Toll样受体4信号通路靶点抑制与新生儿坏死性小肠结肠炎的关系

新生儿坏死性小肠结肠炎（necrotizing enterocolitis,NEC）发生机制尚不清楚,肠上皮细胞Toll样受体4（toll-like receptor 4,TLR4）介导的TLR4信号通路被认为是激活NEC炎症风暴的关键因素。本文围绕TLR4信号通路及其上、下游信号靶点抑制,以及部分关键模式识别受体和特...     

早产大鼠坏死性小肠结肠炎三种常用模型的建立及评价

目的 用人工喂养+缺氧+冷刺激、缺氧-复氧及腹腔注射内毒素(lipopolysaccharides,LPS)等国内外常用方法建立早产大鼠坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)模型,并进行比较和评价. 方法 A组早产大鼠(n=10)采用代乳品人工喂养,并给予100%氮气缺氧90 s,4℃冷刺激10 min,每天2次,连续2 d;B组早产大鼠(n=10)给予100%氮气5 min,100%氧气5 min,每天2次、连续3 d;C组早产大鼠(n=10)给予腹腔注射LPS 5 mg/kg;D、E、F组为相应正常对照组,每组10只.HE染色后光镜下观察肠道、肝、肺及肾组织病理改变,并对肠组织损伤情况进行病理评分,评分≥2分确定为NEC. 结果 A、B、C组均出现不同程度的活动减少,腹胀腹泻,肠道扩张充血.A至F组的肠组织损伤病理评分结果分别为(3.13±0.64)分、(1.40±0.52)分、(2.00±0.42)分、(0.30±0.48)分、(0.30±0.48)分和(0.40±0.52)分,模型组与相应对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01);模型组内B组与A组比较,差异有统计学意义(P＜0.01);C组与A组比较,差异亦有统计学意义(P＜0.05).A、B、C组的NEC发生率分别为6/8、20%(5/10)和4/8,对照组的NEC发生率均为0.C组的肝脏、肾脏和肺脏损伤较A、B组严重,而对照组各重要脏器均未见异常. 结论与缺氧-复氧和腹腔注射LPS等单因素的建模方法相比,综合运用人工喂养+缺氧+冷刺激更接近新生儿NEC的病因,且其发生率高,重复性好,特异性强,是一种较为理想的NEC建模方法.     

新生儿坏死性小肠结肠炎血浆谷氨酰胺浓度变化及临床意义

目的探讨血浆谷氨酰胺(Gln)浓度与新生儿坏死性小肠结肠炎(NEC)的关系。 方法选取2002年10月至2003年10月福建省妇幼保健院住院治疗的NEC患儿16例，以同期住院的性别相同，年龄、胎龄、出生体重相当的非NEC患儿16例为对照组，采用反向高效液相色谱法测定血浆Gln值，观察两组间差异；以多因素分析的方法判定血浆Gln浓度与NEC的关系。 结果NEC患儿血浆Gln浓度为(021±008)mmol/L，对照组为(035±014)mmol/L，差异有显著性意义(P<005)。控制了缺氧和感染因素的影响后，NEC组和对照组的血浆Gln浓度的边缘估计均值及95%可信区间分别为：0216mmol/L(0150~0282mmol/L)和0344mmol/L(0278~0410mmol/L)。两组校正均值比较，差异有显著性意义(P=0032)。在单因素分析筛选出关联因素的基础上，建立多因素条件Logistic回归模型，结果显示血浆Gln浓度是NEC的危险因素，OR值为13342(2006~88735)。 结论NEC患儿血浆Gln浓度降低，低浓度的血浆Gln是NEC发生的危险因素。     

预防性应用天然蒙脱石对新生大鼠坏死性小肠结肠炎肠损伤的保护作用

目的 探讨预防性应用天然蒙脱石对新生大鼠坏死性小肠结肠炎(necrotizing entero-colitis,NEC)模型肠损伤的保护作用及可能机制. 方法 按析因设计,32只新生SD大鼠随机分成4组,每组8只.A组为NEC模型,出生48 h起给予天然蒙脱石0.6 gl(kg·d)灌胃;B组为NEC模型,未添加天然蒙脱石;C组为对照,未添加天然蒙脱石;D组为对照,出生48 h起给予天然蒙脱石0.6 g/(kg·d)灌胃.SD新生大鼠出生后48 h开始采用鼠配方奶喂养,100%氮气90 s,4℃10 min,每天2次,连续3 d,建立新生大鼠NEC模型.A、B组在造模结束后24 h和C、D组新生大鼠空腹断头处死,留取十二指肠下端至直肠上端肠管进行肠细胞凋亡率检测(流式细胞仪)、电镜观察和血小板活化因子(platelet-actvating factor,PAF)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量(ELISA 法)检测.所有新生大鼠均留取回盲部近端肠管进行肠组织损伤评分. 结果造模后,A、B组新生鼠相继出现腹泻、腹胀、萎靡、活动减少,生长减慢;透射电镜显示肠黏膜出现大量凋亡细胞,形成凋亡小体,A组程度较轻.A、B、C和D组肠组织损伤评分分别为1.42±0.36、3.54±0.50、0.13±0.17和0.17±0.18,肠细胞凋亡率为(11.6±4.6)%、(27.6±9.9)%、(4.8±2.9)%和(3.6±3.8)%,与B组相比,A组肠组织损伤评分和肠细胞凋亡率明显降低,但仍高于C、D两组(P均<0.01).A、B、C和D组肠组织PAF含量(单位为pg/mg prot)分别为385.0 4-308.0.1663.24-576.1、40.8±40.4和37.1±33.1,TNF-α含量(单位为pg/mg prot)为46.4±15.1、258.1±281.7、13.2±12.2和12.44-8.8.B组肠组织PAF、TNF-α含量明显高于C、D组;与B组相比,A组肠组织PAF、TNF-α含量明显降低(P均<0.01).肠组织损伤评分、肠细胞凋亡率及肠组织PAF、TNF-α含量均受造模和预防性应用天然蒙脱石两因素影响,造模与预防性应用天然蒙脱石之间存在交互作用. 结论 预防性应用天然蒙脱石可能通过减少肠细胞凋亡率,降低肠组织PAF、TNF-α含量,从而减轻肠损伤程度.     

Toll样受体在母胎界面的表达与早产的关系

早产严重危及围生儿的生命及预后,宫内感染是导致早产的重要原因之一。Toll样受体（TLRs）是固有免疫系统中重要的病原模式识别受体,可调控适应性免疫应答,在母胎界面有广泛表达。TLRs参与母胎界面的炎症反应应答,保护胎儿免受外源性病原微生物感染,同时介导母儿间的免疫耐受。近来众多研究发现,感染导致的TLRs表达失调与早产的发生有一定的相关性。综述TLRs在胎盘、羊膜、蜕膜上的表达及其在早产中可能的作用机制。     

Toll样受体在母胎界面的表达与早产的关系

早产严重危及围生儿的生命及预后,宫内感染是导致早产的重要原因之一.Toll样受体(TLRs)是固有免疫系统中重要的病原模式识别受体,可调控适应性免疫应答,在母胎界面有广泛表达.TLRs参与母胎界面的炎症反应应答,保护胎儿免受外源性病原微生物感染,同时介导母儿间的免疫耐受.近来众多研究发现,感染导致的TLRs表达失调与早产的发生有一定的相关性.综述TLRs在胎盘、羊膜、蜕膜上的表达及其在早产中可能的作用机制.     

肝素结合性表皮生长因子样生长因子在坏死性小肠结肠炎新生大鼠线粒体途径细胞凋亡中的作用

目的 探讨肝素结合性表皮生长因子样生长因子(heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor,HB-EGF)在新生儿坏死性小肠结肠炎(neonatal necrotizing enterocolitis,NEC)新生大鼠模型线粒体途径细胞凋亡中的作用. 方法 新生无特定病原体Sprague-Dawley大鼠随机分为3组,每组10只.NEC模型组:采用代乳品人工喂养,并给予100％氮气缺氧90 s,4℃冷刺激10 min,每天2次,连续3 d;HB-EGF干预组:在NEC模型组基础上予HB-EGF灌胃,每次800 μg/kg,每天4次,连续3d.正常对照组:鼠乳喂养3d,不予任何干预.大鼠生后72h禁食12h后处死.取回肠末端组织,HE染色观察病理改变并评分;电镜下观察线粒体超微结构变化;免疫组织化学方法检测细胞色素C含量;Western印迹技术检测凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)及凋亡肽酶激活因子-1(apoptotic protease activating factor-1,APAF-1)的表达.组间差异比较采用单因素方差分析,两两比较采用q检验,P＜0.05为差异有统计学意义. 结果 (1)HB-EGF干预组NEC发生率为2/10,低于模型组(9/10),差异有统计学意义(x2=7.27,P＜0.01);对照组未发生NEC.(2)NEC模型组线粒体在肠上皮细胞及肌层细胞中存在明显肿胀,基质内有多数电子透亮区,线粒体超微结构严重损伤.HB-EGF干预组有少量线粒体肿胀,损伤较NEC模型组减轻.(3)NEC模型组回肠组织细胞色素C表达较对照组增强,差异有统计学意义(0.030±0.018与0.002±0.001,q=6.15,P＜0.01),HB-EGF干预组回肠组织细胞色素C表达(0.014±0.018)较NEC模型组减弱,差异有统计学意义(q=3.53,P＜0.05).NEC模型组的APAF-1表达较对照组增强(1.364±0.299与0.215±0.033,q=15.31,P＜0.05),AIF表达也增强(0.181±0.050与0.127±0.045,q=3.71,P＜0.05);与NEC模型组比较,HB-EGF干预组APAF-1的表达(0.455±0.123)减低(q=4.04,P＜0.05),AIF的表达(0.289±0.045)则明显增强(q=7.32,P＜0.05). 结论 HB-EGF能降低新生大鼠NEC发生率,其机制之一可能是通过下调APAF-1表达而减少新生大鼠线粒体途径细胞凋亡.     

Toll样受体2和4表达与原因不明复发性流产

母胎界面的免疫耐受对维持正常妊娠至关重要。Toll样受体2(TLR2)和TLR4是机体重要天然免疫受体分子之一,TLR2识别肽聚糖,TLR4识别内毒素脂多糖。通过信号转导机制引起核因子κB(NF-κB)等转录因子的活化并调节肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素12(IL-12)等的产生。越来越多的证据认为,这些细胞因子与不明原因复发性流产(URSA)Th1/Th2细胞因子失衡密切相关。探讨TLR2和TLR4在胎盘中的表达,及其在URSA中的可能作用。     

早产儿坏死性小肠结肠炎临床特点分析

目的　比较早产儿与足月儿坏死性小肠结肠炎 (necrotizingenterocolitis ,NEC)临床特点。　方法　回顾性分析 1994至 2 0 0 3年我所收治的早产NEC患儿 2 8例和足月NEC患儿 3 5例的临床表现、X线表现和实验室检查特点。　结果　早产儿组与足月儿组比较皮肤灰白 5 4% (15 / 2 8)和 2 6% (9/ 3 5 ) ,P <0 .0 5 )、肌张力低下 [4 6% (13 / 2 8)和 14 % (5 / 3 5 ) ,P <0 .0 1]等全身表现明显 ;肠鸣音减弱或消失比足月儿组多见 [5 7% (16/ 2 8)与 2 3 % (8/ 3 5 ) ,P <0 .0 1] ;代谢性酸中毒 [5 4% (15 / 2 8)和 2 3 % (8/ 3 5 ) ,P <0 .0 5 ]和血清尿素氮增高 [3 6% (10 / 2 8)和 14 % (5 / 3 5 ) ,P <0 .0 5 ]比例高。　结论　早产儿NEC病情严重 ,进展迅速 ,应该给予及时正确的处理。并对发病趋势、发病日龄、早期诊断和手术治疗进行了讨论。     

血浆D-乳酸水平与新生儿坏死性小肠结肠炎预后的关系

目的 探讨血浆D-乳酸水平与新生儿坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)预后的关系.方法 采用病例对照研究方法.选择2007年1月至2010年10月入住本院新生儿重症监护病房诊断为NECⅡ、Ⅲ期的早产儿104例(NEC组);同期因其他疾病入院的早产非NEC患儿104例(对照组),与NEC组匹配纠正胎龄、性别和出生体重,按1∶1比例进行配对.NEC组患儿于NEC确诊后24 h内,对照组患儿于相应日龄取血,采用酶联免疫吸附试验检测血浆D-乳酸水平,采用受试者工作特性曲线确定D-乳酸阳性标准.根据此标准将NEC组分为D-乳酸升高组与D-乳酸正常组,x2检验比较组间并发症及病死率.根据患儿病情转归将NEC组分为死亡组和存活组,t检验比较不同组间D-乳酸水平差异.结果 NEC组104例患儿中,NECⅡ期63例(60.6％),NECⅢ期41例(39.4％);存活88例(84.6％),死亡16例(15.4％).NECⅢ期组D-乳酸水平最高,为(35.4±29.1)μg/ml,其次是NECⅡ期组,为(29.5±16.2)μg/ml,对照组最低[(3.7±18.4)μg/ml],差异均有统计学意义(F=5.97,P＜0.05).受试者工作特性曲线分析显示,D-乳酸水平≥6 μg/ml为阳性标准,按此标准,NEC组血浆D-乳酸水平升高者87例(83.7％,87/104).D-乳酸水平升高者新生儿危重病例评分明显低于正常者[(80.9±22.6)分与(95.8±20.5)分,t=2.417,P＜0.05],而合并新生儿败血症的比例[48.3％(42/87)与5.9％(1/17),x2=11.538,P＜0.05]及病死率[27.6％(24/87)与5.9％(1/17),x2=7.146,P＜0.05]较高.NEC组死亡患儿与存活患儿D-乳酸水平[(43.2±13.5) μg/ml与(21.9±22.9) μg/ml,t=4.572,P＜0.05]、新生儿危重病例评分[(82.4±29.1)分与(90.6±21.3)分,t=2.409,P＜0.05]以及合并败血症的比例[68.8％(11/16)与38.6％ (34/88),x2=3.445,P＜0.05]差异均有统计学意义.结论 血浆D-乳酸水平与NEC预后相关,能较好地反映NEC患儿的病情及预后.     

The impact of oral glutamine supplementation on the intestinal permeability and incidence of necrotizing enterocolitis/septicemia in premature neonates

Objective.?To examine the impact of oral glutamine (Gln) supplementation on gut integrity and on the incidence of necrotizing enterocolitis (NEC)/septicemia of premature neonates.

Methods.?Preterm neonates (n?=?101, gestational age?<34 weeks, birth weight?<2000?g) were randomly allocated to receive from day 3 to day 30 postpartum, either oral Gln (0.3 g/kg/day, n?=?51-Gln group) or placebo (caloreen-isocaloric, n?=?50-control group). Intestinal permeability was determined from the urinary lactulose/mannitol recovery (L/M ratio) following their oral administration and assessed at three time points: day 2 (before first administration), day 7 and day 30 of life. The incidence of NEC and septicemia over the study period was also recorded.

Results.?A decrease of lactulose recovery at days 7 (p?=?0.001) and 30 (p?<?0.001) and a decrease of L/M ratio at day 7 (p?=?0.002) were observed only in the Gln group. Lactulose recovery and L/M ratio at day 7 (p?=?0.022 and p?=?0.004, respectively), as well as lactulose recovery (p?=?0.001), mannitol recovery (p?=?0.042), and L/M ratio (p?=?0.001) at day 30, were decreased in the Gln group as compared to controls. NEC and septicemia were lower in the Gln group at the end of the first week (p?=?0.009 and p?=?0.041, respectively) and up to the end of the study (p?<?0.001 and p?=?0.048, respectively).

Conclusion.?Oral Gln administration may have beneficial effects on intestinal integrity and the overall incidence of NEC/septicemia in preterm infants.