实时荧光PCR法测定婴幼儿谷类辅助食品中麸质过敏原成分

目的建立实时荧光PCR法检测婴幼儿谷类辅助食品中麸质过敏原成分的含量。方法样品加入淀粉酶液化后,采用试剂盒方法提取样品DNA,考察大麦Hordein基因、小麦Gliadin基因、黑麦Secl基因和燕麦Avenin基因检测方法的特异性、灵敏度和检出限,幵应用于检测实际样品。结果确定了实时荧光PCR反应体系条件,各个基因的检测方法具有特异性强且灵敏度高,检出限为0.1%。结论该方法操作简便,准确率高,适用于婴幼儿谷类辅助食品中麸质成分的检测。     

食品过敏原羽扇豆成分的实时荧光PCR检测方法

羽扇豆是欧盟法规标签要求强制性标识的食品过敏原。采用现有参考文献TaqMan实时荧光PCR方法,研究建立食品过敏原羽扇豆成分的检测方法。研究表明建立的研究方法具有特异性,灵敏度高,检测限为1 mg/kg。此方法适用于食品中过敏原羽扇豆成分检测。     

实时荧光PCR法检测食物中榛子过敏原成分

榛子是最常见的食品过敏原之一,选择针对榛子不同基因的引物和探针,进行验证、比对和条件优化,建立榛子过敏原的实时荧光PCR检测方法。经实验比较,针对榛子热休克蛋白设计合成的引物和探针具有相对较高的灵敏性,检测限可达0.11ng DNA,而且和常见的食物种类无交叉反应,适于榛子过敏原的检测。该方法的建立,对于加强食品过敏原的标识管理,保护消费者利益、促进进出口贸易具有重要意义。     

实时荧光PCR法检测食物中榛子过敏原成分

榛子是最常见的食品过敏原之一,选择针对榛子不同基因的引物和探针,进行验证、比对和条件优化,建立榛子过敏原的实时荧光PCR检测方法。经实验比较,针对榛子热休克蛋白设计合成的引物和探针具有相对较高的灵敏性,检测限可达0.11ng DNA,而且和常见的食物种类无交叉反应,适于榛子过敏原的检测。该方法的建立,对于加强食品过敏原的标识管理,保护消费者利益、促进进出口贸易具有重要意义。      

双重实时荧光PCR法测定食品中大豆、小麦过敏原

目的:为食品监管部门有效检测食品中大豆、小麦过敏原提供技术支撑。方法:分别依据小麦醇溶蛋白基因及大豆Lectin基因为模板设计并创建TaqMan探针双重荧光PCR方法,大豆Lectin基因检测采用FAM标记,小麦醇溶蛋白基因检测采用HEX标记,同时以真核生物18S rRNA作为内参基因确保检测体系的有效性。结果:所创建的实时多重TaqMan探针PCR体系对大豆、小麦过敏原之外的物种成分无荧光扩增;大豆、小麦混合样品的检出限均能达到0.01%(质量分数)。结论:所创建的实时多重TaqMan探针PCR体系针对大豆、小麦过敏原有高特异性,可用于食品中过敏原大豆、小麦成分的同步快速检测。     

小麦和榛子过敏原成分检测的实时荧光PCR方法

过敏原风险问题已成为重要的食品安全问题,如何快速准确地检测出食物中的过敏原成为当前亟需解决的关键。目前常用的过敏原检测方法有免疫学检测、质谱及SPR等技术,但这些方法均有一定程度的局限性。通过引入分子生物学鉴定手段,建立小麦、榛子的过敏原基因数据库,并依据数据库寻找特异性序列并设计探针引物,建立一种快速、便捷、高效的过敏原检测方法,并适当调整了方法的检出限,降低了检测误判的风险。通过建立实时荧光PCR方法,可快速筛选样品的过敏原基因,简化了食品中过敏原成分的鉴定,降低了实验成本与技能要求,降低了检测的难度,缩短了实验时间。通过适用性验证与检出限验证实验,该方法用于过敏原成分鉴定可以达到理想的效果,重复性好,准确率高,检出限为1%。     

实时荧光PCR法检测食品和饮料中胡萝卜成分的研究

胡萝卜是一种质脆味美的家常蔬菜,同时也是一种常见的食品过敏原。针对胡萝卜抗冻蛋白基因的保守序列,设计特异性引物和探针,经验证和条件优化,建立胡萝卜成分的实时荧光PCR检测方法。经实验比较,针对胡萝卜抗冻蛋白设计合成的引物和探针具有相对较高的灵敏性,检测限可达1 ng DNA,而且和常见的食物种类无交叉反应,适于胡萝卜成分的检测。该方法的建立,对于加强食品过敏原的标识管理,保护消费者利益、促进进出口贸易具有重要意义。     

恒温实时荧光法快速检测婴幼儿辅助食品中胡萝卜成分的研究

为建立婴幼儿辅助食品中胡萝卜成分的恒温实时荧光快速检测方法,根据胡萝卜ITS1-5.8SRNA-ITS2基因序列设计合成恒温实时荧光法（LAMP）的特异性引物,以常见农产品及不同胡萝卜质量分数的白萝卜DNA分别验证方法的特异性和灵敏度,选取不同品系胡萝卜种子验证方法的适用范围,并通过预包装食品检测其实用性。结果表明：所建方法与其他物种无交叉反应,特异性强,能在1 h内检测低至质量分数为0.01%的胡萝卜成分,灵敏度高,适用于不同品系胡萝卜的检测。适用范围广,通过实际样本的检测验证,结果快速、准确。该方法操作简单、成本较低、数据智能判读实时同步、结果准确快速,可用于婴幼儿辅助食品中胡萝卜成分的快速检测,为婴幼儿食品标签管理及食品安全监管提供技术依据。     

实时荧光P C R 法检测食品中芝麻过敏原成分

本实验探讨采用实时荧光定量PCR 方法检测食品中的芝麻成分,结果表明：采用芝麻的引物和探针进行扩增时;22 种样品经实时PCR 扩增,只有白芝麻和黑芝麻产生荧光信号,其余样品均不产生荧光信号。灵敏度实验结果表明能检测到10-5 稀释度的4.4 ×10-12g DNA的量,定量关系式为：y=－ 3.472018x+18.851009,R2=0.993088。这两对引物和探针具有极高的灵敏度和扩增效率,符合痕量检测要求。     

实时荧光PCR快速筛选食品中鸭源性成分

基于鸭线粒体细胞色素Cyt b基因建立了肉制品中的鸭源性成分检测的real-time PCR方法,并对模拟样本和市售样本进行了检测分析,检出限低至1%,适用于实验室的鸭源性成分的鉴定分析。      

Detection of allergenic parvalbumin of Atlantic and Pacific herrings in fish products by PCR

The conventional polymerase chain reaction (PCR) method to detect the major allergenic protein parvalbumin beta 2 of Atlantic herring (Clupea harengus) and Pacific herring (Clupea pallasii) was developed. The specific set of primers for the amplification of the partial genomic sequence of the pvalb 2 gene encoding the main fish allergen of both herrings was designed and applied to the investigation of 24 commercial fish products. The targeted amplicon size was 189 bp of pvalb 2 gene of Atlantic herring and Pacific herring. As the internal amplification control, the DNA of 18S rRNA gene for eukaryotes (141 bp) was successfully used. The specificity of designed primer pair using 26 various fish species was assessed. The intrinsic detection limit was 10 pg µl^?1 of the present specific DNA. Atlantic herring or Pacific herring allergenic parvalbumins were detected in 22 investigated fish products in conformity with the package declaration. Two fish products were negative in spite of the declaration. The proposed PCR method is specific enough and can be used for the detection of Atlantic and Pacific herrings’ major allergen parvalbumin beta 2 in fish food products.     

实时荧光PCR方法在食品真伪辨别中的应用

实时荧光PCR技术以其特异性、灵敏性、简便、快速的优点,广泛应用于食品鉴伪检测。本文阐述了实时荧光PCR的原理以及其在肉制品、高价值食品、乳制品、果汁、水产品和油脂鉴伪检测方面的应用情况。      

实时荧光定量PCR技术快速检测志贺氏菌

目的 建立实时荧光定量PCR法快速检测志贺氏菌。方法 提取志贺氏菌基因组为模板扩增virA基因片段, 将目的片段连接至pMD19-T载体得到重组质粒, 转化大肠杆菌DH5α感受态细胞, 验证所得到的重组质粒, 以紫外分光光度计测量重组质粒吸光度值A260, 并换算为质粒拷贝数后作梯度稀释得到不同浓度的质粒标准品; 进行荧光定量PCR分析并通过特异性、灵敏性实验以验证该方法的可行性。结果 重组质粒标准品浓度在103~108 copies/μL范围内线性关系良好(r2>0.99), 实时荧光定量PCR检测志贺氏菌时出现良好的扩增曲线, 鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均未出现扩增曲线。志贺氏菌的检出限为100 CFU/mL。 结论 本方法便捷、高效、可靠, 可用于志贺氏菌的快速定性定量检测。     

实时荧光定量PCR法鉴别俄罗斯鲟鱼子酱分子

目的 建立鉴别荧光定量PCR法鉴别俄罗斯鲟鱼子酱的方法.方法 以鲟形目16种鱼类D-LOOP基因序列作为目的基因进行比对,选择差异序列设计俄罗斯鲟特异性引物,构建俄罗斯鲟源性成分实时荧光PCR检测方法.结果 通过特异性检测同目7种近源物种、46种非近源物种,表明该方法对于俄罗斯鲟源性成分具有较好的特异性;进行梯度稀释灵...     

鱼肉制品中龙利鱼和巴沙鱼的鱼源性成分的双重实时荧光PCR快速检测法

目的 建立龙利鱼和巴沙鱼源性成分的双重实时荧光聚合酶链式反应(PCR)快速检测方法。方法 根据13种龙利鱼的线粒体16S rRNA序列,设计通用引物和探针,根据巴沙鱼的线粒体cytb基因序列设计引物和探针,通过优化扩增反应体系进行双重实时荧光PCR扩增,达到快速检测产物的目的。结果 本方法特异性良好,龙利鱼基因组DNA灵敏度可达到10^-3ng,在与鲤鱼粉混合的鱼肉制品中可检测,质量分数灵敏度达到1%。巴沙鱼基因组DNA灵敏度可达到10^-4ng,在与龙利鱼粉、大西洋鳕鱼粉混合的鱼肉制品中均可检测,质量分数灵敏度达到0.1%,在与米粉混合的鱼肉制品中可检测,质量分数灵敏度达到0.001%。结论 本方法检测特异性高、所需时间短、灵敏度高,可满足鱼肉制品中龙利鱼真伪鉴别和巴沙鱼掺假的检测要求。     

食品中副溶血性弧菌toxR和tdh基因双色荧光PCR检测方法的建立

目的 建立对副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）特异性检测toxR（跨膜转录激活蛋白）基因和tdh（热稳定性直接溶血素）毒力基因的Taqman探针双色荧光PCR检测方法。方法 根据副溶血性弧菌toxR基因和tdh基因,分别设计引物和探针,建立Taqman探针双色荧光PCR扩增体系,进行特异性、灵敏度试验;对副溶血性弧菌分离菌株实施检测,了解其tdh基因和tdh基因分布情况。结果 结果表明,副溶血性弧菌标准菌株和3株从食物中毒患者中分离获得的分离株均出现toxR基因和tdh扩增曲线,而溶藻弧菌、单增李斯特菌等31株弧菌属其他菌株和肠杆菌科的菌株未见扩增曲线。从食品中分离的37株副溶血性弧菌分离株均未携带tdh毒力基因。副溶血性弧菌检测灵敏度可达到3.6×102 cfu/mL。结论 该方法可用于同时检测食品中副溶血性弧菌的特异性和毒力基因。     

荧光PCR快速检测A、C、G群溶血性链球菌

克服现有文献中PCR检测方法仅能检测兰氏A群链球菌的局限,建立适用于溶血性链球菌群全族群的荧光PCR快速检测方法,实现与国家标准GB/T4789.11-2003检测范围一致。通过文献搜索以及杆菌肽敏感实验,对国标检验范围进行界定。使用CLUSTALX软件寻找兰氏A、C、G群保守序列并设计特异性引物和探针,同时通过特异性实验、模拟污染实验以及方法比对实验验证该方法的特异性、检出限及可靠性。特异性实验结果表明,该方法能特异扩增兰氏A、C、G群链球菌;模拟污染实验表明,在增菌18h后增菌液最低初始污染菌含量分别为3、50、2CFU/mL时,兰氏A、C、G群链球菌可被检出。110份样品比对实验结果表明与国标检测方法实验结果一致。该方法可应用于食品中溶血性链球菌的快速检测,并可为快速检测溶血性链球菌国家标准的建立提供参考。     

菠萝成分的实时荧光PCR检测方法的建立

目的本文研究建立食品中菠萝成分的实时荧光PCR检测方法。方法根据菠萝rbcL基因设计菠萝物种特异性检测引物和荧光探针,对样品中的靶标基因片段进行检测,并进行物种特异性检测、灵敏度测试和实际应用检测。结果通过对供试的58种动植物材料进行检测,只有菠萝出现特异性扩增,其他物种材料无扩增;对不同浓度菠萝DNA样品和不同含量的菠萝粉样品进行灵敏度测试,该检测方法对菠萝成分的检测灵敏度分别为0.01 ng/μL菠萝DNA和0.1%菠萝粉;对市场销售的实际样品进行检测,能够满足于检测需求。结论该方法简单、灵敏、快速、准确,能应用于食品中菠萝成分检测。     

实时荧光PCR法检测鼠伤寒沙门氏菌

目的 建立实时荧光PCR法检测鼠伤寒沙门氏菌的方法。方法 基于鼠伤寒沙门氏菌II型限制酶基因, 设计引物及Taqman探针, 利用实时荧光PCR进行特异性、灵敏性及模拟样品的检测实验。结果 特异性探针可从25种血清型沙门氏菌(共49株)及11株阴性对照菌株中检测出全部的11株鼠伤寒沙门氏菌。以鼠伤寒沙门氏菌梯度稀释菌液DNA为模板进行实时荧光PCR实验, 菌株模板浓度与Ct值呈良好线性关系, 线性系数(R2)为0.998, 扩增效率90%, 最低检测浓度300 cfu/mL。对已接种鼠伤寒沙门氏菌的4种模拟样品同时进行实时荧光PCR检测和传统方法鉴定, 两者结果一致。结论 此方法特异、灵敏、准确, 适于食品中鼠伤寒沙门氏菌的检测。