三氧化二砷对黑色素瘤B16细胞端粒酶活性影响

目的:研究三氧化二砷(As2O3)对黑色素瘤B16细胞端粒酶活性的作用,探讨砷及其化合物治疗黑色素瘤的作用机制,为其治疗黑色素瘤提供新的理论和实验依据.方法:用TRAP-ELISA和TRAP-PAGE银染法检测黑色素瘤B16细胞(简称B16)端粒酶活性.结果:As2O3对黑色素瘤B16细胞端粒酶活性的抑制有明显的浓度和时间依赖关系.结论:As2O3对黑色素瘤B16细胞端粒酶活性表达的抑制作用随药物浓度的增加或作用时间的延长而增强.     

三氧化二砷抑制恶性黑色素瘤B16细胞核酸合成的研究

目的:研究不同浓度的三氧化二砷(As2O3)对恶性黑色素瘤B16细胞核酸合成抑制及诱导B16细胞凋亡的作用,探讨砷及其化合物治疗恶性黑色素瘤的作用机制,为其治疗恶性黑色素瘤提供新的理论和实验依据. 方法:采用3H-TdR和3H-UdR掺入肿瘤细胞DNA和RNA的方法,观察不同浓度的As2O3对恶性黑色素瘤B16细胞核酸生物合成的抑制作用; 用流式细胞术(FCM)检测As2O3诱导B16细胞的凋亡及细胞毒作用. 结果:As2O3 对恶性黑色素瘤B16细胞核酸合成抑制和诱导凋亡及细胞毒作用有显著的浓度和时间依赖关系(P<0.01).结论:As2O3对恶性黑色素瘤B16细胞核酸合成的抑制作用和诱导凋亡及细胞毒作用随药物浓度的增加和作用时间的延长而增强.     

GLS/IL-12对黑色素瘤细胞B16的增殖及凋亡的影响

目的:体外检测人GLS活性肽和小鼠IL-12基因的共表达产物对黑色素瘤细胞B16的增殖及凋亡的影响.方法:用脂质体将含GLS活性肽和小鼠IL-12基因的共表达质粒转染黑色素瘤细胞B16并用RT-PCR检测其表达,再用MTT试验、Hoechst33258染色、AO/EB染色和Annexin V-FITC流式细胞分析检测基因表达产物对B16细胞的增殖抑制与促凋亡作用.结果:GLS活性肽和小鼠IL-12基因能在B16细胞中表达,MTT法观察到表达产物对B16有明显的细胞增殖抑制作用,经Hoechst33258染色、AO/EB染色和流式细胞分析观察到细胞核浓缩、深染、细胞膜改变等凋亡特征,凋亡指数明显高于对照组.结论:GLS活性肽和小鼠IL-12基因的共表达产物对黑色素瘤细胞B16具有明显的增殖抑制作用及促凋亡作用.     

紫杉醇对黑色素瘤细胞B16-F10细胞凋亡影响的机制研究

目的 探讨紫杉醇对黑色素瘤细胞B16-F10细胞凋亡的影响和作用机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测紫杉醇对B16-F10细胞增殖能力及细胞生长的影响,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡.结果 紫杉醇（0.001-10 μM）对B16-F10细胞表现出抑制作用,并且这种抑制作用具有浓度依赖性和时间依赖性,随着浓度的增加和作用时间的延长,抑制作用更为明显.低浓度对细胞周期G0/G1作用,而高浓度对G0/G1和G2/M均发挥作用.结论 紫杉醇对黑色素瘤细胞B16-F10具有明显促进凋亡的作用.紫杉醇可能作为黑色素瘤治疗的策略之一.     

苦参碱对人恶性黑色素瘤A375细胞株增殖和凋亡的影响

目的 研究苦参碱对人恶性黑色素瘤A375细胞株增殖和凋亡的影响.方法 用MTT法观察不同浓度苦参碱对培养的人恶性黑色素瘤A375细胞增殖的抑制作用,采用Annexin-V-FIFT/PI双染色法检测其凋亡细胞,并用倒置显微镜和透射电镜观察细胞形态学的改变.结果苦参碱明显抑制A375细胞增殖,其抑制率与药物浓度和作用时间呈正相关.凋亡细胞的比例与药物浓度呈剂量依赖性.光镜和电镜观察证实随着苦参碱浓度的增加,A375凋亡细胞增多.结论 苦参碱对人恶性黑色素瘤细胞的增殖具有明显的抑制作用,并能诱导其发生凋亡.     

紫外线诱导小鼠B16黑色素瘤细胞凋亡研究

目的 :研究紫外线照射对小鼠B16黑色素瘤细胞凋亡率的影响。方法 :用UV照射培养的小鼠B16黑色素瘤细胞 ,于照射后不同时段分别用流式细胞仪 (FCM )及原位末端标记法 (TUNEL法 )检测B16细胞凋亡率。结果 :UV照射后 0h、12h、2 4h及 36h ,B16细胞的凋亡率分别为 (4 .13± 0 .15 ) % ;(9.2± 0 .74 ) % ;(2 1.6± 1.2 8) % ;(36 .7± 1 5 6 ) %。各时间段B16细胞的凋亡率与对照组B16细胞的 (2 .3± 0 .2 6 ) %相比均有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :紫外线照射可诱导小鼠B16黑色素瘤细胞凋亡。     

三氧化二砷诱导肺癌细胞凋亡及对细胞周期的影响

目的：探讨三氧化二砷（As2O3)对人肺癌细胞株（Spc-A1)诱导凋亡的机制,为抗肿瘤药物的筛选和用药方式提供理论依据。方法：体外培养Spc-A1细胞株与不同浓度的As2O3进行作用,应用MTT比色法、流式细胞仪技术、电子显微镜技术观察细胞增殖率、细胞周期率、细胞凋亡率及亚细胞水平变化。结果：As2O3能够抑制Spc-A1细胞的增殖,且呈时间剂量依赖性,Spc-A1细胞凋亡率与药物浓度和时间呈依赖关系。电镜观察细胞线粒体肿胀、空泡,染色质浓缩、核碎裂。结论：As2O3可诱导Spc-A1细胞凋亡,细胞周期延长,线粒体变性。     

三氧化二砷对恶性黑色素瘤A375细胞株凋亡的诱导作用

目的:研究三氧化二砷(As2O3)对人恶性黑色素瘤A375细胞株凋亡的诱导作用.方法:采用流式细胞术(FCM)检测不同浓度的三氧化二砷诱导A375细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率.结果:As2O3浓度分别为5 μmol/L、10μmol/L、20 μmol/L时,A375细胞的早期凋亡率分别为9.75%、50.9%和43.7%,晚期凋亡率分别为2.10%、4.61%和11.2%,总凋亡率分别为11.85%、55.51%和54.9%.结论:As2O3可诱导A375细胞早期凋亡和晚期凋亡,10 μmol/L和20μmol/L的As2O3可明显增加A375细胞总凋亡率.     

氧化苦参碱对HPV16感染宫颈癌Siha细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨氧化苦参碱对人类乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)16感染宫颈癌Siha细胞增殖与凋亡的影响。方法:以人子宫颈鳞癌Siha细胞作为HPV16感染型宫颈癌体外实验模型,常规复苏、培养及传代;加入不同质量浓度氧化苦参碱(0.2 g·L~(-1)、0.4 g·L~(-1)、0.8 g·L~(-1)、1.6 g·L~(-1))作为实验组,加入等体积RPMI-1640作为溶剂对照组,作用24 h、48 h、72 h;噻唑蓝法检测细胞增殖活性改变,流式细胞仪分析细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法分析凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、P53表达。结果:噻唑蓝结果显示:氧化苦参碱对HPV16感染宫颈癌Siha细胞增殖抑制作用呈质量浓度和时间依赖性(P0.05)。流式细胞仪检测结果显示:不同质量浓度氧化苦参碱作用48 h后,细胞凋亡率与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);氧化苦参碱作用48 h后,与对照组比较,实验组Siha细胞G0/G1期比率上升(P0.05),S期和G2/M期比率下降(P0.05),细胞生长周期停滞于G1期。蛋白免疫印迹检测结果显示:不同质量浓度氧化苦参碱作用48 h后,实验组凋亡相关蛋白Bcl-2蛋白表达下调,Bax、P53蛋白表达上调,且其上调(下调)呈质量浓度依赖性。结论:氧化苦参碱通过抑制Siha细胞增殖和诱导Siha细胞凋亡发挥抗肿瘤作用。     

Genistein抑制Livin基因对恶性黑色素瘤LiBr细胞凋亡、周期及增殖的影响

目的观察genistein抑制Livin基因对恶性黑色素瘤LiBr细胞凋亡、周期及增殖的影响。方法应用RT-PCR检测不同浓度genistein作用LiBr细胞48 h后Livin的表达变化;取最适浓度的genistein作用LiBr细胞后应用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响,应用PI单染流式细胞术分析对细胞周期的改变,应用Western blot检测其对凋亡效应蛋白Ccaspase-3表达的影响及应用MTT比色法检测其对细胞增殖的作用。结果 Genistein可增加LiBr细胞早、晚期凋亡率[分别为(27.87±5.38)%和(11.87±3.86)%],诱导LiBr细胞凋亡(P<0.01);引起细胞G0/G1期阻滞[G0/G1=(72.11±5.89)%、S=(14.53±3.47)%、G2/M=(12.36±2.64)%];下调caspase-3蛋白表达及抑制细胞增殖(P<0.01)。结论 Genistein可诱导LiBr细胞凋亡、使细胞增殖周期进展受阻、抑制细胞增殖。     

三氧化二砷联合维A酸对恶性黑色素瘤细胞株A375的增殖、迁移能力影响及其可能分子机制的探讨简

目的 研究三氧化二砷（As2O3）联合维A酸对恶性黑色素瘤细胞株A375的增殖、迁移能力影响及其可能的分子机制.方法 常规培养黑色素瘤细胞株A375,分为空白对照组（不含药物的DMEM处理）、As2O3组（10μmol/LAs2O3）、全反式维A酸（at-RA）组（10 μmol/L at-RA）、As2O3＋at-RA组（10.μmol/LAs2O3联合10 μmol/L at-RA）.MTT法检测细胞活力,划痕试验检测细胞迁移能力,Western-blot法检测MMP-2、Caspase-2的蛋白水平.结果 ①As2O3＋at-RA组的细胞活力为（35.8±7.3）％,低于As2O3组的（62.4±10.3）％和at-RA组的（59.3±11.3）％,差异有统计学意义（P＜ 0.05）;②As2O3＋at-RA组的迁移能力相对值为（21.3±6.3）％,低于As2O3组的（55.4±9.5）％和at-RA组的（57.1±10.4）％,差异有统计学意义（P＜ 0.05）;③As2O3＋at-RA组的Caspase-2蛋白含量为（274.1±42.4）％,高于As2O3组（175.2±29.4）％和at-RA组（181.4±23.8）％;As2O3＋at-RA组的MMP-2蛋白含量为（36.2±8.2）％,低于As2O3组（64.2±10.4）％和at-RA组（62.7±9.4）％.结论 As2O3和at-RA联合应用能够抑制黑色素瘤细胞株A375的增殖和迁移能力,这一作用可能是通过上调Caspase-2、下调MMP-2来发挥的.     

三氧化二砷对血管内皮细胞增殖和周期的影响

目的:观察As2O3对血管内皮细胞增殖、凋亡和细胞周期的干扰,探讨As2O3对血管内皮细胞生长的直接影响。方法:血管内皮细胞EVC-304体外培养,As2O3干预。采用MTT测定细胞活性,流式细胞仪测定细胞周期、细胞凋亡。结果:ECV-304细胞经过As2O3干预,其存活率明显降低,并且呈剂量依赖性。As2O3干预后,进入S期的细胞减少,细胞周期被阻在G1期,细胞可能在G1期进入凋亡。As2O3诱导早期凋亡是对照组的2.88～5.1倍,并且呈剂量依赖性;其晚期凋亡是对照组的1.17～1.67倍。结论:As2O3可直接干扰血管内皮细胞的细胞周期,阻滞细胞在G1期,并诱导细胞凋亡,进而抑制血管内皮细胞的增殖。     

亚砷酸对人肝癌细胞凋亡及Caspase-3活性的影响

目的探讨亚砷酸对人肝癌细胞凋亡及半胱氨酸蛋白酶（Caspase）-3活性的影响。方法采用细胞培养技术,以肝癌细胞系SMMC7721为靶细胞,以不同浓度的药物处理细胞72h后,利用WST-8法测定亚砷酸对细胞增殖的影响;利用荧光染料Hoechst33258染色,荧光显微镜观察细胞核碎片;以流式细胞仪分析细胞周期的变化;采用CaspasebE色法检测Caspase-3活性。结果亚砷酸（10umol／L）对SMMC7721细胞有明显抑制作用,可诱导SMMC7721细胞凋亡,并能增强Caspase-3基因的活性。结论亚砷酸能够诱导SMMC7721细胞凋亡,其机制与Caspase-3依赖性凋亡调节信号通路有关。     

三氧化二砷诱导血液肿瘤细胞凋亡的机制研究

目的 了解三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）诱导的细胞凋亡是否与线粒体跨膜电位（ΔΨｍ）改变有关及其可能机制。方法 以急性早幼粒细胞性白血病（ＡＰＬ）细胞系ＮＢ４、慢性淋巴细胞性白血病细胞系ＳＫＷ３、Ｂｕｒｋｉｔｔ’ｓ淋巴瘤细胞系Ｎａｍａｌｗａ及其它２个急性髓性白血病细胞系ＨＬ－６０和Ｕ９３７为体外模型,应用碘化丙啶（ＰＩ）／Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ１２３（Ｒｈ１２３）双重染色检测ΔΨｍ,通过测定细胞活力、亚Ｇ１     

三氧化二砷诱导T淋巴细胞白血病细胞株凋亡研究

目的研究三氧化二砷(As2O3)对T淋巴细胞白血病细胞株的作用及其机制.方法用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察药物对细胞株的生长抑作用,流式细胞仪测定细胞凋亡峰,端粒重复扩增法检测端粒酶活性,实时RT-PCR测定端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达.结果2～6μmol/L As2O3可抑制Molt-4细胞生长,且随着时间的延长和药物剂量的增大,这种抑制作用更为明显(P<0.05).药物作用72h,As2O3对Molt-4细胞生长抑制半数致死量为4.68μmol/L.2～6μmol/L浓度范围内,As2O3诱导Molt-4细胞的凋亡率随时间的延长和药物剂量的增大而升高(P<0.05).6μmol/L药物作用96h,K562细胞和Molt-4细胞的凋亡率分别为83.44%±18.04%和77.93%±6.00%.As2O3能显著抑制Molt-4细胞株端粒酶活性,下调hTERT mRNA表达.结论As2O3有明显抑制T淋巴细胞白血病细胞生长和诱导细胞凋亡的作用.通过下调hTERT mRNA表达,从而抑制端粒酶活性可能是As2O3的主要作用机制之一.     

三氧化二砷与奥曲肽联用抑制人肝癌细胞株的增殖和诱导凋亡的作用

目的:研究三氧化二砷(AS2O3)与奥曲肽(octreotide)联用对肝癌细胞生长增殖及细胞凋亡的作用,探讨其对肝癌的作用机制.方法:应用AS2O3和octreotide共同处理肝癌细胞株SMMC-7721,通过MTT法检测细胞存活率;用流式细胞术检测细胞周期变化及细胞凋亡率;透射电镜观察细胞形态变化及细胞凋亡情况.结果:AS2O3与octreotide联用可明显抑制SMMC-7721的生长,两药合用的中效浓度分别为2.0221μmol/L和8.088μmol/L,较两药单用时的中效浓度低(AS2O3单用为3.707μmol/L,octreotide单用为22.637μmol/L).且两药合用可将肝癌细胞阻滞于S期并可诱导细胞凋亡.结论:AS2O3可与Octreotide协同抑制人肝癌细胞株的增殖,又能诱导其凋亡.     

运用蛋白质组学研究三氧化二砷诱导K562细胞凋亡过程中核基质蛋白的变化

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)在体外对慢性粒细胞性白血病细胞系K562细胞核基质蛋白的影响. 方法:用DNA梯度电泳观察As2O3作用后K562细胞凋亡的情况.单向、双向电泳观察As2O3对K562细胞核基质蛋白分布影响. 结果:2.5 μmol/L As2O3处理72 h后,DNA电泳已能检测到发生凋亡的K562细胞,但早在As2O3处理48 h时, 即能观察到核基质蛋白分布的改变,此时尚不能观察到凋亡特征性的DNA片段梯形条带.双向电泳可检测出200多个核基质蛋白点,其中约18个点与As2O3处理相关. 结论:As2O3对K562细胞的影响是时间和剂量依赖性的.双向电泳检测As2O3对K562核基质蛋白分布的影响较DNA梯度电泳检测更为敏感.核基质蛋白成分可能是砷作用的靶蛋白,并且可能是药物发挥抗癌作用的关键点之一.     

三氧化二砷对球囊拉伤后兔血管平滑肌细胞作用的实验研究

目的　探讨三氧化二砷对球囊拉伤后兔髂动脉血管平滑肌细胞的促凋亡作用及其对再狭窄防治的意义。方法　贴块法行球囊拉伤后兔髂动脉血管平滑肌细胞培养 ,将细胞分为正常对照组 ,三氧化二砷 (浓度分别为 1 0、2 0、3 0、4 0及 5 0 μmol/L)组 ,通过绘制细胞生长曲线、DNA电泳、透射电镜、原位细胞凋亡检测试剂盒 (TUNEL)来观察三氧化二砷促细胞凋亡作用。结果　随三氧化二砷浓度的增加它能够抑制细胞的增殖并且该作用与时间及三氧化二砷浓度呈正相关 ,观察第7天、浓度为 5 0 μmol/L时活细胞数为 (5 30± 0 10 )× 10 5/ml与正常对照组 (2 8 77± 0 93)× 10 5/ml相比较差异有显著意义P <0 0 5 )。透射电镜下可见凋亡小体、DNA电泳可见典型凋亡后梯形条带、TUNEL可见凋亡细胞由 18 0 %± 3 1%增至 39 8%± 2 7% (P <0 0 5 )。正常对照组均不见上述变化。结论　三氧化二砷可促进球囊拉伤后兔髂动脉血管平滑肌细胞的凋亡 ,抑制其过度增殖。     

三氧化二砷对黑素瘤B16细胞黏附和迁移的影响

目的:了解三氧化二砷(As₂O₃)对黑素瘤B16细胞迁移能力的影响,评价As₂O₃抗肿瘤侵袭和转移能力。方法:用Transwell侵袭转移模型评价As₂O₃抗黑素瘤B16细胞的侵袭和转移作用。MTT法检测B16细胞的黏附能力。流式细胞术检测B16细胞表面黏附分子CD44的表达情况。结果:As₂O₃可显著抑制B16细胞的迁移和黏附能力(P<0.05~P<0.01),降低细胞表面黏附分子CD44的表达(P<0.01)。结论:As₂O₃具有抗黑素瘤B16细胞侵袭和转移作用,降低细胞表面黏附分子CD44的表达可能是其机制之一。