脑缺氧缺血损伤新生大鼠热休克蛋白70的合成研究

目的：观察热休克蛋白70（HSP70）在缺氧缺血（HI）新生大鼠脑内的表达。方法：应用免疫组化法检测正常对照组以及HI组不同时间点的脑海马和皮质部位的HSP70阳性细胞数。结果：正常脑组织内未观察到明显HSP70阳性细胞，HI后阳性细胞明显增加。HI后2h即可观察阳性细胞，48h,72h达到高峰，7d时已经明显下降，结论：HI是脑HSP70合成及极为敏感的诱因，且HSP70的生成量随HI后时间增加呈动态变化过程。     

美金胺对脑缺氧缺血新生大鼠热休克蛋白70合成的影响

为评估非竞争性：NMDA受体美金胺(Memantine)对缺氧缺血(HI)的脑保护作用，将HI模型鼠(结扎右侧颈总动脉后予8％氧2h)随机分为对照(NC,n=15)组、缺氧缺血(HI，n=25)组，HI前应用美金胺组(PRE，n=25)、HI后应用美金胺组(POST，n=24)。应用免疫组织化学方法观察各组海马及皮质部位热休克蛋白(HSP)70阳性细胞数，进一步从分子水平评估美金胺的脑保护效果。结果显示PRE组和POST组脑HSP70生成量明显低于HI组。提示HI是HSP70生成的强烈诱导剂，美金胺的应用则明显减少了HSP70的生成，具有一定的缺氧缺血脑保护作用。     

庆大霉素诱导急性肾损伤大鼠肾脏热休克蛋白70的表达

目的探讨庆大霉素诱导急性肾损伤大鼠模型中肾脏热休克蛋白70(HSP70)的分布及表达规律。方法大鼠150只随机分为对照组(A)[注射9g/L盐水4mL/(kg·d)]和实验组B[注射庆大霉素注射液80mg/(kg·d)],实验组C[注射庆大霉素注射液160mg/(kg·d)]。将对照组和实验组分别于注射后6、12、24、36、48h各取10只大鼠剖腹取肾,光镜、电镜下观察肾脏的病理变化,通过免疫组织化学法观察HSP70的表达情况。结果HSP70在肾皮质肾小球周围近曲小管上皮细胞胞浆内分布增加,其表达量在注射后6h已经升高,12h达到高峰,48h仍高于正常对照组(P<0.01)。同一时相点注射160mg/(kg·d)较注射80mg/(kg·d)HSP70表达量高(P<0.01)。结论肾毒性药物早期即可引起肾小管上皮细胞的应激反应,可能与细胞自我保护机制启动有关。     

双歧杆菌对新生大鼠炎症反应及热休克蛋白70表达的影响

目的 评价双歧杆菌(BF)对肠道内毒素(LPS)诱导炎症反应的保护作用,探讨BF抗炎症反应的机制.方法 采用鼠替代奶(RMS)人工喂养的新生SD大鼠模型,按析因设计随机分为4组,2组用添加了LPS的RMS喂养,其中1组RMS中补充了BF;另2组用不添加LPS的RMS喂养,其中1组RMS中补充了BF.每天观察新生大鼠生长情况.5 d后,取远端小肠HE染色观察组织学变化,取肺、小肠和肝组织采用蛋白质免疫印迹法检测热休克蛋白(HSP)70的表达水平.结果 (1)LPS处理的2组新生大鼠.出现腹泻、腹胀、活动减少等表现,其中补充BF组新生大鼠程度较轻.新生大鼠的体质量增长受到LPS干预的影响(P＜0.05),LPS处理组新生大鼠体质量增长明显慢于未LPS处理组,补充BF对体质量增长的影响差异无统计学意义(P＞0.05).(2)远端小肠组织学变化显示LPS破坏了小肠黏膜结构;添加BF的LPS处理组新生大鼠小肠黏膜损伤程度较轻.(3)在小肠、肝脏和肺组织中,HSP70表达水平受到LPS和BF的影响(P均＜0.05),LPS和BF之间存在交互作用(P＜0.05).结论 补充BF能减轻由LPS诱导的炎症对机体的损害,这种抗炎症作用可能与BF提高各脏器组织HSP70表达水平有关.     

黄芩甙、川芎嗪对兔感染性脑水肿与磷脂酶A2的作用

目的 探讨黄芩甙(BC)、川芎嗪(TMPZ)、甘露醇(MN)对兔百日咳菌液(PB)脑水肿的治疗作用及机理。方法 应用兔感染性脑水肿模型,用光导纤维颅连续监测硬膜外颅内压,测定血清及脑脊液(CSF)中磷脂酶A2 (PLA2)活性、脑组织含水量(WC)、伊文思蓝(EB)、钠含量及丙二醛(MDA)与超氧化物歧化酶(SOD)活性,观察黄芩甙、川芎嗪和甘露醇治疗对血清及CSF中PLA2活性的抑制作用以及与改善脑水肿的关系。结果 血清及CSF中PLA2活性BC组和TMPZ组明显低于PB组和MN组。脑组织含水量、伊文思蓝含量与钠含量：PB组较NS组明显增高,治疗各组均减少,依次为MN组>TMPZ组>BC组。3个治疗组均能降低MDA浓度,提高SOD活性和减轻颅内压增高。降颅内压的作用以BC最佳,依次为TMPZ,MN。结论 BC与TMPZ均可抑制PLA2活性和脂质过氧化,从而减轻脑水肿与降低颅内高压。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤热休克蛋白70合成与TNF-α的关系

目的 探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后HSP70合成与TNF-α的关系.方法 7日龄SD大鼠54只,随机分为空白对照组、假手术组和实验组(HIBD后2、6、12、18、24、48、72h组)共9组.用HE染色法观察脑皮质细胞形态变化,免疫组织化学法测定脑皮质HSP70阳性细胞数,放射免疫平衡法测定TNF-α含量.结果 HIBD后2h即可在皮质部位观察到HSP70阳性细胞数,HIBD后48h达到高峰,72h HSP70阳性细胞数仍比对照组高(P<0.05).HIBD后2h,实验组大鼠脑组织出现TNF-α,12h达到高峰,然后逐渐减少,HIBD后48、72h TNF-α含量明显减少(P<0.05).结论 HSP70和TNF-α共同参与了新生大鼠缺氧缺血性脑损伤病理生理过程,两者之间可能存在某种联系.     

黄芩甙对大鼠感染性脑水肿NF-κB活性的影响

目的探讨核因子－κＢ（ＮＦ－κＢ）及其抑制蛋白（ＩκＢ）在百日咳菌液所致的大鼠感染性脑水肿模型中的变化及黄芩甙对感染性脑水肿的保护作用是否与抑制ＮＦ－κＢ活化和ＩκＢ降解有关。方法健康ＳＤ大鼠４５只随机分成三组：生理盐水对照组（ＮＳ组）;百日咳菌感染性脑水肿模型组（ＰＢ组）;黄芩甙治疗组（ＢＣ组）。ＢＣ组动物从注菌后 １ｈ起每４ ｈ腹腔注射黄芩甙一次。用电泳迁移率改变法（ＥＭＳＡ）检测各组动物脑组织的 ＮＦ－κＢ与靶基因 ＤＮＡ的结合活性,用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析法检测各组动物脑组织的 ＩκＢα表达。结果在 ＮＳ组、ＢＰ１ｈ组 ＮＦ－ κＢ活性较弱,ＢＰ ２ ｈ组 ＮＦ－ κＢ活性增加,以后持续升高,并以 ＰＢ ２４ ｈ组活性最强;ＰＢ ２ ｈ组 ＩκＢα表达开始减少,２４ ｈ降到最低。 ＢＣ ２ ｈ,４ ｈ,８ ｈ,２４ ｈ组 ＮＦ－ κＢ活性低于相应 ＰＢ组。黄芩甙组ＩκＢα表达比相应 ＰＢ组增多。结论百日咳菌所致的大鼠感染性脑水肿模型中ＮＦ－κＢ的活性明显增强,ＮＦ－κＢ活化可能参与了感染性脑水肿发病机制。黄芩甙对感染性脑水肿的保护作用可能是通过抑制ＮＦ－κＢ异常活化和ＩκＢα降解起作用的。     

热休克蛋白70对缺氧性肺动脉高压新生大鼠肺血管重塑的作用研究

目的 探讨热休克蛋白70(HSP70)对缺氧性肺动脉高压(HPH)新生大鼠肺动脉压力及肺血管重塑的作用。方法 将128只Wistar新生大鼠按随机数字表法分为HPH模型组和空白对照组,根据转染液不同将HPH组再分为盐水组、空病毒组(标有绿色荧光信号但未携带目的基因的病毒载体)和病毒+HSP70组(标有绿色荧光信号同时携带目的基因的病毒载体)。以吸入8%氧浓度的氮氧混合气(1.5 L/min)建立HPH模型,并分别于缺氧3、7、10、14 d检测各组新生大鼠的肺动脉压力(mPAP)及肺血管重塑指标(MT%、MA%)。结果 缺氧3、7、10 d时,盐水组和空病毒组HSP70表达较空白对照组增强(P<0.01),病毒+HSP70组HSP70表达均高于空白对照组、盐水组和空病毒组(P<0.01),缺氧14 d时各组间HSP70表达差异无统计学意义(P>0.05)。缺氧3、7、10 d时,盐水组和空病毒组新生大鼠mPAP持续增高,且均高于空白对照组(P<0.05),病毒+HSP70组新生大鼠mPAP与空白对照组比较未见明显增高(P>0.05);缺氧14 d时,盐水组、空病毒组、病毒+HSP70组新生大鼠mPAP比较差异无统计学意义(P>0.05),但均明显高于对照组(P<0.05)。缺氧7 d后盐水组和空病毒组MT%、MA%明显高于空白对照组(P<0.05),病毒+HSP70组较对照组差异无统计学意义(P>0.05);缺氧14 d时,盐水组、空病毒组、病毒+HSP70组MT%、MA%比较差异无统计学意义(P>0.05),但均明显高于对照组(P<0.05)。结论 HSP70可能可以降低HPH新生大鼠肺动脉压力,减轻其肺血管重塑。     

脑缺氧缺血损伤新生大鼠热休克蛋白70基因的表达研究

目的 对所建立的新生大鼠脑缺氧缺血（ＨＩ）模型进行热休克蛋白７０基因的表达研究,评估检测该基因的表达能否作为缺氧缺血及其程度的有用标志。方法 应用自行研制的新生大鼠缺氧实验装置,建立新生大鼠脑缺氧缺血模型。应用竞争性ＲＴ－ＰＣＲ方法对脑ＨＩ模型进行热休克蛋白７０基因表达的检测。结果 ＨＩ组在ＨＩ后２ｈ即观察到ＨＳＰ７０ ｍＲＮＡ出现明显表达,４８ｈ达高峰,并在７２ｈ内维持较高水平,ＨＩ后７ｄ表达明     

黄芩甙对大鼠感染性脑水肿NF-κB活性的影响

目的 探讨核因子-κB(NF-κB)及其抑制蛋白(IκB)在百日咳菌液所致的大鼠感染性脑水肿模型中的变化及黄芩甙对感染性脑水肿的保护作用是否与抑制NF-κB活化和IκB降解有关。方法健康SD大鼠45只随机分成三组：生理盐水对照组(NS组);百日咳菌感染性脑水肿模型组(PB组);黄芩甙治疗组(BC组)。BC组动物从注菌后1 h起每4 h腹腔注射黄芩甙一次。用电泳迁移率改变法(EMSA)检测各组动物脑组织的NF-κB与靶基因DNA的结合活性,用Western印迹分析法检测各组动物脑组织的IκBα表达。结果在NS组、BP 1 h组NF-κB活性较弱,BP 2 h组NF-κB活性增加,以后持续升高,并以PB 24 h组活性最强;PB 2 h组IκBα表达开始减少,24 h降到最低。BC 2 h,4 h,8 h,24 h组NF-κB活性低于相应PB组。黄芩甙组IκBα表达比相应PB组增多。结论百日咳菌所致的大鼠感染性脑水肿模型中NF-κB的活性明显增强,NF-κB活化可能参与了感染性脑水肿发病机制。黄芩甙对感染性脑水肿的保护作用可能是通过抑制NF-κB异常活化和IκBα降解起作用的。     

核因子-κB活性在大鼠脑水肿的变化及热休克反应对其影响的研究

目的　研究核因子－κＢ（ＮＦ－κＢ） 在百日咳菌液致大鼠感染性脑水肿模型中的活性变化及热休克反应对其影响。方法　动物随机分为：①正常对照组（ＮＳ） ,②感染性脑水肿组（ＰＢ）,③热休克处理组（ＨＳ＋ ＰＢ）。取左大脑半球全层脑组织分别测定脑组织含水量,干脑组织钠、钾离子含量;采用电泳迁移率改变法检测各组神经细胞核内ＮＦ－κＢＤＮＡ－ 蛋白结合物活性的变化并做密度扫描定量分析。结果　ＨＳ＋ ＰＢ各组脑组织含水量明显低于ＰＢ组（ Ｐ＜０ ．０１）,ＨＳ＋ ＰＢ 各组Ｎａ＋ 含量明显低于ＰＢ组（Ｐ＜ ０．０１ 或Ｐ＜ ０．０５） ,Ｋ＋ 含量除２４ ｈ 之外,均明显高于ＰＢ组（ Ｐ＜０ ．０１） 。与正常对照组比较,２ ｈ 感染性脑水肿组ＮＦ－κＢ活性开始增加,并逐渐增高,以２４ ｈ 为最明显。热休克处理组各时相ＮＦ－ κＢ 活性均有不同程度减低。结论　大鼠感染性脑水肿时ＮＦ－ κＢ活性增加,热休克反应对大鼠感染性脑水肿的保护作用可能与抑制ＮＦ－κＢ的活性有关。     

新生猪缺氧缺血性脑病早期弥散加权像变化及热休克蛋白70表达

目的探讨早期缺氧缺血性脑病(HIE)动物模型弥散加权像(DWI)变化和热休克蛋白(HSP)70表达的演变规律。方法3日龄新生猪19只随机分为正常对照组、假手术组、缺氧缺血组。用1.5T磁共振仪行DWI和T2WI检查;用表观弥散系数(ADC)图,测量病灶中心区和周边区ADC值;应用SP法计数中心区和周边区HSP70阳性细胞。结果缺氧缺血组出现四肢抽搐、角弓反张等体征。缺氧缺血后3 h DWI有高信号,ADC图有低信号。各组中心区与周边区ADC比较有显著差异(P<0.01)。缺氧缺血后3 h出现HSP70阳性细胞,6 h达高峰,之后逐渐下降,各组中心区和周边区HSP70阳性细胞计数比较有极显著差异(P<0.01)。结论DWI结合ADC值可以敏感而准确地显示HIE病灶;HSP70表达提示早期HIE病灶周边区有可逆的脑组织区域。     

人结核杆菌HSP70原核表达质粒的构建及其抗肿瘤效应

目的构建可在大肠杆菌中表达编码人结核杆菌(TB)热休克蛋白70(HSP70)基因的表达质粒,并经纯化后研究重组蛋白rHSP70抗肿瘤效应。方法采用基因工程技术将HSP70基因经PCR及末端修饰后装入大肠杆菌质粒pRSET-B中,构建成新的重组质粒pMT70-3。诱导表达纯化后经Western-blot、抗原肽结合试验、native-page鉴定,在有ADP、MgCl2存在时利用重组人 TB的HSP70与小鼠淋巴细胞白血病细胞系L1210的上清于37℃温育形成HSP70-肿瘤抗原肽复合物,以此作为抗原进行体内肿瘤免疫保护试验。结果 HSP70基因的表达质粒构建成功,其产物人TB rHSP70经纯化后具有生物活性。实验动物的腹水量较对照组下降,表明该复合物可引起一定的免疫保护反应(与对照组比较P<0．05)。结论人TB rHSP70-肿瘤抗原肽复合物免疫刺激后可使小鼠产生针对同种肿瘤的强烈免疫作用,与其剂量有一定的相关性。人TB HSP70不仅可起到免疫佐剂的作用,且肿瘤抗原肽复合物也起到一定的抗肿瘤作用。     

Heat Shock Protein as a Predisposing and Immunopotentiating Factor in Kawasaki Disease

Local inflammatory reactivation of a previous BCG inoculation site is a specific and early manifestations of Kawasaki disease (KD). It is postulated that the erythematous changes at the BCG site are part of a generalized activation of the immune system, and that molecules cross-reacting between the infectious agent involved and mycobacterial BCG antigens contribute to the inflammatory process. To detect the cross-reacting molecules, the antibody responses to mycobacterial antigens were examined in 21 patients by IgG-immuno-blotting using acute and convalescent phase sera. Markedly increased levels of antibody against mycobacterial 65kDa protein were detected in all convalescent but in none of the acute sera. Since the antibodies detected are also directed to recombinant 65kDa heat shock protein (HSP65), HSP65 may be related to the initial phase of KD. Moreover, peripheral lymphocytes from convalescent KD patients proliferated in culture in the presence of HSP65, suggesting the sensitization of lymphocytes to HSP65, and γδTCR(+) T cells in the peripheral blood were increased in half the KD patients. Thus, HSP65 is a potent factor involved in activation of the immune system, and consequent endothelial damage in the initial phase of KD.     

清开灵对大鼠谷氨酸神经毒性脑水肿时突触体游离钙的影响

目的 探讨清开灵注射液对谷氨酸(Glu)神经毒性脑水肿时突触体内游离钙(［Ca2+］i)的影响。方法 30只大鼠分成正常对照组、模型组、治疗组3组,右侧脑室注射Glu制作大鼠神经毒性脑水肿模型,4 h后处死大鼠测定其脑皮质含水量、钠、钾、钙和突触体［Ca2+］i含量。结果 模型组脑含水量(82.04±0.8)%,钠含量(244.4±29.3) mmol/kg,［Ca2+］i (327.9±33.2) nmol/L分别较正常对照组(79.93±0.59)%,(213.8±13.0) mmol/kg,(159.6±18.6) nmol/L显著升高(P<0.01,P<0.05,P<0.01),模型组钙(4.76±0.74) mmol/kg较正常对照组(5.21±0.81) mmol/kg显著降低(P<0.05)。治疗组脑含水量(80.13±0.72)%,钠含量(209.4±14.7) mmol/kg,［Ca2+］i (162.5±17.6) nmol/L较模型组显著降低(P均<0.01),钙(5.44±0.76 mmol/kg.干重)却增高(P<0.05)。结论 清开灵对大鼠谷氨酸神经毒性脑水肿有保护作用,其机制可能与拮抗突触体钙离子内流有关。     

姜黄素诱导HSP70及对大鼠感染性脑水肿保护作用的研究

目的：研究姜黄素预处理诱导HSP 70表达的量效和时效关系及对感染性脑水肿的保护作用。方法：①量效及时效关系的研究:SD大鼠随机分为空白对照组、二甲亚砜(DMSO)组、热休克(HS)组和姜黄素(CUR)组;再根据姜黄素的剂量(mg/kg)分为80 mg,40 mg,20 mg及10 mg组。根据观察时间分为0,2,4,6,12,16,24 h及48 h组。Western印迹分析检测脑组织HSP70。②脑水肿保护作用研究:SD大鼠随机分为生理盐水对照组(NS)、感染性脑水肿组(PB)、二甲亚砜组、热休克预处理组和姜黄素预处理组。制备感染性脑水肿模型,用干湿法测定脑含水量;原子光谱吸收法测定脑组织钠、钾含量。结果：正常情况下,脑组织有一定量HSP70的表达,DMSO,CUR 20 mg和CUR 10 mg组HSP70表达无明显增多;HS,CUR 40 mg及CUR 80 mg组HSP70明显增加,以CUR 40 mg组明显,差异有显著性(P<0.01)。HSP70在注射姜黄素后2 h开始表达,16 h达高峰,24～48 h处于稳定状态。HS组、CUR组的脑含水量和脑组织钠离子含量与PB组比较有明显降低,差异有显著性(P<0.01)。结论：姜黄素可诱导大鼠脑组织HSP70的产生,有剂量及时间依赖关系。姜黄素预处理对大鼠感染性脑水肿有保护作用。     

黄芩甙在兔脑水肿模型中血浆和脑脊液的药代动力学

目的 测定黄芩甙在兔感染性脑水肿模型血浆和脑脊液中的药代动力学参数和脑脊液渗透性。方法 采用高效液相色谱法（HPLC）同时测定血浆和脑脊液中黄芩甙浓度。结果 血浆黄芩甙的浓度-时间曲线下的面积（AUCp）每小时30.63±9.21 μg/ml,半衰期（t1/2p）2.19±0.42 h,峰浓度（Cmax p）56±7.6 μg/ml。黄芩甙在脑脊液浓度-时间曲线下的面积（AUCcsf）每小时10.29±5.6μg/ml,半衰期（t1/2csf）2.31±0.37h,峰浓度（Cmax csf）2.35±1.23 μg/ml,达峰时间（t max csf）2.33±0.4 h,比血浆达峰时间明显滞后。脑脊液和血浆浓度-时间曲线下面积之比（AUC csf /AUCp）达0.32（＞0.2）。结论 黄芩甙在兔感染性脑水肿模型脑脊液中具有较好的渗透性。