沙纳唑含量测定及体外放射增敏作用

沙纳唑 (Ｓａｎａｚｏｌｅ,ＡＫ 2 12 3)是一个新型肿瘤放疗增敏剂 ,能明显提高肿瘤组织中乏氧细胞对射线的敏感性 ,具有很大的临床实用价值[1 3] ,笔者进行了沙纳唑含量测定方法的建立和对离体肿瘤细胞放射增敏效应的评价。一、材料和方法1 药物 :沙纳唑原料药和对照品由本课题组制备。2 仪器和条件 :含量测定用高效液相色谱仪 (ＨＰＬＣ) :Ｗａｔｅｒｓ 5 10泵 ,4 86紫外检测器 ,ＡＰＥＸ数据处理系统 ,ＫｒｏｍａｓｉｌＫＲ10 0 5Ｃ1 8色谱柱 (Φ 4 6ｍｍ× 2 5 0ｍｍ)。流动相甲醇∶水∶冰醋酸 (2 0 0∶80∶3) ,检测波长 2 4 8ｍｍ …     

甘氨双唑钠放射增敏作用的临床研究

目的 观察甘氨双唑钠（CMNa）放射增敏作用.方法 对55例经病理学和（或）细胞学证实的肺癌、食管癌采用随机双盲对照法分为A组（放疗＋CMNa组）和B组（放疗＋安慰剂组）.A组CMNa按800 mg/m^2于放疗前1 h内静脉滴注,3次/周滴注至放疗结束.B组用同样剂量的安慰剂.静脉滴注后30～60min内进行放疗,直至疗程结束.放疗总剂量60～70 Gy,2 Gy/次,5次/周,共6～7周.结果 治疗组2例肺癌患者因过敏反应（皮疹）退组未参与疗效评价.肺癌A组和B组的有效率分别为42%和53%（P=0.516）,食管癌中A组和B组有效率分别为100%和43%（P=0.015）,A组和B组总有效率分别为62%和50%（P=0.378）.中位生存期A组为11个月,B组为10个月.1、3、5年总生存率A组分别为31%、13%、10%,B组分别为25%、15%、6%（P=0.475）.1、3、5年局部控制率A组分别为32%、18%、16%,B组分别为28%、19%、13%（P=0.518）.除偶见皮疹,两组毒副反应相似.结论 CMNa对食管癌有放射增敏作用,而对肺癌疗效不明显,其毒副作用轻微.CMNa配合放疗远期疗效不明显,仍需追踪观察和扩大病例试验.     

青蒿琥酯对人宫颈癌HeLa细胞的放射增敏作用

目的 探讨青蒿琥酯对人宫颈癌HeLa细胞的放射增敏作用。方法 应用⁶⁰Co γ射线照射细胞,吸收剂量率为0.635 Gy/min,照射剂量为0、1、2、4和6 Gy。采用MTT法检测青蒿琥酯对HeLa细胞的抑制作用,确定青蒿琥酯的最适实验作用浓度。克隆形成法检测青蒿琥酯对HeLa细胞放射敏感性的影响;采用"多靶单击数学模型"拟合HeLa细胞的剂量-存活曲线,得出平均致死剂量、准阈剂量及放射增敏比,评价其增敏效果。用流式细胞术检测HeLa细胞凋亡率,进一步检测青蒿琥酯对HeLa细胞的放射增敏性。结果 青蒿琥酯对HeLa细胞的抑制作用随药物浓度的增加而增加,单纯照射1、2、4和6 Gy细胞的克隆形成率分别为91.67%、82.02%、58.60%和25.01%,加入青蒿琥酯后,相同照射剂量下克隆形成率分别降低为74.93%、60.53%、22.38%和5.05%;单纯照射组与药物+照射组的平均致死剂量(D₀)分别为2.95和2.07 Gy,准阈剂量(D_q)分别为2.01和1.24 Gy,放射增敏比(SER)为1.43。单纯2和6 Gy照射组细胞凋亡率分别是12.26%和40.08%,加入青蒿琥酯后,相同照射剂量下细胞凋亡率分别上升至22.71%和59.92%。结论 青蒿琥酯对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用成药物浓度依赖性;青蒿琥酯对HeLa细胞具有一定的放射增敏作用。     

青蒿琥酯对人宫颈癌HeLa细胞的放射增敏作用

Objective To investigate the radiosensitizing effects of artesunate on human HeLa cells of cervical cancer in vitro.Methods Hela cells were irradiated with 60Co γ-rays.The dose rate was 0.635 Gy/min and the radiation dose was 0,1,2,4,6 Gy,respectively.The anti-proliferation activities of artesunate on HeLa cells were evaluated with MTT assay,to determine the most appropriate drug concentration.The effect of radiosensitivity was observed by using clonogenic assay.The single-hit multitarget model was used to plot the HeLa cell's dose-survival curve,to calculate mean lethal dose,quasithreshold dose and sensitization enhancement rate,and to evaluate its radiosensitization effect.The apoptosis was analyzed with flow cytometry (FCM) to further test the radiation senseitization of artesunate on HeLa cells.Results The inhibition of artesunate on HeLa cells increased with concentration.In radiation group,the cell cloning efficiency were 91.67% ,82.02% ,58.60% ,25.01%,respectively,and in artesunate (2.0 μ mol/L) + radiation group,the cell cloning efficiency were 74.93% ,60.53% ,22.38% ,5.05%.In radiation group and artesunate (2.0 μmol/L) + radiation group,the mean lethal dose(D0) was 2.95 and 2.07 Gy,respectively,while the qusai-threshold dose (Dq) were 2.01 and 1.24 Gy,respectively,and SER was 1.43.Compared with 2 and 6 Gy radiation group,the apoptosis rate of drug + radiation group increased from 12.26% ,40.08% to 22.71% ,59.92%.Conclusions The inhibiting effect of artesunate on HeLa cells is concentration-dependent.Artesunate has radiosensitizing effect on HeLa cells in vitro.     

抗癌新药dFdC及其放射增敏效应

ｄＦｄＣ是脱氧胞苷的一种类似物,具有全新的药代动力学和药效学特点。它在离体试验,整体试验和临床上都显示出较理想的抗肿瘤活性。     

二氢青蒿素对人宫颈癌HeLa细胞放射增敏作用的研究

目的 探讨二氢青蒿素对人宫颈癌HeLa细胞的放射增敏作用。方法 用MTT法检测其对HeLa细胞生长的抑制效应;克隆形成法检测放射敏感性;应用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡的变化。结果 二氢青蒿素对HeLa细胞有明显的抑制作用,其效应呈时间和剂量依赖性。20 μmol/L二氢青蒿素对HeLa细胞的放射增敏比(SER)为1.47。二氢青蒿素能够去除X线导致的HeLa细胞G₂期阻滞,与单纯6 Gy照射组相比,药物+照射组G₂期阻滞由73.58%降至48.31%。二氢青蒿素能增强X线诱导的细胞凋亡,与单纯2、4、6 Gy照射组相比,药物+照射组凋亡率分别由29.46%、48.04%、70.21%升至45.79%、66.36%、79.58%。结论 二氢青蒿素对人宫颈癌HeLa细胞具有放射增敏作用,机制可能与二氢青蒿素去除照射引起的G₂期阻滞有关。     

甘氨双唑钠对乏氧胰腺癌细胞放射增敏研究

目的 研究甘氨双唑钠（CMNa）在乏氧环境下对人胰腺癌Panc-1细胞的放射增敏效果.方法 在乏氧和加不同浓度CMNa环境下对体外培养的人胰腺癌Panc-1细胞进行单次大剂量的γ射线照射,通过微孔板荧光酶标仪检测细胞死亡率来研究放射增敏作用.CMNa在乏氧环境下的选择性增敏效果利用流式细胞技术进行验证.结果 胰腺癌Panc-1细胞30 Gy照射后的细胞死亡率在乏氧环境下随CMNa浓度的增加显著增高;而在常规环境下CMNa却无明显的放射增敏作用.CMNa在乏氧环境下的选择性增敏作用具有时间相关性.结论 CMNa在乏氧环境下对人胰腺癌细胞大剂量γ射线照射具有明显的增敏效果.     

放射增敏剂的作用机制及临床研究进展

放射治疗是治疗恶性肿瘤的主要手段之一，但是临床上多数肿瘤的放射治疗疗效较低，因此如何增加肿瘤的放射敏感性一直是肿瘤放射治疗领域中受关注的问题。已有为数不多的放射增敏剂应用于临床或正在进行临床试验，各种放射增敏剂的作用方式及效果各有差别，本文作者从几个方面综述如下。     

放射增敏剂沙纳唑的肿瘤内分布

沙纳唑(Sanazole)是一个新型放射增敏剂(Radiosensitizer)，对很多肿瘤有明显的放射增敏效果，具有很大的临床实用价值。本文作者报道了大鼠在沙纳唑静注给药后实体瘤和腹水瘤组织内的浓度分布，并和血清中的浓度作比较，观察适宜照射时间。     

抗癌新药dFdC及其放射增敏效应

ｄＦｄＣ是脱氧胞苷的一种类似物,具有全新的药代动力学和药效学特点。它在离体试验、整体试验和临床上都显示出较理想的抗肿瘤活性。目前,ｄＦｄＣ已在许多国家被批准用于治疗非小细胞肺癌和胰腺癌,并正在进行乳腺癌、膀胱癌、小细胞肺癌等恶性肿瘤的各期临床研究。ｄＦｄＣ高效低毒的特点非常适于与其它化疗药物或放疗联合应用。ｄＦｄＣ具有放射增敏效应,其程度受细胞种类、给药剂量和照射时间等影响。ｄＦｄＣ的放射增敏机制尚不十分清楚,可能与胞内ｄＡＴＰ水平下降、细胞周期变化等因素有关。     

DNA依赖性蛋白激酶催化亚基在电离辐射诱发HeLa细胞自噬中的作用

目的：了解DNA依赖性蛋白激酶催化亚基（ DNA-PKcs）在电离辐射诱发细胞自噬中的作用。方法通过慢病毒载体（ pSicoR ）构建DNA-PKcs短发夹RNA （ shRNA ）表达载体,并转染HeLa细胞敲低DNA-PKcs表达。CCK-8实验检测细胞增殖活性及细胞放射敏感性,免疫印迹检测自噬相关蛋白表达,免疫荧光实验检测自噬标志物GFP-LC3的表达。结果成功构建shRNA敲低DNA-PKcs表达的HeLa细胞模型,通过该细胞模型观察到抑制DNA-PKcs蛋白表达导致细胞增殖能力降低、放射敏感性增高。 P62和LC3蛋白表达变化,以及细胞内绿色荧光蛋白（ GFP）-LC3免疫荧光斑检测结果显示,DNA-PKcs基因敲低后,明显增加X射线诱发细胞自噬。抑制DNA-PKcs导致哺乳动物西罗莫司（雷帕霉素）靶蛋白（ mTOR）第2481位丝氨酸磷酸化水平降低。结论抑制DNA-PKcs增强受照射宫颈癌HeLa细胞的自噬及放射敏感性,mTOR信号通路可能参与DNA-PKcs对自噬的调节作用。     

lyGDI在HeLa细胞中的表达与辐射增敏研究

目的将lyGDI和突变体D191yGDI转入到不含内源性lyGDI的HeLa细胞中，探讨其是否有凋亡信号转导功能，并分析lyGDI的导入表达能否增加辐射诱导HeLa凋亡的敏感性。方法用脂质体转染的方法将构建于pCDNA3．1HisA载体上全长的LyGDI和D191yGDI转入HeLa细胞，用Westem blot检测LyGDI的表达和Xpress标记物，同时，用细胞流式仪和Annexin V-FTTC双染色检测HeLa细胞瞬时转染诱导的细胞凋亡。用G418筛选稳定表达LyGDI的克隆，经12Gv的^60Coγ射线辐射处理，Western blot分析Caspase-3的活性及克隆形成试验来观察LyGDI的导入是否增加HeLa细胞的放射敏感性。结论IyGDI在HeLa细胞中的瞬时表达诱导了细胞的凋亡，LyGDI具有凋亡信号转导功能。其次，Western blot检测Caspase-3和克隆形成试验的结果表明LyGDI的导入增加了HeLa细胞辐射凋亡的敏感性。     

高强度皮秒脉冲电场对人宫颈癌HeLa细胞的生长抑制及凋亡诱导作用

目的探讨高强度皮秒脉冲电场对体外培养的人宫颈癌细胞HeLa的生长抑制和凋亡诱导作用。方法体外培养人宫颈癌细胞HeLa,将细胞分为处理组(在高强度皮秒脉冲电场处理)及正常对照组(未经高强度皮秒脉冲电场处理)。固定脉宽、频率、场强,按脉冲个数1002、005、001、0001、5002、000分为6个处理组,利用MTT比色法检测脉冲电场对HeLa细胞的生长抑制作用和量效关系。检测细胞存活率发生显著变化的5001、0002、000组细胞的Caspase3活性。根据MTT及Caspase结果,只选取Caspase 3活性高的脉冲个数2000组加入罗丹明123探针后于激光共聚焦扫描显微镜下检测HeLa细胞线粒体跨膜电位。结果 MTT证明高强度皮秒脉冲电场对HeLa细胞有杀伤作用且存在剂量-效应关系,细胞存活率随脉冲个数的增加而降低,脉冲个数100、200、500、10001、5002、000处理组及正常对照组HeLa细胞存活率分别为96.23%±0.76%,94.11%±2.42%,90.31%±1.77%,64.59%±1.59%,32.95%±0.73%,23.85%±2.38%,100%,各处理组与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。脉冲个数500、1000、2000及正常对照组Caspase 3吸光度值(A值)分别为0.174±0.012,0.232±0.017,0.365±0.016,0.122±0.011,各处理组均高于正常对照组(P<0.05)。脉冲个数2000组线粒体跨膜电位荧光强度(76.66±13.38)明显低于正常对照组(155.81±2.33,P<0.05)。结论高强度皮秒脉冲电场对HeLa细胞有生长抑制作用,其机制可能是通过线粒体途径诱导细胞凋亡。     

2.45GHz微波非热效应诱导人宫颈癌细胞凋亡及其机制

目的 观察2.45 GHz微波非热效应对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响,探讨不同照射功率与凋亡诱导效应之间是否存在量效关系及其机制.方法 HeLa细胞随机分为对照组、假照射组和低、中、高(10、15和20 mW/cm²)3个功率照射组,2.45 GHz微波照射10 min.MTT法检测HeLa细胞存活率;激光共聚焦显微镜观察各组HeLa细胞核形态变化,并统计异常细胞核比率;流式细胞仪检测细胞周期并分析sub-G₁期细胞所占比例;免疫印迹法观察Bax、Bcl-2和Caspase-3凋亡相关蛋白表达变化并以β-肌动蛋白为内参比较各组蛋白表达灰度变化.结果 MTT结果显示,对照组与假照射组、低功率照射组之间细胞存活率无明显变化,中、高功率照射组HeLa细胞存活率较假照射组明显降低(t=-16.47、-14.23,P<0.05);激光共聚焦观察经Hoechst单染的细胞核显示,低、中、高功率照射组异常细胞核比率与假照射组相比明显增高(t=9.37、11.25、8.47,P<0.05),且高功率组细胞核异常比率高于低、中功率组(t=15.32、10.25,P<0.05);流式细胞术结果显示低、中、高功率照射组sub-G₁期细胞所占比例均比假照射组升高(t=15.24、22.31、10.69,P<0.05);免疫组织化学结果显示Bcl-2的表达随着微波照射功率的增大而减弱,Bax和Caspase-3的表达随着照射功率的增强而加强.结论 2.45 GHz微波可诱导HeLa细胞凋亡,且与其功率密度增加呈正相关.     

Ox-LDL诱导人肾小球系膜细胞凋亡在慢性肾炎中的作用

目的 :探讨氧化低密度脂蛋白 (Ox-LDL)诱导肾小球系膜细胞凋亡的调控机制及其在慢性肾炎中的作用。方法 :通过人肾小球系膜细胞体外培养 ,采用原位末端标记和DNA凝胶电泳检测低浓度的Ox -LDL (0、 2 5、 5 0、10 0 μg/ml)对系膜细胞凋亡的影响 ,免疫组化维生素E干预前后Ox-LDL对系膜细胞Bax/Bcl- 2表达的影响 ;按血浆LDL水平 ,把有不同程度肾小球硬化的慢性肾炎患者肾标本分为LDL正常组和LDL升高组 ,分别采用DNA原位末端标记和免疫组化 ,检测肾小球细胞凋亡及Bax/Bcl- 2蛋白表达。结果 :低浓度Ox-LDL (0～ 10 0 μg/ml)以剂量依赖方式促进肾小球系膜细胞凋亡 ,并使肾小球系膜细胞Bax的蛋白表达呈时间 -剂量依赖性增加 ,P <0 0 1,Bcl- 2的蛋白表达轻度升高后呈时间 -剂量依赖性下降 ,P <0 0 1,导致Bax/Bcl- 2比值增大 ;维生素E干预后这种变化不明显 ,P >0 0 5。LDL升高组肾小球凋亡和Bax蛋白表达明显增加 ,P <0 0 1;Bcl- 2变化不明显 ,P >0 0 5 ,血LDL水平与肾小球硬化指数、凋亡指数、Bax/Bcl- 2比值有显著正相关关系。结论 :Ox -LDL能诱导肾小球系膜细胞凋亡 ;Bax/Bcl- 2比值上升可能是Ox -LDL诱导肾小球系膜细胞凋亡的重要机制 ;脂质异常可能是导致肾小球硬化中细胞减少的重要原因     

钙在血卟啉单甲醚-光动力学疗法处理后HeLa细胞中的变化及作用

目的 了解钙离子在血卟啉单甲醚-光动力学疗法(HMME-PDT)处理后HeLa细胞中的变化和作用。方法 Fura-2／AM孵育荧光分光光度计检测细胞质游离钙浓度[Ca^2 】i的变化，MTT法分析PDT及钙离子对HeLa细胞存活率的影响，Western印迹法分析HMME-PDT后HeLa细胞的肌浆／内质网钙泵(SERCA2)蛋白的降解情况。结果 HMME-PDT处理后即刻HeLa细胞内【Ca^2 】i就开始增高，且与PDT剂量成正相关用，BAPTA／AM拮抗【Ca^2 】i的升高可增加HeLa细胞的存活率。同时HMME-PDT可引起SERCA2蛋白的降解。结论 HMME-PDT处理后HeLa细胞内【Ca^2 】i可迅速增高，【Ca^2 】i，升高可能与SERCA2蛋白的降解相关，并可促进HeLa细胞的死亡。     

Gold nanoparticles in combination with megavoltage radiation energy increased radiosensitization and apoptosis in colon cancer HT-29 cells

Purpose: Gold nanoparticles (GNP) act as a radiosensitizer in radiation therapy. However, recent studies have shown contradictory evidence in terms of radiosensitization in the presence of GNP combined with X-ray megavoltage energy (MV) on different cell types. In this study, the effect of GNP on radiosensitization enhancement of HT-29 human colorectal cancer cells at MV X-ray energy was evaluated.

Materials and methods: The cytotoxicity and radiosensitization of GNP were evaluated in HT-29 human colorectal cancer cells by MTS-assay and multiple MTS-assay, respectively. Cellular uptake was assayed using graphite furnace atomic absorption spectrometry (GFAAS). Apoptosis and cell cycle progression were determined by an Annexin V-FITC/propidium iodide (PI) kit and PI/RNase solution with flow cytometry, respectively.

Results: Results showed that the cell viability of the HT-29 cells was not influenced by exposure to different concentrations of GNP (10–100 μM). GNP alone did not affect the cell cycle progression and apoptosis. In contrast, GNP, in combination with radiation (9?MV), induced more apoptosis. The interaction of GNP with MV energy resulted in a significant radiosensitization enhancement compared with irradiation alone.

Conclusion: It was concluded that GNP may work as bio-inert material on HT-29 cancer cells and their enhancement of radiosensitization may be due to increase in the absorbed irradiation dose.     

线粒体在血卟啉单甲醚-PDT诱导HeLa细胞凋亡中的作用

目的探讨线粒体在血卟啉单甲醚(HMME)-PDT诱导HeLa细胞凋亡中的作用。方法膜联蛋白(annexin)V-PI双染法检测HMME-PDT处理后6hHeLa细胞的凋亡率和坏死率。Rh123染色法检测PDT后2h内HeLa细胞的线粒体膜电位(△Ψm)变化。Western杂交法检测PDT后6h内细胞质内细胞色素C(CytC)的含量变化。结果HMME-PDT后6hHeLa细胞的凋亡率和坏死率分别为11.48%±3.42%和17.68%±1.05%。PDT后2h内△Ψm无显著改变。PDT后即刻(0h)细胞质内未检测到CytC,而在PDT后2、4和6h均可检测到CytC,且含量有增高的趋势。结论线粒体内的CytC转位于细胞质,是HMME-PDT导致HeLa细胞凋亡的机制之一。     

辐射诱导miR-1246对宫颈癌HeLa细胞上皮间质转化作用

目的探讨辐射诱导的miR-1246对宫颈癌He La细胞上皮间质转化(EMT)的作用。方法经不同剂量~(60)钴(~(60)Co)γ射线辐射处理的宫颈癌He La细胞,采用qRT-PCR检测miR-1246的表达水平。借助miR-1246及miR-1246-inhibition慢病毒表达载体,调变miR-1246在He La细胞中的表达水平,然后应用划痕实验及Transwell侵袭实验比较He La细胞的转移和侵袭能力;Western blot实验检测细胞中EMT相关分子的表达情况。结果辐射可诱导miR-1246在宫颈癌He La细胞中表达(P<0.05)。上调miR-1246表达,He La细胞出现间质细胞的形态改变,同时,细胞迁移能力增强,侵袭能力提高。在He La细胞中miR-1246表达上调,可降低细胞中E-cadherin的表达(P<0.05),同时升高N-cadherin的表达(P<0.05)。结论辐射可诱导miR-1246在宫颈癌He La细胞中表达,miR-1246通过调控E-cadherin和N-cadherin的表达促进宫颈癌HeLa细胞发生EMT。