APP17肽和救脑益智胶囊水提液对D-半乳糖脑老化小鼠海马PP-1表达的影响

为探讨 APP17肽及救脑益智胶囊水提液对 D-半乳糖脑老化小鼠海马蛋白磷酸酯酶 -1( PP-1)表达的影响。本研究将昆明小鼠随机分为 5组 :正常对照组、D-半乳糖对照组、APP17肽治疗组、小剂量中药治疗组、大剂量中药治疗组 ,每组动物 8只。用 D-半乳糖制备脑老化模型 ,并皮下注射 APP17肽或救脑益智胶囊水提液灌胃对 D-半乳糖脑老化小鼠进行治疗 ,3个月后取脑组织做 PP-1免疫组织化学染色。结果显示 :D-半乳糖小鼠和大剂量救脑益智胶囊水提液治疗组小鼠海马 PP-1阳性细胞数目少 ,染色淡 ;而正常小鼠、APP17肽保护和救脑益智胶囊水提液小剂量治疗的 D-半乳糖小鼠海马阳性反应神经元数目多 ,胞浆与突起深染。结果提示 :抑制凋亡的 PP-1在 D-半乳糖小鼠海马表达降低。 APP17肽和小剂量救脑益智胶囊水提液治疗能影响 D-半乳糖脑病小鼠脑内 PP-1的表达 ,使之接近正常。而大剂量救脑益智胶囊水提液治疗无此作用     

大鼠海马神经元核受体-盐皮质激素受体于穹窿切断后表达的变化

目的:建立大鼠穹窿切断模型,研究海马神经元核受体-盐皮质激素受体(MR)表达的变化.方法:建立大鼠穹窿切断模型,于穹窿切断术后0、4、7、10 d取材;同时取材假手术组(非穹窿切断术)、正常组作为对照,应用免疫组织化学、免疫印迹方法分别进行各组海马神经元MR表达变化的观察及定量检测.结果:穹窿切断7 d后,免疫组织化学和免疫印迹结果显爪海马神经元MR表达下调,10 d下调更为显著.结论:穹窿切断后,海马MR表达下调,提示海马对下丘脑-垂体-肾上腺轴的抑制作用可能在穹窿切断后减弱.     

APP17肽对D-半乳糖脑老化小鼠海马凋亡相关基因表达的影响

目的 研究APP17肽对D-半乳糖脑病小鼠海马神经元凋亡的影响。方法 用D-半乳糖制备脑老化模型，皮下注射APPl7肽治疗D-半乳糖脑老化小鼠，3个月后取脑组织做Bcl-2、Bax、cREB、AKt、AIF免疫组织化学染色。结果 D-半乳糖脑病小鼠海马内Bax、AIF阳性反应神经元胞浆与突起深染，而正常小鼠及APPl7肽保护的D-半乳糖小鼠海马阳性细胞数目少，染色淡；D-半乳糖小鼠海马内Bcl-2、CREB、AKt阳性细胞数日少，染色淡；而正常小鼠及APP17肽保护的D-半乳糖小鼠海马阳性反应神经元胞浆与突起深染。结论 促进凋亡的Bax、AIF在D-半乳糖小鼠海马表达增加；抑制凋亡的Bcl-2、CREB、AKt在D-半乳糖小鼠海马表达降低。APP17肽能影响D-半乳糖脑病小鼠脑内Bcl-2、Bax、CREB、AKt、AIF的表达，使之接近正常。     

雌二醇经雌激素受体调控分拣蛋白相关受体A对小鼠海马神经元树突棘密度和突触蛋白表达的影响

目的 探讨雌二醇(E₂)调控分拣蛋白相关受体A(SorLA)表达对小鼠海马神经元树突棘密度和突触蛋白表达的影响及机制。方法 32只C57BL/6雌性小鼠随机分为假手术(sham)组、卵巢切除(OVX)组、卵巢切除+E₂组(OVX+E₂)组、卵巢切除+氟维司琼(Fu)+E₂组(OVX+Fu+E₂)组，通过Western blotting和免疫组织化学染色检测小鼠海马CA1区SorLA表达；40只C57BL/6雌性小鼠随机分为假手术+空白病毒(sham+NC-sgRNA)组、卵巢切除+空白病毒(OVX+NC-sgRNA)组、卵巢切除+空白病毒+E₂(OVX+NC-sgRNA+E₂)组、卵巢切除+SorLA敲降病毒+E₂组(OVX+Sorl1-sgRNA+E₂)组，通过高尔基染色检测小鼠海马CA1区神经元树突棘密度；通过Western blotting和免疫组织化学染色检测小鼠海马CA1区突触后致...     

N-甲基-D-门冬氨酸受体与使君子酸受体在培养海马神经元树突上的膜表面表达与共定位

目的　研究含NR2B亚单位的N 甲基 D 门冬氨酸 (NMDA)受体 (NR2B NMDAR)与含GluR1亚单位的使君子酸 (AMPA)受体 (GluR1 AMPAR)在发育不同阶段的培养海马神经元树突上的膜表面表达与共定位。　方法　以FLAG NR2B和GFP GluR1表达载体共转染原代培养第 5d(DIV5 )的大鼠海马神经元 ,分别用相应特异性抗体和荧光标记二抗作活细胞染色 ,显示膜表面表达的受体簇。　结果　对DIV7和DIV14的培养海马神经元树突表面受体簇计数 (个数 10 0 μm) ,GluR1 AMPAR受体簇分别为 5 9 2± 5 6和 74 8± 3 1(P <0 0 5 ) ;NR2B NMDAR为 38 7±3 5和 80 8± 4 9(P <0 0 1) ;两者共定位为 16 3± 5 2和 4 0 1± 6 0 (P <0 0 1)。DIV14海马神经元 4 0 %的共定位受体簇分布在树突棘上。　结论　随着海马神经元的发育 ,树突膜表面NR2B NMDAR、GluR1 AMPAR及两者共定位受体簇密度均增加 ,提示 ,形成更多具有活性的兴奋性突触 ,且主要位于树突棘上。     

参麻益智汤对拟阿尔海默病模型小鼠的治疗作用及其机制研究

目的: 研究参麻益智汤(SYD)对拟阿尔茨海默病(AD)模型小鼠的治疗作用及其机制。方法: 选用昆明种小鼠,腹腔注射D-半乳糖和灌胃三氯化铝(AlCl₃)90 d制备AD小鼠模型,3个治疗组在造模的后40 d分别灌胃低、中、高剂量SYD。从第86 d起灌胃结束后进行Morris水迷宫测试,连续5 d。水迷宫测试结束后检测小鼠海马组织超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)的含量,用荧光实时定量PCR的方法观察小鼠海马bax mRNA和bcl-2 mRNA的表达,用免疫组化方法观察小鼠海马caspase-3蛋白的表达。结果: 与AD模型组比较,SYD中剂量组小鼠水迷宫学习成绩较好(P<0.05);SYD中、高剂量组小鼠海马组织内SOD活性增高,MDA含量降低(P<0.05);中剂量的SYD能下调小鼠海马bax mRNA的表达和caspase-3蛋白的表达(P<0.01),各剂量的SYD对bcl-2 mRNA的表达均未见明显影响(P>0.05)。结论: SYD可以改善拟AD小鼠学习记忆能力,其机制可能与SYD提高小鼠海马神经元的抗氧化能力(SOD活性升高, MDA含量降低)、下调bax mRNA和caspase-3蛋白的表达、进而减少小鼠海马神经元的凋亡有关。     

APP17肽对D-半乳糖性脑老化模型小鼠学习、记忆功能和海马神经元NT-3、NGF表达的影响

目的与方法:用D-半乳糖(D-gal)复制脑老化模型,给模型小鼠皮下注射β-淀粉样肽前体蛋白319-335肽段(APP17p),8周后应用水迷宫实验、神经免疫组化法,观察APP17肽对D-gal脑老化模型小鼠学习、记忆功能及海马神经元中神经营养因子3(NT-3)、神经生长因子(NGF)表达的影响。结果:(1)水迷宫实验D-gal组小鼠游完全程时间及错误反应次数明显高于对照组;APP17肽组小鼠游完全程时间及错误反应次数明显低于对照组和D-gal组。(2)APP17肽组海马神经元NT-3、NGF表达高于C组和D-gal组(P＜0.01)。结论:D-半乳糖性脑老化模型小鼠存在学习、记忆功能障碍,其海马神经元NT-3、NGF表达降低;APP17肽有保护模型小鼠学习、记忆功能的作用,并能促进其海马神经元NT-3、NGF表达的增加。     

快速老化小鼠P8海马神经元突触可塑性相关的AMPA受体表达异常

目的比较快速老化小鼠P8(SAMP8)与抗快速老化小鼠R1(SAMR1)海马神经元突触可塑性相关的谷氨酸α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异唑丙酸(AMPA)受体表达差异,为阿尔兹海默病(AD)的发病机制提供实验依据。方法取雄性10月龄SAMP8 10只和SAMR1 9只,应用Morris水迷宫实验评价动物学习记忆能力,透射电子显微镜观察海马CA1区神经元突触界面超微结构,蛋白质免疫印迹法检测海马AMPA受体亚基GluR1、GluR2的表达。结果与SAMR1比较,SAMP8逃避潜伏期延长,目标象限时间百分比下降,穿台次数减少;海马CA1区神经元突触后致密带变薄,突触间隙增宽,突触界面曲率下降;海马GluR2含量下降,GluR1含量有下降趋势,但差异无统计学意义。结论海马AMPA受体异常可能是导致突触可塑性受损,引发SAMP8认知障碍的原因之一,AMPA受体在AD的发病中可能占有重要地位。     

双氢睾酮对快速老化小鼠海马CA1区突触可塑性和N-甲基-D-天冬氨酸受体1的影响

目的 探讨双氢睾酮(DHT)对快速老化小鼠(SAMP8)海马CA1区突触可塑性和N-甲基-D-天冬氨酸受体1(NMDAR1)的影响.方法 6月龄雄性SAMP8小鼠21只随机分为假手术组、去势组及去势+DHT补充治疗组,每组7只.DHT剂量为1mg/(kg·d),皮下注射21d后,通过Golgi染色观察海马CA1区顶树突树突棘的变化;免疫组织化学及图像分析检测突触素和NMDAR1表达的改变.结果 1.Golgi染色,去势组海马CA1区顶树突树突棘个数明显减少;DHT补充治疗后,树突棘个数明显增多.2.去势组海马CA1区突触素和NMDAR1的表达明显减少,平均吸光度值明显低于其他组(P<0.05).DHT补充治疗能明显增加突触素和NMDAR1的表达.结论 DHT可调节海马CA1区突触可塑性,使树突棘密度增多.DHT对突触可塑性的影响可能与其调节锥体细胞的NMDAR1有关.     

龟龄集对 AD 小鼠皮层和海马 Fas/ FasL 表达及神经元凋亡的影响

目的 探究龟龄集对阿尔茨海默病 (Alzheimer’s disease, AD) 小鼠皮层和海马 Fas/ FasL 表达及 神经元凋亡的影响。 方法 构建 AD 小鼠模型, 小鼠随机分为对照组、 模型组、 多奈哌齐组及龟龄集低、 中、 高剂量组。 Morris 水迷宫检测干预前后小鼠的学习记忆能力; HE 染色检测小鼠皮层、 海马神经元病理 学改变情况; TUNEL 染色检测神经元凋亡情况; Western 印迹及 Real time PCR 分别检测 Fas、 FasL 的蛋白 表达水平及 mRNA 表达水平。 结果 与模型组比较, 龟龄集各组和多奈哌齐组小鼠学习记忆能力明显提高 (P< 0. 05), 皮层和海马神经元病理学损害及神经元凋亡改善 (P< 0. 05), Fas、 FasL 蛋白和 mRNA 水平下 降 (P< 0. 05)。 结论 龟龄集可能通过抑制 Fas/ FasL 表达抑制 AD 模型小鼠皮层、 海马神经元凋亡, 并改 善其学习记忆能力。     

氯胺酮对新生大鼠海马NMDA受体亚型mRNA表达的影响

本研究利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)观察了将氯胺酮给予生后早期大鼠后,海马组织中NMDA受体亚型mR-NA的表达变化。实验用生后7d的SD大鼠40只,随机分为2大组:给药后即刻组(PND7组)和给药后3周组(PND28组)。PND7组为腹腔注射不同剂量氯胺酮后24h内处死,PND28组用相同给药方法给药并在相同环境中饲养3周(即至生后28d)后处死。RT-PCR结果显示在PND7组,腹腔注射氯胺酮引起海马组织内NR2A,NR2B和NR2C亚型mRNA的表达上调,NR1受体亚型mRNA的表达无明显变化。在PND28组,氯胺酮注射引起NR1和NR2A亚型mRNA的表达水平增高,而NR2B和NR2C亚型mRNA的表达没有变化。氯胺酮的给药量和给药方式对上述受体亚型的表达变化没有明显影响。各受体亚型在不同发育阶段的海马组织中的表达水平也有一定的差异。本研究的结果提示氯胺酮对发育阶段大鼠脑内NMDA受体的表达具有上调作用,从而对大鼠神经系统的发育可能产生影响。     

谷氨酸钠致痫大鼠海马mGluR_5的表达变化

本研究目的为探讨谷氨酸钠 (Glu Na)诱导大鼠癫痫发作时海马 m Glu R5的表达变化。将动物随机分为正常对照组、Glu-Na致痫组及 D-AP-5 (非竞争性 NMDA受体拮抗剂 ) + Glu Na组。通过免疫组织化学方法观察了多克隆抗体抗 m Glu R5在海马各区及齿状回的免疫反应阳性细胞的变化 ,同时观察并记录各组大鼠的行为变化。结果证明 :Glu Na注射后的大鼠均出现严重的癫痫发作。正常组大鼠海马中有丰富的 m Glu R5表达 ,以齿状回颗粒细胞层和 CA1 锥体细胞层的表达为最高 ,而 Glu Na致痫组海马各区 m Glu R5表达明显下调。D-AP-5 + Glu Na组海马各区 m Glu R5表达较之 Glu Na致痫组又上调。同时观察到三个组的m Glu R5的表达主要集中在细胞膜上。结果提示 m Glu R5在癫痫发作后表达下降可能在癫痫诱导过程中具有重要作用 ,其作用机制可能为 NMDA受体依赖性的     

毒蕈碱M2受体在脑震荡大鼠脑内的表达变化

为了探讨脑震荡(brain concussion,BC)后认知功能障碍的大鼠中枢毒蕈碱M2受体的表达变化,本实验应用金属单摆式机械打击装置复制单纯性脑震荡大鼠模型,采用免疫组织化学结合图像分析的方法,观察BC后大脑前额叶皮质(PFC)、海马CA1-CA4区、丘脑、尾壳核(CPU)、Broca斜角带垂直支(VDB)和内侧隔核(MSN)区M2受体蛋白的表达情况。结果显示:在损伤后M2受体蛋白的表达在海马CA1-CA4区出现轻微下降(P>0.05),在PFC、VDB、CPU和MSN区即刻呈轻度上升,随后又下降,但与正常组相比无显著性差异(P>0.05);在伤后1、8、24d组大鼠丘脑M2受体的表达呈明显下降,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05)。以上结果提示M2受体的表达在丘脑出现明显下调的改变可能与BC认知功能的改变有关。     

Mel-1a,Mel-1b褪黑素受体在大鼠海马分布的原位杂交研究

Mel-1a,Mel-1b为分别从人大脑和视网膜克隆的两种褪黑素膜受体。随着褪黑素的各种重要生理作用的不断发现 ,对其受体的研究也日益广泛和深入。本文采用原位杂交技术研究了 Mel-1a,Mel-1b两种褪黑素膜受体 m RNA在海马中的表达和分布 ,结果表明此两种受体 m RNA在成年大鼠海马各区神经元中均有表达。由于褪黑素是通过细胞膜上与 G蛋白耦联的 Mel-1a,Mel-1b受体而发挥作用的 ,而海马又是与老化密切相关的脑区 ,提示褪黑素对海马的老化有调节作用     

糖皮质激素对大鼠海马和下丘脑白细胞介素—2受体表达的影响

为了深入研究免疫－神经－内分泌网络，用免疫细胞化学技术，检测了大鼠海马和下丘脑白细胞介素－２受体（ＩＬ－２Ｒ）的分布和体外培养海马神经细胞中ＩＬ－２Ｒ的表达，以及糖皮质激素处理对体内、体外实验中ＩＬ－２Ｒ表达的影响。结果表明：高度密集的ＩＬ－２Ｒ免疫反应神经元分布在下丘脑诸核，特别是弓状核、腹内侧核、背内侧社、室旁核。中等密度的ＩＬ－２Ｒ免疫反应神经元分布在海马锥体细胞层和齿状回颗粒细胞层和多形细     

大鼠脑内白细胞介素-1Ⅰ型受体在致痫活动中的表达变化

为了探讨白细胞介素 -1I型受体 ( IL-1RI)在癫痫发病中的作用 ,本实验采用免疫组织化学方法观察了致痫大鼠行为改变与脑内 IL-1RI表达变化。结果发现 ,侧脑室注射白细胞介素 -1β( IL-1β)后再注射阈下剂量谷氨酸钠 ,可导致动物痫样发作 ,其大脑皮质及海马锥体细胞层 IL -1RI免疫反应阳性细胞数量较对照组明显增多 ,免疫反应增强 ;如先注射白细胞介素 1受体拮抗剂 ( IL-1ra)、再注射 IL-1β和阈下剂量谷氨酸钠 ,则动物无痫样发作 ,且大脑皮质及海马锥体细胞层 IL-1RI免疫反应阳性细胞数量较注射 IL -1β和阈下剂量谷氨酸钠组减少 ,免疫反应着色减弱。结果提示 ,IL -1β有明显促进谷氨酸钠致痫的作用 ,IL-1RI可能参与致痫过程 ,IL-1ra具有抗痫效应。     

APP17肽对糖尿病脑病小鼠海马IRS—1、IGF—1R表达的影响

目的 通过对胰岛素受体底物－1（IRS－1）、胰岛素样生长因子－1受体（IGF－1R）在海马表达的观察，研究APP17肽对糖尿病脑病小鼠海马神经元IRS－1、IGF－1R的影响。方法 用链脲佐菌素（STZ）诱发小鼠糖尿病模型，并皮下注射APP17肽对糖尿病小鼠进行治疗，4周后取脑组织做IRS－1、IGF－1R免疫组织化学染色。结果 糖尿病小鼠海马内IRS－1、IGF－1R阳性反应神经元胞浆与突起深染，而正常小鼠及APP17肽保护的糖尿病小鼠海马阳性细胞数目小，染色淡。结论 糖尿病小鼠海马IRS－1、IGF－1R广泛表达；APP17肽能影响糖尿病脑病小鼠脑内IRS－1，IGF－1R的表达，使之接近正常。     

慢性复合应激对大鼠学习与记忆及海马NMDA受体亚基NR2A和NR2B表达的影响

为了观察慢性复合应激对大鼠学习与记忆的影响和海马内 NMDA受体亚基 NR2 A、NR2 B表达的变化。本研究将成年雄性 Wistar大鼠分为实验组和对照组 ,实验组动物每天交替暴露于复合应激原环境中达 6周 ,用 Morris水迷宫和 Y迷宫作业测试其空间学习与记忆成绩 ,再采用免疫组织化学和图像处理方法分析海马 CA1 、CA3、齿状回区的 NR2 A和 NR2 B的表达。结果显示 :( 1) Morris水迷宫测试 :慢性复合应激组大鼠寻找平台的潜伏期较对照组明显缩短 ,Y迷宫测试 :慢性复合应激组大鼠学会躲避电击的正确次数较对照组明显增多 ;( 2 )慢性复合应激组海马内 NMDA受体亚基 NR2 B表达水平较对照组明显上调 ,NR2 A表达水平无显著变化。结论 :慢性复合应激可增强学习与记忆能力 ,NMDA受体表达变化可能是影响学习与记忆的机制之一     

P物质和P物质受体在小鼠胚胎发育期脑内的表达

目的研究小鼠胚脑发育期间P物质（SP）和P物质受体（SPR）的表达。方法分别取孕11、13、15、17和19d的小鼠胚脑和新生鼠脑。采用SP和SPR酶标免疫组织化学染色观察SP和SPR表达的变化。结果SP自小鼠胚胎11d开始出现少量表达,并一直持续到出生后,主要出现在发育过程中的新纹状体等部位;SPR与SP同时出现并持续到出生后,主要出现在发育过程中的延髓中缝等部位。结论SP和SPR在小鼠发育期间的表达提示SP可能参与中枢神经系统神经元形成和成熟调控。     

Nogo与Nogo受体在正常小鼠大脑的分布

NOgo与NOgo受体对抑制中枢神经系统的再生有着重要的作用。本研究用本室制备的抗Nogo和抗Nogo受体的多克隆抗体进行免疫组织化学染色,在低倍镜下计数阳性细胞、观察Nogo与Nogo受体在正常小鼠脑内的分布。结果显示:Nogo样和Nogo受体样免疫阳性结构在大脑皮层、海马、下丘脑、苍白球、尾壳核和黑质等处的神经元细胞核中有较强的表达,而在胞浆和突起内表达较弱。由此我们得出结论,Nogo和Nogo受体蛋白在成年小鼠脑内分布广泛。