具有良好的生物相容性,能结合在一起并形成人工食管移植体.     

脱细胞真皮基质联合镍钛合金支架修复犬喉腔缺损

背景:镍钛合金支架可制作成甲状软骨的"V"型,有效修复其空间三维结构,最大程度保证喉通气及发声功能的恢复.目的:评估脱细胞真皮基质联合镍钛合金支架修复喉腔缺损的可行性.方法:将6只健康杂种犬分成两组,每组3只.均行喉次全切除术,实验组行脱细胞真皮基质联合镍钛合金支架修复,对照组用镍钛合金支架同期修复.分别于术后1,6个月行X射线检查及喉内窥镜检查,并于术后6个月处死动物,取出标本,分别行大体标本观察及组织学检查.结果与结论:X射线显示镍钛合金支架无移位及变形,大体标本观察可见实验组喉黏膜修复良好,除1例少量瘢痕生成外,余2例基本无瘢痕生成,喉腔通畅,均无喉腔狭窄,犬术后呼吸、吞咽功能恢复良好.对照组3例支架表面肉芽及瘢痕组织增生,其中1例于术后第63天死于呼吸困难.组织学观察显示实验组上皮基本为复层鳞状上皮,间质内可见血管组织及少量淋巴细胞.对照组肉芽组织及纤维组织增生明显,基本无复层鳞状上皮覆盖,间质内大量淋巴细胞及浆细胞.结果表明,脱细胞真皮基质联合镍钛合金支架可有效修复犬喉腔缺损,既可提供良好的支架作用,又可减少喉腔肉芽组织及瘢痕形成.