白藜芦醇抑制TLR4/NF-κB通路对毛细支气管炎小鼠的保护作用

目的 研究白藜芦醇通过抑制T样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)通路对呼吸道合胞病毒(RSV)毛细支气管炎小鼠的保护作用。方法 选取30只小鼠随机分为对照组、RSV组、给药组,建立RSV毛细支气管炎小鼠模型,检测小鼠肺组织中TLR4、NF-κB的变化;利用肺组织HE染色、ELISA法检测白藜芦醇给药前后气道炎症病变、IL-6、TNF-α因子水平,Western Blot法及实时定量PCR法检测TLR4、 NF-κB蛋白及基因表达等相关变化。结果 与对照组相比,RSV组小鼠组肺组织中TLR4、NF-κB水平升高,肺组织切片HE染色显示气道炎症细胞浸润加剧,ELISA检测炎性因子IL-6、TNF-α升高;而给药组处理后,肺组织TLR4、NF-κB的表达下调,病理改变减轻,炎性因子IL-6、TNF-α下降。结论 白藜芦醇可通过抑制TLR4/NF-κB通路抑制炎性因子的释放,从而减轻毛细支气管炎小鼠的气道炎症反应。     

白杨素对哮喘模型小鼠肺组织核因子-κB表达的影响

目的:观察白杨素对急性哮喘模型小鼠肺组织核因子(nuclear factor,NF)-κB表达的影响?方法:24只雌性BALB/c小鼠随机分成4组:正常对照组?哮喘组?白杨素组?布地奈德组,每组6只?使用卵白蛋白腹腔注射致敏,气道激发制备哮喘模型,白杨素组小鼠给予白杨素50 mg/kg灌胃,布地奈德组小鼠给予布地奈德雾化液雾化吸入?肺功能测定评价小鼠气道阻力,HE染色评价小鼠气道炎症,酶联免疫吸附(ELISA)法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白介素(IL)-4?IL-13和血清总IgE的水平,Western blot检测肺组织NF-κB蛋白表达?结果:哮喘组小鼠气道炎症和气道高反应性明显加重,白杨素能够显著抑制哮喘模型小鼠的气道炎症和气道高反应性,白杨素能够抑制哮喘小鼠 BALF中IL-4?IL-13和血清总IgE水平?哮喘组小鼠肺组织高表达的NF-κB水平,经白杨素治疗后显著降低?结论:白杨素能够抑制哮喘小鼠的气道炎症和气道高反应性,其机制可能与抑制肺组织NF-κB的表达有关?     

鱼腥草提取物对慢性阻塞性肺疾病急性加重期大鼠肺功能的影响及对TLR4/NF-κB信号通路的调控作用

目的:探讨鱼腥草提取物对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)急性加重期大鼠肺功能的影响及对Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)/核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路的调控作用。方法:50只大鼠分为对照组、COPD组、鱼腥草低剂量(1.25 g·kg^-1)组、鱼腥草中剂量(2.50 g·kg^-1)组、鱼腥草高剂量(5.00 g·kg^-1)组,各10只,复制COPD急性加重期模型(对照组除外)后,连续4周给予相应的药物。比较各组大鼠肺功能指标;检测肺泡灌洗液(alveolar lavage fluid,BALF)中炎症因子水平;观察肺组织病理变化;比较肺组织中TLR4 mRNA、NF-κB mRNA及蛋白表达。结果:与COPD组比较,鱼腥草低、中、高剂量组用力呼气峰流速(peak expiratory flow rate,PEF)、第0.3秒用力呼气容积(forced expiratory volume at 0.3 second,FEV0.3)/FVC、最大呼气中期流速(maximum middle expiratory flow rate,MMEF)均升高;BALF中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平均明显降低(P<0.05),且具有剂量依赖性;病理结果显示,COPD组肺组织存在典型病理改变,且大量炎性细胞浸润,鱼腥草各剂量组肺组织上述病理改变较COPD组均有所减轻,且鱼腥草高剂量组改善最明显,但仍有少量炎症细胞浸润;同时鱼腥草(低、中、高剂量)组肺组织中TLR4 mRNA、NF-κB mRNA和蛋白相对表达量均明显降低(P<0.05)。结论:鱼腥草提取物可有效改善COPD急性加重期大鼠肺功能,减轻肺病理损伤,推测与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。     

黄龙止咳口服液对咳嗽变异性哮喘模型小鼠的作用机制研究

[目的]探讨黄龙止咳口服液治疗咳嗽变异性哮喘的可能作用机制。[方法]将50只BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组、黄龙止咳口服液低、高剂量组,每组10只。采用卵蛋白、氢氧化铝腹腔注射致敏并吸入卵蛋白激发法建立咳嗽变异性哮喘小鼠模型,黄龙止咳口服液组分别以0.75 g/kg和1.5 g/kg进行灌胃,每日1次,持续14 d后处死小鼠。采集血清,以酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清总免疫球蛋白E(IgE)及白细胞介素(IL)-4、IL-5、IL-13的含量;分离小鼠肺组织,苏木精-伊红(HE)染色后观察肺组织形态;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测肺组织中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子(My D88)及核转录因子-κB(NF-κB)的蛋白表达量。[结果]与正常组比较,模型组血清中各炎症细胞及IgE、IL-4、IL-5、IL-13含量均明显增高,肺组织中TLR4、MyD88和NF-κB蛋白表达增高,差异有统计学意义(P0.01)。与模型组比较,地塞米松组、黄龙止咳口服液低剂量组和高剂量组病理切片表现均有所改善,血清中各炎症细胞及炎症因子含量、肺组织中TLR4、MyD88和NF-κB蛋白表达均降低(P0.01)。[结论]黄龙止咳口服液能改善咳嗽变异性哮喘模型小鼠气道炎症及气道高反应性,其机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。     

呼吸道合胞病毒合并肺炎克雷伯菌感染所致肺炎与TLR4-NF-κB信号通路关系的初步研究

目的 探讨呼吸道合胞病毒( RSV)合并肺炎克雷伯菌( Kp)感染SD大鼠后,初步研究其所致肺炎与TLR4-NF-κB信号转导通路的关系. 方法 60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、RSV组、Kp组及RSV+Kp组,以RSV、Kp滴鼻感染SD大鼠,分别于感染后第0、1、3、5、7天不同时间点,测量其体重、肺指数( LI )的变化;HE染色观察肺的病理学改变;RT-PCR法检测肺组织中TLR4、NF-κB的mRNA表达;Western blot检测NF-κB蛋白的表达;ELISA法检测肿瘤坏死因子-α( TNF-α)和白细胞介素-1β( IL-1β)含量的变化.结果 与正常对照组相比,RSV组和Kp组均存在弥漫性肺泡间隔增厚和炎症细胞浸润,且随感染时间的延长,肺泡结构破坏逐渐加重, LI、TLR4 mRNA、NF-κB mRNA、NF-κB 蛋白、TNF-α和IL-1β的表达均升高,并与RSV和Kp感染之间存在时间依赖性关系;RSV+Kp组 LI、TLR4 mRNA、NF-κB mRNA、NF-κB蛋白、TNF-α和IL-1β的表达量进一步升高,肺组织炎症明显加剧. 结论 RSV和Kp混合感染具有协同作用,加重肺部炎症;RSV合并Kp感染可能通过 TLR4-NF-κB途径诱导肺部炎症反应,释放细胞因子TNF-α和IL-1β等.     

HMGB1基因敲除通过抑制TLR4/NF-κB通路减轻脓毒症小鼠急性肺损伤

目的 研究高迁移率族蛋白B1(HMGB1)基因敲除减轻脓毒症小鼠急性肺损伤及抑制Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)通路的作用。方法 野生型(WT)小鼠分为WT-Sham组和WT-模型组,HMGB1基因敲除(KO)小鼠分为KO-Sham组和KO-模型组。WT-模型组和KO-模型组采用盲肠结扎穿孔术制备脓毒症ALI模型,WT-Sham组和KO-Sham组进行假手术操作。造模后24 h,检测动脉血氧分压(PaO₂),计算氧合指数(OI),检测肺组织病理改变,计算肺损伤评分,检测血清及肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、活性氧簇(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的浓度,肺组织中HMGB1、TLR4、核NF-κB的表达。结果 WT-模型组的PaO₂、OI、血清及肺组织SOD的浓度低于WT-Sham组,肺损伤评分、血清及肺组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、ROS、MDA的浓度、肺组织中HMGB1、TLR4、核NF-κB的表达水平高于WT-Sham组(P<0...     

丹酚酸B对急性脑缺血小鼠TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨丹酚酸B对急性脑缺血小鼠的抗炎作用及Toll样受体4/核转录因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路的影响。方法:建立小鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型。造模后阳性组(尼莫地平30μg/kg)、丹酚酸B低剂量组(丹酚酸B 11.25 mg/kg)、丹酚酸B高剂量组(丹酚酸B 22.5 mg/kg)分别尾静脉注射给药1次,模型组和假手术组给予同等体积的生理盐水。造模后6 h,分别采用酶联免疫吸附法测定脑组织中IL-1β及TNF-α的含量,采用实时定量PCR法检测缺血侧脑皮层TLR4、NF-κBp65 mRNA的表达,采用Western blot法检测缺血侧脑皮层TLR4、NF-κBp65蛋白的表达。结果:与模型组比较,丹酚酸B高、低剂量组均能显著降低小鼠脑组织中IL-1β、TNF-α含量(P0.01,P0.05);丹酚酸B高、低剂量组小鼠缺血侧脑皮层TLR4 mRNA、NF-κBp65 mRNA表达显著降低(P0.01,P0.05);丹酚酸B高剂量组小鼠缺血侧脑皮层TLR4、NF-κB蛋白表达显著降低(P0.01)。结论:丹酚酸B可通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,降低TLR4和NF-κB相关基因蛋白的表达,减少炎症因子IL-lβ和TNF-α的含量,进而发挥抗脑缺血的作用。     

脂多糖诱导的急性炎症小鼠模型血清促炎因子与抑炎因子表达研究

目的:探讨脂多糖(LPS)诱导的急性炎症小鼠模型血清促炎因子、炎性因子表达情况。方法:将120只健康雄性ICR小鼠随机分为空白组、A组、B组和C组，各30只。分别给予A组、B组和C组小鼠经腹腔注射2、4 mg/kg和6 mg/kg LPS 0.9%氯化钠溶液，给予空白组小鼠等体积0.9%氯化钠溶液。建模成功后断头处死小鼠采集血液样本后检测血清中促炎因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-18]、抑炎因子(IL-4、IL-10、IL-13),取肾脏和肺脏采用TUNEL染色法检测细胞凋亡情况，采用Western blot技术检测肾脏和肺脏组织中核因子-κB(NF-κB)、磷酸化NF-κB(pNF-κB)、Toll样受体4(TLR4)相对表达水平。结果:A组、B组和C组小鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18、IL-4、IL-10、IL-13水平以及肺和肾脏组织细胞凋亡比例均显著高于空白组(均P<0.05)。随着LPS注射浓度增加，小鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18、IL-4、IL-10、IL-13水平以及肺和...     

P-选择素糖蛋白配体在盐酸诱导小鼠急性肺损伤中的作用机制研究

目的利用盐酸诱导小鼠急性肺损伤模型,研究P-选择素糖蛋白配体(PSGL-1)在其中的作用及可能机制。方法野生型小鼠(WT)和PSGL-1敲除小鼠(PSGL-1-/-)随机分为生理盐水组和盐酸组,经导管左肺滴注生理盐水或0.1 mol/L盐酸(1μl/g体重),2 h后测定小鼠肺功能指标增强呼气间歇(Penh)、PaO_2和PaCO_2、肺湿干重比值(W/D)以及支气管肺泡灌洗液(BALF)总蛋白浓度和白细胞计数。镜下观察靶肺组织炎症细胞浸润情况,并检测肺组织炎症因子IL-6和IL-1β及核因子-κB(NF-κB)p65、IκBa和p-IκBa蛋白表达水平。结果盐酸刺激后,PSGL-1敲除小鼠Penh(4.77±1.22 vs.5.80±0.84)和PaCO_2[(63.7±3.9)mm Hg vs.(74.4±7.4)mm Hg]较WT组显著降低(P0.05),而PaO_2较WT组显著增高[(81.0±7.1)mm Hg vs.(62.0±8.9)mm Hg,P0.05],肺W/D(4.86±0.15 vs.5.22±0.20)和BALF蛋白浓度[(3.71±0.64)μg/μl vs.(4.74±0.98)μg/μl]及白细胞总数[(13.00±2.18)×10~7/L vs.(49.42±3.35)×10~7/L]较WT小鼠明显降低(P0.05)。肺组织炎症因子IL-6、IL-1β及p65和p-IκBa表达水平显著低于WT组,而IκBa表达水平明显高于WT组(P0.05)。与PSGL-1敲除小鼠比较,盐酸诱导的WT小鼠肺组织出现了更为明显的中性粒细胞和巨噬细胞浸润。生理盐水诱导的对照组小鼠各项检测指标未出现显著差异,但均明显低于其相应盐酸组(IκBa除外,P0.05)。结论 PSGL-1可能通过激活NF-κB信号通路促进肺组织白细胞的浸润及炎症反应,在急性肺损伤疾病的发生发展中发挥重要的作用。     

五味子乙素对脂多糖诱导的脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织病理损伤、炎症反应和核因子-κB表达的影响

目的 观察五味子乙素对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织病理损伤、炎症反应和核因子 -κB （nuclear factor kappa-B,NF-κB）表达的影响。方法 采用气管滴注40 mg/kg LPS制备大鼠急性肺损伤大鼠模型,手术前1 h腹腔注射80 mg/kg 五味子乙素进行干预治疗,测定大鼠肺湿/干质量比,BCA试剂盒测定大鼠支气管肺泡灌洗液（bronchoalceolar lavage fluid,BALF）总蛋白,牛鲍氏计数板计算 BALF中白细胞数,苏木精-伊红染色观察大鼠肺组织损伤情况,ELISA法检测大鼠肺组织中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）含量,相关试剂盒检测大鼠肺组织中丙二醛（malondialdehyde,MDA）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）含量,蛋白质印迹法检测大鼠肺组织中NF-κB p65、磷酸核因子- κB 抑制蛋白（phosphorylation inhibitor of nuclear factor kappa-B,pIκBα）和Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）的表达水平。结果 与模型组相比,五味子乙素组大鼠肺湿/干质量比、BALF中总蛋白含量及白细胞数均显著减少（P<0.05）,病理损伤显著减轻,TNF-α、IL-1β、IL-6含量均显著减少（P<0.05）,MDA含量显著下降,SOD活性显著升高（P<0.05）,NF-κB p65、pIκBα和TLR4表达水平均显著下调（P<0.05）。结论 五味子乙素能够减轻LPS诱导的脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织的病理损伤,抑制炎症反应和氧化应激反应,抑制NF-κB通路激活。     

板蓝根多糖通过TLR4-NF-κB通路对结核大鼠肺部炎症影响的机制研究

目的:探究板蓝根多糖通过Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)-核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)通路对结核大鼠肺部炎症的影响机制。方法:45只SD大鼠随机分为3组(n=15):对照组、模型组、板蓝根多糖组。通过尾静脉注射H37RV结核分枝杆菌建模,在感染的第2天板蓝根多糖组大鼠接受板蓝根多糖灌胃干预。检测和比较各组小鼠血清炎性因子以及肺组织TLR4-NF-κB通路和炎性因子表达水平。结果:模型组肺组织中感染大量的结核分枝杆菌,并且成团聚集在细胞外,板蓝根多糖组的CFU水平显著低于模型组(P<0.05),结核分歧杆菌数量少于模型组(P<0.05),主要分布于结核结节和巨细胞中。模型组血清炎性因子水平显著高于对照组,板蓝根多糖组血清中白细胞介素质1β(IL-1β)、白细胞介素质6(IL-6)、干扰素-γ(IFN-γ)水平显著低于模型组而显著高于对照组(P<0.05)。模型组肺组织中TLR4-NF-κB通路及炎性因子mRNA水平显著高于对照组,板蓝根多糖组肺组织中TLR4、NF-κB、IL-1β、IL-6、IFN-γ水平显著低于模型组而显著高于对照组(P<0.05)。模型组肺组织中TLR4-NF-κB通路表达水平显著上调,板蓝根多糖组肺组织中TLR4、NF-κB蛋白水平显著低于模型组而显著高于对照组(P<0.05)。结论:板蓝根多糖可以通过调节TLR4-NF-κB通路减轻结核分歧杆菌感染引起的肺部炎症反应。     

连翘酯苷A通过TLR4/NF-κB抑制PC12细胞低氧/再复氧诱导的炎症反应

目的 研究连翘酯苷A(FA)对缺血再灌注诱导的PC12细胞炎症反应的抑制作用.方法 建立PC12细胞氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)模型,给予不同浓度的FA(1.25、2.5和5μmol/L)处理,测定炎症因子:白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-6的水平,Western blot测定TLR4/NF-κB通路相关蛋白的表达情况,并采用慢病毒激活颗粒进行机制验证.结果 FA可显著抑制炎症因子释放水平,抑制TLR4和NF-κB p65蛋白表达水平,同时可抑制细胞核内NF-κB p65表达.分别采用Toll样受体4(TLR4)和核转录因子kappa B(NF-kB)慢病毒激活颗粒验证发现FA通过TLR4调控NF-κB p65核转移,从而抑制炎症因子释放,减轻炎症反应.结论 FA可通过调控TLR4抑制NF-κB p65核转移抑制炎症因子表达,从而减轻缺血再灌注诱导的炎症反应,发挥脑保护作用.     

熊果酸对脓毒症模型大鼠肺损伤的保护作用及对HMGB1/TLR4/NF-κB通路的影响

目的:观察熊果酸对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用及对HMGB1/TLR4/NF-κB通路的影响。方法:Wistar大鼠75只随机分为假手术组,模型对照组,熊果酸低剂量组(20 mg·kg~(-1))、中剂量组(40 mg·kg~(-1))、高剂量组(80 mg·kg~(-1)),每组15只。采用盲肠结扎穿孔法制备大鼠脓毒症模型,术后立即及8 h后尾静脉注射给药。造模后24 h处死大鼠,苏木精-伊红染色法评估肺组织病理学变化;ELISA法测定血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平;硫代巴比妥酸比色法检测肺组织匀浆丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;Western blot法检测肺组织中高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)、Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠肺组织中MDA、HMGB1、TLR4、NF-κB表达显著增加,SOD活性下降,血清中TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,熊果酸各剂量组大鼠肺组织病理明显改善,MDA、HMGB1、TLR4、NF-κB表达显著降低,SOD活性升高,血清中TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著下降(P<0.01或P<0.01)。结论:熊果酸可能通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路减轻炎症反应,从而发挥对脓毒症肺损伤的保护作用。     

熊果酸对脓毒症模型大鼠肺损伤的保护作用及对HMGB1/TLR4/NF-κB通路的影响

目的:观察熊果酸对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用及对HMGB1/TLR4/NF-κB通路的影响。方法:Wistar大鼠75只随机分为假手术组,模型对照组,熊果酸低剂量组(20 mg·kg~(-1))、中剂量组(40 mg·kg~(-1))、高剂量组(80 mg·kg~(-1)),每组15只。采用盲肠结扎穿孔法制备大鼠脓毒症模型,术后立即及8 h后尾静脉注射给药。造模后24 h处死大鼠,苏木精-伊红染色法评估肺组织病理学变化;ELISA法测定血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平;硫代巴比妥酸比色法检测肺组织匀浆丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;Western blot法检测肺组织中高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)、Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠肺组织中MDA、HMGB1、TLR4、NF-κB表达显著增加,SOD活性下降,血清中TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著升高(P0.01);与模型组比较,熊果酸各剂量组大鼠肺组织病理明显改善,MDA、HMGB1、TLR4、NF-κB表达显著降低,SOD活性升高,血清中TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著下降(P0.01或P0.01)。结论:熊果酸可能通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路减轻炎症反应,从而发挥对脓毒症肺损伤的保护作用。     

TLR4通过NF-κB/TGF-β信号通路调节结核分枝杆菌感染巨噬细胞中的免疫反应

目的 验证Toll样受体4(TLR4)在核因子-κB(NF-κB)/转化生长因子-β(TGF-β)信号通路调节结核分枝杆菌感染巨噬细胞中的免疫反应和细胞活力,并探究其作用机制。方法体外培养小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7）,将所有细胞分为4组：TLR4过表达质粒（OE-TLR4组）、空白质粒（Empty vector组）、TLR4小干扰RNA(si-TLR4组)和对照si-NC(si-NC组)。将TLR4过表达质粒、空白质粒、TLR4小干扰RNA及其相应对照si-NC转染至RAW264.7细胞系中,随后使用结核分枝杆菌H37Rv菌株感染细胞。采用克隆形成实验检测细菌菌落数,CCK-8实验检测细胞活力。采用ELISA方法检测上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。Western blot检测NF-κB和MAPK信号通路相关蛋白（IκB、p-IκB、SMAD2、p-SMAD2）的表达水平。结果 TLR4在结核分枝杆菌H37Rv菌株感染的RAW264.7细胞中表达水平显著高于未感染的细胞。与Empty vector组相比,OE-TLR4组细胞细...     

瑞马唑仑对颅脑损伤大鼠脑组织损伤及TLR4/MyD88/NF-κB通路的影响

目的:探讨瑞马唑仑(Rem)对颅脑损伤(BI)大鼠脑组织损伤及Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)通路的影响。方法:构建BI大鼠模型;将所有大鼠分为对照组(Control组)、颅脑损伤组(BI组)、瑞马唑仑低、中、高剂量组(Rem-L、Rem-M、Rem-H组)、瑞马唑仑高剂量+TLR4激活剂LPS组(Rem-H+LPS组);检测大鼠脑组织含水量;ELISA检测大鼠脑组织中的炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)水平;HE染色观察大鼠脑组织的形态学变化;TUNEL法检测脑组织神经元凋亡情况;Western blot法检测大鼠脑组织TLR4、MyD88、NF-κB、p-NF-κB p65、Bax、Bcl-2蛋白表达情况。结果:与Control组相比,BI组大鼠脑组织神经元变性坏死,数量减少,体积缩小,损伤严重,神经功能评分、脑组织含水量、神经元凋亡率和TNF-α、IL-1β、IL-6水平及Bax、TLR4、MyD88、NF-κB、p-NF-κB p65表达升高,Bcl-2表达降低...     

木犀草素通过TLR4/NF-κB途径对哮喘模型幼鼠炎症的影响

目的：探究木犀草素（luteolin,LT）通过TLR4/NF-κB途径对OVA诱导幼鼠哮喘模型的炎症的影响。方法：将40只SD雌性小鼠随机分为正常组、模型组、木犀草素组。小鼠通过第1 d、7 d腹腔注射卵清蛋白的乳化液,第15 d、16 d、17 d、18 d、19 d雾化吸入含3%OVA的生理盐水,建立哮喘模型。第15 d,LT组每天腹腔注射1 mg/kg、2mg/kgLT;模型组、正常组注射等体积生理盐水。第30 d采用小鼠无创肺功能仪检测小鼠气道高反应,ELISA测血清IL-2、IL-4浓度,HE染色观察肺组织炎症变化,RT-PCR检测肺组织TLR4、NF-κB的RNA表达,免疫印迹检测肺组织TLR4/NF-κB pP65蛋白表达。结果：木犀草素组的气道高反应和血清IL-4浓度低于模型组,血清IL-2浓度高于模型组。与模型组比,肺组织中,木犀草素组肺部炎症改善,木犀草素组TLR4、NF-κB的mRNA和蛋白表达低于模型组。结论：木犀草素通过调控TLR4/NF-κB途径抑制幼鼠哮喘模型的炎症反应。     

穗花杉双黄酮对脂多糖致大鼠急性肺损伤的保护作用及机制研究

目的探讨穗花杉双黄酮对脂多糖(LPS)致大鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用及机制。方法将60只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、阳性对照组和穗花杉双黄酮组(简称穗花杉组),每组15只。模型组、阳性对照组和穗花杉组大鼠均通过气道滴注3.0mg/kg LPS100μL,对照组大鼠气道滴注等体积的生理盐水,6h后阳性对照组大鼠腹腔注射2.5mg/kg地塞米松100μL,穗花杉组大鼠腹腔注射2.5mg/kg穗花杉双黄酮100μL,对照组和模型组注射等体积生理盐水。48h后称重测定大鼠肺组织湿/干重比;苏木精-伊红染色(HE)观察各组大鼠肺组织病理;ELISA法检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平;RT-PCR检测肺组织miR-140-5p表达;蛋白印迹法(WB)检测肺组织Toll样受体4(TLR4)、核因子活化B细胞κ轻链增强子(NF-κB)蛋白表达水平。利用LPS刺激肺上皮细胞A549,加入穗花杉双黄酮RT-PCR检测miR-140-5P的表达,加入miR-140-5P抑制剂、mimic-NC干预,RTPCR检测TLR4、NF-κB表达。结果穗花杉组大鼠肺组织湿/干重比明显低于模型组[(4.77±0.19)比(5.84±0.27),P0.05];HE染色结果显示,穗花杉组大鼠肺组织结构较ALI模型组大鼠炎症细胞明显减少,肺泡间隔明显变薄;ELISA结果显示,穗花杉组大鼠血清TNF-α、IL-6和IL-1β水平均明显低于模型组[TNF-α:(395.16±41.23)pg/mg比(846.23±29.26)pg/mg;IL-6:(315.26±30.25)pg/mg比(876.54±45.23)pg/mg;IL-1β:(650.16±29.46)pg/mg比(1056.26±54.16)pg/mg,P均0.05];WB结果显示,穗花杉组大鼠肺组织TLR4、NF-κB表达量明显低于模型组;RT-PCR结果显示,穗花杉组大鼠肺组织和人肺上皮细胞miR-140-5P表达分别高于模型组和刺激组[(0.85±0.13)比(0.34±0.08);(0.81±0.15)比(0.27±0.14),P均0.05];miR-140-5P mimic能明显抑制TLR4、NF-κB表达[TLR4:(0.95±0.12)比(2.31±0.08);NF-κB:(0.97±0.13)比(2.45±0.06),P均0.05]。结论穗花杉双黄酮对LPS诱导的大鼠ALI具有保护作用,其机制可能与促进miR-140-5p mimic表达,抑制ALI炎症过程关键蛋白TLR4、NF-κB表达以及其下游炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β水平有关。     

血管紧张素-(1-7)对巨噬细胞源性泡沫细胞炎症因子表达的影响

目的探讨血管紧张素(Ang)-(1-7)是否可以调节巨噬细胞源性泡沫细胞炎症因子的表达及TLR4/NF-κB通路在其中的作用。方法佛波酯(130 ng/ml)诱导人单核细胞(THP-1)分化为巨噬细胞,分别以不同浓度(0.01、0.1、1μmol/L)的Ang-(1-7)和相同浓度氧化低密度脂蛋白(ox-LDL,50 mg/L)联合刺激,并以A-779[Ang-(1-7)特异性受体阻断剂,10-7 mol/L]预处理以及用TLR4单克隆抗体(5 mg/L)阻断TLR4/NF-κB信号通路。ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)的含量。实时PCR检测TLR4的mRNA水平,免疫印迹法检测细胞总蛋白TLR4蛋白水平、IκB蛋白的磷酸化水平以及胞浆蛋白、核蛋白NF-κB蛋白水平。结果与对照组比较,Ang-(1-7)干预下调泡沫细胞分泌的TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白表达,呈现剂量依赖性(P0.05),其作用可被A-779部分抑制;当TLR4/NF-κB信号通路被TLR4单克隆抗体阻断后,Ang-(1-7)作用可被部分抑制。Ang-(1-7)干预下调泡沫细胞TLR4mRNA和蛋白表达水平,下调IκB蛋白的磷酸化水平,抑制NF-kB蛋白由细胞质向细胞核内转位(P0.05),其作用可被A-779部分抑制。结论 Ang-(1-7)可以抑制THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达,该过程与TLR4/NF-κB信号转导通路抑制有关。     

栀子苷对通过TLR4-NF-κB信号通路抑制缺氧/复氧心肌细胞前炎症因子释放的影响

【目的】探讨栀子苷对缺氧/复氧心肌细胞前炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)、IL-6释放以及对Toll样受体4(TLR4)和活化核因子-κB(NF-κB)蛋白表达的影响。【方法】原代培养SD大鼠乳鼠心肌细胞。实验分为正常对照组、缺氧/复氧模型组和栀子苷预处理组,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞培养液前炎症因子TNF-α、IL-1、IL-6的含量,Western blot法检测心肌细胞TLR4、NF-κB蛋白表达。【结果】与缺氧/复氧模型组比较,栀子苷预处理组心肌细胞TNF-α、IL-1、IL-6释放显著减少,TLR4、NF-κB蛋白表达显著下降,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。【结论】栀子苷可抑制缺氧/复氧心肌细胞前炎症因子TNF-α、IL-1、IL-6释放,其作用机制可能与栀子苷下调TLR4-NF-κB通路有关。