生物人工肝细胞材料研究进展

生物人工肝是治疗肝功能衰竭的有效方法.肝细胞是生物人工肝系统的核心,生物人工肝的肝支持作用完全依赖于所用肝细胞的特异性生物学功能.生物人工肝中使用的肝细胞来源主要有人源性肝细胞、异种肝细胞、肝细胞株等.近20年来,虽然对各种来源的肝细胞进行了广泛和深入研究,但是生物人工肝细胞材料的来源问题至今未能得到满意解决.文章综述此方面的最新研究进展.     

生物人工肝细胞材料研究进展

生物人工肝 (ｂｉｏａｒｔｉｆｉｃｉａｌｌｉｖｅｒ ,ＢＡＬ)由反应器和细胞材料两大部分组成 ,前者为细胞成分提供生长、代谢场所 ,后者为ＢＡＬ提供特异性代谢功能。用于ＢＡＬ的细胞材料包括肝实质细胞和肝非实质细胞 (如内皮细胞、星状细胞等 )。鉴于细胞材料在ＢＡＬ中的重要作用 ,其研究一直颇受国外学者的重视 ,并且正在取得迅速进展。本文将这一领域近两年的研究进展作一综述。1　肝实质细胞肝细胞是ＢＡＬ的主要生物成分 ,在ＢＡＬ中起核心作用 ,ＢＡＬ的支持作用主要来源于肝细胞的生物代谢功能。用于ＢＡＬ的肝细胞有人肝细胞、…     

生物型人工肝肝细胞培养系统的研究进展

作为暴发性肝功能衰竭 (fulminanthepaticfailure,FHF)有效治疗手段 ,生物型人工肝 (Bioartificialliver,BAL)正在不断的发展[1～ 3 ] ,肝细胞作为其生物成分是BAL发展的关键因素 ,肝细胞保持分化特性及生理功能依赖于细胞与细胞、细胞与细胞外基质相互作用及细胞外基质等多种因素 ,长期以来国内外学者不断的进行研究 ,建立各种培养系统以使培养环境最大限度的接近体内生理环境 ,提高培养肝细胞的活性及增殖分化能力 ,本文就BAL细胞培养系统的研究现状综述如下。1　肝细胞来源包括人的肝细胞、异种肝细胞及所谓永生化 (immor taiized)…     

适用于生物人工肝的3种不同肝细胞的增殖能力及代谢功能的比较研究

目的 比较Huh7细胞、HepLi3细胞与C3A细胞的增殖能力及合成、代谢功能,评估其作为生物人工肝细胞源的潜力.方法 在同样的培养条件下,观察3种肝细胞的形态和增殖能力,检测肝细胞功能相关基因的表达水平,比较3种肝细胞白蛋白、尿素合成功能及代谢功能,评估肝衰竭血浆对肝细胞活性的影响.结果 3种肝细胞均具有良好的增殖能...     

生物人工肝细胞材料肝细胞株的研究进展

0引言 肝细胞是生物人工肝支持系统的核心原材料,生物人工肝对肝衰竭患者的肝支持作用依赖于所用肝细胞的生物学功能．无论是动物肝细胞还是人肝细胞,在体外培养时均存在生长条件要求严格、存活时间有限、传代困难等缺点．采用永生化程序建立肝细胞株就成为解决生物人工肝细胞来源的重要途径,而永生化的人肝细胞株则可为生物人工肝提供取之不尽的细胞源．现就这一方面的研究进展综述如下．     

生物人工肝中肝细胞材料的研究及应用现状

近年来，生物人工肝的相关研究受到广泛关注，其核心材料肝细胞的研究一直受到重视。作者就此领域的研究及应用情况作回顾性综述。     

培养人肝细胞用于生物人工肝的初步研究

探讨培养人肝细胞与肝非实质细胞用于体外生物人工肝支持系统及其对暴发性肝衰竭进行支持治疗的可能性。方法：首先将由简易体外两步灌流法分离获取的肝细胞，肝非实质细胞进行限制贴壁条件下的混合培养。然后置空心纤维型生物反应器和辅助循环系统组成的ＥＢＬＳＳ，对无肝模型犬进行人工肝支持结果：分离所得成活率高达９４％以上的肝细胞，肝非实质细胞经定时反复旋转振荡后形成多细胞球形聚集体，浮航天工业部工保持良好的形态特     

基于生物人工肝细胞材料研究新进展

1986年Demetrion教授首先提出生物人工肝（bioartificial liver,BAL）,它由微载体粘附的肝细胞和人工解毒装置共同组成的体外肝灌流系统,能发挥肝细胞合成并结合胆红素和合成肝特异性蛋白的作用[1]。BAL是以人工培养的肝细胞为基础构建的体外生物反应装置,是当前体外人工肝支持系统研究领域的主流,主要由肝细胞来源、     

加强我国生物人工肝的研究

尽管传统对症支持疗法有了长足进步 ,肝衰竭的病死率仍居高不下。国外报道暴发性肝衰竭 (ＦＨＦ)病死率在 80 %左右 ;国内由于重症肝炎诊断标准与国外不一致 ,具体应用中亦各不相同 ,各家报道的病死率高低不一 ,但如以相同标准比较 ,病死率不应比西方国家低[1] 。为此 ,国外学者一直致力于人工肝和肝移植治疗的研究。肝移植被认为是此类患者最有效的治疗手段 ,但存在以下问题 :①供体不足问题突出 ,众多患者在等待供体期间死亡 ;②肝移植手术生命危险性高 ;③须终生使用免疫抑制药物 ;④易发生各种致命性感染 ;⑤易继发肾功能衰竭及癌变 ;⑥…     

以培养肝细胞为基础的体外生物人工肝支持系统

肝脏是人体的重要器官之一 ,具有解毒、生物合成和生物转化等多种功能。由于多种原因所致肝衰竭必然导致机体的代谢紊乱和毒性物质的大量堆积 ,这二者又进一步影响肝细胞功能 ,形成肝衰竭的恶性循环。尽管传统对症支持疗法有了长足进步 ,肝衰竭的病死率仍居高不下。国外报道暴发性肝衰竭 (FHF)病死率在80 %左右 ,为此 ,国内外学者一直致力于人工肝和肝移植治疗的研究。肝移植 (OL Tx)被认为是此类患者最有效的治疗手段 ,但由于受供肝来源限制、价格昂贵及必须长期应用免疫抑制剂等原因 ,多数患者难以通过肝移植而达到长期存活的目的。生…     

混合型生物人工肝治疗重型肝炎临床意义的探讨

目的：通过5例经混合型生物人工肝治疗的急性或亚急性重症肝患者的治疗效果．初步探讨混合型生物人工肝治疗的临床意义。方法：组合型生物人工肝由血浆置换和猪肝细胞生物人工肝构成。5例重症肝炎肝功能衰竭患者(急性重型3例和亚急性重型2例)各行组合型生物人工肝治疗1次，时间约10一12小时，于治疗前、治疗中、治疗后分6个不同时段取血，分别测肝功能、血氨、凝血酶原活动度及血清内毒素水平，并观察临床症状及体征变化。结果：3例治疗前伴肝性脑病患者昏迷程度减轻。与治疗前比较，患者血清总胆红素养及内毒素水平明显降低(P＜0．01)．凝血酶原活动度及胆碱脂酶显著升高(P＜0．01和P＜0．05)。2例患者痊愈，1例1周后成功实施肝移植，其余2例分别存活8日和21日，存活率为60％。结论：混合型生物人工肝可能是治疗急性重型肝炎肝衰竭的有效方法．并作为判断患者能否自然恢复或必须进行肝移植的主要指标。     

用猪肝细胞型混合生物人工肝支持系统治疗肝衰竭的初步研究

目的 对培养猪肝细胞型混合生物人工肝支持系统治疗肝衰竭的可行性进行初步评价。方法 采用自行研制的以新生实验小型猪肝细胞为基础的混合生物人工肝支持系统，对5例慢性重型肝炎患者进行体外人工肝支持，综合评价其临床疗效和安全性。结果 5例患者经混合人工肝支持后，肝衰竭均得到不同程度的控制，表现为临床症状和肝衰竭相关指标好转，肝性脑病改善。最终2例好转出院，1例经肝移植存活，2例 死亡，死亡原因与不良反应无关。结论 猪肝细胞型混合生物人工肝系统可用作重型肝炎肝衰竭的辅助支持和治疗。     

一种生物型人工肝支持系统治疗急性肝功能衰竭犬的效应

目的：评价我们改进的生物型人工肝系统（ＢＡＬＳ）治疗急性肝功能衰竭犬的有效性和安全性。方法：在引进中空纤维管式ＢＡＬＳ基本技术的基础上，将中国实验用小型猪肝细胞培养于ＢＡＬＳ中，对醋氨酚诱发ＡＬＦ模型犬进行透析治疗，测定治疗后，后肝衰犬血液ＧＰＴ、ＮＨ３、ＧＯＰ、ＢＵＮ及ＡＫＰ等生化指标及肝脏组织学的变化。结果：采用此种ＢＬＡＳ对ＡＬＦ犬治疗４￣６ｈ，其血氨、ＧＰＴ、ＧＯＴ和ＡＫＰ等生化指标均明显     

冷冻猪肝细胞在生物型人工肝系统中的生存状态研究

目的研究冷冻复温后猪肝细胞在生物型人工肝支持系统(BALSS)中的生存状态.方法用酶法从中国实验用小型猪肝脏分离出猪肝细胞;将1×1010猪肝细胞冷冻保存在-196 ℃液氮中;1个月后复温,将等量的冷冻和新鲜猪肝细胞分别培养在BALSS中,比较其形态、存活率和白蛋白、尿素、葡萄糖合成功能及对利多卡因的转化功能.结果冷冻保存的猪肝细胞,复温后其存活率较高;在培养于BALSS时其生化功能、利多卡因转化功能及超微结构与新鲜肝细胞类似.结论用该冻存方法保存的猪肝细胞可试用于BALSS系统.     

微囊化猪肝细胞移植对急性肝衰竭大鼠肝功能支持的实验研究

目的:探讨微囊化猪肝细胞移植治疗大鼠急性肝衰竭的效果。方法:采用原位胶原酶循环肝灌注法分离中国实验用小型猪肝细胞,海藻酸钠-氯化钡法微囊化。应用D-氨基半乳糖(D-gal)1.2g/kg体重腹腔内注射制作SD大鼠急性肝衰竭模型。急性肝衰竭大鼠随机分为3组。注药24h后分别将PRMI1640培养液2ml腹腔注射为对照组(1组)、2ml游离猪肝细胞(2×107个/ml)腹腔内移植组(2组)、2ml微囊化猪肝细胞(2×107个/ml)腹腔内移植组(3组)。观察移植后大鼠14天存活率、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TB)的改变。结果:肝细胞移植后大鼠14天存活率:1组为20.0%(5/25),2组为66.7%(16/24),3组为76.0%(19/25),3组间差异有显著性(P<0.05)。移植后第1天1组ALT、TB和移植前相比差异无显著性,2、3组ALT、TB下降。第4天3组ALT、TB均继续下降,2、3组低于1组(P<0.05),2、3两组间差异无显著性(P>0.05)。移植后第7天,ALT进一步下降,3组间差异有显著性(P<0.05);TB3组显著低于2组和1组(P<0.05),2组低于1组但差异无显著性(P>0.05)。移植后第14天,肝功能均明显恢复,ALT、TB2、3组均低于1组(P<0.05),2、3两组间差异无显著性(P>0.05)。结论:微囊化猪肝细胞腹腔内移植可以提高药物诱导急性肝衰竭大鼠的存活率,改善ALF大鼠的肝功能。     

Metabolic effects of a novel bioartificial liver on serum from severe hepatitis patients: an in vitro study

Theextracorporealbioartificialliversupportsystem(EBLSS)hasbeenestablishedtocompensateforhepaticfunctionin patientswithseverehepatopathy ,andtoprovidesupportivetherapyforthesepatients EBLSShasanimportantstatusintheresearchofartificialorgans Atpresent,thestudyofartificiallivershasprogressedtothestageofthehybridbioartificialliver (BAL)consistingofmammalianhepatocytesinartificialsyntheticmaterials 1Thistype ofartificiallivercannotonlyprovidethebiologicalfunctionsoflivinghepatocytes,butcanalso…     

零下非结冰UW液成功保存生物人工肝用L-02肝细胞

目的 比较零下非结冰(-0.8℃)与常规低温(4℃)分别用于人工肝用永生化L-02细胞保存的效果,探索零下非结冰保存肝细胞与细胞凋亡的关系.方法 制备好的UW液保存的L-02细胞悬液分为以下2组:-0.8℃组(零下非结冰组),4℃组(对照组).低温保存24、48 h及72 h后,分别测定细胞存活率、凋亡率、坏死率(流式细胞术)及ALT释放、尿素合成功能、白蛋白分泌功能.结果 -0.8℃(零下非结冰)较4℃明显提高了长时间低温保存L-02细胞的存活率[72 h:(70.17±2.82)%vs(60.05 4±3.17)%,P<0.01],降低了细胞凋亡率[72 h:(5.73±1.68)%vs(9.20±2.35)%,P=0.02],抑制了ALT释放[72h:(6.21±O.65)U/L vs(8.68±1.18)U/L,P<0.01],更好地维持了L-02细胞的尿素合成功能[72 h:(1.01±0.14)mmol/L vs(0.66±0.09)mmot/L,P<0.01]及白蛋白分泌功能[72 h:(9.04±0.53)μg/ml vs(7.70±0.52)μg/ml,P<0.01].2组间细胞坏死率差异无统计学意义[72 h:(18.45±1.88)%vs(21.82±3.86)%,P>0.05].结论 零下非结冰可明显维持L-02细胞存活率,降低低温损伤引起的细胞凋亡,有效保护肝细胞尿素合成和白蛋白分泌功能.     

肝祖细胞移植对四氯化碳诱导急性肝衰竭小鼠模型肝损伤的修复作用

目的:观察肝祖细胞(HPCs)移植后不同浓度四氯化碳(CCl₄)诱导的急性肝衰竭小鼠模型肝脏修复情况,评价HPCs对肝损伤的修复能力,为评估HPCs移植疗效建立理想的肝衰竭模型。方法:96只ICR小鼠随机分为空白对照组、阴性对照组(0.1% CCl₄组、0.5% CCl₄组、2.0% CCl₄组、10.0% CCl₄组)和实验组(0.1% CCl₄+HPCs组、0.5% CCl₄+HPCs组、2.0% CCl₄+HPCs组和10.0% CCl₄+HPCs组)。空白对照组小鼠灌胃给予生理盐水,阴性对照组和实验组小鼠灌胃给予不同剂量CCl₄。CCl₄造模后1 d,将实验组和阴性对照组小鼠常规麻醉后切开腹腔,实验组小鼠经脾脏注射HPCs,阴性对照组小鼠注射等剂量无菌生理盐水。动态观察小鼠生命体征,监测其存活率;采血检测小鼠血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)活性;取肝脏计算肝脏指数;HE染色观察各组小鼠肝脏组织病理学变化;Hoechst33342标记外源性HPCs,激光共聚焦显微镜检测移植HPCs在肝脏中的分布情况及肝脏标志蛋白细胞角蛋白18(CK18)和白蛋白(ALB)的表达。结果:与空白对照组比较,0.1%和0.5% CCl₄组小鼠存活率、肝脏指数、AST和ALT活性无明显变化(P>0.05)。病理学检测,肝细胞有自我修复作用,HPCs移植治疗的效果不明显。与2.0 %CCl₄组比较,2.0%CCl₄+HPCs组小鼠AST和ALT活性及肝脏指数降低(P<0.01),存活率增加(P<0.01);病理学检测可见肝细胞再生和大量外源性肝细胞,CK18和ALB表达与内源性肝细胞相当,HPCs移植治疗有效。10.0%CCl₄组和10.0% CCl₄+HPCs组小鼠2 d内全部死亡,无法评估HPCs的治疗效果。结论:HPCs移植可提高急性肝衰竭模型小鼠存活率,改善AST和ALT活性,对肝损伤具有较强的修复能力;且2.0%CCl₄诱导的ICR小鼠急性肝衰竭模型能有效反映HPCs移植治疗的效果。