小檗碱调节AKT/NF-κB信号通路对高糖诱导的足细胞损伤、凋亡和迁移的影响

目的 探究小檗碱(BBR)对高糖环境下足细胞的保护作用及其机制.方法 取指数生长期的足细胞进行实验,将细胞分为五组:正常组,高糖组,BBR 30、60、90 μmol/L组.Annexin FITC/PI双染法检测足细胞凋亡率,高内涵成像系统计算细胞数量,Transwell和细胞划痕实验检测其迁移能力,Western blot检测蛋白激酶B/核转录因子κB(AKT/NF-κB)信号通路相关蛋白、细胞促凋亡蛋白(Bim)和足细胞标志性蛋白WT-1、Podocin、desmin的表达水平.结果 与正常组相比,Annexin FITC/PI双染法结果显示,高糖组足细胞凋亡率上升(P＜0.01);高内涵细胞成像系统显示足细胞数量减少(P＜0.01);Transwell结果显示迁移至下室的足细胞数增加(P＜0.01);细胞划痕实验结果显示划痕愈合率上升(P＜0.01);Western blot结果显示,高糖组足细胞中p-AKT、p-p65、p-IκBα、Bim、desmin 蛋白表达水平升高(P＜0.01),WT-1、Podocin蛋白表达水平降低(P＜0.01).与高糖组相比,BBR给药后足细胞凋亡率下降(P＜0.05);不同浓度BBR给药组的足细胞数量增多(P＜0.01);迁移至下室的足细胞数有所减少(P＜0.05);划痕愈合率下降(P＜0.01);另外,BBR 给药降低了 p-AKT、p-p65、p-IκBα、Bim、desmin 蛋白表达水平(P＜0.05),同时升高了 WT-1、Podocin蛋白表达水平(P＜0.01).结论 BBR可能通过AKT/NF-κB信号通路改善高糖诱导的足细胞损伤、抑制足细胞凋亡、减弱足细胞迁移能力.     

小檗碱调节ERK/NF-κB信号通路改善高糖诱导的系膜细胞异常增殖

目的 探讨小檗碱(BBR)对高糖(HG)诱导的系膜细胞(MCs)异常增殖的调节作用及可能的机制.方法 体外培养MCs,实验分为对照、高糖模型和BBR给药组(30、60、90μmol/L);CCK-8法检测细胞增殖活力;高内涵系统成像法检测细胞的增殖能力;激光共聚焦法检测细胞外基质沉积蛋白(ECM)Ⅳ型胶原蛋白(Col-Ⅳ)、纤维连接蛋白(FN)表达情况;Western blot法检测细胞上细胞外信号调节激酶(ERK)、p-ERK、磷酸化促分裂原激活激酶1(p-MSK1)、IκB、p-IκB、p65、p-p65的蛋白表达情况.结果 CCK-8法结果显示,BBR(30、60、90μmol/L)均可抑制MCs的增殖活力;高内涵系统成像结果显示,BBR(30、60、90μmol/L)可抑制HG诱导的MCs的异常增殖;激光共聚焦实验结果显示,BBR(90μmol/L)能降低ECM上的Col-Ⅳ、FN的表达水平;Western blot实验结果显示,BBR(30、60、90μmol/L)能降低MCs上p-ERK、p-MSK1、p-IκB、p-p65蛋白的表达水平.结论 BBR可能调节MCs上的ERK/NF-κB的信号通路,改善HG诱导的MCs异常增殖.     

Wnt/β-catenin信号通路在高糖诱导足细胞转分化中的作用机制研究

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路在高糖诱导的足细胞转分化中的作用机制。方法收集原代培养的大鼠足细胞,设置正常糖组(D-葡萄糖5 mmol/L)、高糖组(D-葡萄糖15 mmol/L、30 mmol/L)、高渗对照组(甘露醇25 mmol/L+D-葡萄糖5 mmol/L)。观察细胞形态并采用间接免疫荧光法检测nephrin和Wt-1的表达;免疫印迹半定量检测nephrin、α-SMA、活化β-catenin及Wnt-1的表达。结果 nephrin以颗粒状及线状表达于足细胞胞膜、胞质及胞核周围,Wt-1表达于胞核。48 h后,正常糖组nephrin相对表达量为(0.967±0.065),15 mmol/L高糖组为(0.771±0.068),30 mmol/L高糖组为(0.112±0.042),高渗对照组为(1.096±0.104),差异有统计学意义(F=106.848,P=0.000);正常糖组α-SMA相对表达量为(0.360±0.023),15 mmol/L高糖组为(0.430±0.008),30 mmol/L高糖组为(0.524±0.040),高渗对照组为(0.320±0.030),差异有统计学意义(F=18.149,P=0.001)。高糖作用12 h后,足细胞Wnt-1及活化β-catenin表达开始升高,24 h时达到高峰。DKK1有助于增加高糖诱导的nephrin的表达,降低α-SMA的表达。结论高糖可诱导足细胞发生表型转化,而Wnt/β-catenin信号通路可能参与了高糖诱导的足细胞表型转化。     

小檗碱激活SIRT1/AMPK信号通路改善高糖诱导的系膜细胞异常增殖和自噬功能

目的 研究小檗碱(BBR)对高糖(HG)环境下的系膜细胞增殖和自噬水平的影响及具体的分子机制。方法 将指数生长期的系膜细胞分成以下几组：正常组、高糖组、高糖+小檗碱治疗组(30、60、90μmol/L)、高糖+小檗碱(90μmol/L)+腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂组(CC组);高内涵细胞成像仪计算系膜细胞的数量；免疫荧光法检测Ⅳ型胶原蛋白(Col-IV)、纤连蛋白(FN)、微管相关蛋白1轻链3 B(LC3B)在系膜细胞中表达情况；Western blot法检测细胞上LC3B、Beclin-1、p62、Col-IV、FN和沉默信息调节因子1(SIRT1)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路蛋白表达水平。结果 与正常组比较，高内涵细胞成像仪结果显示高糖组系膜细胞异常增殖；免疫荧光法和Western blot法结果显示高糖组系膜细胞外基质沉积蛋白Col-IV、FN的表达水平升高；Western blot法结果显示高糖组系膜细胞中SIRT1、p-AMPK、LC3B、Beclin-1蛋白表达降低，p-p65、p62蛋白表达升高。与高糖组比较，BBR对高糖诱导的系膜细胞异常增殖能力具...     

GSK-3β在高糖环境下足细胞转分化效应中的作用

目的 探讨糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)在高糖环境下足细胞转分化效应中的作用.方法 用含不同浓度葡萄糖的1640培养基处理足细胞36 h ,采用Western blot与间接免疫荧光的方法检测足细胞表面标记蛋白nephrin、podocin和间充质细胞表型标志物α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Fibronectin的表达 ;用 Transwell小室检测不同处理组足细胞清蛋白流入量的变化.用GSK-3β激酶检测试剂盒检测高糖环境下足细胞GSK-3β表达量及活性的变化 ;应用GSK-3βsiRNA干扰高糖组GSK-3β后检测足细胞表型及功能变化.结果 足细胞标记蛋白nephrin、podocin的蛋白表达水平随葡萄糖浓度的升高呈剂量依赖性下调(P＜0 .05) ,间充质标记蛋白α-SMA的表达水平随葡萄糖浓度的升高呈剂量依赖性上调(P＜0 .05);清蛋白流入量随葡萄糖浓度的升高呈剂量依赖性上调(P＜0 .05).高糖组足细胞GSK-3β表达量增多(P＜0 .05).GSK-3βsiRNA处理组与对照组相比足细胞表面标记蛋白nephrin、podocin表达量增多 ,间充质标记蛋白α-SM A表达减少.结论 足细胞在高糖环境下发生表型改变与功能受损 ;GSK-3β参与高糖环境下足细胞的转分化过程.     

小檗碱通过抑制肝星状细胞自噬改善小鼠肝纤维化

目的 研究小檗碱(BBR)对肝星状细胞(HSC)自噬与活化的调控及其抗肝纤维化作用。方法分别采用不同质量浓度BBR(0、2、5、10、20、50μmol/L)干预血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB,20μg/L)处理的LX-2细胞24 h,使用CCK-8法检测细胞活力;采用不同质量浓度BBR(0、2、5、10μmol/L)干预PDGF-BB(20μg/L)处理的LX-2细胞24 h或48 h,使用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)方法检测细胞增殖率,细胞划痕实验检测细胞迁移率。实时荧光定量聚合酶链式反应、免疫印迹法检测小檗碱(5μmol/L)对LX-2细胞α-SMA,COL1A1 mRNA及蛋白表达的影响;检测Atg5、 Becn1、 Atg7、 LC3、p62的表达。动物实验共18只小鼠,随机分为3组,对照组[橄榄油(Oil)+磷酸盐缓冲液(PBS)]、模型组[四氯化碳(CCl₄)+PBS]和药物干预组(CCl₄+BBR),每组6只小鼠,造模5周,2次/周。第3周开始给与BBR干预,2次/周,连续给药3周。造模5周后处死小鼠,检...     

青葙苷A抑制缺氧乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭能力的研究

目的 探索中药青葙子中的齐墩果烷型三萜化合物青葙苷A(celosin A,CA)对缺氧人乳腺癌MDAMB-231细胞的抗肿瘤作用及其相关机制。方法 CoCl2造模MDA-MB-231细胞缺氧状态,建立细胞体外缺氧的CA给药培养体系。采用细胞计数试剂盒（MTT）检测细胞活力,免疫荧光法观察细胞形态学和核凋亡变化。流式细胞术（FCM）法检测细胞凋亡比例;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell法检测CA对肿瘤细胞迁移和侵袭的抑制能力;Western blot实验检测缺氧相关蛋白表达水平和EMT标志蛋白表达水平。结果 在缺氧状态下,高剂量的CA(20、40μmol/L)能抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,诱导肿瘤细胞核凋亡的形态学改变,并且能有效促进早晚期细胞的凋亡率（PI-Annexin V-FITC促凋亡率：20μmol/L:+6.09%;40μmol/L:+18.50%）,有效抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、单核细胞趋化蛋白（MCP）、血管内皮生长因子（VEGF）表达;同时低剂量的CA(5、10μmol/L)能抑制乳腺癌MDA-MB...     

牛蒡子苷对晚期氧化蛋白产物诱导小鼠足细胞转分化的影响

目的探讨牛蒡子苷对晚期氧化蛋白产物(AOPP)诱导小鼠足细胞转分化的影响。方法用200μg/ml AOPP刺激小鼠足细胞24 h,同时加入牛蒡子苷(浓度分别为50、100、200、400μmol/L)进行干预,采用Western blotting检测内质网应激标志性蛋白Grp78、CHOP及平滑肌激动蛋白(α-SMA)表达水平。结果牛蒡子苷干预后可抑制小鼠足细胞Grp78、CHOP、α-SMA蛋白表达水平,且在一定范围内呈剂量依赖性。结论 AOPP可通过引起小鼠足细胞内质网应激(ERS)从而导致上皮-间充质转分化(EMT),而牛蒡子苷则可通过减轻ERS从而逆转EMT,为治疗肾脏纤维化提供新的研究方向。     

缬沙坦对小鼠足细胞GPSD核心蛋白在高糖环境下表达的影响

目的通过观察缬沙坦体外干预高糖环境培养的小鼠足细胞nephrin、podocin和CD2AP的表达,探讨RAS抑制剂治疗糖尿病肾病蛋白尿的机制。方法用不同浓度的缬沙坦干预高糖(25mmol/L的葡萄糖)培养24h后的小鼠足细胞,以RT-PCR方法检测干预前后足细胞nephrin、podocin和CD2AP mRNA的表达水平;以间接免疫荧光法检测2×10-5mol/L缬沙坦干预后nephrin、podocin蛋白的表达。结果①与对照组相比,高糖诱导的足细胞nephrin、podocin和CD2AP mRNA表达显著减弱(P<0.01);②缬沙坦能显著上调高糖诱导的足细胞nephrin、podocin和CD2AP mRNA的表达(P<0.05或P<0.01);③2×10-5mol/L缬沙坦能显著上调高糖对足细胞nephrin和podocin(P<0.05)蛋白表达的抑制。结论缬沙坦显著上调髙糖诱导的足细胞nephrin、podocin和CD2AP的表达,可能是其独立于降压作用以外的降低糖尿病肾病蛋白尿的机制之一。     

小檗碱抑制类风湿关节炎患者的成纤维样滑膜细胞的自噬并促进其凋亡：基于下调ROS/mTOR信号通路

目的 探究小檗碱（BBR）对类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLSs）凋亡/自噬失衡的调控作用及机制。方法 CCK-8法检测BBR对RA-FLSs的增殖抑制作用,实验设空白对照组、TNF-α(25 ng/mL)组、TNF-α+BBR(10、20、30、40、50、60、70、80μmol/L)组,Annexin V/PI双染流式法和JC-1免疫荧光染色检测BBR对RA-FLSs凋亡的影响,Western blot检测BBR对RAFLSs自噬和凋亡相关蛋白表达水平的影响。进一步增加自噬诱导剂RAPA和自噬抑制剂氯喹（CQ）作为对照,激光共聚焦检测mCherry-EGFP-LC3B观察自噬流变化;并设置活性氧（ROS）模拟物H2O2和ROS抑制剂NAC观察BBR对ROS、mTOR、p-mTOR水平的影响。结果 CCK-8结果显示BBR可呈时间和浓度依赖性抑制RA-FLSs增殖活力,流式和JC-1染色结果显示BBR(30μmol/L)可显著增加RA-FLSs凋亡率（P<0.01）,降低线粒体膜电位（P<0.05）。Western blot结果显示BBR处理后Bcl-2/Ba...     

PFT-α对高糖诱导的肾小球足细胞泛素化通路和细胞凋亡的影响

目的:观察p53抑制剂(Pifithrin-alpha,PFT-α)对高糖刺激后肾小球足细胞泛素化通路和细胞凋亡的影响.方法:体外培养小鼠肾小球足细胞,分为对照组、高糖组(30mmo1/L葡萄糖)、甘露醇组(30mmol/L葡萄糖+25mmoI/L甘露醇)、PFT-α 组(30mmol/L葡萄糖+10μmol/LPFT...     

补肾活血汤抑制糖尿病肾病引起的足细胞损伤及EMT发生机制研究

[目的]观察补肾活血汤对高糖诱导的小鼠足细胞损伤及上皮间充质转化(EMT)的影响,并探讨其对足细胞损伤及发生EMT的作用机制。[方法]体外培养永生化的小鼠足细胞系MPC5,分为对照组、高糖组及补肾活血汤组,经相应处理48 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测各组足细胞增殖情况,采用流式细胞术检测各组足细胞凋亡情况,采用Transwell和划痕实验检测各组足细胞体外迁移能力,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测各组足细胞标志P-cadherin、ZO-1及EMT发生过程标志desmin、FSP-1的相对表达量。在高糖诱导的足细胞中分别加入Rac1抑制剂NSC23766或Rac1激活剂PMA,采用Western blot检测不同处理组足细胞中GTP-Rac1、p-PAK1、pp38、p-β-catenin、p65蛋白表达水平。[结果]与对照组相比,高糖处理可抑制足细胞增殖,诱导足细胞凋亡,促进细胞的迁移及EMT的发生,差异具有统计学意义(P0.05)。补肾活血汤可缓解由高糖诱导的足细胞的增殖抑制作用,降低高糖诱导的细胞损伤、凋亡、迁移,逆转EMT的发生,差异具有统计学意义(P0.05)。补肾活血汤通过调控GTP-Rac1、p-PAK1、p-p38、p-β-catenin、p65蛋白表达水平,影响Rac1及其下游信号通路的活化。[结论]高糖可导致小鼠足细胞损伤及EMT的发生,补肾活血汤可抑制高糖诱导的足细胞损伤及EMT的发生,其作用机制是补肾活血汤通过调控Rac1及下游信号通路,起到保护足细胞损伤的作用。     

PF-5274857阻断香烟烟雾诱导的上皮-间质转化的作用

目的 探讨Smoothened（Smo）抑制剂PF-5274857在香烟烟雾(CS)诱导所致的上皮-间质转化（EMT）转变中的作用, 为口腔鳞状细胞癌的临床治疗和预防提供依据。方法 以支气管上皮细胞株Beas-2b建立体外CS诱导EMT模型,实验分为预防实验和治疗实验两部分进行。预防实验:用3 μmol/L PF-5274857预刺激Beas-2b细胞2 h后用CS溶液培养8 d;治疗实验:CS培养8 d后用3 μmol/L PF-52748573处理Beas-2b细胞4 d。通过Western blot、免疫荧光检测细胞蛋白中EMT标志物E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（vimentin）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的含量及位置变化,小室迁移实验测定治疗实验中细胞迁移能力改变。结果 PF-5274857预刺激2 h,间质标志物vimentin和α-SMA蛋白表达降低,上皮标志物E-cadherin表达升高。而已被CS诱导产生EMT改变的Beas-2b细胞经PF-5274857治疗4 d后部分恢复E-cadherin表达,并且vimentin和α-SMA蛋白表达降低,其升高的迁移能力也降低。 结论 PF-5274857可以预防和治疗由CS引起的Beas-2b细胞EMT。     

槲皮素对转化生长因子-β_1诱导的肾小球足细胞转分化抑制作用的实验研究

目的研究槲皮素(Qu)不同给药时间对转化生长因子-β_1(TGF-β_1)诱导的肾小球足细胞向间充质细胞转分化(EMT)的影响。方法取经过鉴定的体外原代培养的足细胞,随机分为对照组、模型组、Qu先干预组、Qu同时干预组和Qu后干预组,共5组。对照组常规培养;模型组采用5 ng/m L TGF-β_1诱导48 h;Qu先干预组采用50μmol/L Qu干预24 h后,再用5 ng/m L TGF-β_1继续诱导24 h;Qu同时干预组采用50μmol/LQu和5 ng/m L TGF-β_1同时干预48 h;Qu后干预组先用5 ng/m L TGF-β_1干预24 h,再用50μmol/L Qu干预24 h。将上述5组细胞分别采用Western blot、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测足细胞裂孔膜蛋白(Nephrin)、Wilms瘤抑癌因子-1(WT-1)和足细胞EMT标志物波形蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白及mRNA表达量,并进行组间比较。结果 1)蛋白表达量:与对照组比较,模型组足细胞Nephrin,WT-1的蛋白表达量明显降低,Vimentin,α-SMA的蛋白表达量明显升高(P0.01);与模型组比较,3种不同干预方法中,Nephrin的蛋白表达量以Qu后干预组最高,WT-1的蛋白表达量以Qu同时干预组最高,Vimentin的蛋白表达量以Qu先干预组最低,α-SMA的蛋白表达量以Qu先干预组最低(P0.01)。2)mRNA表达量:与对照组比较,模型组足细胞Nephrin mRNA和WT-1 mRNA的表达量明显降低,Vimentin mRNA和α-SMA mRNA的表达量明显升高(P0.01);与模型组比较,3种不同干预方法中,Nephrin mRNA的表达量以Qu同时干预组最高(P0.05),WT-1 mRNA的表达量以Qu先干预组最高(P0.01),Vimentin mRNA和α-SMA mRNA表达量均以Qu先干预组最低(P0.01)。结论 Qu能够抑制T GF-β1诱导的足细胞EMT,且Qu先干预组能够更好地抑制TGF-β_1诱导的足细胞EMT,其作用机制可能与抑制TGF-β信号转导通路中的相关信号分子、维持足细胞生理结构的完整性从而保护肾小球滤过屏障有关。     

地塞米松对马兜铃酸诱导的人肾小管上皮-间充质转化的作用及可能机制

目的探讨地塞米松(Dex)对马兜铃酸诱导的肾小管上皮-间充质转化(EMT)的影响及可能机制。方法体外培养的人肾小管上皮细胞(HKC)分为阴性对照组、马兜铃酸(AA,10μg/ml)作用组、Dex(100μmol/L)作用组、AA(10μg/ml)+无水乙醇(100μmol/L)组、AA(10μg/ml)+Dex(100、10、1、0.1、0.01μmol/L)共同作用组,培养细胞48h,应用激光共聚焦显微镜(CFMS)观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素(E-cadherin)的表达,采用Real-timePCR和WesternBlot方法检测α-SMA、E-cadherin、p-Smad3、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad7mRNA和蛋白的表达。结果 AA作用48h后,CFMS观察发现HKC细胞E-cadherin表达减弱而α-SMA表达增强;地塞米松干预后,E-cadherin表达逐渐增强而α-SMA表达减弱,且呈剂量依赖性。Real-timePCR、WesternBlot结果均显示,与阴性对照组相比,AA组α-SMA、p-Smad3、TGF-β1mRNA和蛋白表达水平均显著增强,E-cadherin、Smad7mRNA和蛋白的表达均减弱(P0.05)。同AA作用组比较,AA+Dex共同作用组随Dex剂量增加,α-SMA、p-Smad3、TGF-β1mRNA和蛋白的表达逐渐减弱,E-cadherin、Smad7mRNA和蛋白的表达逐渐增强(P0.05),而无水乙醇却无此作用。结论 Dex可抑制AA诱导HKC细胞发生EMT,并同时下调EMT过程中TGF-β1和p-Smad3的表达、上调Smad7分子的表达,提示TGF-β1/Smad下调可能是Dex抑制EMT发生的机制之一。     

槲皮素诱导肝星状细胞凋亡:基于调控miR-146影响PI3K/Akt信号通路

目的 探讨槲皮素(Que)通过调控肝星状细胞内miR-146水平影响PI3K/Akt信号通路诱导细胞凋亡的作用机制。方法 以大鼠肝星状细胞系(HSC-T6)为研究对象,设计实验分组：空白对照组、TGF-β组、TGF-β+Que-L(40μmol/L)、TGF-β+Que-M(60μmol/L)和TGF-β+Que-H(80μmol/L)为药物治疗部分;各组阴性对照组、miR-146模拟剂(mimic)和抑制剂(inhibitor)为细胞转染部分。CCK-8法检测不同浓度的Que对细胞抑制情况,选出低、中、高3个剂量浓度用于后续细胞实验;细胞凋亡流式细胞术检测Que对HSCs细胞凋亡的影响;RT-qPCR法检测HSC-T6细胞药物治疗以及细胞转染后miR-146、α-SMA、CollagenⅠ、TRAF6、PI3K和Akt mRNA表达情况;Western blot法检测以上各组中α-SMA、CollagenⅠ、TRAF6、PI3K、Akt和p-Akt蛋白表达情况;免疫荧光实验检测HSC-T6细胞药物治疗中α-SMA、CollagenⅠ蛋白表达强弱。结果 CCK-8实验结果显示,相同时间...     

胃饥饿素通过抑制内质网应激减少高糖诱导的视网膜血管内皮细胞凋亡

目的 研究胃饥饿素(ghrelin)对内质网应激及高浓度葡萄糖导致的人视网膜血管内皮细胞(HRMECs)凋亡的影响。方法 将HRMECs细胞分为对照组、高糖组、高糖+ghrelin组和高糖+ghrelin+衣霉素(内质网应激诱导剂)组。对照组细胞不加干预，高糖组采用30 mmol/L葡萄糖构建细胞损伤模型，高糖+ghrelin组采用30 mmol/L葡萄糖和10 nmol/L ghrelin处理细胞，高糖+ghrelin+衣霉素组采用30 mmol/L葡萄糖、10 nmol/L ghrelin和10μmol/L衣霉素联合处理细胞，所有细胞均培养48 h。采用AnnexinⅤ-FITC/7-AAD试剂盒检测4组细胞凋亡率，蛋白质印迹法检测对照组、高糖组和高糖+ghrelin组细胞凋亡蛋白Bax、Bcl-2及内质网应激蛋白GPR78、IRE1α的表达。结果 与对照组比较，高糖组HRMECs细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与高糖组相比，高糖+ghrelin组细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。与对照组比较，高糖组细胞Bax、GPR78及p-IRE1α的蛋白表达明显增加(均P&...     

小檗碱通过激活 Nrf2-HO-1/GPX4 通路抑制小鼠海马神经元HT22细胞的铁死亡

目的 探讨小檗碱对于Erastin诱导小鼠海马神经元HT22细胞的铁死亡的保护作用及其可能机制。方法 以HT22小鼠海马神经元细胞为研究对象,分为对照组、Erastin模型组、Erastin+30 μmol/L BBR组、Erastin+60 μmol/L BBR组。采用CCK-8法、特异性 Fe2+ 荧光探针、荧光染料（DAPI）检测和荧光探针（H2DCFH-DA）检测各实验组细胞的增殖情况、活性铁水平、细胞凋亡和活性氧（ROS）变化。 RT-qPCR和Western blot分别检测各实验组细胞的Nrf2、HO-1、GPX4 mRNA和蛋白表达情况。以60 μmol BBR的最适浓度来进一步探究其作用机制,分为对照组、Erastin模型组、Erastin+60 μmol/L BBR组、Erastin+60 μmol/LBBR+2 μmol Nrf2抑制剂 ML385组。通过使用荧光探针和Western blot检测Nrf2抑制剂（ML385）作用后的活性铁的水平、活性氧含量以及Nrf2、HO-1、GPX4蛋白的表达来验证小檗碱调节的Nrf2-HO-1/GPX4通路对Erastin处理的HT22细胞的保护作用。结果 0.5 μmol/L Erastin作用于HT22细胞8 h,细胞存活率与对照组相比显著被抑制（P<0.05）;同时细胞凋亡、ROS以及活性铁含量增加（P<0.05）。与Erastin组比较,Erastin+30 μmol/L BBR组和Erastin+60 μmol/L BBR组的细胞存活率明显升高（P<0.05）,同时显著降低细胞凋亡、ROS以及活性铁含量（P<0.05）。小檗碱增加 HT22细胞中Nrf2、HO-1、GPX4基因及蛋白的 表达量（P<0.05）。加入Nrf2抑制剂ML385后,Nrf2-HO-1/GPX4通路被抑制,并且ROS以及活性铁含量升高（P<0.05）。结论 Erastin诱导HT22细胞发生铁死亡,小檗碱抑制Erastin诱导的铁死亡,可能机制是激活了Nrf2-HO-1/GPX4通路。     

针对CTGF的siRNA对高糖诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的 探讨针对结缔组织生长因子（CTGF）基因的siRNA对高糖条件培养下的人肾小管上皮细胞株HK-2细胞向间充质细胞转分化（EMT）的影响。方法 将体外培养的HK-2细胞分为6组：(1)正常对照组,培养基含D-葡萄糖1g/L;(2)等渗对照组,培养基含D-葡萄糖1g/L,甘露醇3.5g/L;(3)高糖组组,培养基含D-葡萄糖4.5g/L;(4) 高糖+空白对照组：细胞转染空白质粒后于高糖培养基中培养;(5) 高糖+阴性对照组：细胞转染含无关序列的重组质粒后于高糖培养基中培养;(6) 高糖+干扰组：细胞转染针对CTGF的 siRNA表达质粒后于高糖培养基中培养。应用RT-PCR检测CTGF mRNA水平,Western blot法检测CTGF、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）蛋白水平。结果 高糖刺激可上调HK-2细胞的CTGF mRNA及蛋白水平,并呈时间依赖性降低HK-2细胞的E-cadherin蛋白表达水平,升高α-SMA蛋白表达水平。而通过特异性siRNA抑制CTGF mRNA表达后,细胞的CTGF蛋白表达随时间延长进行性降低,同时伴有细胞E-cadherin蛋白表达升高,α-SMA蛋白表达水平降低。结论 证实了CTGF是高糖诱导HK-2细胞EMT的重要介质。针对CTGF的siRNA能明显改善高糖诱导的肾小管上皮细胞EMT,为进一步寻找DN防治的靶点提供了新的实验依据。