抗内毒素IgY的制备及稳定性研究

目的 用大肠杆菌J5制备特异抗内毒素IgY，探索防治内毒素血症的新途径。方法 用大肠杆菌J5作抗原免疫25周龄Roman鸡，水溶法提取抗体，进行SDS-PAGE及Western blot分析，通过酶联染色反应检测其免疫学活性，ELISA检测其时酸、碱和酶的稳定性。结果 抗体含量为11．4mg／ml蛋黄液，纯度为92．3％，分子量为180KD，初步鉴定其时内毒素具有特异性结合作用，并且对酸、碱、酶有很好的稳定性。结论 用大肠杆菌J5株免疫鸡可刺备出特异性抗内毒素的IgY，且具有良好的稳定性，作为口服制剂为预防和治疗内毒素血症奠定了基础。     

抗内毒素鸡蛋黄抗体F(ab′)_2制备

目的研究抗内毒素鸡蛋黄免疫球蛋白(IgY)用胃蛋白酶切后提取的F(ab′)2片段,探索防治内毒素血症的新途径。方法用内毒素(LPS)作抗原免疫25周龄leghorn鸡,改良水溶法提取抗内毒素IgY,胃蛋白酶切后提取IgY F(ab′)2段,光密度法测抗内毒素IgY F(ab′)2浓度和含量、ELISA检测抗内毒素IgY F(ab′)2效价,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其分子量及纯度。结果抗内毒素IgY F(ab′)2含量为1.04mg/ml蛋黄液,效价为1∶25600,纯度为90%,相对分子质量为24000。结论抗内毒素IgY F(ab′)2产量大、效价高、特异性强。     

抗内毒素鸡蛋黄抗体F(ab'''')2制备

目的研究抗内毒素鸡蛋黄免疫球蛋白(IgY)用胃蛋白酶切后提取的F(ab’)2片段，探索防治内毒素血症的新途径。方法用内毒素(LPS)作抗原免疫25周龄leghorn鸡，改良水溶法提取抗内毒素IgY，胃蛋白酶切后提取IgY—F(ab’)2段，光密度法测抗内毒素IgY—F(ab’)2浓度和含量、ELISA检测抗内毒素IgY—F(ab’)2效价，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其分子量及纯度。结果抗内毒素IgY—F(ab’)2含量为1．04mg／ml蛋黄液，效价为1：25600，纯度为90％，相对分子质量为24000。结论抗内毒素IgY—F(ab’)2产量大、效价高、特异性强。     

抗内毒素抗体与抗生素的作用对严重烧伤病人内毒素血症的…

目的：研究抗内毒素抗体与抗生素对严重烧伤并发症－－内毒素血症的治疗作用。方法：２９例病人随机分为拮抗内纱治组和常规治疗组。并在烧伤后不同时相点测定了血浆内毒素，血清ＴＮＦ，和血浆白介素－６（ＩＬ－６）和血浆白介素－８（ＩＬ－８）的含量。结果Ｌ：抗生素和抗内毒抗体治疗可明显患者血中内毒素水平（Ｐ〈０．０５）同时降低ＩＬ－６，ＩＬ－８和ＴＮＦ血中含量，而单用抗生素治疗对降低血中内毒素水平作用不明显，结     

内毒素及内毒素血症治疗研究进展

内毒素是革兰阴性菌细胞壁的脂多糖(LPS)成分，脂多糖的类脂A是LPS的“毒力中心”。正常机体肠腔内含有大量细菌及内毒素，有报道称正常肠黏膜可允许少量内毒素进入门脉，而少量内毒素对促使肝脏网状内皮系统处于激活状态有一定意义。当机体受到创伤(包括手术)、烧伤、感染、放化疗和接受长期传统的肠外营养时，肠黏膜有可能发生通透性增高，导致细菌和内毒素移位。     

内毒素的来源结构和生物活性及中药对内毒素血症的治疗

内毒素有多种生物活性，进入人体血液可造成内毒素血症(ETM)，而引起许多严重疾病。筛选研究治疗内毒素类疾病的有效药物是当今医学研究的重要课题。     

大白鼠内毒素休克的代谢变化及山莨菪碱(654-2)对其的影响

用E.Coli内毒素复制休克模型。将内毒素注入静脉后立即引起ABP先降、后升、再降的双向反应。在ABP第二次降至<8.0 kPa时,迅速采血样检查,结果为:血气无异常(P>0.05),血液pH降低(p<0.001);动脉血中葡萄糖水平降低(P<0.001),乳酸和NPN升高(P<0.01,P<0.05),胰岛素水平无明显变化(P>0.05)。预先应用654-2后再进行同样实验,发现:PaO_2-PrO_2差出现代偿性增大(p<0.05),乳酸回降至正常水平,pH显著回升(P<0.05),低血糖症明显改善(P<0.05),只是对高氮质血症无影响(P>0.05)。再将休克和654-2+休克2组的ABP作动态对比观察,未见654-2对ABP有任何影响。单纯休克的血糖水平随ABP而进行性降低;在ABP2次下降前,即注内毒素后30 min再静脉注入肾上腺素,血糖仍有升高反应,在观察期内一直在正常水平之上。作者结合实验结果对发病过程作了分析。     

抗白色念珠菌鸡卵黄抗体(IgY)的研制

目的：观察鸡蛋黄中抗体的产量、纯度、来源及稳定性。方法：应用白色念珠菌作为抗原免疫25周龄Leghorn鸡，通过改良水溶法（WD）提取蛋黄中抗体IgY，双紫外光测定抗体含量，SDS-APGE电泳检测抗体纯度，Western blot免疫印迹法测定该抗体来源，ELISA检测热处理后的抗体活性。结果：抗体含量13mg/ml蛋黄液，抗体纯度达到95%，Western blot免疫印迹证明该抗体与鸡血清中的IgG具有相同的分子量和抗原性。ELISA检测热处理后的抗体活性，其具有良好的热稳定性。结论：鸡蛋黄内含有丰富的抗体，通过WD水溶提取法可得到高产量，高纯度的特异性抗体IgY，证明其来源于鸡血清中的IgG，对热具有高度稳定性。     

鸡卵黄抗体用于诺如病毒检测的初步研究

目的以鸡卵黄免疫球蛋白IgY代替哺乳动物来源的IgG抗体,建立ELISA双抗体夹心法．探索用于诺如病毒检测的可行性。方法以387型菌株（GⅡ．4型）诺如病毒P颗粒为抗原免疫健康产蛋来航鸡,制备、纯化特异性抗诺如病毒鸡卵黄免疫球蛋白IgY。采用过碘酸钠法对IgY进行酶标。以特异性抗体为捕获抗体,酶标抗体为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA检测体系。评价其灵敏度、特异度及重复性。并将其与金标准进行比较。结果本实验建立的双抗体夹心ELISA检测体系最低检测限达20ng／ml。批内变异系数为1．021％,批间变异系数为1．150％。临床应用评价显示真阳性率为82．5％,真阴性率为81．82％。与金标准比较,检出率差异无统计学意义（P=0．629）。结论建立了基于特异性抗诺如病毒卵黄抗体IgY的双抗体夹心ELISA检测体系,用于腹泻患者粪便标本诺如病毒的检测具有较好的敏感性和特异性。     

抗HLA-A*0201重链卵黄抗体的制备及初步鉴定

目的制备高效价特异性鸡卵黄免疫球蛋白(Yolk immunoglobulin,IgY)抗体。方法用纯化HLA-A*0201重链抗原加完全福氏佐剂免疫岭南黄鸡,经水稀释法初步纯化浓缩后,用ELISA鉴定其免疫学活性,测定纯化后蛋白含量,并用SDS-PAGE进行分析鉴定。结果获得ELISA效价为1×106的抗重链IgY抗体,蛋白含量为9.77 mg/ml。经SDS-PAGE分析,出现2条蛋白带,纯度达90%以上。结论用重链抗原加福氏佐剂免疫种鸡制备的IgY抗体产量多、效价高,为结合HLA-A*0201复合体诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞活化奠定了基础。     

卵黄抗体用于大山区血吸虫病诊断的可行性

目的评价卵黄抗体(anti-SEA chicken egg yolk antibody,IgY)用于血吸虫病诊断在大山区型血吸虫病流行现场的应用效果。方法对大山区血吸虫病流行区的506位居民进行粪检,同时用IgY(以IgY作为捕捉抗体,以酶标NP28-5B为检测抗体)和血吸虫抗体ELISA检测试剂盒(SEA-ELISA)分别对其血清进行检测,评价anti-SEA IgY的敏感性,分析其用于大山区血吸虫病诊断的可行性;同时检测非流行区的200份血清确定其特异性。结果 IgY和SEA-ELISA的粪检阳性符合率分别为92.68%(152/164)和89.02%(146/164);两者的特异性分别为99%(198/200)和95%(190/200),差异无显著性(P均>0.05),但在粪孵阴性人群血清样本中,IgY和SEA-ELISA的检出率分别为31.00%(106/342)和83.63%(286/342),差异有显著性(P<0.05)。结论 anti-SEA IgY可用于大山区血吸虫病诊断。     

抗HPV16L1 IgY抗体的制备及活性检测

目的 制备出高特异性的抗HPV16L1 IgY抗体,为HPV16L1蛋白的检测提供一种方法.方法 用纯化HPV16 L1蛋白免疫母鸡,分别收集鸡蛋,4℃下保存备用;经聚乙二醇法提取鸡蛋黄中IgY抗体;用酶联免疫吸附法检测IgY抗体效价的测定;采用免疫组织化学法通过对转染pcDNAEGFP-HPV16L1(含EGFP-HPV16L1融合基因)质粒的CHO细胞中L1蛋白的检测评价IgY抗体的特异性.结果 3次免疫之后,IgY抗体效价达到1:10 240,同时可特异性与转染pcDNAEGFP-HPV16L1(含EGFP-HPV16L1融合基因)质粒的CHO细胞中EGFP-HPV16L1 结合.结论 采用HPV16L1蛋白免疫母鸡,成功获得了较高效价的特异性IgY抗体,并可用于HPV16L1蛋白的细胞学检测,为IgY抗体在免疫组织化学检中的应用提供实验依据.     

副溶血性弧菌高免卵黄抗体的制备和不同提纯方法效果的比较

目的：通过比较聚乙二醇（PEG）沉淀法、氯仿抽提法和氯仿/PEG法3种卵黄抗体（IgY）提纯方法的提纯效果,为批量提纯高质量IgY提供依据。方法：制备副溶血性弧菌灭活疫苗,采用肌肉多点注射法免疫高产蛋鸡,收集鸡蛋,分别采用PEG沉淀法、氯仿抽提法和氯仿/PEG法对鸡蛋中的IgY进行提纯,比较3种提纯方法获得的IgY的蛋白质量浓度、抗体效价和纯度,结合操作过程、成本效益及安全性对3种提纯方法进行综合分析比较。结果：3种方法所提纯的IgY中,蛋白质量浓度从高到低依次为氯仿抽提法、氯仿/PEG法、PEG法;抗体效价相差不大,氯仿抽提法稍高;抗体纯度由高到低依次为PEG法、氯仿/PEG法、氯仿抽提法。PEG法安全性较好,但提取效率相对较低,成本投入较高;氯仿抽提法能够高效地从卵黄中获得IgY,但提取物中掺杂了大量的杂质蛋白;氯仿/PEG法提纯效率高,抗体纯度好,成本效益相对较高。结论：PEG法适用于实验室中少量IgY的提取;氯仿/PEG法的提取效率高,抗体纯度好,可用于批量提取高质量的IgY。     

抗白念珠菌鸡卵黄抗体的制备及温度对其效价的影响

目的:制备抗白念珠菌鸡卵黄抗体(IgY)并检测其生物学性能.方法:白念珠菌标准菌株10231灭活后作为抗原免疫25周龄产蛋海蓝鸡,从水溶法提取鸡卵黄IgY抗体.用考马斯亮蓝染色法测定IgY抗体提取液的蛋白浓度.用Tris-tricine电泳测定提取蛋白的相对分子质量、纯度,Western blot确定蛋白来源.以免疫组织化学检验抗白念珠菌IgY抗体与白念珠菌结合的特异性.ELISA测定抗白念珠菌IgY抗体的抗菌效价.结果:IgY抗体液中蛋白浓度为7.9 g/L,IgY抗体的纯度达到91.5%.提取的IgY抗体与鸡血清和正常鸡IgY抗体具有同源性.提取的IgY抗体可与白念珠菌发生特异性结合. ELISA测定抗白念珠菌IgY抗体的效价达到1:12 000.结论:研究得到的IgY,产量和纯度高,效价好,体温条件下48 h效价没有降低.在体外能够特异性地与白念珠菌结合.     

抗加特纳杆菌卵黄免疫球蛋白(IgY)的研究

目的 观察鸡卵黄中抗加特纳杆菌抗体的产量、纯度、来源及稳定性。方法 用阴道加特纳杆菌作为抗原免疫Leghorn鸡。通过改良水稀释法提取卵黄中的IgY。双紫外光波长测定抗体含量,SDS-PAGE电泳检测抗体纯度。Westernblot免疫印迹法测定该抗体来源。ELISA检测IgY对温度、酸碱度的稳定性。结果 抗体含量12．8mg／mL蛋黄液,抗体纯度达95％。免疫印迹证明IgY与鸡血清中的IgC具有相同的分子量和抗原性。IgY具有良好的热稳定性,对酸碱具有一定的耐受力。结论 WD水稀释法能得到高产量、高纯度的特异性IgY,而且有良好的生物学活性。     

抗内毒素IgY体外拮抗内毒素效应的实验研究

目的观察抗内毒素鸡卵黄抗体(IgY)在体外拮抗内毒素(LPS)的作用.方法①用不同浓度IgY与LPS直接体外中和作用,检测剩余LPS的量,观察二者的量效关系;②以培养的原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为模型,加入一定浓度的FITC-LPS及IgY,观察各时相点细胞的荧光强弱变化;③加入一定浓度的LPS及IgY,观察各时相点培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性变化.结果①当二者浓度比为16:1时,有较好的量效关系;②在4、8、12 h 3个时相点,单纯FITC-LPS结合组细胞均显示较亮的荧光,且强弱没有明显的区别,在IgY拮抗组的3个时相点,荧光均有减弱,以8、12 h较明显;③LDH的活性在LPS攻击8 h后明显升高(P＜0.01),IgY拮抗组LDH的活性在8h后明显降低(P＜0.01).结论在体外,特异性IgY有较强的拮抗LPS的作用.