Juglone联合顺铂抑制食管癌EC1细胞增殖的研究

目的研究Pinl抑制剂Juglone与化疗药物顺铂（CDDP）单独及联合使用对食管癌EC1细胞增殖的抑制作用。方法使用不同浓度Juglone、CDDP或者两药联用处理食管癌EC1细胞后,应用MTT法测定两药单独或联合使用对食管癌EC1细胞增殖的影响,使用流式细胞仪检测其对EC1细胞周期的影响。结果 Juglone对EC1细胞的生长有明显的抑制作用,48 h细胞抑制率从11.5%上升到50.7%,具有显著的剂量效应。Juglone可造成食管癌细胞在G2/M＋S期的阻滞;CDDP可增加EC1细胞对于Juglone的敏感性,CDDP与Juglone合用,明显提高了EC1细胞的生长抑制率。结论 Juglone与CDDP联合能显著抑制食管癌EC1细胞的增殖。     

Juglone对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z细胞增殖及细胞周期的抑制作用

目的测定Pin1抑制剂(Juglone)对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z细胞生长增殖及细胞周期的影响,讨论Ju-glone的抗鼻咽癌肿瘤的作用效果。方法体外培养人鼻咽癌CNE-2Z细胞,采用MTT实验观察细胞生长增殖状况,流式细胞仪检测细胞周期。结果 MTT测定结果显示,Juglone对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z细胞生长有明显的抑制作用,并且随着时间的延长和作用浓度的升高,其抑制作用也逐渐增强;流式细胞仪分析检测结果显示,加入Juglone培养24 h后造成CNE-2Z细胞G1期阻滞,48 h后,CNE-2Z细胞G2/M期阻滞(P<0.01)。结论 Juglone有抑制鼻咽癌细胞增殖和细胞周期阻滞的作用,有望为鼻咽癌防治提供候选药物。     

稳定干扰Pin1基因的食管癌细胞株的筛选及其生物学特征

目的:筛选稳定干扰Pin1的食管癌细胞系,研究Pin1表达与食管癌细胞生物学特征的关系.方法:将针对Pinl1基因的shRNA(pmU6-Pin1)转染入EC1细胞,经G418加压筛选稳定表达Pin1小干扰RNA的细胞株,用免疫印迹法检测细胞中Pin1的表达,确定筛选细胞系的正确性.通过MTT实验以及流式细胞仪检测Pin1抑制对食管癌细胞增殖、凋亡的影响.结果:Western blot检测结果显示,Pinl蛋白表达被成功抑制,建立了稳定表达Pin1小干扰RNA的细胞株(shPin1).与正常EC1细胞比较,MTT实验和流式细胞术实验结果表明基因沉默Pin1抑制食管癌细胞增殖(抑制率为51.8%),诱导细胞凋亡(凋亡率为46.39%):并增加了食管癌细胞EC1对顺铂的敏感性,抑制食管癌细胞增殖以及诱导细胞凋亡的能力均有所增强,抑制率从23.5%上升到61.0%,凋亡率从26.10%上升到58.95%.结论:稳定干扰Pin1食管癌细胞系的建立为进一步研究Pin1在食管癌中的作用提供了研究平台:基因沉默Pin1增加了食管癌细胞对顺铂的敏感性.     

环氧合酶-2选择性抑制剂NS-398诱导食管癌细胞EC 9706凋亡及其机制的探讨

目的 观察环氧合酶-2(COX-2)选择性抑制剂NS一398对食管癌细胞株EC 9706增殖及凋亡的影响,砌究其对凋亡抑制蛋白Survivin和Caspase-3表达的影响,探讨NS-398诱导Ec 9706细胞凋亡的作用机制.方法 NS-398作用EC 9706细胞后,MTT法测定NS-398对人食管癌EC 9706细胞增殖的抑制率;DNA片段分析法和流式细胞仪检测细胞凋亡;免疫细胞化学检测Survivin和Caspase-3蛋白表达变化.结果 NS-398(10～100μmol/L)对EC 9706细胞生长有抑制作用,随浓度升高、时间延长抑制作用增强,并诱导EC 9706细胞凋亡,呈剂量-时间效应关系;NS-398可降佴Survivin蛋白表达,增加Caspase-3蛋白表达.结论 NS-398可诱导人食管癌细胞株EC 9706凋亡,其机制可能与下调Survivin表达及激活Capase-3表达有关.     

双氢青蒿素对肺癌细胞增殖的抑制作用

目的探讨双氢青蒿素对肺癌细胞生长增殖的抑制作用。方法用MTT法观察浓度为4、8、16、32、64、128、256μmol/L的双氢青蒿素对三种不同的肺癌细胞SPC-A-1、Calua-3、PC-14作用48 h的增殖抑制作用,同样用MTT检测29μmol/L的双氢青蒿素作用时间为12、24、48、72、96 h后的肺癌细胞增殖情况,经DNA ladder和流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果双氢青蒿素对三种肺癌细胞的抑制率从大到小依次为:SPC-A-1、PC-14、Calua-3。肺癌细胞SPC-A-1在双氢青蒿素的作用下细胞抑制率较PC-14、Calua-3肺癌细胞大,利用软件计算出细胞SPC-A-1、PC-14、Calua-3的IC50分别为28.9、46.9、78.6μmol/L。双氢青蒿素作用时间为12、24、48、72和96 h的细胞抑制率较0 h差异显著(P<0.01)。说明随着作用时间的加长,抑制增殖效果越强。29μmol/L的双氢青蒿素作用48 h后的肺癌细胞出现明显的类似梯子样条带,说明双氢青蒿素可以促进肺癌细胞的增殖。流式细胞仪结果表明,经药物作用后的SPC-A-1细胞的凋亡率较对照组显著增高(P<0.01),这表明双氢青蒿素抑制肺癌细胞SPC-A-1的增殖主要是通过诱导细胞凋亡所引起的。结论双氢青蒿素可通过诱导细胞凋亡抑制肺癌细胞增殖分化。     

PI3K/AKT抑制剂对肺腺癌细胞株生长的影响

目的检测磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K/AKT）特异性抑制剂Ly294002对肺腺癌细胞系XWLC-05增殖和凋亡的作用。方法 MTT法检测Ly294002对肺腺癌细胞XWLC-05体外细胞培养株诱导凋亡作用,流式细胞术测定不同条件下细胞的周期分布比例和细胞凋亡情况。结果 Ly294002对XWLC-05细胞株生长有抑制作用,但Ly294002需达到50μmol.L-1才能产生明显差异。Ly294002处理XWLC-05细胞24 h、48 h后G2/M期细胞相对增加,有统计学意义（P〈0.05）,凋亡细胞增加,但无统计学意义（P〉0.05）。结论 LY294002对肺腺癌细胞有抑制生长的作用,且抑制细胞增殖与导致细胞凋亡并无直接关系。     

奥曲肽诱导体外培养人胃癌细胞MGC-803凋亡的研究

目的研究不同浓度，不同作用时间奥曲肽（Oct）对体外培养胃癌细胞MGC-803的作用及可能机制．方法采用MTT比色法检测Oct对体外培养胃癌细胞生长的抑制作用．用DNA断片法和流式细胞仪观察了Oct对胃癌细胞凋亡的影响，扫描电镜和透射电镜同时显示了凋亡细胞的形态学特征．结果MTT比色法测得Oct对胃癌细胞增殖有明显的抑制作用，呈剂量相关性Oct能有效地诱导人胃癌细胞MGC-803凋亡．经Oct处理12h～48h的胃癌细胞，DNA琼脂糖电泳呈现典型的梯形条带（Ladder），电镜和流式细胞仪（FcM）检测出现典型凋亡特征结论Oct对胃癌MGC-803细胞生长增殖有抑制作用；能有效地诱导人胃癌细胞MGC－803凋亡；是潜在的抗癌剂     

MEK抑制剂U0126对食管癌Eca109细胞生长的影响

目的研究不同条件的MEK抑制剂U0126对食管癌Eca109细胞生长的影响。方法 Western-blot检测不同浓度的抑制剂U0126对ERK1/2表达的影响;MTT检测抑制剂U0126在不同的作用条件下,对食管癌Eca109细胞生长的影响并筛选出最佳的作用条件;流式细胞术检测U0126作用后细胞的凋亡情况。结果 Western-blot检测不同浓度的U0126对ERK1/2表达抑制作用,提示最佳抑制浓度为50μmol。MTT检测结果为不含胎牛血清（FCS）的RPMI1640配制U0126,作用1小时对食管癌细胞的生长抑制最佳。流式细胞术检测显示细胞凋亡率为6.5%。结论不同作用条件下的抑制剂U0126,对食管癌细胞生长的影响不同。     

拓扑替康对食管癌EC9706细胞自噬和凋亡的影响

目的探讨拓扑替康(TPT)对食管鳞癌细胞株(EC9706)自噬和凋亡的影响。方法使用20 mg/L TPT和(或)5 mmol/L 3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理人食管鳞癌细胞EC9706,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测TPT对食管癌EC9706细胞生长的抑制作用,单丹磺酰尸胺(MDC)法检测TPT对EC9706细胞自噬水平的影响,采用流式细胞仪技术检测TPT对EC9706细胞凋亡的影响,Western印迹测定TPT对EC9706细胞自噬相关蛋白Beclin1和凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响。结果流式细胞仪检测结果显示,TPT作用于EC9706细胞48 h后,TPT组、3-MA组及TPT+3-MA组细胞凋亡结率分别为(32.45±2.79)%、(7.58±1.12)%及(48.69±3.51)%。MDC染色结果显示TPT能够诱导细胞内自噬囊泡的出现,而3-MA能显著抑制这一现象。Western印迹结果显示对照组、TPT组、3-MA组及TPT+3-MA组Beclin1和Caspase-3蛋白的相对灰度值分别为0.62±0.06、0.91±0.12、0.47±0.04、1.04±0.08和0.54±0.05、0.84±0.11、0.42±0.03、0.71±0.07。结论 TPT康可以诱导食管鳞癌细胞自噬和凋亡的发生,而3-MA能够通过抑制自噬上调Caspase-3的表达增强对食管癌细胞的杀伤作用。     

HSP90抑制剂17-DMAG对胃癌细胞株SGC-7901增殖及凋亡的影响

目的:探讨热休克蛋白90(HSP90)功能特异性抑制剂17-DMAG对胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的影响.方法:体外培养人胃癌细胞SGC-7901,以不同浓度的17-DMAG处理后采用MTT法检测SGC-7901细胞的生长抑制情况,流式细胞仪碘化丙啶(PI)染色分析细胞周期分布,流式细胞仪及Annexin V-FITC试剂盒监测17-DMAG对胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响.结果:不同浓度的17-DMAG对人胃癌细胞SGC-7901有明显的生长抑制作用,各组之间比较(P＜0.01),且呈时效量效依赖关系(F=241.313,246.856,均P＜0.001).17-DMAG作用24 h后胃癌细胞株SGC-7901呈现G2/M期阻滞,试验组与对照组比较(F=231.991,P＜0.001),呈浓度依赖关系.17-DMAG处理胃癌细胞SGC-7901 24 h早期凋亡细胞增加,48 h晚期凋亡细胞增加.结论:17-DMAG可明显抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖,使胃癌细胞SGC-7901阻滞于G2/M期,诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡.     

硒蛋氨酸诱导食管癌细胞株凋亡的实验研究

目的：探讨硒蛋氨酸对食管癌细胞系EC 9706凋亡的影响。方法：采用MTT比色法，细胞生长曲线描绘观察硒蛋氨酸对食管癌细胞系EC 9706增殖的影响。采用流式细胞仪观察硒蛋氨酸对EC 9706细胞诱导其凋亡的作用及对细胞周期的影响。琼脂糖凝胶电泳法检测DNA ladder。结果：硒蛋氨酸呈时间、剂量依赖性方式抑制EC 9706细胞增殖，改变细胞周期分布，增加G0／G1期细胞比例，诱导细胞凋亡。结论：硒蛋氨酸可能通过影响细胞周期分布和诱导细胞凋亡，从而抑制EC 9706细胞增殖。硒蛋氨酸可能是预防和治疗食管癌的一种新制剂。     

体外研究腺苷酸活化蛋白激酶对食管鳞癌EC9706细胞增殖及凋亡的影响

目的通过体外研究观察腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的激活剂AICAR对人食管癌EC9706细胞的增殖及凋亡影响。方法 AICAR以不同浓度作用于人食管癌EC9706细胞,通过光学显微镜观察不同时间后EC9706细胞的生长状态,并用MTT方法检测其吸光度值及细胞存活率的变化,流式细胞术检测其细胞凋亡率情况。结果随着AICAR浓度的增加,细胞的死亡数目明显增加。MTT法检测结果表明,AICAR能够抑制EC9706细胞增殖,并呈现出良好的浓度依赖性。流式细胞术检测结果显示,不同浓度的AICAR干预24 h后早期凋亡率、晚期凋亡率及总凋亡率均高于对照组,但仅有总凋亡率有统计学意义(P0.01)。结论 AMPK可以抑制人食管癌EC9706细胞的生长增殖,并可诱导EC9706细胞凋亡。     

miR-451对食管癌EC9706细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响

目的:探讨miR-451对食管癌EC9706细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响.方法:化学合成miR-451mimics,脂质体包裹转染EC9706细胞为miR-451组,同时设立无关序列(Scramble-miR)对照组、脂质体对照组和空白对照组.转染后48h,荧光定量RT-PCR检测miR-451表达量的变化,Westernblot检测Bcl-2、AKT和磷酸化AKT蛋白表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力的改变;MTT法检测转染后l、2、3、4、5、6d各组细胞增殖率.结果:miR-451组的miR-451表达水平显著上调(P<0.01,F=69.26),为空白对照组的15.84倍;miR-451组细胞Bcl-2、AKT和磷酸化AKT蛋白表达均显著下调(P<0.05,F=5.83);miR-451组细胞凋亡率为12.07%±1.12%,与3个对照组比较显著升高(P<0.01,F=26.72);miR-451组平均侵袭细胞数为47.4±7.4,与3个对照组比较显著降低(P<0.01,F=34.55).miR-451组细胞的生长在转染后2d出现显著抑制(P<0.05,F=5.95),并且随时间的延长而日益显著.结论:上调miR-451表达可抑制食管癌EC9706细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡.     

5-Aza-CdR对人食管癌细胞株中T-cadherin基因表达和细胞增殖的影响

背景：T-cadherin在肿瘤的发生中可能扮演肿瘤抑制基因的角色．在食管癌等多种肿瘤中的表达明显下降。目的：探讨去甲基化制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对人食管癌细胞株EC109中T—cadherin基因表达和细胞增殖的影响。方法：常规培养人食管癌细胞株EC109．并分为5μmol／L5-Aza-CdR组和对照组。以甲基化特异性PCR（MSP）法检测T-cadherin基因启动子区甲基化状态．RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测T-cadherinmRNA和蛋白表达,MTr法检测EC109细胞增殖。结果：对照组EC109细胞中T-cadhefin基因启动子区呈异常甲基化状态．5-Aza-CdR干预可逆转甲基化状态。与对照组相比,5-Aza-CdR组T-cadherin基因mRNA和蛋白表达均显著增高（P〈0．01）．细胞增殖明显受到抑制。结论：去甲基化制剂5-Aza-CdR通过逆转食管癌细胞中T-cadherin基因启动子区甲基化状态来增强其表达．并抑制肿瘤细胞增殖．     

脐血树突状细胞介导的食管癌疫苗实验研究

目的　用杂交瘤技术制备脐血树突状细胞 (DC)和食管癌细胞融合疫苗 ,分析其生物学特征及体外诱导特异性免疫应答的能力。方法　 2 0 0 2 - 0 12 0 0 3- 0 3汕头大学医院第一附属医院分离脐血CD3 4 干细胞并诱导扩增为成熟DC ,并与EC10 9细胞融合 ,免疫磁珠法筛选EC10 9 DC ;流式细胞术鉴定疫苗表型 ;绘制疫苗生长曲线 ;MTT法测定瘤苗诱导淋巴细胞增殖能力及体外特异性免疫应答能力。结果　疫苗可体外生长 ,高表达CD80 、CD83 和CD86,并能有效刺激淋巴细胞增殖反应 ,体外诱导细胞毒T细胞 (CTL)对EC10 9的杀伤活性显著高于对照组 (P <0 0 5 )。结论　EC10 9 DC具备了刺激免疫细胞活化的分子表型 ,能在体外刺激淋巴细胞增殖和诱导特异性CTL杀伤作用     

Effects of Helicobacter pylori on endothelial cell proliferation and chemotaxis

BACKGROUND/AIM: Helicobacter pylori is associated with an increased risk of peptic ulcer disease development and recurrence. Ulcer healing is dependent upon angiogenesis, requiring endothelial cell (EC) proliferation and chemotaxis. This study determined whether extracts of H. pylori affected EC proliferation and/or chemotaxis in vitro. METHODS: The effects of water and broth extracts of three genotypically different strains of H. pylori and of single strains of Campylobacter jejuni and Escherichia coli on human dermal microvascular EC (HuDMEC) and human umbilical vein EC (HUVEC) were assessed. Tetrazolium dye (MTT) proliferation, dual staining cell viability, flow cytometry, and microchemotaxis assays were performed. RESULTS: H. pylori (all strains) and C. jejuni inhibited HuDMEC (p < 0.01) and HUVEC (p < 0.01) proliferation and decreased the proportion of HUVECs in the S phase of the cell cycle. E. coli had no effect on EC proliferation. The levels of vascular endothelial growth factor stimulated chemotaxis were significantly greater (p < 0.01) than the levels of basal migration for both control and extract-treated ECs. However, none of the bacterial extracts affected EC basal migration or chemotaxis. CONCLUSION: H. pylori extracts inhibit HuDMEC and HUVEC proliferation in vitro by a cytostatic, strain-independent mechanism. A similar antiproliferative effect of C. jejuni was observed. Our findings suggest that both H. pylori and C. jejuni have the ability to inhibit one of the key stages of angiogenesis which may have implications in peptic ulcer disease.     

EGCG对LoVo和SW480结肠癌细胞株的作用及对Notch1与Notch2基因表达的影响

目的:探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对结肠癌细胞株LoVo细胞和SW480细胞增殖的抑制作用,研究其对Notch1与Notch2的基因表达的影响,方法:体外培养LoVo细胞和SW480细胞,采用不同浓度的EGCG(10、20、35 mg/L)对其进行干预,MTT法检测EGCG对LoVo细胞和SW48...     

MTT法观察三七总甙对NIH/3T3成纤维细胞毒性作用与增殖的影响

目的：ＭＴＴ法观察三七总甙的体外细胞毒性与抗肝纤维化活性。方法：传代培养ＮＩＨ／３Ｔ３ 细胞,不同浓度接种细胞、不同血清浓度培养、不同ＭＴＴ用量等观察ＭＴＴ的转化Ａ５７０值,建立合适的试验条件。分别以无血清或含５％ 小牛血清的１６４０ 培养液稀释不同浓度的三七总甙或三七浸膏冻干粉,温育细胞１８ ｈ,测定ＭＴＴ转化Ａ５７０ 值,观察三七总甙及三七对ＮＩＨ／３Ｔ３ 细胞的毒性作用与对细胞增殖的影响。结果：细胞数量与ＭＴＴ Ａ５７０值明显正相关,在一定范围内血清温育浓度及ＭＴＴ用量与ＭＴＴ Ａ５７０值也呈明显正相关。三七总甙浓度＞ １．６ ｍ ｇ／ｍ ｌ时,对细胞有明显毒性作用,其ＩＤ５０ 约为０．４ ｍ ｇ／ｍ ｌ,对小牛血清刺激的细胞增殖有明显的抑制作用。与三七冻干粉相比,三七总甙对细胞的毒性作用与增殖抑制影响均较明显。结论：三七总甙能抑制成纤维细胞增殖,具有体外抗肝纤维化作用,可能是三七的抗肝纤维化的主要药效成分。