大黄乙醇提取物的体外抗新城疫病毒作用

目的：研究大黄乙醇提取物的抗新城疫病毒（NDV）作用。方法：采用体外细胞培养的方法研究大黄乙醇提取物对NDV感染的拮抗作用。结果：20g/L剂量大黄乙醇提取物对BHK21细胞未有任何毒性作用；0.5g/L大黄对NDV所致CPE有明显的抑制作用；大黄可预防NDV感染，并对NDV的复制动力学有明显影响。结论：大黄乙醇提取物具有明显的抗NDV作用。     

大黄乙醇提取物体外抗麻疹病毒作用实验研究

目的：研究大黄乙醇提取物体外抗麻疹病毒的作用及其途径。方法采用组织细胞培养法,使用麻疹病毒野毒株、标准株和疫苗株,采用抗病毒生物合成组、直接杀灭组、预防作用组3种加药方式,在Vero‐SLAM细胞上观察大黄乙醇提取物抗麻疹病毒作用。结果大黄乙醇提取物在Vero‐SLAM 细胞上对不同来源的麻疹病毒株均具有明显的抗病毒生物合成和直接杀灭作用,药物的最小有效浓度（MIC ）为156μg／ml ,最大无毒浓度（0％ toxility concentration ,TC0）为5000μg／ml ,治疗指数（ TI ）为32。结论大黄乙醇提取物在体外对麻疹病毒具有显著抗病毒作用,安全性较高,应用前景广泛。     

新城疫病毒抗恶性肿瘤研究进展

溶瘤病毒疗法是临床治疗恶性肿瘤的新突破,其通过感染肿瘤细胞,引起病毒性细胞病变反应并诱发宿主抗肿瘤免疫,从而选择性杀死肿瘤细胞。新城疫病毒(NDV)是一种禽副黏病毒,对小鼠和人的抗肿瘤和免疫刺激作用已在临床前及临床研究中被证实,是最具潜力的溶瘤病毒之一。随着反向遗传学技术的不断成熟,使用该技术构建的以NDV为载体的插入外源基因重组NDV在免疫活性肿瘤模型中的研究成为热点。重组NDV不但可以稳定表达外源治疗基因,还可以增强病毒杀伤肿瘤和诱导宿主抗肿瘤免疫应答的能力。但其治疗恶性肿瘤的效果未来需大量临床试验验证。     

硫酸化人参皂苷体外抗新城疫病毒作用

目的 观察硫酸化人参皂苷（sGS）抗新城疫病毒的活性。方法 采用氯磺酸-吡啶法制备sGS,红外光谱仪对sGS结构进行分析,MTT法检测硫酸化修饰前后人参皂苷（GS）预先给药、接种病毒后给药、与病毒同时给药3种不同给药方式的抗新城疫病毒活性。结果 硫酸化修饰后人参皂苷在1 144、807 cm^?1有2个特征吸收峰,表明硫酸基已经和糖链结合成酯。预先给药或病毒接种后给药,加入一定质量浓度范围内的GS和sGS的CEF培养液的 A₅₇₀值均显著大于未给药的病毒组（P＜0.05）,且GS与sGS的抗病毒活性无显著差异（P＞0.05）;GS和sGS与病毒同时给药,两药在一定质量浓度范围内的A₅₇₀值也均显著大于未给药的病毒组（P＜0.05）,且sGS的最大病毒抑制率显著高于GS。结论 GS经硫酸化修饰后可提高其抗新城疫病毒活性,主要表现为提高其直接杀灭病毒的作用。     

紫外线灭活新城疫病毒体外抗肿瘤作用的研究

目的比较新城疫病毒（NDV）和紫外线灭活的新城疫病毒（NDV-UV）在体外对肿瘤细胞的直接杀伤作用。方法用NDV和NDV-UV作用于喉癌细胞株Hep一2细胞，用MTT法测定病毒的杀瘤活性并测定培养上清液病毒的血凝效价。结果NDV和NDV-Uv对Hep一2细胞均有杀伤作用，且随着病毒与肿瘤细胞作用时间的延长，二者杀瘤率逐渐增强，病毒与细胞作用48h后。NDV对Hep一2细胞的杀伤作用较NDV-UV组强，NDV组可测出血凝效价，且随着病毒与细胞作用时间的延长，NDV组血凝效价逐渐升高，而NDV-UV组血凝效价始终未测出。结论NDV和NDV-UV能直接杀伤肿瘤细胞，NDV能在肿瘤细胞内复制并杀伤肿瘤细胞，而NDV-UV不能在肿瘤细胞内复制亦能杀伤肿瘤细胞，提示NDV的杀瘤作用并不完全依赖于病毒的复制，NDV-UV可作为安全有效的生物调节剂用于肿瘤的生物治疗。     

新城疫病毒对人类大肠癌细胞的杀伤作用研究

目的：研究NDV（F48E9和La Sota株）体外感染人类大肠癌细胞导致细胞死亡的方式。方法：实验采用处于对数生长期的人类大肠癌细胞。首先采用MTT法测定NDV对人类大肠癌细胞的杀伤活性。当细胞铺满30%培养瓶时,向细胞中加入10、20和40倍稀释的新城疫病毒,37℃感染1小时,继续培养24和48小时后进行进一步分析。通过倒置显微镜、HE染色、AO-EB荧光染色、透射电镜和琼脂糖凝胶电泳法从形态学和生物化学角度判断细胞死亡方式。结果：MTT法表明NDV可体外杀伤人类大肠癌细胞,且强毒株F48E9的杀伤活性强于弱毒株La Sota。细胞感染病毒后24小时即可表现出明显的病理变化：通过倒置显微镜和HE染色可见细胞融合及多核巨细胞,AO-EB荧光染色可见橙黄色荧光聚集于核膜边缘,透射电镜表现出典型的细胞凋亡形态学改变,琼脂糖凝胶电泳可见典型DNA ladder。上述变化在细胞感染病毒48小时后更加明显。结论：NDV可通过凋亡方式诱导人类大肠癌细胞死亡,且强毒株F48E9的杀伤活性高于弱毒株La Sota。     

新城疫病毒体外诱导S180细胞凋亡的实验研究

目的：探讨新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）体外对S180肉瘤细胞（简称S180）生长有无抑制和诱导细胞凋亡作用。方法：取培养至对数生长期的S180细胞浓度为5×104/mL和1×106/mL分别接种于96孔板和50mL培养瓶中,加入不同浓度的NDV（1∶20、1∶10、1∶5）作用24h,分别用MTT法检测NDV对S180瘤细胞的生长抑制作用,荧光显微镜和琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果：经上述不同浓度的NDV作用24h,对S180细胞生长的抑制率依次为10%、26%、39%,各实验组吸光度值（A490）与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。荧光显微镜观察实验组培养的S180瘤细胞,出现细胞核固缩及凋亡小体,琼脂糖凝胶电泳见DNA梯形条带。结论：NDV对体外培养S180细胞增殖有明显抑制作用,可诱导S180细胞凋亡。     

新城疫病毒疫苗对人卵巢癌细胞株治疗作用的研究

目的：研究新城疫病毒疫苗（ATV-NDV）对人卵巢癌细胞株体外生长的抑制作用.方法：制备人卵巢癌细胞株3A0 ATV-NDV瘤苗,将不同浓度的ATV-NDV、白细胞介素12（IL-12）、白细胞介素15（IL-15）、ATV-NDV＋IL-12、ATV-NDV＋IL-15分别与正常人外周血淋巴细胞混合培养,MTT法测定其刺激淋巴细胞增殖的程度及对肿瘤细胞的生长抑制率；HE染色法观察效靶比为50：1时活化的淋巴细胞与3A0细胞共同培养24～96 h后细胞形态学的变化.结果：活化的淋巴细胞与靶细胞共培养可杀死肿瘤细胞,并具有时效性（P＜0.05）；不同细胞间细胞生长抑制率（GIR）差异无显著性（P＞0.05）；IL-15、IL-12与ATV-NDV在活化淋巴细胞方面具有协同作用，与单独作用差异有显著性（P＜0.01）；IL-15与ATV-NDV作用差异无显著性（P＞0.05）。淋巴细胞作用48 h后3AO细胞即出现凋亡形态。结论：经ATV-NDV、IL-12、IL-15、ATV-NDV＋IL-12、ATV-NDV＋IL-15混合培养的正常人外周血淋巴细胞可有效地抑制3AO细胞株的生长,并具有时间、浓度依赖性,其作用机制是诱导细胞凋亡。     

新城疫病毒体内外抗肿瘤作用的研究

目的 :了解新城疫病毒体内外抗肿瘤作用。方法 :用小鼠肉瘤 1 80 ( S1 80 )、小鼠肝癌 ( Hep)为瘤株 ,对新城疫病毒进行体内外抗肿瘤药效试验 ,观察其对荷瘤小鼠免疫器官重量的影响。结果 :新城疫病毒对小鼠移植性 S1 80实体瘤有明显抑制作用 ,可延长 Hep腹水癌小鼠生命 ,对 S1 80和 Hep瘤细胞的体外存活有明显抑制 ,可增加荷瘤小鼠胸腺重量。结论 :新城疫病毒在实验条件下有一定抗肿瘤作用 ,能延缓免疫器官衰退。     

新城疫病毒免疫治疗肿瘤研究进展

肿瘤是严重威胁人类健康的疾病之一，有关肿瘤治疗方面的研究是目前医学研究领域的热点。利用病毒来治疗肿瘤可以追溯到20世纪的早期，当时许多有意义的发现引起了人们的极大兴趣：许多肿瘤患者在自然感染病毒后出现肿瘤缓解和自愈现象。由此，便开始了将不同病毒用于临床治疗的尝试，尤其在20世纪50～60年代，利用病毒治疗肿瘤的研究更是得到迅速发展。     

新城疫病毒疫苗对小鼠S180肉瘤抑瘤作用的实验研究

目的 研究新城疫病毒疫苗对小鼠Ｓ１８０肉瘤细胞的作用。方法 采用昆明种小鼠皮下移植性Ｓ１８０肉瘤模型,Ⅰ组瘤体内注射ＰＢＳ液Ⅱ,Ⅲ组瘤体内注射ＮＤＶ疫苗（Ⅱ组在接种Ｓ１８０肉瘤前１周皮下注射ＮＤＶ疫苗）,分２次解剖取材后光镜,电镜观察。结果ＮＤＶ颗粒附着在瘤细胞表面,瘤组织大片坏死,坏死周边部有炎细胞浸润,并可见凋亡小体。     

新城疫病毒联合替莫唑胺对胶质瘤细胞生物学行为的影响

目的 探讨新城疫病毒（NDV）联合替莫唑胺（TMZ）对脑胶质瘤U87MG细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法 将脑胶质瘤U87MG细胞随机分为对照组、药物组、病毒组和联合组。采用MTT法、划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测NDV、TMZ和二者联合使用对U87MG细胞增殖、迁移和侵袭的影响。采用qRT-PCR法检测不同组U87MG细胞中MMP-2、caspase-3和caspase-9的表达,使用Western blot法检测不同组U87MG细胞中MMP-2的表达。结果 ①MTT法结果显示,与对照组相比,其余3组细胞增殖率显著降低,且呈剂量依赖,联合组细胞增殖抑制率高于二者单用,差异有统计学意义（P<0.05）。②划痕实验结果显示,24 h后病毒组和联合组细胞迁移率低于对照组及药物组,差异有统计学意义（P<0.05）。③侵袭实验结果显示,联合组侵袭细胞数低于其余3组,差异有统计学意义（P<0.05）。④qRT-PCR结果显示,处理24 h后病毒组及联合组细胞caspase-3表达高于对照组及药物组,处理48 h后联合组细胞MMP-2表达量低于对照组及药物组,差异有统计学意义（P<0.05）。⑤Western blot结果显示,与对照组相比,病毒组及联合组MMP-2蛋白表达下调,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 NDV联合TMZ可显著抑制U87MG细胞增殖、迁移、侵袭,并在一定程度上促进细胞凋亡。     

新城疫病毒对人前列腺癌细胞LNCaP免疫性细胞死亡标志物表达的影响

目的　探讨新城疫病毒（NDV）能否诱导人前列腺癌细胞LNCaP免疫性细胞死亡(ICD)标志物的表达。方法　病毒滴度和蛋白质免疫印迹（Western Blot,WB）检测NDV在细胞内的复制情况;CCK-8法检测细胞增殖情况;蛋白质免疫印迹（Western Blot,WB）检测细胞上清中的热休克蛋白70/90（HSP70/90）及高迁移率族蛋白1(HMGB1);流式细胞术和免疫荧光检测细胞膜上钙网蛋白(calreticulin,CRT)表达量;荧光素酶法检测细胞外ATP的释放。结果　NDV可以在LNCaP细胞内发生复制,并随着时间的增加而增加,P<0.05。NDV感染细胞的增殖能力较未感染组随时间逐渐降低,P<0.001。NDV感染细胞较未感染细胞,细胞上清中HSP90的表达明显增加,并呈时间依懒性,在细胞上清中可以检测到HSP70和HMGB1的表达。两组细胞的裂解液中HSP70/90和HMGB1的表达未有统计学差异,P＞0.05。NDV感染后,细胞表面CRT表达阳性率较未感染组显著增加,差异有统计学意义,P<0.001。另外,病毒感染细胞较未感染组向外释放ATP增加,差异有统计学意义,P<0.05。结论　NDV可诱导人前列腺癌细胞发生免疫性细胞死亡,为溶瘤病毒NDV结合当前免疫疗法和化疗治疗前列腺癌提供了理论依据。     

大黄蒽醌类化合物体外抗流感病毒作用的研究

目的:探讨大黄蒽醌类化合物(RAA)在细胞培养中抗流感病毒的作用。方法:采用细胞培养技术,以病毒唑为阳性对照药,比较观察大黄蒽醌类化合物对流感病毒引起的细胞病变(CPE)的抑制作用。结果:大黄蒽醌类化合物半数中毒浓度(TC50)为226.1μg/m l,其抗流感病毒的半数有效浓度(IC50)为122.4μg/m l,治疗指数(T I)为1.9,且对流感病毒抑制作用存在明显的量效反应关系。结论:大黄蒽醌类化合物在M DCK细胞中对流感病毒有抑制作用。     

新城疫病毒HN基因真核表达质粒的构建及其抗肿瘤作用的初步研究

构建新城疫病毒血凝素神经氨酸酶基因真核表达质粒,并初步探索其在抗肿瘤治疗中的机制及应用价值。方法：用ＲＴ－ＰＣＲ从ＮＤＶ中克隆ＨＮ ｃＤＮＡ,并构建ＨＮ的真核表达载体,转染ＣＯＳ－７细胞表达,注射至小鼠Ｂ１６黑素瘤模型,检测其抗肿瘤作用。结果成功地克隆了ＮＤＶ ＨＮ ｃＤＮＡ,所构建的ｐｃＤＮＡ３－ＨＮ有良好的表达,动物实验显示,ｐｃＤＮＡ３－ＨＮ有增强荷瘤小鼠ＣＴＬ,ＮＫ杀伤活性的作用。结论ＮＤ     

大黄提取物保护脂多糖诱导的内皮细胞的作用研究

摘要 目的 内皮细胞损伤是脓毒症炎症发生发展过程中的关键环节。中药大黄被认为在脓毒症治疗中可能有良好的应用前景,但其在脓毒症内皮保护中的作用还不明确。我们以脂多糖（LPS）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）作为脓毒症内皮损伤的模型,研究大黄提取物对内皮细胞的保护作用。 方法 使用大黄提取物处理1μg/mL LPS处理的HUVEC细胞; CCK-8检测LPS处理后HUVEC增殖;ELISA比较大黄提取物对HUVEC的血管内皮生长因子（VEGF）和血管生成素（Ang）的分泌变化;WB 研究大黄提取物对 NF-κB和ERK信号通路激活的作用。结果 HUVEC在用1μg/mL 的LPS处理后,MTT测到的吸光度与空白对照组相比有明显下降（0.36±0.02 比 0.65±0.02,P<0.01）;使用1μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL或40μg/mL大黄提取物治疗LPS诱导的HUVEC,吸光度分别为0.40±0.03、0.44±0.03、0.52±0.03、0.55±0.04、0.57±0.03或0.57±0.02,其中大于5 μg/mL的大黄提取物组与LPS处理组相比P均<0.01。5μg/mL大黄提取物处理组与单纯LPS处理组相比,VEGF分泌下降（240.92±3.09 pg/mL 比 283.59±1.38 pg/mL,P<0.01）,Ang1分泌上升（115.64±0.61 pg/mL 比 104.30±2.38 pg/mL,P<0.05）,Ang2分泌下降（105.40±1.40 pg/mL 比 118.79±6.81 pg/mL,P<0.05）。同样,5μg/mL大黄提取物处理组与单纯LPS处理组相比,Ang1的基因表达上升（0.77±0.10 比 0.35±0.04,P<0.01） ,Ang2的基因表达下降（1.76±0.09 比 2.30±0.37,P<0.05）。5μg/mL大黄提取物处理后,pERK和p-p65明显下降。结论 大黄提取物可以保护脂多糖诱导的内皮细胞损伤和功能异常。     

新城疫病毒对体外培养人膀胱癌EJ细胞凋亡作用机制研究

目的探讨新城疫病毒(NDV)对体外肿瘤细胞的抑制作用机制。方法以人膀胱癌EJ细胞株为靶细胞,观察NDV对人膀胱癌EJ细胞的作用。结果NDV病毒能作用于体外培养膀胱癌细胞,光镜下细胞的贴壁率和生存率显著下降,电镜下可见到凋亡典型形态结构,TUNEL方法检测膀胱癌细胞有大量凋亡,新城疫病毒作用膀胱癌细胞24h凋亡细胞阳性指数(AI)为9.9%,48h凋亡细胞阳性指数(AI)为17.8%。免疫组化检测膀胱癌细胞有p53、bax、Fas、Fas-L及细胞因子TGFβ1表达增加而原癌基因bcl-2的表达降低从而诱导膀胱癌细胞凋亡。结论NDV病毒是一种有效抗肿瘤细胞的病毒,在体外具有明显的抑制肿瘤细胞作用。     

新城疫病毒对TSCCa细胞survivin表达及细胞周期的影响

目的 研究新城疫病毒(NDV)对人舌鳞癌TSCCa细胞survivin表达及细胞周期的影响.方法 通过NDV体外感染人舌鳞癌TSCCa细胞,MTT方法 检测TSCCa细胞的生长情况;采用RT-PCR和Western bloting检测survivin表达变化;流式细胞术分析检测NDV感染后TSCCa细胞分裂周期各时相的变化及细胞凋亡情况.结果 NDV感染后TSCCa细胞降低survivin表达,细胞凋亡率增加,S和G2/M期细胞减少,增殖指数(PI)降低,与阴性对照组比较有显著性差异(P<0.01).结论 NDV感染可抑制TSCCa细胞survivin的表达,影响细胞周期,诱导细胞凋亡.