蝎毒耐热蛋白对外源性Aβ活化星形胶质细胞的作用

目的观察蝎毒耐热蛋白(SVHRP)对Aβ_(1-40)活化星形胶质细胞(AST)作用的影响。方法应用Aβ_(1-40)进行大鼠海马内定位注射后腹腔给予SVHRP进行干预,16d后应用免疫组化法进行海马内GFAP免疫反应强度检测。结果Aβ_(1-40)注射点周围GFAP免疫反应明显增强,而经SVHRP干预后GFAP免疫反应显著减弱,接近正常对照水平。结论腹腔注射SVHRP可抑制外源性Aβ_(1-40)引起的大鼠海马内AST活化。     

SVHRP对Aβ_(1-40)处理后大鼠海马突触形态学改变的抑制作用

目的:探索蝎毒耐热蛋白(SVHRP)对淀粉样β蛋白(Aβ)神经毒性的抑制作用。方法:在大鼠海马内每侧注射Aβ1-40(10μg/2μl)后1d,给予腹腔SVHRP(0.5～2μg/100g),1次/d,连续10次。建模16d后分别进行海马部位的突触体素免疫组织化学分析和突触超微结构计量观察。结果:与对照组比较,Aβ组大鼠突触体素免疫反应强度和电镜下突触密度明显下降(P0.01),小突触丢失为主,突触终末可见突触小泡大量集聚,突触活性区平均长度增加。SVHRP干预组大鼠实触体素免疫反应强度和电镜下突触密度明显高于Aβ组大鼠(P0.01),突触终末内未见突触小泡过量集聚,但小突触比例显著增加(P0.01)。结论:以上结果强有力的提示,Aβ是突触退变的始动因素,SVHRP可抑制Aβ引起的突触退变,有可能成为治疗Alzheimer病(AD)的一种药物。     

外源性Aβ活化星形胶质细胞的超微结构表现和SVHRP的抑制作用

目的观察淀粉样β蛋白(Aβ1-40)诱导星形胶质细胞活化的超微结构改变和蝎毒耐热蛋白(SVHRP)在超微结构水平对胶质活化的抑制作用。方法应用Aβ1-40进行大鼠海马内定位注射,同时腹腔给予SVHRP进行干预。通过免疫组化染色和透射电镜观察星形胶质细胞的变化。结果 Aβ注射16天后,注射点周围GFAP免疫阳性细胞较对照组增多、肥大;电镜下星形胶质细胞核异染色质减少,核周体明显,胶质丝增生,线粒体、粗面内质网等细胞器丰富,胞内见吞噬物。SVHRP干预后,GFAP免疫反应水平下降与对照组相近,电镜下仍然可见核周体明显的星形胶质细胞,但胶质丝较少。结论外源性Aβ引起星形胶质细胞出现明显的超微结构改变,SVHRP抑制这一反应。     

睾酮对β-淀粉样蛋白1-42寡聚体联合去势大鼠海马内突触素表达的影响

目的 :研究睾酮对β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)寡聚体CA1区注射联合去势大鼠脑内突触素表达的影响。方法 :双侧海马CA1区注射Aβ1-42寡聚体同时去势建立动物模型。动物分为空白对照组、模型组、氟他胺组、睾酮组及氟他胺+睾酮组。采用H-E染色法检测海马锥体细胞数量。采用免疫组织化学法及免疫印迹检测各组大鼠脑内突触素的表达量。结果:锥体细胞数量和突触素表达量在睾酮组和空白对照组比较高,两组间差异无统计学意义,但睾酮组与其他各组间差异有统计学意义。睾酮组,氟他胺+睾酮组的锥体细胞数量和突触素表达量均高于模型组。结论 :睾酮可以通过雄激素受体途径增加锥体细胞的生存率,可以增加突触素在模型动物海马中的表达。     

突触内与突触外NMDA受体在β-淀粉样蛋白减少海马神经元突触后密度蛋白-95表达中的作用

目的 研究可溶性Aβ寡聚体在海马神经元中对突触蛋白表达的影响.方法 用免疫细胞化学方法检测在NMDA拮抗剂与激动剂作用下,Aβ25～35对突触后密度蛋白(PSD-95)表达的影响.结果 Aβ25～35引起的PSD-95减少具有时间、剂量依赖性.PSD-95的减少可被非特异性NMDA受体拮抗剂(MK801)缓解;突触外NMDA受体被阻断时,也可显著缓解;而在突触内NMDA受体被阻断时,无显著性改变.结论 Aβ引起的PSD-95减少依赖NMDA受体活性,突触外NMDA受体可能参与Aβ诱导突触蛋白降解.     

Aβ1-42诱导的AD小鼠模型学习记忆能力的变化

目的研究不同剂量β淀粉样蛋白1-42片段(Aβ1-42)诱导的阿尔茨海默病(AD)小鼠模型的学习记忆功能的变化。方法在C57BL/6J小鼠双侧海马注射不同浓度的Aβ1-42各1μL诱导AD模型,并在对照组注射等量溶剂(生理盐水)。注射7天后,应用水迷宫(MWM)对小鼠进行学习和记忆功能的测定。结果与对照组相比,低剂量Aβ1-42(1μg/μL)处理对小鼠学习记忆功能未产生显著影响;而高剂量Aβ1-42(5μg/μL)处理组与对照组比较,潜伏期明显延长(0.05)、周边活动时间百分比增加(0.05)、平台象限活动时间百分比减少(0.05)、平台穿越次数减少(0.05)。结论双侧海马注射5μg(5μg/μL,1μL)的Aβ1-42能够显著地影响小鼠的学习和记忆功能,是制备小鼠AD模型的有效方法。     

蝎毒耐热蛋白对原代培养海马神经元NPY表达的影响

探讨具有抗癫痫反复发作作用的蝎毒耐热蛋白(scorpion venom heat-resistant protein,SVHRP)对大鼠海马神经元神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)表达的影响。采用免疫细胞化学ABC法与HPIAS系列彩色病理图文定量分析系统相结合,检测NPY-免疫阳性产物(NPY-IR)表达的变化,用RT-PCR技术观察NPY mRNA表达水平的变化。终浓度范围为0.2、2、20和200μg/ml的SVHRP分别与培养10d的海马神经元共孵育24h后,NPY阳性神经元的反应强度明显增强,具有剂量-反应关系。终浓度为20μg/ml的SVHRP分别与培养10d的海马神经元共孵育3、6、9、12和24h,NPY阳性反应强度增强,并呈时间-反应关系。RT-PCR结果显示,20μg/ml的SVHRP与原代培养海马神经元共孵育24h后,NPY mRNA的表达明显增加。以上结果提示SVHRP可诱导原代培养海马神经元NPY阳性反应和NPY mRNA的表达。     

β-淀粉样蛋白的神经毒性与跨膜离子转运

Alzheimer' s Disease,( AD)已成为影响老年人健康和寿命的突出问题。一般公认 ,脑内出现高密度的老年斑和神经纤维缠结是 AD的病理学特征。老年斑的主要成分是 β-淀粉样蛋白 ( Amyloidβ-Protein,AβP) [1 .2 ]。AβP由 40～ 42个氨基酸组成 ,是 β-淀粉样蛋白前体 βAPP的裂解产物。βAPP的编码基因位于 2 1号染色体 ,在正常人脑以及其它器官也有表达。因此 ,βAPP和 AβP在正常细胞的功能意义已受到人们的注意 ,对此问题的了解可能有助于阐明它们在 AD发病中的意义。目前积累的资料主要涉及到 AβP的神经毒作用[3 ] 。本文从…     

蝎毒耐热多肽对脂多糖诱导的BV2细胞炎性反应的抑制作用

目的:观察蝎毒耐热多肽(SVHRP)对细菌脂多糖(LPS)诱导的BV2细胞炎性反应的影响,探讨其是否具有抑制神经炎症的作用。方法:LPS诱导BV2细胞活化,进行免疫细胞化学染色(OX-42抗体)检测细胞的形态,MTT法检测SVHRP对细胞的毒性;分别用Griess试剂法和酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞外液炎性介质一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;Western Blot检测诱导型NO合成酶(iNOS)蛋白表达水平。结果:不同浓度的SVHRP(2~50μg/ml)对BV2细胞均无毒性。SVHRP(20μg/ml)预处理能明显抑制LPS诱导的BV2细胞的形态活化改变,减少细胞激活后产生的炎性因子NO和TNF-α,抑制iNOS的蛋白表达。结论:SVHRP明显抑制BV2小胶质细胞的炎性反应,提示SVHRP具有抗神经炎症作用。     

β-淀粉样蛋白对体外培养的神经干细胞作用研究

目的：观察β-淀粉样蛋白(Aβ)对体外培养的大鼠神经干细胞的作用。方法：取E13 d的Wistar胚胎大鼠脑组织，体外进行培养、传代、鉴定后，加入β-淀粉样蛋白，利用台盼兰拒染法细胞计数及MTT法观察细胞增殖及细胞活力，利用流式细胞术观察凋亡程度，同时观察加入β-淀粉样蛋白后，分化状态神经干细胞（加入10％胎牛血清）的变化。结果：当Aβ浓度大于25μmol/L时，能明显抑制神经干细胞的增殖及活力，同时引起神经干细胞的明显凋亡。而在12.5 μmol/L时就能抑制分化状态神经干细胞突起的延伸。结论：Aβ抑制神经干细胞的增殖分化并可致神经干细胞凋亡，可能是Alzheimer’s病的发病原因之一。     

穹窿海马伞切断鼠脑突触素动态变化及Morris水迷宫重复训练对其影响

目的在Morris水迷宫(MWM)重复训练的过程中观察穹窿海马伞切断大鼠的突触素(SYN)动态变化探讨阿尔茨海默病(AD)的发病机制和MWM重复训练学习和记忆能力对AD的影响,为临床应用提供实验依据。方法采用wistar大鼠60只,随机分为对照组、模型组和实验组,建模后连续四周给予Morris水迷宫重复训练定位航行和探索训练,分别评定大鼠空间学习和记忆能力,后进行海马突触素(SYN)免疫组化染色和超微电镜观察并进行统计学处理。结果随着训练次数的增加,对照组、模型组、实验组逃逸时间均逐渐缩短,实验组短于模型组,长于对照组(P0.05),提示空间学习能力得到提高。对照组、模型组和实验组大鼠在靶象限活动时间(s)百分比无明显差异(P0.05),提示空间记忆能力无明显提高。SYN免疫组化实验组SYN表达高于模型组,弱于对照组。结论MWM重复训练增加海马SYN表达可能与提高穹窿海马伞切断大鼠空间学习能力有关。     

神经生长因子对Aβ1-40诱导海马神经元周期蛋白异常表达的影响

为了探讨神经生长因子(NGF)对β-淀粉样蛋白诱导海马神经元周期蛋白表达的影响。本研究取新生3d内大鼠海马细胞行体外培养7d,分别在加入Aβ1-40前后加入NGF和等体积培养液,采用β-tubulin、ChAT免疫组化、cyclin免疫荧光进行检测。β-tubulin免疫组化证实所培养的为特异性结构完整的海马神经元;cyclin免疫荧光检测、ChAT免疫组化显示Aβ1-40导致cy-clin A、cyclin B1水平显著增高及ChAT免疫阳性细胞明显减少;而给予NGF可在不同程度上降低cyclin A、cyclin B1蛋白水平,增加ChAT免疫阳性细胞。结果提示,NGF能有效地阻止和轻度地修复Aβ1-40诱导的海马细胞损伤,对Aβ引起的海马神经元内异常表达细胞周期蛋白有一定的抑制作用。     

鼠脑穹窿海马伞切断突触素动态变化及Morris水迷宫重复训练对其影响

目的在Morris水迷宫(MWM)重复训练的过程中观察穹窿海马伞切断大鼠的SYN动态变化探讨AD的发病机制和MWM重复训练学习和记忆能力对AD的影响,为临床应用提供实验依据。方法采用Wistar大鼠60只,随机分为对照组、模型组和实验组,建模后连续4周给予Morris水迷宫重复训练定位航行和探索训练,分别评定大鼠空间学习和记忆能力,后进行海马突触素(SYN)免疫组化染色和超微电镜观察并进行统计学处理。结果随着训练次数的增加,对照组、模型组、实验组逃逸时间均逐渐缩短,实验组短于模型组,长于对照组(P<0.05),差异有统计学意义,提示空间学习能力得到提高。对照组、模型组和实验组大鼠在靶象限活动时间(s)百分比差异没有统计学意义(P<0.05),提示空间记忆能力无明显提高。免疫组化结果显示实验组SYN表达高于模型组,弱于对照组。结论MWM重复训练增加海马SYN表达可能早提高穹窿海马伞切断大鼠空间学习能力的重要机制。     

大鼠海马内注射β淀粉样蛋白1-40抑制铜蓝蛋白表达

目的:通过检测阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)模型大鼠海马铜蓝蛋白(glycan-phosphatidyli-nositol ceruloplasmin,GPI-Cp)的变化,探讨AD时脑铁增高的机制。方法:取雄性(290±10)g SD大鼠,经海马内注射(amyloid beta-peptide 1-40,Aβ1-40)建立AD模型,于1、2、3和4周取各组大鼠脑组织,分离海马,用RT-PCR检测GPI-Cp mRNA表达情况,免疫组织化学染色检测GPI-Cp蛋白表达情况。结果:海马的星形胶质细胞、血管内皮细胞、室管膜细胞均有GPI-Cp的mRNA和蛋白表达;而海马的锥体细胞仅轻度表达,颗粒细胞不表达。注射Aβ1-40后,模型组海马GPI-Cp mRNA和蛋白表达均随着时间延长逐渐降低,具有统计学意义(P<0.01)。结论:海马内注射Aβ1-40可引起大鼠海马GPI-Cp表达减少,GPI-Cp表达减少可能是AD时脑铁增高的原因。     

β-淀粉样蛋白在Alzheimer病中的神经毒性

文综述了β淀粉样蛋白多肽(βamyloid peptide,Aβ)在老年性痴呆症(Alzheimer's disease,AD)中的毒性作用。Aβ是老年斑形成的始动因子,也是老年斑核中的核心成分;Aβ沉积所形成的神经炎性斑,即老年斑是AD脑内特征性病理变化之一;Aβ本身也可形成自由基损伤神经元;Aβ引起的细胞凋亡在AD病神经元丢失中起着重要作用;Aβ可作用于胆碱能神经元末梢,通过抑制胆碱的摄取而减少乙酰胆碱合成,减少海马和皮质脑片释放乙酰胆碱。总之,Aβ是通过多个环节引发神经毒性作用的。     

β淀粉样蛋白在老年痴呆症突触活动改变中作用的研究进展

<正>老年性痴呆,即阿尔茨海默症(Alzheimer’sdisease,AD)是一种常见的神经退行性疾病。临床上表现为渐进性记忆力衰退、认知能力下降和性格改变,并最终完全失去自理能力。中国进入老龄化社会的进程正在加速,由于人口基数大,AD这种神经退行性病变的高发期即将到来。防治AD不仅是医学科技人员的重任,也是全社会的共同责任。β淀     

［Gly14］-humanin 多肽对β淀粉样蛋白引起的神经干细胞毒性的拮抗作用研究

目的：研究［Gly14］-humanin对β淀粉样蛋白1-42引起的神经干细胞毒性的作用。方法：用［Gly14］-humanin和β淀粉样蛋白1-42处理神经干细胞，观察其对神经干细胞增殖、分化的影响。结果：较低浓度的［Gly14］-humanin加入有β淀粉样蛋白1-42处理的神经干细胞培养基，经过琼脂糖凝胶电泳分析及流式细胞测定DNA含量，神经干细胞显示出对β淀粉样蛋白1-42的耐受，而对照组则显示神经干细胞出现凋亡现象。高浓度的［Gly14］-humanin加入培养基，经台盼蓝拒染法计数细胞，神经干细胞死亡率明显低于对照组，对照组神经干细胞出现大量死亡。结论：［Gly14］-humanin 不但具有抑制β淀粉样蛋白1-42对神经干细胞的毒性作用，而且在低浓度的情况下，可以促进神经干细胞的增殖和分化为神经元。     

重组四价Aβ1-15蛋白的表达及免疫原性鉴定

目的:制备重组人四价串联Aβ1-15老年性痴呆二代蛋白疫苗,探讨其免疫原性.方法:以本室前期制备的含四价AB1-15基因(4×Aβ15)的重组质粒peDNA-4×Aβ15为模板,PCR扩增4×Aβ15基因并克隆至pGEX-4T-2质粒中,转化大肠杆菌,诱导表达GST-4×Aβ15.经thrombin酶切去除GST后得到纯化的4×Aβ15蛋白.将4×Aβ15免疫BALB/c小鼠,观察其诱导体液免疫反应的能力.结果:经鉴定、测序,获取重组质粒pGEX-4×Aβ15,诱导表达后Western blotting显示在相对分子质量约35×103处有GST-4×Aβ15表达带,thrombin酶切去除GST后得到相对分子质量约9×103的4 xAβ15蛋白.4×Aβ15蛋白免疫小鼠诱导出(964.6+401.3)ms/L抗AB抗体.结论:成功构建了pGEX-4×Aβ15原核表达质粒并表达人重组4×Aβ15蛋白,免疫动物证实该蛋白疫苗有较强的免疫原性.     

STCH减弱Aβ_(25-35)对SH-SY5Y培养细胞神经毒性作用的初步研究

目的:研究应激和分子伴侣蛋白(stress and chaperon,STCH)拮抗β淀粉样蛋白(beta-amyloid25-35,Aβ25-35)在体外对人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y毒性的机制。方法:用Aβ25-35(20μmol/L)在不同时间点分别处理SH-SY5Y培养细胞,然后采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白印记(Western Blot)法检测内质网应激相关分子的表达和c-Jun amino-terminal kinase(JNK)的磷酸化,并采用负载钙荧光探针(acetoxymethyl ester ofFura-2,Fura-2AM)钙成像技术检测过表达STCH对100nmol/L星孢霉素(staurosporin)引起的钙超载的情况。结果:Aβ25-35处理SH-SY5Y细胞后引起STCHmRNA表达上调,在3h开始升高,12h达到高峰,然后下降;而葡萄糖调节蛋白94(glucose-regulated protein94,Grp94)则于处理后6h表达上调,9h达到高峰,然后快速下降。Aβ25-35处理SH-SY5Y细胞能够激活JNK通路,致其磷酸化增加,过表达STCH,能够抑制JNK的磷酸化。过表达的STCH能够显著拮抗stauroposrine引起的游离钙增加。结论:STCH可能通过拮抗游离钙增加,抑制JNK通路而发挥保护神经元的作用,这将为我们寻找神经保护的策略提供有益的线索。     

免疫球蛋白对 Aβ引起的神经细胞毒性的拮抗作用

中枢神经系统退行性疾病,如早老性痴呆症（AD）、帕金氏综合症等在老年人群中发病率逐年升高,目前对此类疾病还没有很好的药物治疗。早老性痴呆症的病理特征是神经细胞间隙有大量的β-淀粉样蛋白（β-amyloid,Aβ）沉积,干扰神经细胞功能,使神经系统的信号传导受阻,最后致细胞死亡。大量的实验结果和临床资料表明,Aβ是各种原因诱发AD的共同通路,是AD形成和发展的关键,如果能阻止Aβ产生或清理掉已产生的Aβ,将会阻止AD的发生或减轻AD症状。免疫球蛋白是被抗原激活的B淋巴细胞产生的一类蛋白质,通过血液循环进入各种组织,它既能与抗原结合清理掉病原微生物,也具有蛋白质的共性发挥其他作用。近年有报道,免疫球蛋白可抑制早老性痴呆症。为研究免疫球蛋白在治疗AD中与Aβ的关系,我们用免疫球蛋白和Aβ共处理体外培养的神经细胞,通过形态观察、MTT法活性检测和荧光双染色等方法探究免疫球蛋白对Aβ神经毒性的拮抗作用,为治疗早老性痴呆症等中枢神经系统退行性疾病提供一种新的思路。