夏枯草口服液对雌激素受体阳性乳腺癌细胞凋亡的影响

目的:研究夏枯草口服液对雌激素受体(ER)阳性人乳腺癌细胞凋亡的影响。方法:将ER阳性型人乳腺癌细胞系MCF-7及ER阴性型人乳腺癌细胞系MDA-MB-231、SK-BR-3分别与不同浓度(0、25、50、100 mg/ml)的夏枯草口服液提取物共孵育。采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;流式细胞术及Annexin V/PI双染色检测细胞周期和细胞凋亡;ELISA法检测雌激素应答基因表达量;Western blot法检测ERα蛋白表达情况。结果:1夏枯草口服液提取物呈剂量依赖性地抑制MCF-7细胞的生长,但对MDAMB-231、SK-BR-3细胞无显著作用。2夏枯草口服液提取物可诱导MCF-7细胞产生凋亡,在mRNA水平降低MCF-7细胞内雌激素应答基因的表达,并降低ERα蛋白表达。结论:夏枯草口服液可诱导ER阳性乳腺癌细胞的凋亡,用于治疗ER阳性乳腺癌。     

番茄红素对乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231增殖的影响

目的 观察番茄红素对体外培养的雌激素受体阳性(ER )乳腺癌细胞MCF-7和雌激素受体阴性(ER-)乳腺癌细胞MDA-MB-231的存活率、细胞周期及凋亡的影响.方法 采用MTT法和H3-TdR 掺入法观察番茄红素对两种细胞增殖的影响;流式细胞仪观察同步化的细胞经番茄红素作用后细胞周期及凋亡的变化.结果 番茄红素抑制MCF-7、MDA-MB-231细胞的增殖和DNA合成,具有剂量效应关系,随着时间延长,抑制作用增强,最大抑制率分别为52.6%、61.9%.流式细胞仪结果显示,番茄红素作用24 h后,MCF-7、MDA-MB-231细胞周期各相发生变化,G0/G1期细胞增多,而S期和G2/M期细胞减少,同时可诱发MDA-MB-231细胞凋亡.结论 番茄红素通过阻滞MCF-7细胞于G1期而抑制该细胞的增殖,而对MDA-MB-231细胞增殖的抑制除可通过阻滞细胞周期进程外,还与诱导凋亡有关.     

丹参酮ⅡA磺酸钠对乳腺癌细胞株的作用及其机制研究

目的:研究丹参酮ⅡA磺酸钠对雌激素受体(ER)、表皮生长因子受体-2(HER-2)表达不同的人乳腺癌细胞株(MCF-7、SKBR-3、MDA-MB-231)的作用,并探讨其作用机制。方法:以0.025~0.8μg/ml不同浓度丹参酮ⅡA磺酸钠处理MCF-7、SKBR-3、MDA-MB-231细胞,MTT法测定不同浓度丹参酮ⅡA磺酸钠对三种乳腺癌细胞株细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期。结果:丹参酮ⅡA磺酸钠处理后,MCF-7细胞增殖活性降低,凋亡指数升高,细胞周期分布改变,G0/G1期细胞数增加,S期和G2/M期细胞数减少;SKBR-3和MDA-MB-231细胞增殖活性、细胞凋亡及细胞周期无明显改变。结论:丹参酮ⅡA磺酸钠对ER阳性乳腺癌细胞具有生长抑制作用,其作用机制可能与凋亡诱导、细胞周期阻滞有关;丹参酮ⅡA磺酸钠对ER阴性、HER-2阳性和ER阴性、HER-2阴性乳腺癌细胞无明显生长抑制作用。     

补骨脂素对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞体外作用的比较研究

[目的] 观察并比较补骨脂素对人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞的抑制作用.[方法] 以不同浓度的补骨脂素(25.000、12.500、6.250、3.125μg/mL)对人乳腺癌细胞株MCF-7[雌激素受体(ER)阳性]和MDA-MB-231(ER阴性)进行体外抑制实验,运用流式细胞仪观察细胞的周期变化,Annexin V和碘化丙锭(PI)双染法观察细胞凋亡情况,基因芯片检测补骨脂素对两种人乳腺癌细胞基因表达谱的影响.[结果] 补骨脂素对人乳腺癌细胞株MCF-7有显著抑制作用(P<0.05),半数抑制浓度(IC50)为15.160 μg/ml;作用24 h后,S期细胞明显减少,G1、G2期细胞增加,早期凋亡细胞明显增多.而补骨脂素对MDA-MB-231细胞无明显抑制作用,仅早期凋亡细胞增多.人类全基因组寡核苷酸微阵列芯片杂交结果显示,补骨脂素可以使MCF-7细胞出现1 053个差异表达基因,其中表达上调的有456个,表达下调的有657个.[结论] 补骨脂素对ER阳性的乳腺癌MCF-7细胞具有一定的抑制作用,其抑制肿瘤细胞生长的机理可能与将肿瘤细胞阻止在G2期相关.     

姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制作用及机制研究

目的:探讨姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制、诱导凋亡作用及其分子作用机制。方法:MTT法检测姜黄素对MCF-7细胞的增殖抑制作用;流式细胞术PI单染法检测细胞周期;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax的mRNA表达水平。结果:姜黄素对MCF-7细胞生长有明显抑制作用,并呈剂量、时间依赖性;FCM结果显示姜黄素能使MCF-7细胞阻滞在G1/S期;Annexin V/PI双染法验证姜黄素可以诱导细胞凋亡;RT-PCR结果显示Bax mRNA水平明显上调,而Bcl-2的mRNA表达水平降低。结论:姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖具有显著的抑制作用并可诱导细胞凋亡,其作用机制可能与其上调Bax基因表达水平的同时,下调Bcl-2基因表达水平,从而诱导细胞凋亡有关。     

1,25-二羟基维生素D3对乳腺癌MCF-7细胞CYP1B1表达的作用和COX-2/PGE2通路机制

目的 分析COX-2、p-ERα、CYP1B1在人乳腺癌组织和ERα阳性表达人乳腺癌细胞系MCF-7中的表达规律,探讨1,25-二羟基维生素D3 [1,25(OH)2D3 ]在人乳腺癌细胞MCF-7中通过COX-2/PGE2通路对CYP1B1表达和细胞增殖、细胞周期转化的影响及作用机制。方法 用免疫组织化学法检测42例人乳腺癌组织中COX-2、p-ERα、CYP1B1的表达,并分析其相关性;MTT法检测1,25(OH)2D3对MCF-7细胞增殖的影响,并确定后续实验药物浓度;流式细胞术检测细胞周期;RT-PCR检测MCF-7细胞COX-2 mRNA水平;ELISA法检测细胞培养上清液中PGE2水平;蛋白质印迹法检测MCF-7细胞COX-2、p-ERK、p-ERα、CYP1B1蛋白水平;免疫细胞荧光检测COX-2、p-ERα、CYP1B1蛋白在MCF-7中的原位表达。结果 在人乳腺癌组织中COX-2、p-ERα、CYP1B1蛋白呈阳性表达,两两之间均呈正相关性(P<0.05)。1,25(OH)2D3对MCF-7细胞增殖具有抑制作用,且呈时间和剂量依赖性(P<0.05)。应用100 nmol/L 1,25(OH)2D3 72 h后,MCF-7细胞周期阻滞在G0/G1期(P<0.05);细胞COX-2 mRNA表达减少(P<0.05);细胞培养上清中PGE2水平降低(P<0.01);COX-2、p-ERK、p-ERα及CYP1B1蛋白表达均减少(P<0.05)。结论 在乳腺癌中,COX-2/PGE2通路对CYP1B1的表达具有正向调控作用。1,25(OH)2D3可通过抑制COX-2/PGE2通路减少CYP1B1的表达,对乳腺癌细胞MCF-7的增殖产生抑制作用。     

基于CYP19探讨雷公藤甲素抗ER(+)人乳腺癌MCF-7细胞作用机理

目的 基于CYP19基因阐明雷公藤甲素抗ER(+)人乳腺癌细胞的作用机制。方法 雷公藤甲素组与来曲唑组相对照,采用MTT法观察雷公藤甲素对MCF-7细胞增殖的影响;采用Western blot观察其对芳香化酶的影响;采用RT-PCR观察其对CYP19基因的影响;采用瞬时转染形成高表达及低表达CYP19基因的MCF-7细胞,并用Western blot的方法观察雷公藤甲素对转染细胞CYP19以及其下游通路相关基因JNK、P38和ERK的影响。结果 雷公藤甲素能明显抑制MCF-7细胞增殖（P<0.01）,其抑制作用随着浓度增高和时间的延长而增强,能抑制芳香化酶及CYP19基因的表达,并能明显下调低表达CYP19-MCF-7细胞的CYP19表达,及抑制JNK、p-38和ERK的磷酸化。结论 雷公藤甲素抗MCF-7细胞的作用机制之一,是通过抑制芳香化酶起作用,并引起下游Ras-Raf-MAPK-ERK激酶系统通路受抑制。      

MCF-7人乳腺癌细胞阿霉素敏感株和耐药株中雌激素受体表达的变化及意义

目的:研究MCF-7人乳腺癌细胞阿霉素敏感株(MCF-7细胞)和耐药株(MCF-7/ADR细胞)中雌激素受体(estrogenreceptor,ER)表达的变化与其对细胞生物学特性的影响。方法:应用Westernblot法检测MCF-7细胞和MCF-7/ADR细胞中雌激素受体表达,MTT法检测细胞增殖及细胞对雌激素(es-trogen,E2)和droloxifene(Dro)的敏感性,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果:Westernblot证实在MCF-7细胞中ER为阳性,而在MCF-7/ADR细胞中ER为阴性。经MTT分析,与MCF-7相比,MCF-7/ADR细胞生长速度减慢,细胞多分布于G0/G1期。E2在1×10-12mol/L的浓度时开始促进MCF-7细胞的生长,到达1×10-9mol/L时促生长作用进入平台期;而任何浓度的E2对MCF-7/ADR细胞均无促生长作用。Dro的浓度达到10μmol/L的时候,开始出现对MCF-7细胞生长的抑制,抑制程度随浓度的增加而逐渐增强;Dro浓度小于20μmol/L时,对MCF-7/ADR细胞生长无明显作用,当浓度达到20μmol/L时对MCF-7/ADR细胞的生长出现明显抑制,且高于对MCF-7细胞的抑制。结论:MCF-7/ADR细胞雌激素受体表达缺失,生长速度减慢,同时细胞失去对雌激素的依赖性,并对一定浓度的内分泌治疗药物不敏感。     

菊藻丸含药血清对人乳腺癌细胞影响的体外实验研究

目的探讨含菊藻丸大鼠血清对人乳腺癌雌激素受体阳性细胞[ER(+)]MCF-7和人乳腺癌雌激素受体阴性细胞[ER(-)]MDA-MB-231增殖、细胞周期分布及凋亡的影响。方法将20只Wistar雌性大鼠分为4组,每组5只。3个中药组以3种不同浓度的菊藻丸水剂灌胃,分别为0.286、2.860和28.600 ng/ml;另以等量生理盐水灌胃进行对照。末次灌胃后于1.5~2.0 h时间段内取下腔静脉血制成血清。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测4组血清在不同时间(24~120 h)对MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞增殖的影响;流式细胞术测定各组血清对MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞作用48 h后的细胞周期分布及细胞凋亡的影响,并比较各组之间的差异。结果 3个中药组的含药血清对MCF-7细胞有一定的增殖抑制作用,而对MDAMB-231细胞有显著的增殖抑制作用,对两者的作用均成明显的剂量-时间依赖关系。从24~120 h,中药剂量由低至高,对MCF-7细胞抑制率由1.47%~11.06%增至6.29%~20.01%,对MDA-MB-231细胞抑制率由15.45%~20.19%增至21.24%~45.79%。两种细胞经各含药血清组处理48 h后,与对照组比较,随着药物剂量的加大,G0/G1期细胞逐渐增多,而各组的S期细胞和G2/M期细胞则逐渐减少,增殖指数PI值亦逐渐减少,但MCF-7细胞各中药组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),MDA-MB-231细胞中、高剂量组与对照组的G0/G1期数值和PI值比较,差异有统计学意义(P<0.01);随剂量的增大,凋亡的MCF-7细胞和MDAMB-231细胞逐渐增多,2种细胞的中、高剂量组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01),但是对MDAMB-231细胞的抑制率要明显高于MCF-7细胞。结论含菊藻丸大鼠血清对MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞均有抑制作用,呈剂量和时间依赖性,并能影响细胞周期分布,诱导肿瘤细胞凋亡。但是对E(-)的MDAMB-231细胞的抑制和杀伤作用远比对ER(+)的MCF-7细胞的作用要强。     

靶向survivin反义寡核苷酸对MCF-7乳腺癌细胞系Survivin mRNA及紫杉醇药物敏感性的影响

目的探讨靶向survivin基因的反义寡核苷酸（ASODN）对MCF-7细胞的增殖、凋亡及药物敏感性等生物学行为的影响。 方法采用脂质体介导survivin-ASODN转染MCF-7乳腺癌细胞系，RT-PCR检测survivin mRNA的表达，MTT法检测细胞增殖能力及对药物的敏感性，流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。 结果survivin-ASODN可有效下调survivin表达水平，抑制细胞的生长，并呈时间剂量依赖关系；流式细胞术示，24h反义转染组细胞周期被阻滞于G2/M期，细胞凋亡率增加到15.23%。 紫杉醇作用早期（6h），survivin mRNA 表达增高，利于肿瘤细胞逃避紫杉醇诱导的细胞凋亡，增加肿瘤耐药的机会；反义转染组中细胞早期survivin mRNA表达上调受到抑制，对药物的敏感性增加。 结论survivin基因ASODN转染细胞后，下调survivin的表达，细胞凋亡增加，提高了对药物的敏感性。     

黄连素抑制人乳腺癌细胞MCF-7作用的研究

目的 研究黄连素对人乳腺癌细胞MCF-7的抑制作用.方法 用WST-1方法、流式细胞术和划痕实验分别检测黄连素对乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡、细胞周期及迁移能力的影响.结果 不同浓度的黄连素可以抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖.黄连素作用于MCF-7细胞24 h可以使细胞周期阻滞在G1期,进入S期的细胞比例降低,同时MCF-7细胞凋亡明显增加.黄连素作用于MCF-7细胞24 h及48 h后,可以抑制MCF-7细胞的迁移能力.结论 黄连素可有效地抑制乳腺癌细胞的增殖与迁移能力,并诱导其凋亡,参与抗肿瘤作用.     

甲地孕酮与三苯氧胺联合应用对乳腺癌MCF-7细胞生长和凋亡的影响

目的:探讨小剂量甲地孕酮(MA)和三苯氧胺(TAM)联合应用对乳腺癌细胞MCF-7生长和凋亡的影响.方法:分别或联合应用TAM、MA作用于MCF-7细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法分析细胞生长和抑制作用,应用流式细胞技术测定细胞周期和凋亡率.结果:TAM可抑制MCF-7细胞生长,阻滞细胞周期于G0/G1期,并可诱导细胞凋亡;小剂量的MA对MCF-7细胞生长与凋亡无明显影响,G0/G1.期细胞增多;两者联合应用时,细胞的生长抑制作用加强,凋亡率上升.结论:TAM对MCF-7细胞具有抑制生长和诱导凋亡作用.加用小剂量的MA后,其抑制生长和凋亡诱导作用加强,两者联合应用具有协同作用.     

黄芪解毒汤对乳腺癌细胞凋亡及Notch1基因表达的影响

目的:观察黄芪解毒汤对人乳腺癌细胞MCF-7凋亡及Notch1基因表达的影响,探讨该方抑制乳腺癌复发转移的可能机制。方法:制备含药血清,分为黄芪解毒汤血清组、阿霉素血清组、参一胶囊血清组,另设生理盐水血清组。常规培养细胞,MTT法检测不同浓度含药血清对MCF-7细胞增殖的影响;选择最佳抑制浓度的含药血清分别干预乳腺癌细胞,干预3 d后流式细胞仪检测各组MCF-7细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测各组MCF-7细胞Notch1基因的表达。结果:MTT法检测结果显示,3种含药血清均可抑制MCF-7细胞增殖(P0.05)且对细胞抑制最佳浓度为20%含药血清。流式细胞检测结果显示,与生理盐水血清组比较,黄芪解毒汤血清组、参一胶囊血清组、阿霉素血清组均可明显诱导MCF-7细胞凋亡(P0.05);实时荧光定量PCR结果显示,与生理盐水血清组比较,黄芪解毒汤血清组、参一胶囊血清组、阿霉素血清组Notch1基因表达均明显降低(P0.05)。结论:黄芪解毒汤可能通过诱导MCF-7凋亡、降低Notch1基因表达起到抑制乳腺癌复发转移的作用。     

Hedgehog通路对乳腺癌细胞增殖和凋亡的作用及其对Cx32和Cx43表达的影响

目的: 研究Hedgehog通路对乳腺癌细胞增殖、凋亡及间隙连接蛋白32(Cx32)和间隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响,探讨其在乳腺癌细胞增殖和转移中的作用机制。方法: 取对数生长期乳腺癌MCF-7细胞分为环巴胺组和空白对照组,环巴胺组分别以5、10、20、30和40 μmol·L^-1环巴胺处理MCF-7细胞24、48和72 h,应用MTT法测定各组MCF-7细胞增殖抑制率。以0(阴性对照组)和25 μmol·L^-1环巴胺处理MCF-7细胞48 h后,AnnexinⅤ/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率及Cx32、Cx43胞膜阳性表达率。结果: 与空白对照组比较,各剂量环巴胺组MCF-7细胞增殖抑制率明显升高(P<0.05),且随环巴胺剂量增加和作用时间延长其增殖抑制作用增强;与空白对照组比较,25 μmol·L^-1环巴胺组48 h时,MCF-7细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。与阴性对照组比较,25 μmol·L^-1环巴胺组48 h时,MCF-7细胞胞膜Cx32和Cx43阳性表达率明显升高(P<0.05)。结论: Hedgehog通路可抑制乳腺癌细胞凋亡,并调节Cx43和Cx32的胞膜表达。     

rhTIMP-3与TAM联合应用对乳腺癌细胞MCF-7生长与凋亡的影响

目的:探讨重组金属蛋白酶组织抑制因子-3(rhTIMP-3)和三苯氧胺(tamoxifen,TAM)联合应用对乳腺癌细胞株MCF-7(ER )生长和凋亡的影响。方法:分别或联合应用不同浓度的rhTIMP-3、TAM作用于MCF-7细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法分析细胞生长抑制作用,应用流式细胞技术测定细胞周期分布和凋亡率。结果:rhTIMP-3与TAM均可抑制MCF-7细胞增殖,呈时间、浓度依赖性,并可诱导凋亡。rhTIMP-3使细胞阻滞在S和G2/M期;TAM可造成细胞G0/G1期的阻滞,当两者联合时对MCF-7的生长抑制明显增加,在诱导凋亡方面有明显协同作用。结论:rhTIMP-3、TAM均可抑制MCF-7细胞的增殖,并可诱导其凋亡;二者联合应用不仅能增加细胞生长的抑制作用,而且在诱导细胞凋亡方面有协同作用。     

三苯氧胺与阿霉素联合应用对乳腺癌MCF-7细胞生长与凋亡的影响

目的：探讨三苯氧胺（tamoxifen,TAM)和阿霉素(adriamycin，ADM)联合应用对乳腺癌细胞MCF—7(ER )生长和凋亡的影响。方法：分别或联合应用不同浓度的TAM、ADM作用于MCF—7细胞，应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法分析细胞生长抑制作用，应用流式细胞技术测定细胞周期分布和凋亡率。结果：TAM与ADM均可抑制MCF—7细胞生长，诱导其凋亡。TAM可造成MCF—7细胞G0／G1期阻滞，且呈时间、剂量依赖性；ADM可造成G2／M期细胞增高；两者联用时MCF—7细胞的生长抑制率、凋亡率无明显增加，G0／G1期细胞增高。结论：TAM与ADM可抑制MCF—7细胞生长，诱导其凋亡，两者联合应用不能增强作用效果，无协同作用。     

端粒酶反义寡核苷酸对MCF-7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响

为探讨端粒酶反义寡核苷酸对人乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响,应用与人端粒酶RNA组分(hTR)模板区互补的硫代反义寡核苷酸处理MCF-7细胞.发现经反义hTR寡核苷酸作用后,细胞端粒酶活性明显受到抑制,至作用后72 h,端粒酶活性较对照组降低61.0%(P<0.05);细胞生长明显受到抑制;细胞周期发生显著变化,G0/G1期细胞数增多,S期及G2/M期细胞数则减少;细胞增殖指数由0.46降低至0.29;并可观察到凋亡细胞的出现,凋亡发生率为10.7%;而无义寡核苷酸处理组及空白对照组以上各指标均无明显变化.提示端粒酶反义寡核苷酸可明显抑制乳腺癌细胞端粒酶活性,抑制细胞生长和增殖,诱导细胞凋亡;表明应用反义技术抑制端粒酶活性治疗乳腺癌可能具有广阔的前景.