耐高温酸性α-淀粉酶基因部分序列的克隆与分析

利用已报道的α-淀粉酶基因序列的保守区域设计引物,通过聚合酶链式反应(PCR)获得了高温球菌Thermococcus sp. HJ21的耐高温酸性α-淀粉酶基因的部分序列。通过对该序列的同源性比较分析发现,高温球菌Thermococcus sp. HJ21与热水高温球菌Thermococcus hydrothermalis和Thermococcus sp. OGL-20P的亲缘关系最近,序列相似度达到95%以上;利用Swiss Model预测该基因产物的3级结构,显示其具有典型的(β/α)8桶状结构;通过分析密码子的使用情况得知,该α-淀粉酶存在着密码子的兼并性和使用的偏向性问题。     

热球菌HJ21高温α-淀粉酶基因克隆、表达及性质研究

通过简并引物扩增热球菌(Thermococcus siculi)HJ21高温α-淀粉酶保守区域之间的序列,再利用Site-finding技术获得两端未知序列.构建了在N端添加了His6标签的表达载体pEt-28a-His6-THJA后转化E.coli,在IPTG诱导下表达.进一步纯化后SDS-PAGE电泳检测达到电泳纯...     

正交试验优选复方莪术散的提取工艺及其颗粒制备工艺研究

目的：优选复方莪术散颗粒的最佳提取与颗粒制备工艺,为该复方的开发利用提供试验依据。方法：采用正交试验法对复方莪术散进行提取,以淫羊藿苷的含量和收率综合评价为指标,通过L_{9（3^{4）正交试验设计对醇的用量、提取的时间和提取次数进行考察,优选复方莪术散的醇提取工艺,再以浸膏为原料,通过L9（34）正交试验设计考察稀释剂（可溶性淀粉）的比例及粘合剂（乙醇）的浓度和干燥温度,制备复方莪术散颗粒。结果：复方莪术散提取最佳工艺为A2B22C11D1,即处方药材加60%浓度的10倍剂量的乙醇,提取2次,每次1.5h为最优。最佳制备工艺为A3B2C2,即干浸膏∶淀粉的比例为1∶2.5,并以90%乙醇为湿润剂,采用湿法制粒的方法,干燥温度为60℃,所制得颗粒剂经检查符合相关要求。结论：本试验所得复方莪术散颗粒剂的提取与制备工艺合理、可行,为该复方的开发利用提供了试验依据。}}     

凡纳滨对虾α-淀粉酶基因PCR-RFLP多态性与生长性状的相关分析

采用PCR-RFLP法对379尾凡纳滨对虾α-淀粉酶基因(AMY)多态性进行检测,并分析AMY基因多态性与生长性状的相关性.结果表明:引物AMY-5与AMY-6扩增片段均具多态性,引物AMY-5扩增产物有CC,CT和TT 3种基因型,AMY-6扩增产物有AA,AB和BB 3种基因型.AMY基因AMY-5引物位点TT基因...     

星点设计-效应面法优选壮药盘龙止咳颗粒提取工艺的研究

目的：通过星点设计-效应面法优选壮药盘龙止咳颗粒的最佳提取工艺,为后续研发更有效、更稳定、更方便的新制剂提供依据。方法：采用高效液相色谱法进行含量测定,采用单因素试验、星点设计-效应面法考察乙醇浓度、溶剂倍量、提取时间及提取次数,以山奈酚-3-O-龙胆二糖苷与岩白菜素总含量及干膏率的综合评分为评价指标,优选出壮药盘龙止咳颗粒最佳提取参数。结果：壮药盘龙止咳颗粒的最佳提取工艺为加入12倍量浓度为50%的乙醇,每次提取50 min,提取2次。结论：通过星点设计-效应面法优选盘龙止咳颗粒的提取工艺,方法预测性良好,重复性良好,简便可靠,为改变服用剂型研究提供了可靠依据。     

正交试验优选前列舒康片提取工艺研究

目的：优选前列舒康片的提取工艺。方法：以浸膏得率、盐酸小檗碱和京尼平苷酸为评价指标,将溶剂倍数、溶剂种类、提取时间、浸泡时间等作为考察因素,通过正交试验优选出前列舒康片的提取工艺。结果：优选出前列舒康片中黄柏醇提工艺为黄柏粗粉加乙醇回流提取2次,第1次加7倍量60%乙醇提取1.5h,第2次加6倍量60%醇提取1h;车前子等药材水提工艺为加水煎煮2次,1次加8倍量水,浸泡1h,煎煮2h;第2次加6倍量水,煎煮1.5h。结论：通过正交试验优选出的前列舒康片提取工艺合理可行、重复性良好,可为前列舒康片的工艺研究提供参照。     

超嗜热古菌耐热酸性α-淀粉酶的发酵条件和酶学性质研究

对一株分离自深海热液口的超嗜热古菌(Thermococcus sp.HJ21)菌株进行了α-淀粉酶发酵条件的优化和酶学性质的研究.该菌株发酵9h后到达产酶高峰,产酶温度范围为60-90℃,其最适产酶温度为80℃.产酶pH范围为5.0-9.0,最适产酶pH为7.5.产酶NaCl浓度范围为0.5-4.0%,2.5%为最适宜NaCI浓度.糖原、淀粉、麦芽糖、酵母膏和蛋白胨促进产酶.该菌株产生的α-淀粉酶的分子量为51.4 kDa,酶的最适作用温度为95℃,在100℃仍有60%的酶活力.酶在90℃的半衰期为5 h,在100℃ 2 h仍有40%的残余酶活,酶的热稳定性不依赖Ca2+.酶的最适作用pH为5.0,pH 4.5仍有80%的酶活力,pH在5.5-7.0较稳定(80℃ 4 h).金属离子1 mmol/L的Mg2+、Co2+、Sr2+、Ba2+、K+、Na+对酶有激活作用,Cu2+、Pb2+、Hg2+、zn2+、Al3+对该酶均有抑制作用.     

南极菌Pseudoalteromonas sp. A211-5产α-淀粉酶Amy3809的表达、性质及其降解特性

对具有高淀粉酶活性的南极菌Pseudoalteromonas sp. A211-5的全基因组数据进行了分析和筛选,筛选获得α-淀粉酶疑似序列amy3809,并采用基因工程手段对该基因的功能和性质进行验证和分析。首先,以淀粉酶Amy3809的完整开放阅读框(ORF)为模板设计特异引物,克隆获得amy3809的全序列并对其进行重组表达,获得的重组蛋白采用镍柱进行分离纯化;DNS-还原糖法测定重组酶的酶学性质;薄层层析(TLC)技术对Amy3809的酶解产物进行分析。实验结果:1)克隆获得的amy3809成功地连接到pET-30a载体,并在工程菌E.coli BL21(DE3)中实现了高效表达,纯化的重组酶Amy3809分子量为67 kDa;2)重组酶Amy3809在10~40℃的范围内仍能保持85%以上的酶活,但随着温度的升高酶活迅速降低,70℃时几乎失活,表明该酶具有良好的低温耐受特性及热敏感性;3)最适pH为7.0,在pH 5.0~10.0的范围内仍能保持50%以上的活性;4)金属离子Na+,K+和Ca2+均能提高Amy3809的活性,而Cu2+,Fe2+,Mg2+和EDTA则能显著降低Amy3809的活性;5)Amy3809的酶解产物主要为麦芽四糖、麦芽三糖、麦芽糖和葡萄糖。由此可知,南极菌产的α-淀粉酶Amy3809,具有良好的低温耐受特性,热敏感性和较广的pH耐受范围,并能够有效地将淀粉降解为低聚糖和葡萄糖,因而具有潜在的工业应用前景。     

中国卤虫种群α—淀粉酶同工酶的基因表达特征

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳法,对中国卤虫种群中２０个品系的α－淀粉酶（α－ＡＭＹ）同工酶基因的表达特征进行了分析。实验结果显示：Ａｒｔｅｍｉａｓｉｎｉｃａ和Ａ．ｐａｒｔｈｅｎｏｇｅｎｅｔｉｃａ各自有其独特的酶谱和基因型,Ａ．ｓｉｎｉｃａ的主要基因型为：０／ａｂ／ｂｂ和ａｂ／ａｂ／ａｂ,而Ａ．ｐａｒｔｈｅｎｏｇｅｎｅｔｉｃａ的主要基因型为０／ｂｂ／ａｂ和０／ｂｂ／ｂｂ,这可以作为区分两个种的重要生化指标;各品系间、品系内存在多态现象,并且平均杂合度值较高,与卤虫为了更好地适应不良的生活环境而积累大量有利基因和变异有关;从遗传距离和遗传相似系数可知Ａ．ｓｉｎｉｃａ和Ａ．ｐａｒｔｈｅｎｏｇｅｎｅｔｉｃａ有共同的祖先,两者分化时间大约在距今５７６万年至１００万年左右。     

盐藻多糖提取工艺的研究

探讨盐藻D.peircei多糖的提取工艺.采用正交实验确定了提取盐藻粗多糖的最佳工艺条件,通过酶解方法脱除其蛋白.实验结果表明,提取盐藻粗多糖的最佳工艺条件为100℃,提取10h,固液比1∶16,pH=9,通过中性蛋白酶对其酶解,可脱除其部分蛋白,使糖含量达到29.01%,初步确定此多糖为含有硫酸基和己糖醛酸的蛋白多糖.     

多管藻多糖提取工艺的研究

就影响多管藻多糖提取的诸因素进行了探讨 ,确定了最佳工艺条件。试样用 2 5%Na OH在 30℃处理 3d后用 5% H2 O2 脱色 ,在 110℃提取两次多管藻多糖得率平均达 2 1.2% ,且色泽、凝固性能较好。     

螺旋藻多糖对移植性癌细胞的抑制作用及其机理的研究

螺旋藻多糖200mg/kg可显著抑制小鼠体内腹水型肝癌细胞的增殖。它对S180和腹水型肝癌细胞DNA,RNA和蛋白质的抑制作用,在3～24h内均随作用时间延长而提高。它对癌细胞DNA合成的抑制作用,属DNA代谢干扰型。螺旋藻多糖虽不能直接杀伤癌细胞,但通过增强机体的免疫力而抑制癌细胞的增殖。     

枸杞多糖的精制工艺优选

目的：优化枸杞多糖(LBP)的精制工艺,为LBP的开发提供参考。方法：以多糖提取率为指标,采用正交试验考察提取次数、提取时间、料液比对多糖提取工艺的影响。在单因素试验的基础上,以糖损失率为指标,利用正交试验优化活性炭除色素工艺,以蛋白清除率和糖损失率的综合评分为指标,采用正交试验优化酶-sevag法脱蛋白工艺。结果：最佳提取工艺为提取次数2次、提取时间30 min、料液比1∶10。最佳除色素工艺为活性炭用量1.0%、温度100℃、时间20 min;糖损失率为28.6%。最佳除蛋白工艺为酶用量1.5%、温度50℃、时间60 min;蛋白质清除率为28.2%,糖损失率为10.9%。结论：优选的LBP精制工艺稳定可行,适用于LBP产品开发。     

深海细菌太平洋火色杆菌中α-淀粉酶基因amy608的克隆表达及其酶学性质研究

从来自深海沉积物的太平洋火色杆菌(Flammeovirga pacifica)的基因组中发现了一个全长为1 875 bp的α-淀粉酶基因amy608.该基因在数据库中找不到具有同源性的序列,而所编码的Amy608蛋白与已注册蛋白的氨基酸序列相似性最高仅为56%,但具有α-淀粉酶水解活性所必需的保守基序DXEXD.进化树分析表明其属于糖苷水解酶13(GH13)家族第二亚家族.构建了p ColdΙ-amy608表达载体,在大肠杆菌中进行重组Amy608蛋白的异源表达,并采用镍离子亲和层析柱对重组蛋白进行了纯化.酶学性质分析表明,重组酶Amy608的最适作用温度为40℃,在40℃保温4 d后,仍保留70%以上的酶活,显示出良好的中温热稳定性;最适p H值为7.0,p H值范围在6~9时仍保留60%以上的酶活力,表明该酶具有较宽的p H值作用范围.Ca2+、Na+、K+对α-淀粉酶Amy608有激活作用,尤其是Ca2+可使酶活显著提高40%.薄层色谱分析结果显示该酶水解可溶性淀粉的最终产物以葡萄糖为主,表明该酶是一个糖化型淀粉水解内切酶.这些结果表明Amy608为GH13家族第二亚家族中一个新型的α-淀粉酶.     

3种海洋微藻多糖提取工艺的研究

采用热水浸提法,通过一系列单因素试验,研究了提取时间、pH、温度和液料比对四爿藻、新月菱形藻和三角褐指藻等3种海洋微藻多糖提取的影响。在此基础上,通过正交试验进一步优化多糖的提取工艺。最后,采用适宜提取工艺制备3种海洋微藻粗多糖样品,并测定样品蛋白质和多糖含量。单因素结果表明,提取时间、pH、温度和液料比均能影响四爿藻、新月菱形藻和三角褐指藻多糖的提取。其中,提取时间显著影响新月菱形藻多糖的提取,提取pH对四爿藻和新月菱形藻多糖的提取有显著影响,而提取温度和料液比均能显著影响3种海洋微藻多糖的提取。正交试验结果表明,四爿藻、新月菱形藻和三角褐指藻粗多糖提取的适宜提取时间,温度,pH和料液比分别为80℃、60℃、80℃,240min、240min、120min;10、10、10;1:15、1:25、1:25。制备的粗多糖样品中蛋白质和多糖含量分别为0.59%、0.76%、1.50%和51.4%、17.2%、13.5%。很低的蛋白质含量和较高的多糖含量,表明采用上述试验确定的提取工艺获得的粗多糖样品纯度较高,利于样品的后续分离纯化。     

刺麒麟菜基本成分分析和ι-卡拉胶的提取工艺参数优化

以印尼海域刺麒麟菜（Eucheuma spinosum）为原料, 分别采用烘箱法、高温灼烧法、凯式定氮法、索氏提取法对其水分、灰分、粗蛋白、粗脂肪含量进行测定, 通过正交试验确定最佳提取工艺参数。结果表明, 该刺麒麟菜中水分、灰分、粗蛋白、粗脂肪含量分别为12.93%, 22.68%, 4.19%和0.58%。最佳提取...     

α-1,4-葡聚糖裂解酶的动力学性质研究

红藻中的α-1,4-葡聚糖裂解酶是红藻淀粉的降解酶,除了 红藻淀粉外,它还可以作用于多种底物。文中分别以PNPG和可溶性淀粉作底物,以龙须菜的 几个品系作为材料,研究了该酶促反应的动力学方面的性质。以 PNPG作为底物,该酶在60m in内酶促反应速度与保温时间成线性关系;在野生型龙须菜品系中该酶的最适反应温度是50 ℃,在两种突变型品系中是40℃;最适pH范围在4.4～5.5;底物浓度是4mmol/L时达到最大反 应速度;葡萄糖对该酶促反应有明显的抑制作用。以可溶性淀粉作为底物,在反应60 min内 酶反应速度与保温时间成线性关系;最适反应温度为50℃;最适pH范围在5.0～5.8;底物浓 度是8mg/mL时达到最大反应速度;葡萄糖对可溶性淀粉的抑制作用比对PNPG的弱。     

盐生植物中亚滨藜叶蛋白提取工艺的研究

采用酸化和加热相结合的方法，从中亚滨藜叶中提取叶蛋白。分别研究了溶剂用量和加入无机盐、溶剂酸碱度、温度、提取时间等对蛋白质提取率的影响；以及不同pH、絮凝温度、絮凝时间对从提取物中沉淀蛋白质的影响。确定了中亚滨藜叶蛋白的最佳提取工艺。为盐生植物中亚滨藜资源的开发利用提供科学依据。     

化瘀骨合片提取工艺的优化研究

目的：优化化瘀骨合片的提取工艺条件。方法：以牡荆苷含量、芍药苷含量和固形物质量为评价指标,在单因素试验的基础上设计正交试验,考察料液比、提取时间、提取次数对提取工艺的影响,优化提取工艺条件。结果：最佳工艺条件为全方药材加水提取3次,每次加12倍量水提取2h,该条件下牡荆苷的提取率为89.81%,芍药苷的提取率为86.08%。结论：优选的提取工艺稳定,指标成分的提取率高,工艺合理可行。     

不同提取工艺对复方银杏通脉口服液质量指标的影响

目的：探讨不同提取工艺对复方银杏通脉口服液质量指标的影响。方法：采用微波提取、超声提取、醇与水回流提取3种工艺,通过正交试验法对复方银杏通脉口服液的处方进行提取,以总黄酮醇苷、二苯乙烯苷、丹酚酸B含量及干膏率作为考察指标,运用综合评分法进行质量指标的比较。结果：最佳工艺为醇与水回流提取,12倍量料液比,回流提取1 h,提取2次。结论：醇与水回流提取工艺优于微波提取及超声提取工艺,且该方法实际可行,成本可控,可实现大生产。