硫芥中毒小鼠微量血细胞DNA损伤的检测

目的　为探讨硫芥对小鼠外周血细胞DNA损伤的剂量 效应和时间 效应关系 ,为寻找硫芥中毒早期亚临床损伤的诊断指标 ,提供动物体内实验的数据。方法　昆明种小鼠 ,硫芥纯度 97.3% ,用1,2 丙二醇稀释成所需浓度 ,在颈背部皮下注射。随机分为丙二醇溶剂组 ,硫芥中毒组 (自身对照 ) :18mg·kg- 1(LD50 ) ,2 4mg·kg- 1(LD70 ) ,30mg·kg- 1(LD90 ) ,正常观察组和中毒观察组 ,每组 10只小鼠(18mg·kg- 1组除外 )。剪尾采血 5 μL ,采血时间为0 ,2 ,4 ,8,2 4 ,72和 12 0h。应用单细胞凝胶电泳(SCGE)技术进行制片、铺胶、裂解、电泳、染色。荧光显微镜下目镜测微尺测量 ,彗星细胞DNA迁移度(μm)和彗星细胞DNA迁移率 (% ) ,统计分析用SPSS10 .0分析软件及卡方检验。结果　①硫芥中毒后受损细胞 (即拖尾细胞 )DNA迁移率 4h达到峰值 ,低、中、高 3个剂量组分别为 35 .3% ,5 7.8% ,72 % ,显著高于自身对照 (P <0 .0 1) ,8h后逐渐降低 ,72h后低剂量组接近正常值 (P >0 .0 5 )。②DNA迁移度 (拖尾长度 ) 4h达到第一个峰值 ,低、中、高 3个剂量组分别为 (16 .0 0± 1.99) ,(2 2 .0 5± 1.0 0 ) ,(35 .90± 1.2 9) μm ,显著高于自身对照 (P <0 .0 1) ,2 4h出现第二个峰值 ,其后随时间延长逐渐下降。上述结果提示硫?     

硫芥对犬外周血淋巴细胞DNA损伤的作用

硫芥是典型的双功能烃化剂 ,进入体内后产生烃化作用 ,攻击的主要靶分子是ＤＮＡ。目前 ,单细胞凝胶电泳(ＳＣＧＥ)技术发展很快 ,国内、外将该法作为ＤＮＡ损伤检测的基本方法之一。先前我们用此法进行硫芥对人外周血淋巴细胞ＤＮＡ损伤的体外实验[1 ] ,本次选用犬外周血淋巴细胞 ,观察体内、外硫芥染毒后ＤＮＡ损伤的剂量效应与时间效应关系 ,为寻找研究硫芥细胞毒性作用及中毒早期敏感的检测方法提供实验依据。1　材料与方法1 1　主要仪器设备　奥林巴斯ＢＸ - 6 0显微镜、目测微尺(日本 )、电泳仪ＤＤＹ Ⅲ 6Ｂ、电泳槽ＤＤＹ Ⅲ 34Ａ…     

烟酰胺治疗大鼠硫芥中毒的实验评价

目的　为评价多 (ADP核糖 )聚合酶 (PAD PRP)抑制剂烟酰胺 (尼克酰胺 )对SD大鼠硫芥全身中毒的治疗效果。方法　雄性SD大鼠 30只 ,体重190～ 2 30g ,分为正常对照组、中毒对照组和烟酰胺治疗组。 4mg·kg- 1硫芥中毒。中毒对照组和烟酰胺治疗组动物腰背部皮下注射硫芥 ,正常对照组给予等容量的丙二醇。中毒后 0 .5hip 5 0mg·kg- 1烟酰胺 ,每日 1次 ,连续 8d。实验动物在中毒前测 1次体重 ,以后每天定时测 1次。观察动物食欲及腹泻情况 ,记录动物死亡时间。中毒后d 4 ,d 8各测 1次血常规 ,d 8全部活杀 ,取胫骨上段做骨髓涂片 ,重点观察骨髓的细胞学分类及增生程度。结果　①中毒对照组腹泻率为 70 % ,但未见死亡 ;烟酰胺治疗组的腹泻率为 80 % ,并且在d 5出现动物死亡 ,死亡率为 10 % ,但统计学上均无显著差异。中毒对照组和治疗组动物之间体重变化无明显差异 ,而与正常对照组相比自中毒后d 3起均明显下降。②血常规变化 ,中毒后d 4 ,治疗组与中毒对照组相比 ,结果均无显著差异 ,但这两组与正常对照组相比 ,白细胞总数 (WBC)、淋巴细胞分类 (LYM )、粒细胞分类(GRAN)和血小板总数 (PLT)均明显下降 ,尤其以WBC ,LYM和GRAN为显著 ,而红细胞总数 (RBC)和血红蛋白量 (HGB)均无显著变化。中毒后d 8,治疗组与?     

彗星试验目测与图像分析结果的比较

目的　探讨彗星试验目测与图像分析结果的比较。方法　分离人外周血淋巴细胞 ,设 16 40培养液、H2 O2 和 1,2 丙二醇分别为阴性、阳性和溶剂对照组 ,硫芥为受试物 ,37℃水浴 1h ,清洗后单细胞凝胶电泳 ,用目测微尺和图像分析系统观察分析硫芥对人血淋巴细胞细胞DNA损伤的程度。结果　彗星试验检测 12 .5～ 2 0 0 μmol·L- 1H2 O2 和 1,10 ,10 0和 10 0 0 μmol·L- 1硫芥对人外周血淋巴细胞DNA损伤 ,目测 (迁移率和迁移度 )观察和计算机图像分析(彗星长、尾长、Olive尾矩、尾DNA %和尾 /头 (长 ) 5项参数 )的结果基本一致 ,DNA损伤的程度呈现浓度 效应关系。各项观察指标和参数检出DNA损伤(P <0 .0 5或P <0 .0 1)的浓度不尽一致。目测迁移率检测H2 O2 诱导的DNA损伤最低作用浓度为 12 .5μmol·L- 1,比迁移度 2 5 μmol·L- 1的检出浓度敏感。计算机图像分析中尾DNA %参数能显示 1μmol·L- 1硫芥和 12 .5 μmol·L- 1H2 O2 诱导的DNA损伤 ,其敏感程度为各项指标和参数之首 ;参数Olive尾矩对H2 O2 和硫芥诱导的DNA损伤的最低作用浓度分别是 5 0和 10 0 μmol·L- 1,为不敏感参数。溶剂 1%～4 %丙二醇各组与阴性对照相比 ,无显著性差异(P >0 .0 5 )。结论　①彗星试验检测硫芥对人外周血淋巴细胞DNA损?     

单细胞DNA损伤的微凝胶慧星电泳检测法

单细胞ＤＮＡ损伤的微凝胶慧星电泳检测法袁守军韩锐（中国医学科学院、中国协和医科大学药物研究所，北京１０００５０中国图书分类号Ｒ３４；Ｒ３９２．２３外来理化因素对细胞ＤＮＡ的损伤是引起基因突变及癌症发生的重要因素。建立快速灵敏的ＤＮＡ损伤检测方法，对于...     

硫芥的小鼠致畸作用

目的 研究硫芥对小鼠的胚胎毒性和致畸毒性。方法 将60只孕鼠随机分为6组,即阴性对照组、溶剂对照组、硫芥5.0, 1.0和0.2 mg·kg^-1染毒剂量组和阳性对照组,每组10只。于孕第7天开始定时腹腔注射给药,连续6 d,每天1次。于妊娠第18天处死孕鼠进行胎鼠检查。结果 硫芥1.0和5.0 mg·kg^-1组孕鼠体重增长受抑,与溶剂对照组相比差异显著;硫芥对胎鼠外观的影响主要表现为导致胎鼠出现血肿,各染毒组与溶剂对照组相比均差异显著(P<0.01);硫芥对胎鼠骨骼的影响主要表现为椎体缺失、胸骨二分化、胸骨残余、椎弓分离、颈肋等。硫芥0.2, 1.0和5.0 mg·kg^-1组畸形（变异）率分别为22.45%, 29.17%和18.00%,硫芥0.2和1.0 mg·kg^-1组与溶剂对照组相比差异显著(P<0.01)。结论 硫芥可导致小鼠胚胎外观和骨骼畸形,有一定致畸性。     

硫芥染毒大鼠肺组织内皮素-1及ETAR转录表达的变化

目的　探讨内皮素 1(ET 1)和内皮素A型受体 (ETAR)在硫芥中毒后病理生理中的作用。方法应用免疫组化及逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术 ,观察大鼠硫芥中毒后肺组织ET 1和ETAR各自转录表达变化、相互关系及其与组织损伤程度的关系。结果　硫芥中毒后大鼠肺组织ET的含量明显增加 ,2h达峰值 ,但在 12h后下降到低于正常组 ;中毒后肺组织ET 1及ETAR的mRNA表达均增加 ,ET 1mRNA在 2 4h仍高于正常 ,ETARmRNA在 2 4h低于正常组。结论　ET 1及其受体ETAR在硫芥中毒后肺部病理生理进程中可能起一定作用     

硫芥对兔眼视网膜和脉络膜的影响

目的　研究硫芥全身吸收中毒可能对视功能造成的影响。方法　健康灰兔和新西兰白兔各 5只 ,各 4只给予 1个致死剂量的硫芥 (0 .0 94 %硫芥 ,1mL·kg- 1sc) ,余下各 1只给予生理盐水作对照。中毒 2d后 ,im 15 %噻胺酮麻醉动物 ,托品酰胺 /去氧肾上腺素 (美多丽 )眼液扩瞳 ,暗适应 30min ,1%丁卡因点眼 2次 ,用LKCUTAS E 2 0 0 0型视觉电生理记录仪行ERG检查 :记录暗视ERG、混合ERG、振荡电位、明视ERG和闪烁ERG。作用电极放置于角膜表面 ,参考电极和地电极分别刺入前额正中和耳背皮下。ERG检查后处死动物 ,取眼球 ,左眼作病理检查 ,右眼作透射电镜检查。结果　无论是白兔还是灰兔 ,实验组和对照组的ERG检查 5种反应均无显著差异。病理检查白兔的视网膜、脉络膜组织完整 ,未见增厚和变薄 ,锥体、杆体层未见溶解 ,外节未见变短 ,细胞核数目未见明显减少 ,色素上皮细胞少见 ,脉络膜结构未见异常。灰兔的视网膜色素上皮细胞排列整齐 ,数目未见变少 ,可见脉络膜色素颗粒 ,其余结构同白兔。光镜下 ,灰、白兔与对照组均无明显差异。电镜检查视网膜内外节盘膜排列整齐 ,密集 ,核区未见异常 ,色素上皮细胞内线粒体轻度肿胀 ,有空泡化趋势 ,但未见核固缩 ,滑面内质网未见明显扩张 ,粗面内质网未见脱粒 ;节细胞胞核?     

尼卡地平对SD大鼠硫芥全身中毒疗效评价

目的　为评价钙拮抗剂尼卡地平对SD大鼠硫芥全身中毒的治疗作用。方法　以SD大鼠为动物模型 ,硫芥中毒剂量为 4mg·kg- 1sc。治疗组动物在中毒后 30min即ip 0 .15mg·kg- 1尼卡地平 ,每日2次 ,连续 5d。通过观察 1周内动物腹泻率和死亡率、体重变化、血常规指标变化来评价药物疗效。结果　与中毒对照组相比 ,药物治疗组的腹泻率、死亡率、动物体重等均无显著差异。中毒初期 ,治疗组某些血液学指标的改变与正常组相比无显著性差异 ,但与中毒组差异显著。中毒期内 ,治疗组与中毒组的各项指标均与正常组间存在显著差异 ,但两组之间的差异不显著。在恢复期 ,治疗组的红细胞总数、血红蛋白量已恢复至与正常组无异 ,白细胞总数、淋巴细胞数虽与正常组有差异 ,但也显著好于中毒组 ,而中毒组的大部分指标仍与正常组有较大差异。结论　硫芥全身中毒的综合治疗方案中 ,在掌握合适剂量情况下 ,尼卡地平能起到一定的辅助治疗作用。     

硫芥中毒复合四肢火器伤的初步实验研究

目的　通过对硫芥中毒复合枪弹伤伤情观察 ,了解硫芥中毒复合伤伤情特点。方法　动物分为假手术组、中毒组、中毒复合枪伤骨折、中毒复合骨折中毒急救、中毒复合骨折中毒急救及手术救治。将兔四肢关节伸展位固定在架上 ,枪击点位于右大腿中下 1/ 3前外侧 ,皮肤硫芥染毒 5min后 ,枪击造成兔右股骨开放性粉碎性骨折 ,立即进行中毒急救及手术救治。假手术组动物以生理盐水替代硫芥 ,相同部位行假手术 (即切开显露股骨 ,不作骨折固定 )。观察 2 4h存活率及伤情变化。结果　假手术组及单纯中毒组 2 4h死亡率均为 0 % ,中毒复合骨折动物未经救治死亡率为 10 0 % ,经手术急救后死亡率为 2 5 %。死亡兔与创伤重及骨折部位大出血有关。结论　硫芥中毒复合火器伤骨折 ,先挽救危及生命的骨折出血 ,同时洗消解毒     

硫芥中毒复合腹部穿透伤的初步实验研究

目的　观察硫芥中毒复合枪弹伤伤情 ,以了解硫芥中毒复合伤伤情特点 ,为临床救治提供帮助。方法　实验兔分中毒复合火器伤组及假手术组。中毒复合伤组 :兔正中切 1～ 2cm小口入腹 ,提起胃窦部缝扎固定于腹壁 ,固定于枪击架上 ,左侧腹部硫芥染毒 5min后 ,5 4式手枪距腹部 2 0cm枪击 ,立即进行中毒急救及手术救治。假手术组 :兔以生理盐水替代硫芥中毒 ,剖腹探查 (进腹 ,不做胃手术 )时间同实验组。 2 4h后观察存活率。结果　假手术组及单纯硫芥中毒组 2 4h死亡率均为 0 %。中毒复合枪伤的手术急救组 2 4h死亡率为 2 5 % ,未进行手术急救的死亡率为 10 0 %。死亡兔为腹腔内出血较多及创伤较重有关。结论　硫芥中毒复合火器伤的救治应在局部消毒、清创的同时以首先抢救火器伤情为主。     

人与不同种属动物骨髓粒系祖细胞对硫芥敏感性的比较

本文用半固体琼脂体外培养技术和琼脂扩散盒体内培养技术测定了人和不同种属动物骨髓粒系祖细胞(CFU—GM),比较了在体内与体外条件下硫芥对不同种属动物骨髓CFU—GM的剂量存活曲线。人、犬、大鼠和小鼠离体骨髓细胞受硫芥作用后CFU—GM的剂量存活曲线在半对数座标图中呈指数性直线,D_(10)(μmol/L)分别为:人0.79,犬0.24,大鼠0.49,小鼠0.84,对硫芥的敏感性以犬最敏感.其次是大鼠.人和小鼠相对最低.硫芥中毒犬、大鼠和小鼠骨髓CFU—GM对硫芥敏感性与体外结果基本一致.     

硫芥诱导HeLa细胞坏死和凋亡的超微结构变化

硫芥是一种细胞毒药物，能烃化生物体内一系列大分子物质，其中核酸是硫芥作用最敏感的靶分子．它还是首次证实有致突变的化学物质［１］．硫芥损伤的短期效应是引起ＤＮＡ断裂，细胞死亡；长期效应是致畸，致癌，致突变．硫芥对人体各种组织都有损伤作用，对皮肤，眼睛，...     

单细胞凝胶电泳图像分析软件的比较

单细胞凝胶电泳技术(SCGE，又称彗星试验)是在单细胞水平上检测DNA链断裂损伤的敏感方法。随着彗星试验的发展，一些无法用肉眼测量的能更精确反应彗星水平的指标如尾矩、尾部DNA含量，随着彗星分析软件的出现而得到解决。国外一些免费彗星分析软件的出现，如Sicion Image(以下简称Sicion)和CASP给科研工作人员带了极大方便。     

乙酰半胱氨酸及还原型谷胱甘肽对抗硫芥引起的细胞凋亡及坏死

本文在细胞水平上研究了 N-乙酰 L-半胱氨酸 ( NAC)及还原型谷胱甘肽 ( GSH)对抗硫芥致细胞坏死及凋亡的效应 .结果表明 :NAC和 GSH均可部分地对抗硫芥 1 0 0 0μmol· L-1引起的细胞坏死 ,可明显提高细胞的存活率 ,二者的有效浓度为0 .1 - 1 0 mmol· L-1. NAC( 5mmol· L-1)和 GSH( 5mmol· L-1)还均可对抗硫芥 ( 1 0 0 μmol·L-1)引起的细胞凋亡 ,使 DNA的降解片段明显减少 .流式细胞术检测表明 ,硫芥 1 0 0 μmol· L-1作用 1 2 h的 Hela细胞凋亡百分率为 37.2 % ,而 NAC和 GSH保护组的细胞凋亡百分率分别为 5.2 % ,8.2 % .谷氨酰胺也有对抗硫芥细胞毒的作用 ,但保护效果不及 NAC和 GSH.     

硫芥对小鼠造血干细胞自我更新和分化功能的影响

用2次移植法测定不同剂量硫芥sc小鼠骨髓CFU_0的自我更新和分化功能。硫芥小剂量(15mg/kg)杀伤下,约半数剩余的CFUs的更新潜能仍保持正常。加大硫芥剂量(25mg/kg)使CFUs严重耗竭,残存的CFUs仅为正常值的8％,但其自我更新能力却高达正常的2.5倍,并历时30d而不减退。在上述剂量作用下,不论近期或远期测定,残存的CFUs主要表现为向粒系分化的提高和向巨核系分化的减少。硫芥作用下残存的CFUs具有良好的自我更新功能,是其染毒后造血功能得以迅速恢复的根本原因。然而,造血干细胞向巨核系分化的相对减少,可能影响血小板的生成量是应该引起注意的问题。     

奎硫平所致不良反应文献分析

目的:分析奎硫平所致不良反应的临床特征、相关因素,为临床提供参考依据。方法:检索1989-2011年5月CNKI、VIP、万方数据库收载的奎硫平不良反应文献,得到符合标准的病例80例,按世界卫生组织(WHO)国际药品监测合作中心的不良反应分类方法进行分类、研究。结果:80例不良反应中,女性多于男性,21～40岁患者较多(38例,48%);不良反应均发生在调整剂量过程中;多发生在用药1个月内;累及的器官或系统较多,以神经系统损害最常见(35例,44%);不良反应转归总体较好。结论:合并用药容易引发严重不良反应,医生应尽量减少合并用药,在患者还未达到维持剂量状态的调药过程中要特别谨慎,建议1个月内进行血常规、肝功能、心电图等检查。     

硫芥对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的毒效应及机制

目的 建立硫芥(SM)染毒的神经细胞损伤模型,研究SM的神经细胞毒性效应及潜在机制。方法 采用SM 0(溶剂,0.2%乙醇),0.1,1.0,10,50,100,200,400和800μmol·L^-1孵育人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞30 min,而后去除药物,换用正常培养基孵育24 h。应用IncuCyte ZOOM长时间动态活细胞成像及数据分析系统观察细胞融合率和细胞形态;CCK-8法检测细胞活力;SM 0,1.0,10,25,50,100和400μmol·L^-1以同样方式处理细胞,calcein-AM/PI荧光染色检测活细胞比例和死细胞比例;试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率;5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)-488细胞增殖试剂盒检测细胞增殖;免疫荧光法测定细胞DNA双链断裂标志物γ-H2AX。SM 0,1.0,10和100μmol·L^-1以同样方式处理细胞后,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)相对含量;试剂盒检测细胞内NAD⁺/NADH和ATP含量;SM 10μmol·L     

甲氨蝶呤治疗类风湿关节炎对外周血淋巴细胞DNA的损伤

目的研究多次低剂量应用甲氨蝶呤治疗类风湿关节炎(RA)病人造成的淋巴细胞DNA的损伤,并探讨四氢叶酸对该损伤的保护作用。方法应用甲氨蝶呤10mg/次,每周1次,共8周,同时在应用甲氨蝶呤4h后应用相同剂量的甲酰四氢叶酸;用单细胞凝胶电泳方法检测其外周血淋巴细胞DNA的损伤及修复情况。结果单用甲氨蝶呤组细胞尾长及拖尾频率与对照组相比差异均有显著性,而同时应用等量的甲酰四氢叶酸其细胞尾长及拖尾频率与对照组相比差异无显著性。结论单细胞凝胶电泳技术可敏感地检测RA病人多次应用低剂量甲氨蝶呤造成的外周血淋巴细胞DNA损伤,并能反映甲酰四氢叶酸对甲氨蝶呤所致的DNA损伤的保护作用,为探讨甲氨蝶呤治疗RA引起的不良反应机制提供了线索。