棕榈酸诱导人绒毛滋养层细胞胰岛素抵抗模型的建立

目的探讨人胎盘绒毛滋养层细胞HTR8-S/Vneo在高脂环境下是否会形成胰岛素抵抗。方法用MTT法测定棕榈酸和胰岛素不影响HTR8-S/Vneo细胞增殖的最适浓度,在该最适浓度下分为四组(对照组、棕榈酸组、胰岛素组、棕榈酸-胰岛素协同处理组)处理HTR8-S/Vneo细胞,检测不同处理条件及不同处理时间下,细胞葡萄糖摄取量和细胞内总糖量。结果用MTT法检测不同浓度棕榈酸及胰岛素处理的HTR8-S/Vneo细胞,发现棕榈酸浓度为0.125mmol/L、胰岛素浓度为100nmol/L时,对细胞增殖没有显著影响(P0.05),故选择该浓度的棕榈酸与胰岛素处理HTR8-S/Vneo细胞。在处理12h、18h、24h、36h分别检测葡萄糖的消耗量和细胞内总糖量,发现与对照组相比,胰岛素处理后葡萄糖消耗量和细胞内总糖量呈上升趋势(P0.05),而棕榈酸处理后葡萄糖消耗量和细胞内总糖量无显著变化(P0.05);与棕榈酸单独处理组相比,棕榈酸-胰岛素协同处理组在12h和18h能显著增加细胞内总糖量(P0.05),但在24h和36h时这种显著差异消失(P0.05),且与单独胰岛素处理组相比,棕榈酸-胰岛素协同处理组显著降低了葡萄糖消耗量和细胞内总糖量(P0.05)。结论棕榈酸-胰岛素协同处理24h,引起HTR8-S/Vneo细胞对胰岛素的敏感性降低,HTR8-S/Vneo细胞胰岛素抵抗模型建立;与文献报道模型相比,棕榈酸-胰岛素协同处理大大缩短了细胞出现胰岛素抵抗的时间。     

促肾上腺皮质激素释放激素对JAR细胞凋亡相关蛋白配体表达的影响

本实验采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测促肾上腺皮质激素释放激素(cortico-tropin-releasing hormone,CRH)对体外培养的滋养层细胞(绒毛膜上皮癌细胞系JAR细胞)凋亡相关蛋白(factor associated suicide)配体(Fas ligand,FasL)的表达及其调节作用。一、实验步骤1.不同浓度CRH对JAR细胞FasL的表达:JAR细胞(上海细胞生物研究所)传代后分为4组:分别用含10-9、10-8、10-7mol/L CRH(Sigma,美国)及不含CRH(对照组)的无血清RPMI1640培养液,在六孔培养板中培养24h后,收获细胞,提取RNA,并行RT-PCR。实验重复5次。2.CRH…     

埃兹蛋白在早孕自然流产患者蜕膜、绒毛的表达

目的探讨埃兹蛋白在胎盘形成过程中是否有作用及其与自然流产的关系。方法采用免疫组织化学方法检测自然流产组及正常妊娠组蜕膜和绒毛中埃兹蛋白的表达。结果在蜕膜及绒毛组织的蜕膜细胞以及滋养层细胞的胞膜和胞浆内均可见深浅不一的棕黄色颗粒沉着。与正常妊娠组相比,自然流产组蜕膜组织中埃兹蛋白的表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);与正常妊娠组相比,自然流产组绒毛组织中埃兹蛋白的表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论自然流产组较正常妊娠组蜕膜及绒毛组织中埃兹蛋白的表达减弱,推测埃兹蛋白低表达可能与胚泡植入过程中胚泡不易黏附、滋养层细胞侵袭力下降、胎盘形成不良有关,提示埃兹蛋白可能在胎盘形成及妊娠的维持过程中起作用。     

缺氧对滋养层细胞功能的影响

在早孕期 ,由于胎盘绒毛发育不完善 ,胚胎与母体血液之间的物质交换尚未完全建立 ,胚胎发育及滋养层细胞侵入子宫基质的过程是在一个相对缺氧的环境下进行的。缺氧对这些过程产生着广泛的影响 ,而其对滋养层细胞增殖和功能的调节是这些影响的核心 ,并与一些妊娠疾病的病理机制有关。本文就近年来有关缺氧对滋养层细胞功能影响的研究进展进行综述     

细胞凋亡与诱导型一氧化氮合酶在早期自然流产绒毛滋养细胞的表达

目的 :为了探讨细胞凋亡与诱导型一氧化氮合酶 (i NOS)对早期自然流产的影响。方法 :应用末端缺口标记法 (TUNEL)检测自然流产 (流产组 )绒毛组织中滋养细胞的凋亡 ,原位杂交及免疫组织化学 (免疫组化 )方法检测 i NOS的表达 ,利用计算机 CMIAS系统 ,滋养细胞凋亡及原位杂交阳性表达指标以光密度 (D)及数密度 (N/S)表示 ,免疫组化阳性表达指标以 N/S及阳性单位 (Pu)表示 ,检测结果与正常人工流产 (对照组 )比较。结果 :滋养细胞凋亡阳性指标 D、N/S流产组 (分别为 0 .48± 0 .0 4及 0 .0 45± 0 .0 0 2 )显著高于对照组 (分别为 0 .35± 0 .0 6及 0 .0 31± 0 .0 0 3) ,差异有显著性 (均为 P<0 .0 1 ) ;原位杂交及免疫组化同时显示阳性细胞表达指数流产组高于对照组 ,差异有显著性 ,凋亡与 i-NOS表达呈正相关。结论 :滋养细胞凋亡和 i NOS的表达在早期自然流产中具重要作用 ,细胞凋亡的发生和 i NOS表达有关。     

PEG10对人类绒毛滋养层细胞系HTR-8/Svneo细胞增殖和凋亡影响的初步研究

目的 初步研究父系表达印记基因PEG10低表达对人类绒毛滋养层细胞系HTR-8/Svneo细胞增殖和凋亡的影响。方法 构建4组PEG10干扰载体[si-898、si-1854、si-1951及对照(si-NC)],然后转染到HTR-8/Svneo细胞株并进体外培养,si-NC组为对照组。流式细胞术检测HTR-8/Svneo细胞的细胞周期和细胞凋亡,qRT-PCR检测Cytochrome C、Caspase3、Bid、Bak、Bax及Cyclin D1 mRNA的表达情况,MTT法检测细胞增殖活力。结果 与对照组比较,转染3组siRNA片段均能显著抑制PEG10基因的表达(P<0.05),其中si-898、si-1854抑制作用更显著(P<0.01)。转染si-898或si-1854的HTR-8/Svneo细胞Cytochrome C、Caspase3、Bid、Bak、Bax mRNA的表达显著升高(P<0.01),而Cyclin D1 mRNA的表达显著降低(P<0.05),并且细胞凋亡率也显著高于对照组(P<0.05)。MTT法检测细胞增殖活力显示,与对...     

早期自然流产患者绒毛、蜕膜组织中血红素氧合酶-一氧化碳的表达

目的 探讨血红素氧合酶(HO)和内源性一氧化碳(CO)在早期自然流产患者绒毛和蜕膜组织中的表达情况及其相关性.方法 应用免疫组化法检测20例正常早孕和30例早期自然流产(SA)患者绒毛和蜕膜组织HO-1、HO-2的表达,双波长定量的方法测定两组碳氧血红蛋白(COHb)水平.结果 HO-1蛋白主要定位于蜕膜上皮细胞、蜕膜细胞、绒毛滋养层细胞和绒毛间质,HO-2蛋白主要定位于蜕膜上皮细胞、蜕膜细胞、绒毛滋养层细胞、绒毛间质和血管内皮细胞.SA组绒毛滋养细胞、绒毛间质HO-1、HO-2表达的水平均明显低于正常早孕组(P<0.01);SA组绒毛血管内皮细胞及蜕膜细胞、蜕膜血管内皮细胞HO-2表达的水平均明显低于正常早孕组(P<0.05);两组蜕膜腺上皮细胞HO-2的表达及HO-1在蜕膜组织的表达均无显著差异(P>0.05);SA组绒毛和蜕膜组织中的COHb含量明显低于正常早孕组(P<0.01,P<0.05).结论 HO-CO在母胎界面表达水平降低可能与早期自然流产的发病有关.     

X染色体相关凋亡抑制蛋白在移行细胞癌中的表达及临床意义

目的 探讨X染色体相关凋亡抑制因子(XIAP)在移行细胞癌(TCC)组织中的表达及意义, 方法应用免疫组化S-P法、蛋白质印迹法、RT-PCR法检测43例TCC(肾盂癌6例、输尿管癌2例、膀胱癌35例)以及12例正常移行上皮细胞组织中XIAP蛋白及mRNA表达水平,并采用t检验和方差分析进行统计学比较. 结果 XIAP蛋白及mRNA表达在TCC和正常移行上皮组织(S-P法:22±5和16±2;蛋白质印迹法:1.21±0.15和0.61±0.24;mRNA:1.17+0.30和0.75±0.17)、膀胱癌复发者与初发者(S-P法:24±3和20±3;蛋白质印迹法:1.66±0.28和1.10±0.23;mRNA:1.44±0.27和1.05±0.23)之间比较差异有统计学意义(P<0.05).而在TCC分级、膀胱癌与输尿管和肾盂癌、膀胱癌分期以及膀胱癌单发与多发之间XIAP表达比较差异均无统计学意义(P>0.05), 结论 XIAP在TCC中呈高表达,可能是促进移行上皮恶变的一个重要因素.膀胱癌复发者XIAP表达较初发者明显增高,检测XIAP表达可能成为判断膀胱癌预后、预防膀胱癌复发的新指标.     

完全性葡萄胎绒毛凋亡与基因表达的相关研究

目的 :探讨完全性葡萄胎绒毛凋亡、增殖活性与 Bcl-2、Bax、Fas、Fas-L及增殖细胞核抗原 ( PCNA)基因表达的相关性。方法 :收集正常早孕绒毛标本及近一年归档的完全性葡萄胎绒毛蜡块 ,原位末端标记法 ( TUNEL)进行细胞凋亡的组织学检测 ,免疫组织化学法测定 Bcl-2、Bax、Fas、Fas-L、PCNA的分布与含量 ,原位杂交法测定 Fas、Fas-Lm RNA的分布与含量。结果 :正常早孕绒毛有少量凋亡细胞 ,主要分布于合体滋养细胞 ,Bcl-2、PCNA蛋白仅在细胞滋养细胞表达且含量丰富 ,Bax、Fas、Fas-L蛋白在合体滋养细胞表达且含量低下。完全性葡萄胎绒毛合体滋养细胞凋亡较正常早孕明显增多 ,Fas、Fas-L 蛋白及其 m RNA不仅在合体滋养细胞而且在细胞滋养细胞表达均明显增强 ,Bcl-2、Bax蛋白在两种细胞中表达也增强 ;PCNA蛋白仅见于细胞滋养细胞 ,含量丰富。结论 :完全性葡萄胎绒毛凋亡细胞增多 ,主要经 Fas/ Fas-L 转录与翻译水平介导 ,表现为高凋亡与高增殖共存现象 ,可能与其无控生长的特性相关。     

胰腺癌细胞凋亡相关基因的表达

我们采用免疫组化方法检测ｂｃｌ２、ｐ５３、ｃｍｙｃ等３种细胞凋亡相关基因在胰腺癌、胰腺癌转移组织和胰腺良性病变中的表达，旨在探讨这些基因产物的表达及相互关系。１．材料和方法：本院病理科存档的石蜡标本，取胰腺癌４８例，Ⅰ期１４例，Ⅱ期２０例，Ⅲ期８...     

自然流产夫妇巨细胞病毒抗体测定的临床意义

目的：探讨自然流产病人ＨＣＭＶ抗体测定的临床意义。方法：用市售ＨＣＭＶ－Ｉｇ的间接ＥＬＩＳＡ试剂盒测定病人血清中的ＨＣＭＶ－Ｉｇ滴度。结果：４２例ＲＳＡ病人、３３例早孕对照组、３７例正常对照组ＨＣＭＶ－ＩｇＧ、ＨＣＭＶ－ＩｇＭ抗体测定结果为：１０倍稀释的血清ＨＣＭＶ－ＩｇＧ在３组标本中的检出率分别为８８．１％、８７．９％和８３．５％;血清ＨＣＭＶ－ＩｇＭ抗体检出率分别为８３．３％、６６．７％和６７．７％;血清１００倍稀释时,ＲＳＡ组两种类别ＨＣＭＶ抗体的阳性检出率分别为２８．６％和３８．１％,对照组的ＨＣＭＶ－ＩｇＧ检出率分别为１５．２％和２．７％;ＨＣＭＶ－ＩｇＭ分别为６．１％和２．７％;血清１０００倍稀释,ＨＣＭＶ的两种类别抗体仅实验组有较低的检出率（分别为９．５％和７．１％）外,两个对照组均未检出阳性病例。结论：早孕妇女反复自然流产与ＨＣＭＶ感染有密切关系,对早孕妇女进行ＨＣＭＶ抗体调查时,血清１∶１０００稀释对结果的判定有重要价值。     

同型半胱氨酸代谢异常与不明原因反复性自然流产相关性研究

目的　探讨同型半胱氨酸 ( Hcy)代谢异常对不明原因反复性自然流产( URSA)的发生及与叶酸、维生素 B12 缺乏和抗心磷脂抗体 ( ACA)的关系。　方法　非孕期 URSA患者 57例 ,非孕期正常妇女 50例为对照组。采用高压液相色谱法测空腹血清总 Hcy,放射免疫法测血清叶酸、维生素 B12 ,酶链免疫法测 ACA的 Ig G、Ig M。　结果　( 1 ) URSA组血清 Hcy水平显著高于对照组 ( P<0 .0 1 ) ;血清叶酸、维生素 B12 水平显著低于对照组 ;血清 Hcy水平与年龄明显相关 ,叶酸、维生素 B12 水平与年龄无相关性 ,三者与城乡、流产次数、流产时期及原发性或继发性流产均无明显关联。URSA患者血清 Hcy水平与血清叶酸、维生素 B12 浓度均呈负相关。 ( 2 ) URSA组 ACA阳性率显著高于对照组。URSA患者中 ACA( +)组 Hcy水平显著高于 ACA( -)组 ( P<0 .0 1 ) ;ACA与高 Hcy血症有一定的协同作用。　结论　高同型半胱氨酸血症 ( HHM)和低叶酸状态均系 URSA发生的独立危险因素。叶酸和维生素 B12 缺乏 ,是血清 Hcy增高的主要原因之一。 ACA也是 URSA的独立危险因素。 ACA与 HHM相互影响 ,可能存在协同作用。     

诱导型一氧化氮合酶与Th1/Th2型细胞因子在不明原因早期自然流产绒毛和蜕膜组织中的表达

目的了解不明原因早期自然流产局部绒毛、蜕膜组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和辅助性T细胞(Th1)/Th2型细胞因子的表达,进一步探讨不明原因早期自然流产发病机制。方法Th1/Th2型细胞因子分别以白细胞介素(IL)-2和IL-10为代表,采用原位杂交及免疫组化方法对40例自然流产患者绒毛和蜕膜中iNOS、IL-2、IL-10的表达(试验组)进行检测,利用计算机CMIAS系统,表达指标以阳性数密度(N/S)计算,并与40例正常人工流产的绒毛和蜕膜组织(对照组)比较。结果试验组iNOS、IL-2、IL-10原位杂交显示绒毛、蜕膜组织分别为(0.082±0.026)、(0.0026±0.0007)、(0.036±0.011)vs(0.10±0.03)、0、(0.02±0.006),对照组分别为(0.022±0.007)、(0.0028±0.0007)、(0.042±0.011)vs(0.03±0.009)、0、(0.032±0.006);两组比较iNOS、IL-10差异有显著意义(P<0.05)。免疫组化结果显示与原位杂交结果一致。结论INOS和ThI/Th2型细胞因子与自然流产相关,可能是介导流产发生的重要因素之一。     

宫颈支原体感染与胚胎停止发育的关系

目的探讨宫颈支原体感染与胚胎停止发育的关系,及支原体药物敏感试验结果。方法收集60例正常早孕人工流产妇女(正常组)和60例胚胎停止发育的自然流产妇女(胎停育组)的宫颈分泌物进行解脲支原体和人型支原体培养,比较2组妇女支原体检出的阳性率,并对支原体结果培养阳性者进行司怕沙星、罗红霉素、加替沙星、氧氟沙星药物敏感试验,观察支原体感染与胎停育组胚胎停止发育次数之间的相关性。结果胎停育组解脲支原体阳性45例,阳性率75.0%,人型支原体阳性17例,阳性率28.3%,解脲支原体、人型支原体均阳性13例,阳性率21.7%。正常组解脲支原体阳性23例,阳性率38.3%,人型支原体阳性5例,阳性率8.3%,解脲支原体、人型支原体均阳性2例,阳性率3.3%,2组阳性率比较差异有极显著性(P0.01,P0.05)2组妇女中支原体阳性患者的药物敏感率分别为司怕沙星91.4%,罗红霉素73.2%,加替沙星51.6%,氧氟沙星28.8%。支原体感染与胚胎停止发育次数间无正相关关系。结论宫颈支原体感染与胚胎停止发育有关,是导致胚胎停止发育的原因之一,支原体药物敏感试验以司怕沙星最为敏感。     

神经元型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子与自然流产关系的观察

目的探讨神经元型一氧化氮合酶（nNOS）和血管内皮生长因子（VEGF）与自然流产的关系。方法应用免疫组织化学法和图像分析（NIS—DR）软件检测孕40～90d自然流产和正常人工流产患者胎盘组织nNOS和VEGF的表达规律，数据的组间比较采用单因素方差分析。结果妊娠第40～90d的正常人工流产患者的绒毛组织内均有nNOS和VEGF的阳性表达，自然流产患者的绒毛组织内VEGF呈弱阳性或阴性表达，nNOS阳性表达的积分光密度（IOD）值呈先降低再增高趋势，两两比较，差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论nNOS和VEGF的正常表达可以维持妊娠，异常表达可能会引发自然流产。     

正常妊娠与自然流产小鼠模型母胎界面细胞因子表达特征的比较

目的　比较正常妊娠与自然流产模型母胎界面细胞因子表达特征的差异 ,探讨T辅助细胞 (Th) 1型和 2型 (Th1 /Th2 )细胞因子在介导流产发病中的作用机制。　方法　建立正常妊娠模型CBA×BALB/c和自然流产模型CBA×DBA/ 2。采用酶联免疫吸附试验 (ELISA)测定两组模型孕第 9和 1 4天母胎界面组织培养上清中Th1 /Th2型及相关细胞因子表达水平 ;以白细胞介素 4/干扰素 γ(IL 4/IFN γ)比值作为衡量Th2 /Th1型免疫调节平衡的指标。　结果　孕第 9天 ,与正常妊娠模型相比 ,自然流产模型母胎界面IL 4、IL 1 0和转化生长因子 (TGF) β2的表达显著降低 (P <0 .0 5) ;IFN γ、肿瘤坏死因子 (TNF) α的表达显著升高 (P <0 .0 5) ,IL 4/IFN γ比值显著降低 (P <0 .0 5)。至孕第 1 4天 ,自然流产模型母胎界面IFN γ、TNF α表达仍显著高于正常妊娠模型 (P <0 .0 5) ,IL 1 0表达、IL 4/IFN γ比值仍低于正常妊娠模型 (P <0 .0 5) ,IL 4和TGF β2在两组模型中的表达无显著差异。两组模型孕第 9和 1 4天母胎界面均未测到IL 2的表达。　结论　与流产模型相比 ,无论在妊娠早期或中晚期 ,正常妊娠模型母胎界面局部均呈现明显的Th2型免疫偏倚。母胎界面Th1 /Th2型细胞因子表达调节失衡是导致流产的重要原因之一     

蜕膜自然杀伤细胞与不明原因反复自然流产的关系

目的通过测定子宫蜕膜自然杀伤(NK)细胞亚群及其杀伤活性,探讨其在不明原因反复自然流产(URSA)发病中的作用。方法随机选取确定URSA的患者10例为实验组,选取15例正常妊娠(NP组)为对照,采用流式细胞仪检测两组蜕膜组织NK细胞亚群,MTT还原法测定NK细胞杀伤活性。结果URSA组蜕膜中CD56+NK细胞含量显著高于NP组(P<0.01),且URSA组CD56+CD16+细胞亚群含量及CD56+CD16+/CD56+CD16-比值也较NP组显著升高(P均<0.01),而CD56+CD16-细胞亚群含量两组比较无差异(P>0.05)。蜕膜NK细胞活性URSA组为(31.60±2.62)%,而NP组仅为(15.65±2.02)%,两组蜕膜NK细胞活性有显著差异(P<0.01)。结论URSA的发生可能与NK细胞亚群失衡及杀伤活性异常增高而导致母胎间的免疫耐受平衡被打破有关。     

蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛与c-myc、c-fos、c-jun表达的关系

目的 通过采用兔基底动脉穿刺建立的蛛网膜下腔出血（SAH）模型，系统研究蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛发生（CVS）的情况，脑血管痉挛的病理损害。方法应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及免疫组织化学的方法分别检测受累动脉c-myc、c-fos、c-jun mRNA及c-myc、c-fos，c-jun蛋白表达情况。结果 SAH后CVS发生过程中，在8h后相继出现c-myc、c-fos、c-jun mRNA的明显表达，c-myc、c-fos、c-jun的蛋白表达落后于基因表达，免疫组织化学显示c-myc、c-fos、c-jun主要表达在血管内皮细胞及平滑肌细胞。基因与蛋白表达均具有明显的时间依赖性，并与病理损害程度相平行。结论 揭示SAH后CVS的发生可能与细胞凋亡的发生有关，为防治SAH后CVS提供了一个研究方向。