六味地黄丸含药血清对MC3T3-E1细胞增殖以及对Runx2、FOXO1 mRNA表达的影响

目的探讨六味地黄丸含药血清对MC3T3-E1细胞增殖以及对Runx2、FOXO1 mRNA表达的影响。方法制作六味地黄丸混悬液,对成年Wistar大鼠进行灌胃,获取六味地黄丸含药血清。常规培养MC3T3-E1细胞24 h后更换含10%不同浓度含药血清的培养基,分别培养48 h和72 h后用CCK-8法检测MC3T3-E1细胞的增殖;对MC3T3-E1细胞进行诱导培养22天后进行饥饿培养24h,随后更换含10%不同浓度的含药血清,培养72 h后检测Runx2、FOXO1 mRNA表达。结果六味地黄丸含药血清能促进MC3T3-E1细胞增殖,并且呈现一定的剂量依赖性;同时六味地黄丸含药血清各剂量组均能明显促进Runx2 mRNA的表达(P0.01),高剂量组的表达明显高于低剂量组(P0.01)。高剂量组的FOX01 mRNA表达明显高于其他3组(P0.01)。结论六味地黄丸含药血清能促进MC3T3-E1细胞增殖,同时能促进Runx2、FOXO1 mRNA表达。     

六味地黄丸含药血清对树突状细胞增殖的影响

目的：研究六味地黄丸含药血清对SD大鼠骨髓源性树突状细胞（bone marrow-derived dendritic cells,BMDC）增殖的影响。方法：制备六味地黄丸含药血清,观察含药血清作用下的细胞生长情况,进行细胞计数及细胞活力测定;用四甲基偶氮唑盐（MTT）法,检测不同浓度、不同时间六味地黄丸含药血清作用下的细胞增殖变化,寻找最佳六味地黄丸浓度和作用时间;ELISA法检测细胞上清中树突状细胞分泌细胞因子IL-12的浓度;混合淋巴细胞反应（MLR）检测其刺激T淋巴细胞活化和增殖能力。结果：与空白对照组比较,成熟型DC含药血清组显著促进DC细胞增殖,且这种增殖在含药浓度15%,作用时间48 h时最为显著。其IL-12分泌量显著提高（P<0.05）。六味地黄丸含药血清培养的成熟型DC对异基因T淋巴细胞具有增殖刺激作用,且随着细胞数量的增加作用增强（P<0.05）,呈量效关系。结论：六味地黄丸含药血清具有诱导大鼠骨髓源性树突状细胞增殖的作用。     

制作六味地黄丸含药血清有关问题的思考

目的 为观察六味地黄丸对体外成骨细胞的影响而制作含药血清。方法 给予新西兰兔3d和7d灌胃后采血，并制作血清。结果 灌胃3d组动物状态良好，正常采得高质量血清；而灌胃7d组动物于第4日后出现动物消化不良现象，甚至拒食以致衰竭死亡。结论 含药血清制作过程要考虑动物接受药物时出现副作用情况下的血清质量问题，本实验随着灌胃时间的延长动物受到毒副作用影响的机会就增加，说明六味地黄丸含药血清的时效问题上应该考虑短时间灌胃后采血的方法较好；并建议采用病理模型动物。     

六味地黄丸含药血清对骨髓细胞增殖的影响

目的观察六味地黄丸含药血清对正常大鼠骨髓细胞体外增殖的影响。方法体外培养大鼠股骨骨髓细胞,加入不同浓度的六味地黄丸含药血清,采用MTT比色法检测对骨髓细胞增殖的影响,采用流式细胞仪PI单标法检测对骨髓细胞周期的影响。结果与正常对照组比较,六味地黄丸含药血清能显著促进骨髓细胞增殖,促使细胞由G0/G1期进入S期以及由S期进入G2/M期,从而有利于骨髓细胞的增殖。结论六味地黄丸含药血清对大鼠骨髓细胞有很好的促增殖作用。     

基于网络药理学的六味地黄丸治疗高血压、2型糖尿病、阿尔茨海默病的异病同治机制分析

目的:借助网络药理学研究模式,以中医理论为指导原则,从分子水平探究六味地黄丸对高血压、2型糖尿病、阿尔茨海默病"异病同治"的物质基础和作用机制。方法:使用TCMSP、Swiss Target Prediction、STITCH数据库筛选出六味地黄丸的化学成分及其作用靶点,结合从Genecards、HPO、OMIM数据库以及GEO数据库中获取的基因芯片挖掘出的疾病靶点,将二者取交集后获取的共有靶点导入STRING数据库获得蛋白质相互作用关系,运用Cytoscape软件构建"中药-化合物-靶点"网络及PPI网络,运用Auto Dock软件进行分子对接。最后借助DAVID数据库进行GO和KEGG富集分析。结果:筛选出六味地黄丸活性成分69个,作用靶点280个,高血压、2型糖尿病、阿尔茨海默病及六味地黄丸共有靶点如VEGFA、IL-6、MMP-9、PPARG等21个。结论:该研究初步揭示了六味地黄丸对三病"异病同治"作用的现代生物学机制,包括影响血管生成及内皮功能、炎症反应、缺氧反应,为探究中医"异病同治"治疗原则的科学内涵提供了一定的依据。     

六味地黄丸对肿瘤细胞抑制作用的研究

目的 探讨六味地黄丸对不同肿瘤细胞的抑制作用.方法 采用中药血清药理学方法,选择不同剂量的六味地黄丸水溶液以灌胃方式给药,以空白血清组为对照组,应用MTT法检测考察不同给药天数、不同采血时间点大鼠含药血清对人肝癌细胞BEL-7402、肺癌细胞A549共同孵育不同时间段的抑制作用.结果 六味地黄丸低剂量组(4.8 g·kg-1)给药5d与10d,在末次给药1h眼眶取血制作的含药血清与肝癌细胞孵育48 h的抑制作用最明显,抑制率分别为43.2％和42.8％.与空白对照血清组比较,差异有统计学意义(P＜0.01),但是从给药天数上比较差异无统计学意义(P＞0.05).低剂量组(4.8 g·kg-1)给药5d末次给药4h取血制作的含药血清培养基,与人肺癌细胞孵育72 h的抑制作用为49.2％;给药10 d末次给药2h眼眶取血制作的含药血清培养基,与人肺癌细胞孵育48 h的抑制作用为47.2％,与空白对照血清组比较差异都有统计学意义(P＜0.01),但是从给药天数上比较差异无统计学意(P＞0.05).结论 对人肝癌细胞BEL-7402进行干预时,六味地黄丸含药血清的制备方法以低剂量(4.8 g·kg-1),给药5d,给药后1h取血,与肝癌肿瘤细胞培养48 h的抑制作用最为理想.对人肺癌细胞A549进行干预时,六味地黄丸含药血清的制备方法以低剂量(4.8 g·kg-1),给药5d,给药后4h取血,与肺癌肿瘤细胞培养72 h的抑制作用最为理想.     

六味地黄丸对胰岛素抵抗小鼠糖代谢的影响及其与骨钙素的关系

目的探讨六味地黄丸对胰岛素抵抗小鼠糖代谢的影响及其与骨钙素的关系。方法将高脂饮食诱导的胰岛素抵抗模型小鼠,分为六味地黄丸小剂量组、中剂量组、大剂量组、西药组(吡格列酮),模型组,加上正常组共6组。给予相应药物干预8周后,检测空腹血糖(FBG)、胰岛素(Fins)和骨钙素。结果与模型组比较,六味地黄丸小剂量组能够明显改善胰岛素抵抗小鼠的FBG(P0.01);六味地黄丸小剂量组和大剂量组的Fins均明显降低(P0.01,P0.05);六味地黄丸各剂量组均能明显升高胰岛素抵抗小鼠的未羧化骨钙素(P0.01,P0.05),同时小剂量组能明显升高未羧化骨钙素/羧化骨钙素。相关性分析显示,未羧化骨钙素与FBG存在负相关(P0.05);未羧化骨钙素/羧化骨钙素与FBG和Fins均存在负相关(P0.01,P0.05)。结论六味地黄丸能明显改善胰岛素抵抗小鼠的FBG和Fins;相比于未羧化骨钙素,未羧化骨钙素/羧化骨钙素能更好地解释六味地黄丸对糖代谢的改善作用。     

六味地黄丸对肾阴虚型骨质疏松老年患者骨钙素及骨密度的影响

目的:观察六味地黄丸对肾阴虚型骨质疏松老年患者的疗效及其对骨钙素、骨密度的影响。方法:选取我院2012年1月至2014年1月收治的70例肾阴虚型骨质疏松老年患者纳入研究,随机分为对照组和观察组,其中对照组每周口服1次阿仑膦酸钠,70 mg/次,观察组在对照组治疗方案基础上加用六味地黄丸,1丸/次,2次/d。2组均以28 d为1个疗程,连续使用6个疗程,检测治疗前后患者骨钙素、骨密度水平的变化情况。并用生活质量量表(36-items Short form Health Survey Scale,SF-36)评估患者治疗后的生活质量。结果:1)观察组SF-36量表中8个维度评分均明显提高,与治疗前及对照组治疗后比较,差异均有统计学意义(P0.01)。2)2组治疗后第1-4腰椎(L1-L4)和股骨颈、总髋部的骨密度与治疗前相比均具统计学意义(P0.05),其中观察组治疗后骨密度远高于对照组(P0.05);对照组与观察组在治疗后的t值均显著高于治疗前(P0.05),且观察组显著高于对照组(P0.05);3)2组治疗后外周血清骨钙素的浓度均有上调,与治疗前比较差异有统计学意义(P0.05),其中观察组上调的趋势较对照组明显,差异有统计学意义(P0.05)。结论:六味地黄丸可能通过骨密度及骨钙素的合成来改善肾阴虚型骨质疏松患者的生活质量。     

“同病异治”与“异病同治”浅议

"同病异治"一语首见于《素问》,而"异病同治"则是后人根据"同病异治"的精神和临床治疗的实际情况而提出的相对性词语,并作为中医治疗上的一大特色。"同病异治"一语在《素问》中有两种含义:一是     

中西医“同病异治、异病同治”比较的启示

<正>同病异治是指"同一疾病,可因人、因时、因地的不同,或由于病情的发展,病机的变化,以及邪正消长的差异,治疗上应根据不同的情况,采取不同的治法",《素问·病能论》:"有病颈痈者,或石治之,或针灸治之,而皆已,其真安在?岐伯曰:此同名异等者也。夫痈,气之息者,宜以针开除去之;夫气盛血聚者,宜石而泻之。     

去甲二氢愈创木酸对成骨细胞MC3T3-E1增殖的影响

目的探讨不同浓度去甲二氢愈创木酸(NGDA)对成骨细胞MC3T3-E1增殖的影响及其机制。方法应用MTT法测定0,5,10,20,30μmol/L NGDA培养后成骨细胞MC3T3-E1增殖情况,利用流式细胞技术检测0,5,10,20μmol/L NGDA培养后MC3T3-E1细胞周期,用Western blotting法检测0,10,20,30,60μmol/L NGDA培养后MC3T3-E1成骨细胞m TOR通路蛋白表达情况。结果 NGDA浓度从5μmol/L开始有促进成骨细胞MC3T3-E1增殖的作用,20μmol/L时MC3T3-E1增殖活性最强,而30μmol/L时MC3T3-E1增殖活性明显低于20μmol/L时(P<0.05)。0,5,10,20μmol/L浓度的NGDA刺激下,成骨细胞MC3T3-E1进入S期的比例分别为28.9%,38.3%,44.2%,58.2%。NDGA浓度在20μmol/L时m TOR信号通路下游底物p-4E-BP1、p-S6水平明显高于0μmol/L时(P<0.05),但30μmol/L时m TOR信号通路下游底物p-4E-BP1、p-S6水平开始明显下降。结论低浓度NDGA可明显促进成骨细胞MC3T3-E1增殖,诱导细胞周期进入S期,且呈剂量依赖关系,这一作用可能是通过对m TOR信号通路的激活来完成的。     

Up-regulation of VEGF by MC3T3-E1 cells treated with curculigoside

Empirical evidence has shown that curculigoside, the main active compound of the traditionally used Chinese herb, Curculigo orchioides (Amaryllidaceae, rhizome), affects bone formation and fracture healing. However, the mechanistic details of these processes remain unclear. Therefore, the effects of curculigoside on immortalized, pre-osteoblastic mouse MC3T3-E1 cells was investigated. Following treatment with curculigoside, MC3T3-E1 cells exhibited an increased rate of proliferation. Higher levels of vascular endothelial growth factor (VEGF), Fms-like tyrosine kinase-1 (Flt-1) and bone morphogenetic protein-2 (BMP-2) were also detected in cell supernatants and cell lysates by ELISA and western blot analysis, respectively. Furthermore, the stimulatory effect of curculigoside was observed at relatively low doses (i.e. 10-100 μg/mL). In combination, these responses to treatment with curculigoside elucidate mechanistic details underlying the therapeutic effects of Curculigo orchioides on bone, and identifies these molecules as potential targets for the treatment of common metabolic bone diseases.     

六味地黄丸对老年性高血压患者肾保护作用的临床研究

目的探讨六味地黄丸对老年性高血压患者肾保护作用.方法采用随机对照方法,将符合标准的136例患者分为治疗组70例和对照组66例,治疗组口服六味地黄丸,同时服用西拉普利,对照组单服西拉普利,观察8周.在治疗前后分别检测患者BUN、Cr、mALB等肾功能指标及ET、NO等指标.结果治疗组降压总有效率95.7%,对照组总有效率86.4%,两组有显著性差别（P＜0.05）,治疗组在降低SBP及DBP方面明显优于对照组（P＜0.05）,治疗组在降低BUN,Cr、mALB、ET水平和升高NO水平方而亦明显优于对照组（P＜0.05）.结论六味地黄丸具备良好的保护靶器官功能,从不同程度上延缓或逆转了老年性高血压患者的肾损害,对老年性高血压患者具有多重性肾保护作用     

六味地黄丸对老年性高血压患者肾保护作用的临床研究

目的探讨六味地黄丸对老年性高血压患者肾保护作用。方法采用随机对照方法,将符合标准的136例患者分为治疗组70例和对照组66例,治疗组口服六味地黄丸,同时服用西拉普利, 对照组单服西拉普利,观察8周。在治疗前后分别检测患者BUN、Cr、mALB等肾功能指标及ET、NO 等指标。结果治疗组降压总有效率95．7％,对照组总有效率86．4％,两组有显著性差别(P<0．05),治疗组在降低SBP及DBP方面明显优于对照组(P<0．05),治疗组在降低BUN,Cr、mALB、ET水平和升高NO水平方而亦明显优于对照组(P<0．05)。结论六味地黄丸具备良好的保护靶器官功能,从不同程度上延缓或逆转了老年性高血压患者的肾损害,对老年性高血压患者具有多重性肾保护作用     

龙牡壮骨颗粒对小鼠成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化及矿化的影响

目的:研究龙牡壮骨颗粒对小鼠成骨细胞株MC3T3-E1增殖、分化和矿化的影响。方法:以小鼠成骨细胞株MC3T3-E1作为药物筛选的体外模型;采用终浓度分别为1,5,10,25,50μg/ml的龙牡壮骨颗粒溶液干预,MTT法检测细胞增殖率;同时检测药物作用不同时间后的碱性磷酸酶(ALP)活性;茜素红染色和Von Kossa钙化染色检测不同浓度药物对细胞钙化的影响。结果:龙牡壮骨颗粒溶液在5⁵0μg/ml范围内培养24和48 h可显著促进小鼠成骨细胞增殖;龙牡壮骨颗粒溶液在550μg/ml范围内培养24和48 h可显著促进小鼠成骨细胞增殖;龙牡壮骨颗粒溶液在5⁵0μg/ml范围内培养48和72 h显著提高MC3T3-E1细胞ALP活性。龙牡壮骨颗粒浓度为10μg/ml和50μg/ml时,茜素红染色钙化结节显著增多,药物浓度在1050μg/ml范围内培养48和72 h显著提高MC3T3-E1细胞ALP活性。龙牡壮骨颗粒浓度为10μg/ml和50μg/ml时,茜素红染色钙化结节显著增多,药物浓度在10⁵0μg/ml范围内,Von Kossa染色钙化结节显著增多。结论:龙牡壮骨颗粒可提高MC3T3-E1增殖、分化及矿化的能力。     

黄芪甲苷对MC3T3-E1细胞活性的影响及其机制探讨

目的:探讨黄芪甲苷对小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1细胞活性的影响及其作用机制。方法:体外培养MC3T3-E1细胞,用不同浓度的黄芪甲苷进行预处理后,MTT法测定细胞增殖情况,碱性磷酸酶法(ALP)测定细胞分化情况,Western blotting分析转化生长因子TGF-β1、成骨细胞信号转导蛋白Smad2/3表达水平;应用小干扰RNA(siRNA)转染法观察TGF-β1 siRNA对MC3T3-E1细胞增殖及活性的影响,加入抗Smad2/3抗体,探讨Smad2/3在黄芪甲苷介导的细胞增殖分化中的作用。结果:黄芪甲苷在一定浓度范围内剂量依赖性促进MC3T3-E1细胞的增殖和分化能力。进一步机制分析表明,黄芪甲苷处理可诱导TGF-β1蛋白表达,TGF-β1siRNA处理后,黄芪甲苷诱导的MC3T3-E1细胞的增殖和分化能力明显下降;此外,黄芪甲苷可显著性诱导Smad2/3表达,经TGF-β1 siRNA处理后,黄芪甲苷诱导的Smad2/3表达显著下降;加入Smad2/3抗体后,黄芪甲苷诱导的MC3T3-E1细胞的增殖和分化能力明显下降。结论:黄芪甲苷可通过刺激TGF-β1-Smad2/3通路的活化促进成骨细胞的增殖和分化,从而有利于骨形成。因此,本研究将为骨折愈合的治疗提供新的研究方向。     

沉默Cx43基因对左归丸促MC3T3-E1细胞分化作用的影响

目的:研究沉默Cx43基因对左归丸含药血清促MC3T3-E1细胞分化作用的影响。方法:采用慢病毒介导的RNA干扰技术沉默Cx43基因,将培养细胞分为正常对照A组、含药血清B组、基因沉默C组。细胞培养第3、5、7、9天进行ALP活性测定、第21天矿化结节茜素红染色,进行组间对比。结果:左归丸含药血清可以促进MC3T3-E1细胞的分化,与A组比较:ALP活性增强,其中第5、7、9天差异显著(P0.05);茜素红染色面积增加(P0.01)。C组与B组比较:ALP活性降低,其中第7、9天差异显著(P0.05);茜素红染色面积明显减少(P0.05)。结论:沉默细胞Cx43基因导致左归丸含药血清促MC3T3-E1细胞分化作用明显下降。     

金叶子异槲皮苷对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响

该研究对从金叶子中分离得到的异槲皮苷的成骨活性进行了系统评价。在1×10-4,1×10-5,1×10-6,1×10-7mol·L-1异槲皮苷浓度作用下检测了MC3T3-E1细胞增殖活力和碱性磷酸酶活性;在异槲皮苷作用的第3天对MC3T3-E1碱性磷酸酶、I型胶原以及转录因子Runx2和Osterix的基因表达水平进行了检测;并通过茜素红染色的方法在第21天对MC3T3-E1进行了胞外基质矿化能力的评价。结果显示,异槲皮苷在1×10-7~1×10-5mol·L-1能促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化及矿化能力,上调成骨相关基因的表达,而且该作用呈现出一定的浓度依赖性,在浓度为1×10-6mol·L-1时促进作用最强。在1×10-4mol·L-1时表现出明显的细胞毒性。因此,从金叶子中分离得到的异槲皮苷有一定的成骨活性,这可能是传统中药金叶子治疗骨折的主要药效成分。     

Stimulation of osteoblastic differentiation and mineralization in MC3T3-E1 cells by yeast hydrolysate

In a previous study, it was reported that yeast hydrolysate (YH) was effective in promoting bone growth in Sprague‐Dawley (SD) rats. To further clarify the mechanism of YH, the effects of YH on proliferation, differentiation and gene expression in vitro were investigated using osteoblastic cell lines (MC3T3‐E1). Cell proliferation increased significantly as much as 110% of the basal value when cells were treated with 100 µg/mL of YH. Alkaline phosphatase (ALP) activity increased significantly with a YH concentration of 25–100 µg/mL, and the activity increased 152% that of the control at 100 µg/mL. The calcium content increased as much as 129% at 100 µg/mL YH. The gene expression levels of ALP and collagen type II (COL II) significantly increased approximately 1.3‐fold and 1.7‐fold of control, respectively, at 100 µg/mL. YH increased significantly the mRNA level of bone sialoprotein (BSP) but not in a dose‐dependent manner. The mRNA levels of bone morphogenetic proteins (BMP)‐2, BMP‐4, collagen type I (COL I) and osteonectin (ON) did not increase. In summary, YH increased the proliferation of osteoblasts and directly stimulated ALP and bone matrix proteins (e.g. BSP, COL II), and these increases trigger osteoblastic differentiation (e.g. mineralized nodule formation). Copyright © 2010 John Wiley & Sons, Ltd.