前列腺干细胞抗原和前列腺特异性抗原在前列腺组织中的表达和意义

目的 比较前列腺干细胞抗原（PSCA）和前列腺特异性抗原（PSA）在不同前列腺病变组织中的表达差异;比较在不同的Gleason评分的前列腺癌（PCA）中PSCA的表达差异，及对前列腺癌的诊断意义。方法 采用SP二步免疫组织化学染色方法，对51例PCA、16例前列腺上皮内瘤（PIN）及18例前列腺良性增生（BPH）组织进行染色、观察及统计分析。结果 PSCA及PSA在前列腺癌、前列腺上皮内瘤、前列腺良性增生组织中的表达差异均具有显著性（P〈0．05）；两者在前列腺癌组织中的表达差异无显著性意义（P〉0．05）。结论 PSCA有可能成为前列腺癌分子病理学诊断的新型瘤标，在前列腺癌的免疫治疗方面的应用可能成为新的研究热点。     

前列腺干细胞抗原在前列腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨前列腺干细胞抗原（PSCA）在前列腺癌（Pca）中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学方法，对PSCA蛋白在41例Pca、5例正常前列腺组织（NP）和9例前列腺增生组织（BPH）中的表达水平进行检测。结果PSCA在NP、BPH及Pca组织表达阳性率分别为60．0％、66．7％和80．5％，强阳性率分别0、11．1％和61．0％。PSCA在NP和BPH组织之间表达水平差异无显著性；Pca与NP和BPH组织的表达水平差异有显著性（P〈0．05）；PSCA的表达水平与Pca的临床分期和病理分级无相关性，（P〉0．05）。结论PSCA在Pca有稳定的高表达，它可能成为前列腺肿瘤治疗的分子靶点。     

前列腺干细胞抗原研究进展

前列腺癌是男性泌尿生殖系统中常见的恶性肿瘤之一．在欧美国家发病率较高．位居男性恶性肿瘤的第二位。在美国．前列癌的发病率占所有恶性肿瘤的第一位．其死亡率仅次于肺癌；在我国．前列腺癌的发病率也在逐年增加．根据顾方六统计报告．前列腺癌无论占泌尿外科住院病人或外科肿瘤的百分比均明显上升。继前列腺特异性抗原(PSA)后，     

人前列腺干细胞抗原基因PSCA的扩增及真核表达

目的：从人前列腺癌细胞系中扩增获得目的基因前列腺干细胞抗原（PSCA）,构建真核表达载体并进行真核表达。方法：从人前列腺癌细胞系LNCaP中扩增目的基因PSCA,构建真核表达质粒plRES-neo—PSCA-His,脂质体法转染小鼠黑色素瘤B16细胞,用RT—PCR及免疫荧光和流式细胞仪分别检测B16细胞中人PSCA基因的mRNA和蛋白表达。结果：得到372bp人PSCA目的基因片段,序列测定证实与GenBank上登录的序列一致。结论：成功构建pIRES—neo—PSCA—His质粒并验证其真核表达,为PSCA在前列腺癌免疫治疗研究中的应用奠定了基础。     

不同组织中前列腺干细胞抗原的表达分析

目的 研究不同组织中前列腺干细胞抗原(PSCA)的表达水平。方法 运用免疫组化S-P法及自身制备的抗PSCA单抗检测组织中PSCA的表达水平。结果 抗PSCA单抗与前列腺癌组织及少许膀胱癌组织呈阳性反应，与正常前列腺组织、前列腺增生症及前列腺外组织均呈阴性反应。结论 前列腺干细胞抗原具有较高的前列腺组织特异性，是前列腺癌免疫治疗最有意义的靶蛋白。     

前列腺癌患者癌组织前列腺干细胞抗原、血清前列腺特异抗原检测

目的:探讨前列腺癌(PCa)组织中前列腺干细胞抗原(PSCA)的表达及与血清前列腺特异抗原(PSA)的关系.方法:采用免疫组织化学方法检测36例PCa组织、20例前列腺高分级上皮样内瘤样病变(HG-PIN)及20例良性前列腺增生(BPH)组织中PSCA的表达,术前ELISA法检测血清PSA水平.结果:BPH组织中无PSCA表达,HG-PIN、PCa组织中PSCA阳性率分别为70.0%(14/20)、80.6%(29/36),高于BPH组织(P＜0.05).高分化、中分化、低分化PCa组织中PSCA的阳性率分别为6/11、14/16、9/9,依次增高(P＜0.05).PSCA阳性率与PCa患者血清PSA水平无相关性(r=0.215,P＞0.05).结论:PSCA有可能是一种新的PCa肿瘤标志物.     

抗人前列腺干细胞抗原单克隆抗体的前列腺癌免疫病理研究

目的观察前列腺干细胞抗原(PSCA)在前列腺癌中的表达情况,探讨其与前列腺癌病理组织学分级及临床分期的关系。方法采用EnVisionTM两步免疫组织化学染色法,以抗人PSCA单克隆抗体检测正常前列腺、前列腺增生、前列腺癌及膀胱、肾脏等组织中PSCA的表达。结果PSCA在5例正常前列腺组织、10例前列腺增生组织、38例前列腺癌组织中有不同程度的阳性染色;膀胱、肾脏等正常组织的染色为阴性。95%(38/40例)的前列腺癌PSCA染色呈阳性、强阳性染色,50%～100%的肿瘤细胞着色,与前列腺增生及正常前列腺组织相比,其染色强度及范围的差异有显著性(P<0.01),但与前列腺癌的病理分级和临床分期不相关。结论前列腺干细胞抗原具有前列腺组织特异性,可用于前列腺癌免疫病理、放射免疫显像诊断及免疫治疗的研究。     

前列腺癌组织中前列腺干细胞抗原表达的临床病理相关因素

目的 探讨前列腺干细胞抗原(PSCA)在前列腺癌(PCa)组织中的表达及与肿瘤临床病理因素之间的相关性.方法 采用免疫组化SP法,用PSCA单克隆抗体对前列腺不同病变组织及非前列腺肿瘤组织石蜡包埋切片进行染色,其中PCa组织50例,良性前列腺增生(BPH)组织50例,其它肿瘤组织标本9例.引入阳性灰度值概念判定PSCA染色强度.采用logistic回归分析模型研究PSCA高表达是否和PCa临床病理参数之间存在相关性.结果 100例前列腺病变组织中,仅1例PCa和2例BPH组织PSCA呈阴性表达,PSCA在BPH和PCa组织中平均染色阳性灰度值分别为:18.73灰阶(Gs)和42.16Gs,在PCa组织中呈现明显高表达(P＜0.05),非前列腺肿瘤组织染色均呈阴性.多变量logistic回归分析表明PSCA高表达和PCa分期、分级和有无骨转移之间存在显著相关性(OR值分别为1.8,2.3,3.1;P值分别为0.029,0.013,0.007).结论 PSCA具有良好的前列腺组织器官特异性,并有助于判断PCa临床分期、分级和有无骨转移.     

前列腺干细胞抗原在卵巢浆液性腺癌中的表达及临床意义

目的:探讨前列腺干细胞抗原(PSCA)在卵巢浆液性囊腺癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用SP免疫组织化学方法检测75例卵巢浆液性囊腺癌、20例卵巢交界性浆液性囊腺瘤、20例浆液性囊腺瘤组织标本中PSCA蛋白的表达水平。结果:PSCA蛋白在浆液性囊腺癌、交界性浆液性囊腺瘤、浆液性囊腺瘤标本中阳性表达率分别为62.7%、35.0%、15.0%,三者比较有极显著性差异(χ2=29.804,P=0.000)。PSCA蛋白在浆液性囊腺癌中的表达与临床分期及组织分化程度相关(P<0.05),与患者年龄和淋巴结转移无关(P>0.05)。结论:PSCA蛋白与卵巢浆液性囊腺癌的发生、发展有关,可作为对其进行早期诊断及预后评估的重要参考指标。     

负载前列腺干细胞抗原的树突状细胞疫苗制备

目的研究在体外负载前列腺干细胞抗原(PSCA)制备树突状细胞(DC)疫苗的方法。方法应用PSCA融合蛋白冲击致敏由外周血单个核细胞分离培养得到的人DC,采用流式细胞仪检测其活化前、后的表型变化,混合淋巴细胞反应检测其在体外刺激淋巴细胞增殖的能力。结果DC-PSCA组白细胞介素(IL)-12(p40)和IL-1β浓度分别为(183.0±5.0)和(1183.0±30.9)ng/L,显著高于DC-TRX组[(162.0±2.5)和(971.0±10.4)ng/L,P值均<0.01]和DC组[(30.0±2.6)和(204.0±6.1)ng/L,P值均<0.01]。不同抗原冲击活化后,DC-PSCA组人类白细胞抗原(HLA)-DR、CD80、CD86、CD40的荧光强度(除去同型对照抗体荧光强度后的数值)分别为101.7±9.8、334.2±18.3、371.2±22.5和102.3±8.2,显著高于DC-TRX组(88.4±6.3、304.3±19.4、315.5±24.7和94.6±7.9,P值均<0.05)和DC组(68.8±3.0、283.2±23.1、265.4±18.8和77.2±4.6,P值均<0.05)。经肿瘤坏死因子-α活化后的DC-PSCA组放射性活度值(cpm值)显著高于其他两组(P值均<0.05)。结论PSCA融合蛋白体外冲击DC是一种制备DC疫苗的有效方法。     

人酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶C端片段在大肠杆菌中的表达及其抗体的制备

目的：为了表达人ＡＣＴＣ端片段并制血表达载体其抗体。方法：将编码人ＡＣＡＴ羧基端包含跨膜（４６３－５５０氨基酸残基）的ｃＤＮＡ片断克隆至不同的大肠杆菌表达载体中,构建了毓表达质粒,并在多种大肠杆菌中进行了表达研究。结果：在详细探索到达条件的基础上,经温敏诱导,成功地在大肠杆菌ＡＲ６８中表达了Ｎ端融合ＰｒｏｔｅｉｎＡ ＢＣ ｄｏｍａｉｎ的人ＡＣＡＴ羧基末端包含第二个跨膜区的片段,表达量约２０ｍｇ／Ｌ     

Parkin蛋白C端的表达及抗体的制备

目的 :构建Parkin基因 3’端的表达质粒 ,在大肠杆菌中表达并制备多克隆抗体。方法 :构建Parkin基因3’端 (937～ 195 9bp)的谷氨酰胺硫转移酶 (glutathion sulfate transferase ,GST)融合表达质粒 ,在JM 10 5中获得表达。用Triton 10 0 (1% )和Tween 2 0 (1% )处理 ,并用亲和层析纯化表达产物 ,将其免疫新西兰兔 ,用免疫印迹分析收获的兔抗血清。结果 :构建的ParkinC表达质粒在JM 10 5中获得表达 ,以分子量为 4 2kD的包涵体存在 ;目的蛋白纯度为 95 % ;得到效价为 1∶6 4的抗血清 ;免疫印迹分析表明 ,制备的抗血清可与鼠脑细胞抽提物中 5 1 6kD的蛋白产生特异的免疫反应。结论 :Parkin蛋白C端在 JM 10 5 中获得高效表达并得到特异性多克隆抗体     

Parkin蛋白C端的表达及抗体的制备

目的：构建Parkin基因3‘端的表达质粒，在大肠杆菌中表达并制备多克隆抗体。方法：构建Parkin基因3‘端（937－1959bp）的谷氨酰胺硫转移酶（glutathion-sulfate-transferase,GST)融合表达质粒，在JM105中获得表达。用Triton-100(1%）和Tween-20(1%）处理，并用亲和层析纯化表达产物。将其免疫新西兰兔，用免疫印迹分析收获的兔抗血清。结果：构建的ParkinC表达质粒在JM105中获得表达，以分子量为42kD的包涵体存在；目的蛋白纯度为95％；得到效价为1：64的抗血清；免疫印迹分析表明，制备的抗血清可与鼠脑细胞抽提物中51.6kD的蛋白产生特异的免疫反应。结论；Parkin蛋白C端在JM105中获得高铲表达并得到特异性多克隆抗体。     

p11融合蛋白表达、纯化及抗血清的制备

目的 :表达GST p11和 6xHis p11融合蛋白并制备GST p11特异性抗体。方法 :将人p11基因克隆入两种原核表达载体pGEX 4T 2和pQE30 ,分别在大肠杆菌BL2 1和M15中表达 ,用GlutathioneSepharose 4B和Ni NTAagar ose亲和柱分别纯化目的蛋白。利用纯化的GST p11蛋白制备多克隆抗体。结果 :得到高表达量的融合蛋白 ,经亲和层析柱纯化获得较高纯度的GST p11和 6xHis p11蛋白。以GST p11蛋白免疫新西兰兔得到p11多克隆抗体 ,Westernblotting证实该抗体能够识别 6xHis p11蛋白 ,具有较高特异性。结论 :利用原核表达人p11融合蛋白制备的p11多克隆抗体具有较好的特异性 ,为研究p11蛋白在蛋白转运和定位过程中的作用提供重要的技术和材料保障     

人PSCA真核表达载体的构建及表达

目的构建含有信号肽及FLAG标签的人前列腺干细胞抗原（PSCA）真核表达载体,并在人胚肾293T细胞中进行表达。方法通过PCR方法获得SIG-FLAG基因片段及人PSCA基因片段,插入到真核表达载体pIRES-neo中。构建的重组质粒pIRES-neo-sig-FLAG-PSCA转染293T细胞,利用流式细胞仪、免疫荧光及RT-PCR方法检测其表达情况。结果PCR扩增出的SIG-FLAG及PSCA基因测序正确,酶切鉴定证明重组质粒pIRES-neo-sig-FLAG-PSCA构建成功;检测结果显示重组质粒pIRES-neo-sig-FLAG-PSCA在293T细胞中得到表达。结论成功构建了重组质粒pIRES-neo-sig-FLAG-PSCA,且在293T细胞中能有效表达,为后续转人PSCA基因细胞系的构建工作奠定了基础。     

p11融合蛋白表达、纯化及抗血清的制备

目的：表达GST－p11和6xHis-p11融合蛋白并制备GST－p11特异性抗体。方法：将人p11基因克隆人两种原核表达载体pGEX-4T-2和pQE30,分别在大肠杆菌BL21和M15中表达，用Glutathione Sepharose 4B和Ni-NTA agarose亲和柱分别纯化目的蛋白。利用纯化的GST－p11蛋白制备多克隆抗体。结果：得到高表达量的融合蛋白，经亲和层析柱纯化获得较高纯度的GST－p11和6xHis-p11蛋白。以GST－p11蛋白免疫新西兰兔得到p11多克隆抗体，Westernblotting证实该杭体能够识别6xHis-p11蛋白，具有较高特异性。结论：利用原核表达人p11融合蛋白制备的p11多克隆抗体具有较好的特异性，为研究p11蛋白在蛋白转运和定位过程中的作用提供重要的技术和材料保障。     

人趋化因子SLC在大肠杆菌中的表达与初步纯化

目的确立人趋化因子SLC在大肠杆菌中的表达条件和初步纯化条件。方法将pET32a（＋）/SLC分别转化大肠杆菌AD494（DE3）、BL21trxB（DE3）、BL21trxB（DE3）plusS．选择最佳宿主菌，优化诱导表达的条件，将大量表达的目的蛋白经金属离子亲和层析、除盐、肠激酶酶切、阳离子交换进行初步纯化。结果pET32a（＋），SLC最佳宿主菌为BI。21trxB（DE3）．优化的表达条件为37C、1mmol／LIPTG诱导3h，SDS-PAGE分析可见，表达蛋白的大小约为30kd，占菌体总蛋白的50%以上．可溶性蛋白约占50％。用SLC多克隆抗体进行Westernblm分析显示，在30kd处出现单一阳性条带，而对照的pET32a（＋）／BL21trxB（DE3）诱导菌则无此反应。SLC经一系列纯化步骤得到初步纯化。结论初步建立pET32a（＋）／SLC在宿主菌BL21trxB（DE3）中表达和纯化的方法。     

TTV蛋白抗原在大肠杆菌中的表达

目的 :用原核系统表达TTV的重组蛋白抗原 ,建立诊断TTV感染的特异性方法。方法 :采用PCR方法扩增TTVORF2 基因 ,将之插入到测序质粒载体中进行测序 ,验证序列正确后再嵌入到原核表达载体pQE30 ,并转化大肠杆菌M15菌株 ,进行诱导表达。用SDS PAGE分析表达产物。表达产物经Ni NTA柱层析纯化后 ,得到纯度为90 %的ORF蛋白抗原。用TTV感染者的阳性血清对该蛋白进行了Western BlotBlotting分析。结果 :经IPTG诱导后 ,筛选出 2株高表达株。结论 :该蛋白具有良好的抗原活性     

TTV蛋白抗原在大肠杆菌中的表达

目的:用原核系统表达TTV的重组蛋白抗原,建立诊断TTV 感染的特异性方法. 方法:采用PCR方法扩增TTV ORF2基因,将之插入到测序质粒载体中进行测序,验证序列正确后再嵌入到原核表达载体pQE30,并转化大肠杆菌M15菌株,进行诱导表达.用SDS-PAGE分析表达产物.表达产物经Ni-NTA柱层析纯化后,得到纯度为90%的ORF蛋白抗原.用TTV感染者的阳性血清对该蛋白进行了Western-Blot Blotting分析.结果:经IPTG诱导后,筛选出2株高表达株. 结论:该蛋白具有良好的抗原活性.     

GST-Gankyrin融合蛋白的原核表达及抗体制备

目的:为进一步研究在肝癌上过表达的癌相关基因Gankyrin的功能,进行GST-Gankyrin融合蛋白表达载体的构建、原核表达、及抗体制备.方法:采用逆转录PCR(RT-PCR)法从人肝癌细胞系hepG2中扩增Gankyrin Cdna编码区,并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达质粒Pgex-4T2中,经酶切、序列鉴定分析后,用该重组质粒转化大肠杆菌DH-5α,经IPTG诱导获得表达,并将Gankyrin蛋白免疫家兔,经过Western blot检测抗Gankyrin抗体的产生.结果:成功构建了Gankyrin原核表达载体,并在大肠杆菌DH-5α中获得表达,Western blot检测证实获得了抗Gankyrin抗体.结论:成功表达了Gankyrin蛋白并制备了其特异性抗体.