依托咪酯对神经元缺氧损伤的保护及其作用机制

目的观察依托咪酯对大鼠海马神经元缺氧损伤的保护作用及其机制。方法用原代培养的新生大鼠海马神经细胞建立缺氧模型,用MTT法测定神经元存活率。采用激光扫描共聚焦显微镜动态监测单个海马神经元[Ca2+]i随缺氧或加入谷氨酸、KC l前后的实时变化。结果依托咪酯在1.2~4.8 mg.L-1范围内,可剂量依赖性地降低神经元缺氧损伤时的细胞死亡率(P<0.05)。0.3~4.8 mg.L-1依托咪酯能抑制缺氧及50 mmol.L-1KC l引起的[Ca2+]i升高(P<0.05),仅在4.8 mg.L-1时才抑制1 mmo.lL-1谷氨酸所致的[Ca2+]i升高(P<0.01)。结论依托咪酯对离体大鼠海马神经元缺氧性损伤具有保护作用,其机制可能与依托咪酯抑制缺氧引起[Ca2+]i异常升高有关。     

七氟醚对神经元缺氧损伤的保护及其作用机制

目的 观察七氟醚对大鼠海马神经元缺氧损伤的保护作用及其机制.方法 用原代培养的新生大鼠海马神经细胞建立缺氧模型,用MTT法测定神经元存活率.采用激光扫描共聚焦显微镜动态监测单个海马神经元[Ca2 ]i随缺氧或加入KCl前后的实时变化.结果 七氟醚在2MAC(肺泡气最小有效浓度),可降低神经元缺氧损伤时的细胞死亡率(P＜0.05).0.5～2MAC七氟醚能抑制缺氧及50 mmol/L KCl引起的[Ca2 ]i升高(P＜0.05).结论 七氟醚对离体大鼠海马神经元缺氧性损伤具有保护作用,其机制可能与七氟醚抑制缺氧引起[Ca2 ]i异常升高有关.     

天麻素对大鼠皮质神经元缺氧损伤的保护作用

<正>天麻为兰科天麻属植物天麻(Gastrodia elata Bl.)的干燥块茎,为常用名贵中药,具有息风止痉,平抑肝阳,祛风通络之功效[1],主要有效单体为天麻素(gastrodin,Gas),化学名称为4-羟甲基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷,又叫天麻苷,因其具有镇静、镇痛、抗惊厥、降压、抗炎、抗氧化等作用,临床上主要用于治疗眩晕、头痛、缺血性脑损伤等。为探讨天麻素对神经系统的保护作用机制,实验考察了天麻素对培养的皮质神经元缺氧损伤的作用[2-5]。     

乙酰胆碱介导的内皮超极化因子对海马神经元缺氧/再给氧损伤的保护作用

目的研究乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)介导的大鼠大脑中动脉内皮释放的内皮超极化因子(endothelium-de-pendent hyperpolarizing factor,EDHF)对海马神经元缺氧/再给氧损伤的保护作用。方法用原代培养的大鼠海马神经元细胞建立缺氧/再给氧损伤模型,取大鼠大脑中动脉(mid-dle cerebral artery,MCA)血管段,PGI2和NO的阻断剂NG-ni-tro-L-argininemethyl ester(L-NAME)和indomethacin(Indo)预处理后,用ACh刺激血管内皮释放EDHF,用四甲基偶氮唑盐(MTT)染色吸光度和乳酸脱氢酶(LDH)活性作为细胞损伤指标,用激光共聚焦显微镜检测细胞内游离Ca2+浓度。结果与正常对照组相比,缺氧/再给氧损伤组细胞MTT染色吸光度明显降低,上清液中LDH活性和细胞内Ca2+浓度则明显升高。1μmol.L-1ACh合用含血管内皮的MCA血管段(MCA/Endo)或ACh+MCA/Endo+L-NAME+Indo均可抑制缺氧/再给氧致海马细胞MTT染色吸光度降低、培养上清液中LDH活性及细胞内Ca2+浓度的升高,但单用1μmol.L-1ACh或MCA/Endo却无上述抑制作用,合用1μmol.L-1ACh和去内皮MCA血管段(MCA/-Endo)也无明显抑制作用。K+在25~35μmol.L-1范围内,可明显减弱ACh+MCA/Endo+L-NAME+Indo对缺氧再给氧致海马神经细胞MTT染色吸光度降低、上清液LDH活性及细胞内Ca2+浓度升高的抑制作用,但Ba2+没有明显影响。结论假定的EDHF对原代培养的海马神经元缺氧/再给氧损伤具有保护作用,其机制可能与抑制缺氧/再给氧引起的钙超载有关。     

异丙酚对培养海马细胞氧化性损伤后存活率的影响

目的：观察异丙酚对谷氨酸导致的原代培养海马细胞存活性率的影响。方法：培养12d海马神经元，随机分为正常对照组，分别加谷氨酸10umol/L,50umol/L,100umol/L再培养24h组，加谷氨酸同时加异丙酸50umol/L,500umol/L 再培养24h组，MTT法测量的细胞存活率。结果：加谷氨酸对海马细胞存活率与正常组相比明显下降，谷氨酸10umol/L,50umol/L,100umol/L组存活率与正常组比下降（P＜0．001），再加入异丙酚50umol/L组则存活率与加谷氨酸组没有统计学差异。再加入异丙酚500umol/L组则存活率上升（P＜0．01），与加谷氨酸组有统计学差异，说明谷氨酸对神经元有毒性作用，而异丙酚对谷氨酸的细胞毒性有抑制作用，与用量呈正相关，结论：异丙酚能提高体外海马神经元的抗阻质过氧化耐力，抑制谷氨酸的神经细胞毒性作用，提高细胞的存活率。     

纳洛酮对海马神经元的预防保护作用

目的为观察缺氧对大鼠海马神经元的影响及纳络酮的保护作用。方法采用细胞培养方法获取10～14d的海马神经元,将含药血清加入到培养液中,4h后建立95%N2＋5%CO2混合气体急性缺氧模型,胎盘兰染色细胞计数并做流式细胞仪检测以及酶法测定抗氧化酶（超氧化物歧化酶）的抗氧化能力及丙二醛、NO的含量。结果离体条件下纳络酮可显著增强海马神经元的活性,降低其凋亡率及死亡率;提高细胞上清夜中超氧化物歧化酶的活性,降低丙二醛及NO的含量,且成量效比例关系。结论纳络酮在体外有抗缺氧损伤的作用。其作用机制可能是通过抑制细胞凋亡,提高抗氧化酶的活力,清除自由基,而发挥作用。     

异丙酚预处理对缺氧/复氧后培养海马神经元金属硫蛋白-3蛋白表达的影响

目的:本研究观察异丙酚对培养海马神经元缺氧复氧后损伤反应的影响及金属硫蛋白-3(metallothionein-3,MT-3)在其中的作用。方法:培养7～10d海马神经元,以不同浓度的异丙酚(50,150,250μmol/L)预处理后24h后,制备缺氧4h后复氧24h模型(H/R),Western blot法检测MT-3蛋白表达水平;以MT-3特异性siR-NA沉默MT-3表达后,采用MTT法观察异丙酚对H/R海马神经元存活率的影响。结果:在H/R条件下,异丙酚可浓度依赖性促进MT-3的蛋白表达。以MT-3siRNA抑制MT-3蛋白表达后,异丙酚提高神经元存活率的作用消失。结论:异丙酚具有神经元保护效应,这一作用可能与其上调MT-3的蛋白表达有关。     

缺氧后处理对成年大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的：通过建立成年大鼠心肌细胞缺氧复氧模型观察缺氧后处理的心肌保护机制。方法雄性SD大鼠,体质量250～350 g ,随机分为3组：正常组（NOR组）、缺氧组（H／R组）、缺氧后组（HP组）。采用激光共聚焦显微镜检测心肌细胞线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential , MMP）、细胞内钙离子荧光强度以及 Western blot方法测定磷酸化 p38丝裂原活化蛋白激酶（p‐p38MAPK）表达量。结果（1）与正常组比较,H／R组和 HP组 MMP显著降低（P＜0．05）;HP组MMP明显高于 H／R组（P＞0．05）;（2）与正常组和 HP组比较,H／R组细胞内钙离子荧光强度显著升高（P＜0．01）;HP组和正常组间差异无统计学意义（P＞0．05）;（3）与正常组和 HP组比较,H／R组p‐p38MAPK表达量显著升高（P＜0．05）;HP组和正常组间表达量差异无统计学意义（P＞0．05）。结论缺氧后处理可对缺氧复氧成年大鼠心肌细胞产生保护作用,其机制可能与下调心肌细胞p‐p38M A PK 表达量、抑制线粒体膜电位下降以及防止钙超载进而抑制凋亡有关。     

异丙酚对大鼠肝脏缺氧复氧损伤的保护作用

为探讨异丙酚对大鼠肝脏缺氧复氧损伤的保护作用，将Wistar 大鼠24只随机分为3组：对照组(A组)、缺氧复氧组(B组)和异丙酚预处理组(c组)。采用酶联免疫吸附法检测大鼠肝组织8-异前列腺素F2α(8-iso．PGF2α)水平，硝酸还原法测定其一氧化氮合酶(NOS)活力和NO含量。结果表明，缺氧复氧后，B组肝组织中8-iso-PGF2α水平明显升高，而NOS活力和NO含量则明显降低，与A组比较差异有非常显著意义(P＜0．01)；C组与B组相比，肝组织中8-iso-PGF2α水平明显下降，而NOS活力和NO含量明显上升，差异亦有非常显著意义(P＜0．01)。结论：异丙酚能明显降低缺氧复氧后8-iso-PGF2α水平，提高内源性NO生成，提示对大鼠肝脏缺氧复氧损伤有明显的保护作用。     

异丙酚对缺血再灌注损伤大鼠海马线粒体能量代谢、ATP酶活性及自由基系统的影响

目的：观察异丙酚对缺血再灌注损伤大鼠海马线粒体能量代谢、ATP酶活性、脂质过氧化及超微结构的影响。方法：雄性Wistar大鼠30只，随机分为假手术组、缺血再灌注对照组和缺血再灌注异丙酚处理组。采用大鼠全脑缺血再灌注损伤模型。全脑缺血10min再灌注60min时，断头处死大鼠。检测海马线粒体三磷酸腺苷(ATP)、丙二醛(MDA)含量及Na^ -K^ -ATP酶、Ca^2 -ATP酶、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)活性并观察线粒体超微结构的改变。结果：缺血再灌注后海马线粒体的ATP含量及Na^ -K^ -ATP酶、Ca^2 -ATP酶、SOD、GSH活性均有不同程度的降低，MDA含量增高，线粒体超微结构亦发生明显损害；麻醉相关剂量的异丙酚可使ATP含量、Na^ -K^ -ATP酶、Ca^2 -ATP酶、SOD、GSH活性有不同程度的恢复，并降低MDA的含量，减轻线粒体损伤的程度。结论：异丙酚对脑缺血再灌注损伤的保护作用可能与其抑制线粒体脂质过氧化反应，清除自由基，保持线粒体结构的完整性，促进线粒体ATP含量和ATP酶活性的恢复有关。     

小檗碱对培养大鼠神经细胞“缺血”性损伤的保护作用

目的观察小檗碱（Ｂｅｒ）对缺氧／缺糖培养引起的大鼠脑皮层神经元“缺血”性损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法体外培养大鼠胎鼠脑皮层神经元,以缺氧加缺糖培养作为细胞“缺血”性损伤模型,观察Ｂｅｒ对神经元“缺血”性损伤的保护作用。结果Ｂｅｒ５,２５μｍｏｌ·Ｌ－１能显著降低神经细胞“缺血”性损伤时的细胞死亡率,减少乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）的漏出,改善细胞形态,对缺氧／缺糖诱导的神经细胞内游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）的升高有明显的抑制作用,并能减少脂质过氧化物生成,提高谷胱甘肽（ＧＳＨ）含量及超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性。结论Ｂｅｒ对培养大鼠脑皮层神经元“缺血”性损伤具有保护作用,其机制可能与Ｂｅｒ抑制“缺血”性损伤诱导的［Ｃａ２＋］ｉ异常升高,减少脂质过氧化物生成,增加抗氧化物质的含量有关。     

丙泊酚对自由基引起的大鼠脑皮质线粒体损伤的保护作用

目的：在大鼠脑皮质线粒体自由基损伤的体外实验中，观察丙泊酚的保护作用，为治疗脑缺血再灌注损伤提供实验依据。方法：采用抗坏血酸-Fe^2＋体系诱导产生氧自由基，对分离的大鼠脑线粒体进行体外损伤实验，与丙泊酚温育后测定线粒体膜流动性、肿胀度和丙二醛（MDA）含量的变化。结果：脂质过氧化可降低线粒体膜流动性、增加线粒体肿胀和MDA含量，30μmol／L的丙泊酚均可减轻上述损伤。结论：脂质过氧化使大鼠脑皮质线粒体结构和功能显著量损．丙泊酚对此有明显保护作用。     

氯沙坦对离体培养大鼠海马神经元缺糖缺氧损伤的保护作用

目的：研究氯沙坦对离体培养大鼠海马神经元细胞缺糖缺氧损伤的保护作用及机制。方法：取大鼠海马神经元细胞进行原代培养,分为3组：对照组、氯沙坦低剂量组、氯沙坦高剂量组。通过建立缺糖缺氧培养条件的细胞损伤模型,观察氯沙坦对细胞凋亡的拮抗作用。Tunel染色检测神经元凋亡细胞,Western blot免疫印迹方法观察Caspase-3蛋白表达改变。结果：缺糖缺氧环境可诱导海马神经元凋亡,预先加入不同剂量氯沙坦进行处理后,活性Caspase-3蛋白水平降低,神经元凋亡细胞百分比明显下降（P〈0.05）。结论：氯沙坦预处理能够减少脑缺血缺氧损伤所致的大鼠海马CA1区神经元凋亡,呈剂量依赖性,其作用机制与Caspase依赖性途径相关。     

粉防己碱对喹啉酸致海马神经元损伤的保护作用

目的研究粉防己碱(Tet)对喹啉酸(QA)诱导原代培养乳鼠海马神经元兴奋毒损伤的保护作用。方法乳鼠海马神经元原代培养后用QA诱导损伤,MTT法测定细胞活力,同时测定培养上清中LDH活性,神经元病理染色后进行形态学观察。结果Tet(10-6mol·L-1和10-7mol·L-1)能明显提高QA损伤后原代培养乳鼠海马神经元的细胞活力,降低其上清液中LDH活性,与模型组相比,差异均有显著性(P<0.01),并明显改善神经元病理损伤。结论Tet(10-6mol·L-1和10-7mol·L-1)对QA所致的原代培养乳鼠海马神经元损伤有明显保护作用。     

知母皂苷元对高糖引起的体外培养大鼠海马神经元损伤的保护作用

目的探讨知母皂苷元(sarsasapogenin,Sar)对高糖引起的海马神经元损伤是否有保护作用。方法选用出生0～24 h Sprague-Dawley(SD)大鼠乳鼠,取海马,进行海马神经元体外培养,培养7 d用于实验。实验分为正常对照组、高糖组、高糖+Sar(10、30、100μmol.L-1)组;对照组:加入等量含0.1%DMSO培养基;高糖处理组:分别加入葡萄糖(30、50、100 mmol.L-1)作用48 h;高糖+Sar(10、30、100μmol.L-1)组:先加入不同浓度Sar(10、30、100μmol.L-1)作用1 h,然后加入葡萄糖(50 mmol.L-1)作用48 h;应用MTT方法观察细胞活力,免疫荧光和Western免疫印迹方法观察神经元突触素表达的改变。应用Hoechst 33258核染色检测神经元凋亡。应用Western免疫印迹方法观察caspase-3和多聚ADP核糖聚合酶(PARP)蛋白表达改变。结果加入葡萄糖(30、50、100 mmol.L-1)作用48 h可使培养神经元细胞活力明显降低,神经元突触素蛋白表达明显降低。另外高糖也可引起神经元凋亡细胞百分比和活性caspase-3、PARP蛋白表达水平也较对照组明显提高。在加入高糖前加入不同浓度Sar(10、30、100μmol.L-1)可明显对抗高糖引起的这些变化。培养海马神经元突触素蛋白表达较高糖组(50 mmol.L-1)明显增加,神经元凋亡细胞百分比和活性caspase-3、PARP蛋白表达水平也较高糖组明显降低。结论 Sar对高糖引起的海马神经元损伤具有明显的保护作用。     

Electrophysiological effects of phencyclidine on rat hippocampal pyramidal neurons

The effects of local application of phencyclidine to hippocampal CAl pyramidal neurons was investigated using electrophysiological techniques. The predominant response was a decrease in firing rate, although excitation and biphasic responses were also seen. The stereospecificity of these responses was demonstrated using the (+) and (?) isomers of 1-[1-phenylcyclohexy]-3-methylpiperidine (PCMP). The (+) enantiomer was 4–15 times more potent than the (?) enantiomer. Interactions between PCP and catecholaminergic synapses were also investigated. Catecholamine depletion by reserpine markedly increased the amount of phencyclidine needed to elicit effects on cell discharge; in many cases, no response was seen with the largest dose of phencyclidine tested. The α-adrenergic antagonist, phentolamine, reversibly antagonized phencyclidine-induced inhibition in the firing rate of CAl cells but did not seem to affect excitation; in contrast, timolol, a β-adrenergic antagonist, did not affect the depression but seemed to antagonize reversibly the phencyclidine-induced excitations. It is concluded that the mechanism of phencyclidine-induced changes in pyramidal neuron discharge involves adrenergic input to these cells.     

果糖二磷酸锌对体外培养新生大鼠海马神经细胞生长发育的影响

目的　研究不同剂量果糖二磷酸锌 (ZnFDP)对体外培养新生大鼠海马神经细胞的生长发育的影响。方法　采用体外培养的新生大鼠海马神经细胞 ,在血清培养液中加入低、中、高剂量ZnFDP ,使之终浓度分别为 2 .5、12 .5、12 5 μg·ml-1,通过细胞形态学观察 ,神经元突起和胞体生长状况的定量比较 ,不同培养期细胞存活数和培养液中乳酸脱氢酶 (LDH)渗漏量的测定 ,分析研究了ZnFDP对海马神经细胞生长发育的影响。结果　培养 36h后与对照组比 ,中剂量ZnFDP组海马神经元的突起数目增多 ,突起长度增加 ,胞体长径没有显著性变化 ;低剂量ZnFDP组与对照组比各项指标没有显著差别 ;高剂量ZnFDP则明显抑制神经细胞分化。培养 3d、7d、10d ,中剂量ZnFDP组细胞存活数明显高于对照组 ;培养 7d、10d ,中剂量ZnFDP组LDH渗漏量明显低于对照组。结论　一定量的ZnFDP能促进海马神经细胞的生长发育。     

大蒜多糖对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

大蒜(Garlic)为百合科葱属多年生草本植物,现代医学研究证明[1]:大蒜具有降血脂、防治冠心病、消炎杀菌、抗肿瘤、保护肝脏、降血压、降血脂和延缓衰老等作用,其作用可能与大蒜多糖(Garlic polysaccharide,GP)有关.GP约占大蒜干物质总量的80％以上,是一种新的食品资源[2].