结缔组织生长因子与肝纤维化

结缔组织生长因子(CTGF)是新近发现的一种在器官纤维化病变中起关键作用的细胞因子，它除特异性介导TGF-β促纤维化作用外，还可介导高血糖、高血压及脂质过氧化物等信号的促纤维化作用。在人肝纤维化、肝硬化及实验性肝纤维化模型中，CTGF表达显著增高，并与肝组织纤维化积分呈明显正相关，而抑制肝星状细胞CTGF表达，可显著减少胶原等细胞外基质基因表达及阻抑肝纤维化进展。现就CTGF的一般特性，生理及病理作用，CTGF在肝纤维化中的作用、信号通路及调控作一综述。     

结缔组织生长因子与肝纤维化

肝纤维化的病理过程受着细胞因子的调节，结缔组织生长因子作为转化生长因子－β1的下游反应元件，在肝纤维化的发生、发展过程中起着关键的作用，不同类型的肝经每人经模型中均存在结缔组织生长因子的高表达，且与病理上纤维化的程度相平行。本文就结缔组织生长因子的分类、结构、特性及其在肝纤维化病理机制中的作用和临床意义作一综述。     

结缔组织生长因子与肝纤维化相关性的研究进展

结缔组织生长因子（connective tissue growth factor，CTGF）是Bradham等于1991年首次在人脐静脉内皮细胞条件培养基中发现的细胞因子，它属于一种即刻早期基因（CTGF Cyr61 nov，CCN）家族成员之一，是转化生长因子（transforming growth factor-beta，TGF-β）的下游介质。广泛存在于人类肝脏、肾脏、心脏、肺脏和结缔组织等多种咒织器官中，具有明显的有丝分裂原性和趋化性，在体内参与胚胎发育、细胞增生、分化及创伤愈合等病理生理活动。     

结缔组织生长因子与肝纤维化

结缔组织生长因子(CTGF)是新近发现的一种在器官纤维化病变中起关键作用的细胞因子,它除特异性介导TGF-β促纤维化作用外,还可介导高血糖、高血压及脂质过氧化物等信号的促纤维化作用。在人肝纤维化、肝硬化及实验性肝纤维化模型中,CTGF表达显著增高,并与肝组织纤维化积分呈明显正相关,而抑制肝星状细胞CTGF表达,可显著减少胶原等细胞外基质基因表达及阻抑肝纤维化进展。现就CTGF的一般特性,生理及病理作用,CTGF在肝纤维化中的作用、信号通路及调控作一综述。     

结缔组织生长因子与肝纤维化

结缔组织生长因子(connective tissue growth factor，CTGF)是一种新发现的细胞因子，是细胞外间质及纤维化领域新的研究热点。本重点讨论CTGF的结构、功能以及在肝纤维化形成中的作用，从而为有效防治肝纤维化提供理论依据。     

结缔组织生长因子与肝纤维化的研究进展

肝纤维化是大多数慢性肝病共有的组织学改变,因此,能否终止肝纤维化的进展甚或逆转至正常,是治疗慢性肝病的关键.在肝纤维化的发病机制及治疗研究中,细胞因子网络始终是人们研究的热点.结缔组织生长因子(connective tissuegrowth factor CTGF)是一种新发现的细胞因子,1991年由Bradham等从人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养液中分离所得,为富含半胱氨酸的多肽.目前,CTGF在肝纤维化的研究中已成为新的热点.本文就CTGF的结构,生物学特性,主要调节因素及其与肝纤维化的关系作一综述.     

结缔组织生长因子与肝纤维化

结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)是一种新发现的细胞因子,是细胞外间质及纤维化领域新的研究热点。本文重点讨论CTGF的结构、功能以及在肝纤维化形成中的作用,从而为有效防治肝纤维化提供理论依据。     

抗结缔组织生长因子小分子干扰RNA防治大鼠肝纤维化的研究

目的 探讨经腹腔注射抗结缔组织生长因子(CTGF)小分子干扰RNA(siRNA)是否能抑制大鼠体内肝脏CTGF基因表达及防治大鼠肝纤维化.方法 雄性SD大鼠30只,随机分成5组,分别为模型组腹腔注射40%CCl4 (3 mL/kg)及尾静脉注射生理盐水,1次/3 d,连续8周;预防组腹腔注射40%CCl4 及尾静脉注射...     

沉默结缔组织生长因子对大鼠肝纤维化的影响

目的 研究结缔组织生长因子(CTGF)小干扰RNA(siRNA)在CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型中的抗肝纤维化作用及其对肝星状细胞(HSC)激活的影响.方法 雄性SD大鼠24只,随机分成4组.模型组:皮下注射CCl4及经门静脉注射等渗盐水,每3 d 1次,连续6周(给药频率与时间,下同);CTGF siRNA干预组:皮下注射CCl4及经门静脉注射CTGF siRNA ;对照siRNA干预组:皮下注射CCl4及经门静脉注射对照siRNA;正常对照组:经门静脉注射等渗盐水.用HE染色和Sirius red染色评估大鼠肝组织学变化,Western blot检测肝组织CTGF及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,免疫组织化学染色评估肝组织α-SMA阳性细胞数量.对实验数据用单因素方差分析或Kruskal-Wallis检验分析.结果 模型组及对照siRNA组大鼠肝组织CTGF及α-SMA蛋白表达显著上调,α-SMA染色阳性细胞数量明显增加.与模型组相比,CTGF siRNA组CTGF及α-SMA蛋白表达分别下调95%±2%和86%±11%(F值分别为21.234和12.473,P值均＜0.01);肝组织α-SMA染色阳性细胞数减少76%±9%(F=9.179,P＜0.01);组织学检查显示肝纤维化程度明显减轻.结论 siRNA沉默CTGF基因能显著减轻大鼠实验性肝纤维化,减少活化HSC数量可能是其改善肝纤维化的主要机制之一.     

抗结缔组织生长因子小分子干扰RNA防治大鼠肝纤维化研究

目的探讨经门静脉注射抗结缔组织生长因子(CTGF)小分子干扰RNA(siRNA)是否能在体内抑制大鼠肝CTGF基因表达及防治大鼠肝纤维化。方法雄性SD大鼠24只,均分成4组,模型组皮下注射40%CCl4(3ml/kg)及门静脉注射生理盐水,每3d1次,连续6周;预防组皮下注射CCl4及门静脉注射抗CTGFsiRNA(0.1mg/kg),每3d1次,连续6周;治疗组皮下注射CCl42周,随后再给予抗CTGFsiRNA及CCl44周;对照组门静脉注射生理盐水6周。于最后1次CCl4注射后3d行门静脉测压,并取血及组织标本,检测血清转氨酶、透明质酸(HA)及Ⅲ型前胶原(PⅢNP)浓度,应用RTPCR及Western印迹法检测CTGFmRNA及蛋白质在大鼠肝组织表达,应用HE及Siriusred胶原染色检测肝组织炎症及纤维化,应用偏光扫描对肝组织胶原染色面积进行定量。结果与模型组相比,预防组及治疗组大鼠肝组织CTGFmRNA及蛋白质表达显著下调,肝组织炎症、坏死及纤维化明显减轻,血清转氨酶、HA及PⅢNP浓度显著降低;预防组、模型组和治疗组的肝组织胶原染色面积分别为5.8%±0.8%、12.3%±0.8%和7.2%±0.9%(P<0.01);门静脉压力分别为(14.2±2.3)cmH2O、(20.6±5.8)cmH2O和(15.1±3.6)cmH2O(P<0.05),明显降低。结论经门静脉注射抗CTGFsiRNA能在体内显著抑制大鼠肝CTGF基因表达并能有效防治大鼠肝纤维化,提示抗CTGFsiRNA有潜力成为防治肝纤维化的一种新策略。     

沉默结缔组织生长因子对鼠转化生长因子β/Smads信号的影响

目的 研究小干扰RNA(siRNA)沉默结缔组织生长因子(CTGF)对大鼠转化生长因子(TGF)β/Smads信号通路的影响.方法 将化学合成CTGF siRNA转染肝星状细胞(HSC)T6和经门静脉注入CCl4诱导6周的肝纤维化大鼠,设空白及随机siRNA对照,抽提HSC T6及大鼠肝组织总RNA和蛋白质,应用Western blot和RT-PCR检测HSC T6及肝组织CTGF及TGF β1,Smad2、3、7蛋白质和基因表达. 结果与空白对照组相比,siRNA能显著下调HSC T6 CTGF蛋白表达,以48 h最明显,CTGF蛋白表达下调94%±4%(t=46.196,P<0.01),而TGF β1、Smad2,3,7 mRNA表达差异无统计学意义;模型组及对照siRNA组,CCl4诱导的大鼠肝组织CTGF和TGF β1蛋白表达明显上调,与模型组相比,CTGF siRNA组大鼠肝组织CTGF及TGF β1蛋白表达分别下调95%±2%(F=21.234,P<0.01)和74%±8%(F=13.464,P<0.05),但Smad2和Smad7蛋白表达无明显改变. 结论沉默CTGF基因表达对大鼠肝TGF β/Smads信号具有阻抑作用.     

大鼠结缔组织生长因子短发夹RNA干扰质粒重组体的构建和鉴定

目的构建靶向大鼠结缔组织生长因子(CTGF)的shRNA真核表达载体质粒,为利用基因沉默技术从转录后水平进行抗心肌纤维化的研究做准备。方法根据大鼠CTGFmRNA序列设计并合成shRNA寡核苷酸片段,退火形成双链并克隆进入载体pGenesil-1,并进行酶切鉴定和测序。结果酶切证明构建的shRNA已插入载体,经测序证明与设计的相同。结论成功构建靶向大鼠CTGF的shRNA真核表达质粒重组体,为质粒的筛选和进一步进行体内外心肌纤维化的RNA干扰研究奠定了基础。     

大鼠结缔组织生长因子部分cDNA序列的克隆及其mRNA在实验性 …

目的 克隆出大鼠结缔组织生长因子（ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ ｔｉｓｓｕｅ ｇｒｏｗｔｈ ＣＴＧＦ）的部分ｃＤＮＡ序列,并观察在实验性肝经大鼠肝脏中ＣＴＧＦ ｍＲＮＡ的表达改变。方法 根据小鼠ＣＴＧＦ ｍＲＮＡ序列设计引物,用ＲＴ－ＰＣＲ从大鼠肝脏总ＲＮＡ中扩增出一段４３０ｂｐ的产物,并测定其序列,将１６只雌性Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机为胆管堵塞组（ｎ＝８）及假手术组（ｎ＝８）,６周后取大鼠提取总ＲＮＡ,利用     

反义金属蛋白酶组织抑制因子—1表达质粒对实验性大鼠肝纤维 …

观察反义金属蛋白酶组织抑制因子－１（ＴＩＭＰ－１）表达质粒对实验性大鼠肝纤维化的影响。方法运用逆转录巢式和重组ＤＮＡ技术,构建大鼠反义ＴＩＭＰ－１真核细胞表达质粒,经脂质体包埋后,利用腹腔注射将其导入免疫性大鼠肝纤维化模型体内;通过ＲＴ－ＰＣＲ,Ⅰ、Ⅲ型胶原的免疫组化及Ｍａｓｓｏｎ胶原染色观察反义ＴＩＭＰ－１表达质粒对大鼠肝纤维化的影响。结果反义原的免疫组化以及     

抗结缔组织生长因子小干扰RNA对鼠原代肝星状细胞增殖的影响

细胞外基质（ECM）积聚与活化肝星状细胞（HSC）数量密切相关，增殖是活化HSC的重要生物学特性之一，也是调控活化HSC数量的一种重要方式，结缔组织生长因子（CTGF）主要由活化HSC产生，是HSC增殖的一个重要刺激因子。     

反义金属蛋白酶组织抑制因子-1表达质粒对实验性肝纤维化的影响

目的　观察反义金属蛋白酶组织抑制因子 1(TIMP 1)表达质粒对实验性肝纤维化的影响。方法　运用重组DNA技术构建反义TIMP 1真核细胞表达质粒 ,经与糖化多聚赖氨酸偶联后 ,尾静脉注射将其导入猪血清诱导的免疫性大鼠肝纤维化模型体内 ;通过Northern印迹法、RT PCR、Western印迹法检测外源导入基因的表达 ,并通过肝组织间质胶原酶活性和羟脯氨酸测定 ,以及肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原免疫组织化学与VanGieson染色观察反义TIMP 1质粒对大鼠肝纤维化的影响。结果　外源导入基因可在肝组织中获得确切表达 ,其表达可增加间质胶原酶的活性 (P <0 .0 1) ,减少羟脯氨酸含量 (P <0 .0 1) ,促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解 (P <0 .0 1) ,并促进肝脏病理形态一定程度的改善 (P <0 .0 1)。结论　反义TIMP 1表达质粒对肝纤维化有较好的改善作用。     

Smad泛素化调节因子2在肝纤维化过程中对结缔组织生长因子的作用研究

目的:在体内和体外研究Smad泛素化调节因子2(Smurf2)在肝纤维化过程中对结缔组织生长因子(CTGF)的作用。方法:建立四氯化碳诱导肝纤维化大鼠模型,收集人类肝硬化和正常肝组织样本,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹(Western blot,WB)、免疫组织化学(IHC)方法检测Smurf2和CTGF的表达;培养人类肝星状细胞(LX-2),构建Smurf2表达质粒和小干扰RNA(siRNA),在转化生长因子β1(TGF-β1)作用后,通过WB检测Smurf2过表达和小干扰后对CTGF表达的影响。结果:在大鼠肝纤维化时,Smurf2表达增加,伴有CTGF水平增高;大鼠和人类肝硬化组织中,Smurf2表达反而减少,CTGF表达仍然增加。体外肝星状细胞用TGF-β1处理后,CTGF蛋白水平升高;过表达Smurf2可以阻断CTGF蛋白的合成;抑制Smurf2表达后,CTGF表达持续增加。TGF-β1处理LX-2后可以诱导Smurf2表达内源性轻度增加。结论:Smurf2可以由TGF-β1诱导产生,作为负反馈抑制子抑制肝纤维化过程中CTGF表达的增加。