从形态和超微结构对干燥保存角膜内皮细胞活性的评价

为从形态和超微结构上观察干燥保存角膜内皮细胞是否具有活性，应用０．２％茜素红和０．２５％台盼兰对干燥保存不同时间的兔、猴和人角膜内皮细胞分别进行活性染色，并与正常新鲜者作对照。同时，在电镜下对干燥保存角膜及其新鲜标本进行超微结构观察。结果，新鲜角膜六角形细胞边界清楚，核呈淡蓝色；干燥保存角膜，六角形细胞边界不清，但核的染色及分布密度与新鲜者几无区别。电镜下，干燥保存角膜六角形镶嵌状细胞边界看不到，细胞间连接处有空泡，但细胞轮廓可见；核染色质有皱缩，但无核溶解现象。胞浆内有空泡，但仍有细胞器存在；人的细胞膜上还可看到微绒毛。结论：干燥保存角膜无活性特征虽然明显，但也存在有活性的标志。     

改良Optisol角膜保存液保存兔角膜内皮细胞超微结构的观察

为提高角膜移植供体质量，我院自1996年起对Optisol保存液进行研究，对其成分进行改良称改良Optisol保存液，并对其保存兔角膜内皮细胞的超微结构进行观察。现总结如下。     

用茜素红—锥蓝联合染色法对兔角膜内皮细胞活性的评价

利用茜素红—锥蓝联合染色法,对正常新鲜角膜和干燥保存角膜内皮细胞进行染色。正常新鲜角膜内皮细胞为六角形,边界呈桔红染色,核淡蓝色、蚕豆状;而保存角膜内皮细胞则仅可看到淡蓝色、蚕豆状细胞核。提示保存角膜与新鲜角膜内皮细胞染色所见有明显区别。     

不同保存方法对角膜内皮细胞活性的影响

目的:探索简易安全的中长期保存供体角膜方法,评价不同保存方法保存后角膜内皮细胞活性,为临床提供优质角膜材料。方法:建立简易中期保存液,深低温保存法保存大鼠角膜。将30只鼠眼随即分为3组。分别为湿房保存,中期保存液和深低温保存。采用活性染色对角膜内皮细胞进行评价。判定3种方法保存的角膜内皮细胞的活性状态。结果:使用中期保存液和深低温保存后复温的角膜植片内皮细胞密度和活性率与湿房保存组比较差异无显著性(湿房组细胞密度个/mm2为2729.5±158.0,ESR%为88.9±3.5;中期保存组分别为2646.8±217.2和86.9±2.7;深低温组分别为2706.2±184和287.3±3.3,P>0.05)。结论:简易中期保存液和深低温保存后角膜具有较好的内皮细胞活性和临床应用价值。     

器官培养法保存角膜对角膜内皮细胞活性的影响

成功的角膜保存方法应能很好地维持角膜内皮细胞的活性.测定角膜内皮细胞的活性是器官培养保存角膜中最为重要的环节之一.本文总结了常用的角膜内皮细胞观察方法以及现阶段对其凋亡的研究,分析了保存液中主要成分、不同脱水剂以及保存时间对角膜内皮细胞活性的影响.     

应用跨角膜内皮细胞膜电位评价角膜保存液的保存效果

目的角膜透明性的维持决定于角膜内皮细胞的功能，内皮细胞膜上的钠泵不断地进行着离子转运，从而维持角膜的正常水合状态，这种由离子转运所产生的电位差（跨角膜内皮细胞膜电位）直接反映着角膜内皮细胞的功能状态。本研究通过测定跨角膜内皮细胞膜电位评价角膜保存液的保存效果。方法使用Ｕｓｓｉｎｇ灌流小室分别测定了新鲜兔去上皮角膜片和保存于ＭＫ液、Ｋ液和高钾保存液不同时间的兔去上皮角膜片的跨角膜内皮细胞膜电位。结果新鲜兔角膜跨角膜内皮细胞膜电位值是０．４～０．５±０．１ｍＶ；随着保存时间的延长，３种保存液所保存的角膜片电位值均出现下降，二者呈线性关系。当保存至ｄ１２时，高钾保存液所保存的角膜其电位值最接近新鲜角膜。结论高钾保存液维持角膜内皮细胞活性的作用优于ＭＫ液和Ｋ液。     

应用全自动角膜内皮细胞分析仪对保存兔角膜内皮细胞定量研究

目的研究保存的兔角膜内皮细胞活性四项定量指标的变化.方法应用非接触式眼库镜及计算机角膜内皮细胞形态定量分析系统对42只(84片)实验兔角膜内皮细胞进行四项指标(平均细胞面积、细胞密度、六棱细胞比率、变异系数)定量分析,并同时检测内皮细胞活性率,其结果进行对比研究.结果改良K3液组与K液对照组保存5天时,四项指标两组无显著性差异(P＞0.05),保存7、10天时,四项指标两组有显著性差异(P＜0.05).改良K3液组及K液组分别与正常兔组进行比较改良K液组在保存10天时,四项指标与正常兔组差异有显著性(P＜0.05).K液对照组在保存7、10天时,四项指标与正常兔组差异有显著性(P＜0.05).改良K3液组在保存10天时,内皮细胞活性率在93.36±1.96%,而四项指标与正常兔组差异已有显著性.K液对照组在保存7、10天时,内皮细胞活性率分别为90.84±1.9%,79.8±4.48%,四项指标均与正常兔组差异有显著性.结论完整的评价角膜植片的活性,单纯依靠既往的内皮细胞活性率测定是不全面的,在有条件的情况下应同时结合四项定量指标进行综合评价,才能确保供体角膜片的质量.     

高钾保存液对角膜内皮细胞存活的影响

应用流式细胞仪及细胞活性染料Ｄｉｏ，ＰＩ对高钾角膜保存液保后角膜内皮细胞的存活与Ｋ液进行了对照研究，结果表明：（１）高钾保存液组保存５、７、９、１１天的角膜内皮细胞存活率均高于Ｋ液组（Ｐ〈０．０５），（２）含钾离子浓度在１２．１５ｍＭ的高钾保存液角膜内皮细胞存活高于其它高钾组（Ｐ〈０．０５），提示低温状态下高钾角保存液对延长角膜内皮细胞的存活有一定的作用。     

改良中期保存法角膜内皮细胞的扫描电镜观察

目的:通过扫描电镜观察抽空房水、前房注入C_3F_8气体全眼球湿房保存角膜不同保存时间角膜内皮的超微结构。方法:兔眼球来源于4只新西兰白兔(即摘取眼球),实验组为右眼,对照组为左眼。实验组(兔眼4只,人眼6只)抽空房水,随即注入等量的C_3F_8气体,充填前房,然后将全眼球置4℃湿房条件下保存。4只兔眼中2只(1只用于实验性同种异体穿透性角膜移植)保存7天,其它2只分别保存10和14天;人眼球3对(6只)均为死后1小时内摘除眼球,经常规湿房保存4～7小时后转入实验组方法保存。分别保存0、3、5、7、10、14天。对照组兔眼球4只,取下带1mm巩膜环的角膜片,置于Optisol营养液中4℃保存,保存时间同实验组。保存后剪下角膜片行扫描电镜检查。结果:兔角膜保存7天内皮细胞只是轻度水肿,10及14天内皮细胞形态有改变,细胞表面微绒毛近消失,有少部分细胞溶解。人角膜保存7天内内皮细胞结构无明显改变,只是细胞增大,随着保存时间延长,内皮细胞形态及结构均有不同的改变。结论:此法保存7天的角膜内皮结构无明显改变。眼科学报 1995;11:186—188。     

干燥脱水法长期保存角膜及角巩膜植片的组织活性研究

目的 研究干燥脱水法保存角膜及角巩膜植片的组织活性。方法 应用无水氯化钙－硅胶干燥脱水法保存角膜及角巩膜植片，根据现有保存资料统计共1287例，保存时间半年至15年，对不同保存时间的植片进行了组织结构，细胞活性和超微结构的研究。结果 干燥保存角膜片5，10，15年的组织切片报告其胶原纤维束清昕可见，各层纤维排列呈一定角度，成纤维细胞减少，细胞器存在，内皮细胞的核存在。保存后植片合格率分别为：半年98．8％，1年98．4％，5年98．9％，10年93．3％，15年96．7％。保存合格植片临床应用，术后植片透明率平均94．9％。结论 无水氯化钙－硅胶干燥脱水法长期保存的角膜及角巩膜植片，具有一定的组织活性，临床应用效果好，操作简便，费用低廉，值得推广。     

角膜保存研究进展

随着现代眼科学的发展,角膜保存技术取得了重大进步,使角膜保存质量提高,保存时间明显延长。本文复习了目前常用的各种角膜保存方法,同时对角膜保存的热点问题:角膜保存的免疫原性,细胞凋亡,角膜内皮、上皮细胞的保护,需氧量,污染控制等方面作了综述,最后,我们对未来的发展趋势进行展望。     

干燥法长期保存角膜板层移植1267例临床研究

目的：评价干燥脱水法长期保存角膜片在板层治疗性角膜移植术中的效果。方法：保存角膜片选自我院眼库干燥保存符合临床标准、复水透明的完整角膜片，临床病例选自我院角膜病组1976年8月～1999年12月期间行板层治疗性角膜移植患者1267例，从手术前后视力比较、原发病灶控制、植片存活情况进行临床效果综合分析。结果：保存角膜片复水透明合格率为94．9％，临床治愈率：感染性角膜溃疡／穿孔88．8％，血管翳性全角膜白斑98．3％。化学及热烧伤(穿孔，睑球角粘连等)92．1％，圆锥角膜及急性圆锥角膜99．5％，角膜变性(边缘性及前基质层)99．0％。其他88．9％，平均总治愈率93．5％。结论：1．对各种严重的角膜感染、药物治疗无法控制的病人，治疗性角膜移植术是唯一有效的方法。2．采用无水氯化钙一硅胶干燥脱水长期保存的供体角膜能为临床随时提供角膜材料，是一项简单易行、便于推广应用的成功率很高的保存方法。     

影响中期保存的角膜供体内皮细胞活力的相关因素分析

目的 探讨影响中期保存的供体角膜内皮细胞活性的相关因素.方法 对保存液中的角膜内皮细胞进行培养和评分,并与供体年龄、供体保存与死亡时间间隔、供体采集与死亡间隔、是否曾在常温下长时间暴露等因素进行相关分析.结果 细胞培养评分与供体年龄呈负相关,与供体保存时间呈负相关,与是否在常温下过夜呈负相关.结论 供体的年龄、植片的保存时间及是否在常温下长时间暴露均是影响供体角膜内皮细胞活力和功能的关键因素.     

硫酸软骨素在深低温角膜保存中对内皮细胞的保护作用

为探讨硫酸软骨素（ＣＳ）对深低温保存角膜内皮细胞的保护作用及机理，将牛角膜分成对照组及实验组Ⅰ～Ⅴ，每组６只角膜。对照组用７５％二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）为抗冻剂，实验组Ⅰ～Ⅳ除用７５％ＤＭＳＯ外，还分别加用０５％、２５％、５％及７５％ＣＳ，实验组Ⅴ抗冻剂仅有２５％ＣＳ，没有ＤＭＳＯ。采用程序降温法深低温保存角膜，复温后经组织培养６～８小时检测内皮细胞密度及存活率，测量角膜厚度。结果：抗冻剂中含２５％ＣＳ时，保存的角膜内皮细胞密度及存活率最高，且复温后角膜厚度恢复最快。但仅有２５％ＣＳ，没有ＤＭＳＯ时，保存的角膜看不见内皮细胞结构。经含２５％ＣＳ的抗冻剂保存的人角膜行穿透性角膜移植术后透明率高（５／６，８３３３％），但内皮细胞存活率（８１７％）较牛角膜内皮细胞存活率（９４４％）低。结论：ＣＳ能改善深低温保存的角膜内皮细胞活性。它虽不能代替ＤＭＳＯ，但可增强ＤＭＳＯ的抗冻效果。     

干燥保存角膜穿透移植实验与临床应用

一般认为.干燥保存角膜是无活性的组织。仅限于板层角膜移植应用。我们在临床实践中发现,干燥保存角膜有可用于穿透角膜移植的苗头。为探讨干燥保存角膜可否作为常规穿透角膜移植材料应用。我们进行了系列的动物实验。临床上。我们有选择的将干燥保存角膜。作为挽救眼球的穿透角膜移植材料使用。其综合结果报告于下。     

远程投送对中期保存兔角膜内皮细胞的影响

目的:探讨模拟运输状态下机械振动对中期保存角膜内皮细胞(CEC)活性的影响.方法:DX中期保存液保存兔角膜片7d,实验室用摇床模拟远程运输环境,按作用不同时间、不同振动强度进行分组,分别进行CEC活性染色和CEC酶组织化学染色,对比不同组间模拟运输对角膜内皮的影响.结果:实验条件下观察指标并不随振动强度和时间变化,组间各项指标差异无显著性.结论:实验室模拟远程投送对中期保存兔CEC无明显影响.     

角膜活性保存质量影响因素研究进展

有效的角膜保存技术是角膜移植成功的基础。近年来,角膜活性保存技术得到不断改进和发展。角膜保存过程中,细胞活性、角膜免疫原性等诸多因素和角膜保存的质量密切相关。本文对角膜活性保存过程中影响保存结果的因素进行综述。     

干燥法长期保存角膜片板层治疗性角膜移植1267例临床研究

目的：评价干燥脱水法长期保存角膜片在板层治疗性角膜移植术中的效果。方法：保存角膜片选自我院眼库干燥保存符合临床标准、复水透明的完整角膜片，临床病例选自我院角膜病组1976年8月-1999年12月期间行板层治疗性角膜移植患1267例，从手术前后视力比较、原发病灶控制、植片存活情况进行临床效果综合分析。结果：保存角膜片复水透明合格率为94.9％，临床治愈率：感染性角膜溃疡/穿孔88.8％，血管翳性全角膜白斑98.3％，化学及热烧伤（穿孔，睑球角膜粘连等）92.1％，圆锥角膜及急性圆锥角膜99.5％，角膜变性（边缘性及前基质层）99.0％，其他88.9％，平均总治愈率93.5％；结论：①对各种严重的角膜感染、药物治疗无法控制的患，治疗性角膜移植术是唯一有效的方法。②采用无水氯化钙-硅胶干燥脱水长期保存的供体角膜能为临床随时提供角膜材料，是一项简单易行、便于推广应用的成功率很高的保存方法。