不同浓度神经生长因子诱导BMSCs的实验研究

目的 研究不同浓度神经生长因子体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经细胞分化的调节作用.方法 贴壁培养BMSCs,流式细胞检测表面标志物.A组加入3种浓度EGF和bFGF;B组加同样浓度bFGF;C组不加诱导剂.A、B组用脑源性神经营养因子(BDNF)和全反式维甲酸(ATRA)诱导,免疫荧光及免疫组化鉴定.结果 第3代BMSCs为梭形样细胞,CD29、CD44、CD90为阳性,CD34、CD45为阴性.A组中100μg/L巢蛋白(NESTIN)(81.9±1.8)%.A组与B组比较,差异有统计学意义(P<0.05).继续诱导,可见微管相关蛋白2(MAP2)、神经丝(NF)及神经元特异性烯醇化酶(NSE)阳性细胞.结论 采用改良的全骨髓贴壁法,细胞活性好.bFGF和EGF同时应用比bFGF单独应用效果好.100μg//L(bFGF+EGF)预诱导m神经干细胞数量多,并分化为神经元样细胞.     

黄连素体外诱导人脐带间充质干细胞向神经样细胞定向分化的实验研究

目的:探讨黄连素体外诱导人脐带间充质干细胞(hUMSCs)向神经细胞分化的作用。方法:体外对hUMSCs进行培养,以不同浓度黄连素(分4组：对照组即0 mg/L组、50 mg/L组、100 mg/L组和200 mg/L组)诱导其向神经样细胞分化,显微镜下观察细胞形态改变并记录,并通过细胞免疫化学及免疫荧光技术检测细胞表...     

成体神经干细胞培养方法的建立

目的 探讨体外建立培养成体神经干细胞(MSC)的方法.方法 从6周龄大鼠脑组织中分离神经干细胞,用神经干细胞培养液[DMEM/F12培养液添加1%N2、2%B27、20 μg/L表皮生长因子(EGF)和20μg/L碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)]使其稳定增殖,10%胎牛血清诱导其贴壁分化.倒置显微镜下观察神经干细胞形态学变化;流式细胞仪检测神经干细胞表面标记物巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇酶(NSE,成熟神经元的特异性标志)、半乳糖脑苷脂(Galc-C,成熟少突胶质细胞的标记物)的表达.结果 分离所得细胞能在体外传代培养,流式细胞仪检测显示Nestin阳性细胞为97.6%,细胞经胎牛血清诱导分化后能形成NSE、Galc-C阳性细胞.结论 采用无血清的神经干细胞培养液能培养出具有分化潜能的成体神经干细胞.     

不同方法诱导脂肪干细胞向神经元样细胞分化研究

目的 通过比较化学和生长因子两种不同诱导方法,观察评估脂肪干细胞(ADSCs)向神经元样细胞(NLCs)分化,并探讨诱导分化机制.方法 取SD大鼠腹股沟和腹膜后脂肪分离培养获得ADSCs,取其第3代细胞进行流式细胞表型鉴定(CD29、CD34、CD45、CD73、CD90、CD105)并进行实验诱导.分为化学诱导组[DMEM/F12 +5 mmol/L β-巯基乙醇(β-BME)+2％二甲基亚砜(DMSO)+ 200 μmol/L丁酸酯羟基茴香醚(BHA)]和生长因子分步诱导组[第1步:DMEM/F12+20 μg/L表皮生长因子(EGF)+20 μg/L碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) +2％ B27;第2步:DMEM/F12+ 10 μg/L脑源性神经营养因子(BDNF)+ 10 μg/L胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)+1 μmol/L维甲酸(RA)].每天在光镜下观察其形态变化,并在第3天用免疫荧光法检测诱导后神经细胞特异标志物巢蛋白(Nestin)、神经元核蛋白(NeuN)、抗微管相关蛋白-2(MAP-2)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达,并行统计学分析.结果 流式细胞仪检测结果显示,第3代ADSCs细胞表型CD34(0.57％)、CD45(0.67％)、CD29(99.38％)、CD90(96.21％)、CD73(99.80％)和CD105(97.97％).化学诱导组在诱导24 h后即出现神经元样细胞形态,表达Nestin和MAP-2,但其诱导后形态在第5天出现逆转且在第7天有部分细胞开始死亡;生长因子诱导组诱导3d时Nestin表达,1周后MAP-2、Neun和GFAP表达逐渐增加,诱导生成稳定NLCs.结论 化学诱导ADSCs向神经元样细胞分化速度较快,但其性质不够稳定,形态出现逆转且伴随细胞死亡;生长因子法能够实现稳步诱导,诱导生成的NLCs更符合组织工程种子细胞的要求.     

骨髓基质干细胞定向分化为神经细胞及分化后细胞功能特征的研究

目的 探讨骨髓基质干细胞(BMSCs)定向分化为神经细胞的潜能及分化后细胞的功能特征.方法 体外分离、扩增、纯化Sprague-Dawley大鼠BMSCs,取第6代细胞接种并随机分为4组,实验组A、B、C组开始每组加预诱导夜(含预诱导剂碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子),6d后A组继续加预诱导夜,其余两组在预诱导后加定向诱导剂(音猬因子和维甲酸)时选择是否保留预诱导液分为B组(保留)和C组(去除);D组不做任何干预,为空白对照组.采用细胞免疫荧光化学法检测分化后神经样细胞的形态和功能标志.结果 接种后的细胞迅速贴壁,加预诱导液6 d细胞增殖迅速,且可以观察到有类似神经干细胞的克隆团形成.在诱导剂的特定组合和时序的诱导下,A、B、C组均出现胞体收缩和突起伸出,呈现神经元细胞样改变.D组细胞形态基本没有变化.6～12 d,B组微管相关蛋白-2(MAP-2)阳性细胞率为59.17%±1.84%,胶质酸性蛋白(GFAP)阳性细胞率为22.10%±1.03%;C组MAP-2阳性细胞率为29.35%±4.85%,GFAP为36.35%±4.85%,A组和D组均未检测到上述细胞标志物.12～18 d,A组仅出现少量GFAP阳性细胞;B组MAP-2、GFAP阳性细胞率分别为72.54%±1.02%、21.54%±1.02%;C组MAP-2、GFAP阳性细胞率分别为31.02%±2.37%、23.45%±3.74%.神经细胞的功能标志胆碱乙酰转移酶、囊泡乙酰胆碱通道只有B组表达,12～18 d后阳性细胞率分别为45.11%±3.04%、28.22%±1.72%.结论 BMSCs在体外能定向诱导为具有一定功能的神经细胞,为脊髓损伤后细胞移植治疗奠定了基础.     

黄芪诱导人脐带间充质干细胞分化为神经样细胞的实验研究

目的 研究原代人脐带间充质干细胞(UCMSCs)的生物学特性及其体外向神经细胞诱导分化的条件,为组织化人工神经的制备提供干细胞资源.方法 无菌条件下从人脐带华尔通胶(Wharton jelly)分离并贴壁培养人UCMSCs,免疫组化技术检测UCMSCs表面特异标志物表达;四组细胞分别加入单纯培养液空白对照组(A组)、单纯生长因子诱导组(B组)、单纯黄芪诱导组(C组)和黄芪联合生长因子诱导液(D组),倒置显微镜下观察其形态并检测NSE、NF和GFAP的阳性表达,结果进行统计学分析.结果 人UCMSCs表面标记CD29、CD44、CD105强阳性,CD106弱阳性,CD34、CD45阴性,符合人UCMSCs的特征;人UCMSCs经黄芪诱导后细胞表面GFAP、NSE均为强阳性表达.结论 人UCMSCs可以在体外采用组织块贴壁培养法培养成功,黄芪可将人UCMSCs成功的诱导为神经样细胞,为组织化人工神经的制备和周围神经缺损的治疗提供了新的方法.     

黄芪诱导人脐带间充质干细胞分化为神经样细胞的实验研究

目的 研究原代人脐带间充质干细胞(UCMSCs)的生物学特性及其体外向神经细胞诱导分化的条件,为组织化人工神经的制备提供干细胞资源.方法 无菌条件下从人脐带华尔通胶(Wharton jelly)分离并贴壁培养人UCMSCs,免疫组化技术检测UCMSCs表面特异标志物表达;四组细胞分别加入单纯培养液空白对照组(A组)、单纯生长因子诱导组(B组)、单纯黄芪诱导组(C组)和黄芪联合生长因子诱导液(D组),倒置显微镜下观察其形态并检测NSE、NF和GFAP的阳性表达,结果进行统计学分析.结果 人UCMSCs表面标记CD29、CD44、CD105强阳性,CD106弱阳性,CD34、CD45阴性,符合人UCMSCs的特征;人UCMSCs经黄芪诱导后细胞表面GFAP、NSE均为强阳性表达.结论 人UCMSCs可以在体外采用组织块贴壁培养法培养成功,黄芪可将人UCMSCs成功的诱导为神经样细胞,为组织化人工神经的制备和周围神经缺损的治疗提供了新的方法.     

音猬因子体外诱导人骨髓基质干细胞转化为神经元样细胞的研究

目的：研究体外使用音猬因子（sonic hedgehog，SHH）诱导人骨髓基质干细胞（BMSCs）分化为神经元样细胞（神经干细胞、神经细胞、神经胶质细胞）的可行性。方法：从健康志愿者髂骨抽取骨髓5ml．离心、分离BMSCs。接种于含10％胎牛血清（FBS）的DMEM／F12培养液中，BMSCs体外扩增、纯化到第五代后分别种于含有不同浓度诱导液的24孔板中：A组为空白对照；B组加SHH 700ng/ml，碱性成纤维生长因子8（fibroblast growth factor-8，FGF-8）140ng／ml；C组加SHH500ng/ml，FGF-8100ng／ml；D组加SHH250ng/ml，FGF-8 50ng／ml；E组加SHH125ng／ml，FGF-825ng／ml，诱导BMSCs分化。使用免疫组化及免疫荧光鉴定微管相关蛋白（MAP-2）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、神经元烯醇化酶（NSE）的表达。结果：诱导7d后，部分BMSCs胞体收缩、突起伸出，表现出神经元样细胞的形态。除A组外其余各组免疫组化及免疫荧光染色NSE、MAP-2均为阳性，各组免疫组化及免疫荧光染色均有GFAP阳性细胞存在，且以B组、C组的MAP-2、GFAP、NSE染色阳性细胞数最多。结论：人BMSCs具有较强的自我更新和多向分化潜能，一定浓度的SHH可以在体外有效诱导人BMSCs转化为神经元样细胞。     

氯化锂体外诱导人脐血间充质干细胞向神经细胞分化的实验研究

目的 探讨氯化锂体外诱导人脐血间充质干细胞(MSCs)向神经细胞分化的可行性.方法 无菌条件下收集正常足月儿的脐带血,肝素抗凝,密度梯度离心法分离人脐血单个核细胞,贴壁法纯化,用含15%FBS的低糖DMEM培养基进行扩增培养,流式细胞仪检测表面抗原.取3代的脐血MSCs进行诱导,A组:用含15%FBS和20 ng/ml bFGF的DMEM完全培养基预诱导24 h,3 mol/L LiCI的DMEM培养基继续诱导6 d:B组:含3 mol/L LiCI的DMEM培养基诱导7 d;C组:含15%FBS的DMEM培养基正常培养7 d.光镜下观察细胞形态,用免疫组化技术检测细胞NSE、MAP2及GFAP的表达.结果 A组与B组诱导3 d后细胞即出现形态学上的改变,细胞变成不规则形,立体感增强,从胞体伸出突起.免疫组织化学和免疫荧光方法鉴定显示,诱导后的细胞能表达神经元特异性标志NSE和MAP2,阳性表达率A组[分别为(73.6±7.8)%,(75.5±8.5)%]明显高于B组[分别为(31.0±4.3)%、(33.5±5.O)%],而星形胶质细胞特异性标志GFAP阳性细胞较少,A、B、C三组阳性表达率分别为(4.7 ±3.3)%、(5.1±4.6)%、(8.5±3.2)%.结论 LiCI联合生长因子bFGF体外可诱导人脐血MSCs分化为神经元样细胞.     

人脐带间充质干细胞复合去细胞神经基膜管修复大鼠坐骨神经缺损

目的 探讨诱导后的脐带间充质干细胞作为组织工程种子细胞修复大鼠坐骨神经缺损的可行性.方法 从正常足月新生儿脐带中分离培养间充质干细胞并诱导分化为神经样细胞,与去细胞神经基膜管共培养以构建组织工程神经;用30只健康成年雄性SD大鼠建立坐骨神经缺损(10 mm)的动物模型并随机分成3组:A组为脐带间充质干细胞复合去细胞神经基膜管组,B组为单纯去细胞神经基膜管组,C组为自体神经桥接组.术后10周通过神经电生理检测、组织学观察等评测效果.结果 在局部观察和肌肉测量、神经电生理检测、组织学观察等方面,脐带间充质干细胞复合去细胞神经基膜管组(A组)神经再生及肢体功能情况良好,效果接近于自体神经桥接组(C组),明显优于单纯去细胞神经基膜管组(B组).结论 脐带间充质干细胞复合去细胞神经基膜管构建的组织工程神经可有效促进大鼠坐骨神经缺损(10 mm)的修复.     

神经生长因子对神经干细胞增殖、分化和凋亡的影响

目的 观察不同剂量神经生长因子(NGF)对神经干细胞增殖、分化和凋亡的影响.方法 从孕15 d鼠胚胎脑室下区组织分离神经干细胞,培养于DMEM/F12+B27细胞基础培养液中,加入碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)作为阳性对照组,实验组分别加入10、20、50μg/L的NGF,无添加成分作为阴性对照组.用噻唑蓝(MTT)比色分析法测定细胞增殖能力;倒置显微镜下观察细胞增殖、分化,鼠抗胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、鼠抗神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫细胞化学染色鉴定;流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 10 d MTT比色显示,10μg/L NGF组(0.150±0.025)与阳性对照组(0.158±0.017)比较,差异无统计学意义(P＞0.05),与阴性对照组(0.128±0.015)比较,差异有统计学意义(P＜0.05).分化实验显示:随着NGF的浓度递增,NSE阳性率分别为(15.21±1.27)%、(20.64±2.61)%、(24.20±3.10)%,GFAP阳性率分别为(27.98±2.35)%、(28.94±2.84)%、(30.79±3.23)%,神经干细胞分化的比率增高[FNsz(+)=3.47、FGFAP(+)=3.47,PGFAP(+)＜0.05].流式细胞仪检测示20、50μg/L NGF组细胞凋亡率明显增高,l0μg/L NGF组细胞增殖指数(PI)较其他实验组高.结论 合适浓度NGF能促进神经干细胞的增殖.随神经生长因子浓度的增高,促神经分化作用增强.随着NGF浓度的增加,其促NSCs凋亡作用增强.

Abstract：

Objective To evaluate the influence of different doses of nerve growth factor (NGF) on the proliferation, differentiation and apoptosis of embryonic rat neural stem cells. Methods The neural stem cells were isolated from subventricular zone of rat embryonic brains and cultured in serum-free medium DMEM/F12 with B27. NGF with different doses of 10, 20, 50 μg/L were added into the different experimental groups. The proliferation ability of the cells was measured by methyl thiazol tetrazolium (MTT) assay at 10th day. All cells were collected in plates at 7th day. Streptvidin-peroxidase immunocytochemistry was used to detect the expression of neuron specific enolase (NSE) and glial fibrillary acidic protein (GFAP) , and the number of NSE( + ) and GFAP( + ) cells was counted. The apoptosis rat at 5th day after culture was assessed. Results There was no significant difference in the the number of neurospheres between 10 μg/L NGF group (0. 150 ±0. 025) and positive control group (0. 158 ±0. 017), but there was significant difference between 10 μg/L NGF group and blank control group (0. 128 ±0. 015). In 10, 20,50 μg/L N GF groups, the rate of NSE ( + ) cells was ( 15. 21 ± 1.27) %, (20. 64 ± 2. 61 )%, (24. 20 ± 3. 10) %, and that of GFAP( + ) cells was (27.98 ± 2. 35 ) %, ( 28.94 ± 2. 84 ) %, ( 30. 79 ± 3.23 ) % respectively. The rate of cells differentiation was increased with the dose of NGF added[( FNsE (+ ) = 3.47,FGFAp( + ) = 3. 47 ,PGFAP( + ) ＜ 0. 05)]. Flow cytometry revealed that in 20, 50 μg/L NGF groups the apoptosis rate was significantly increased as compared with other groups. The proliferation index (PI) in 10 μg/L NGF group was higher than other groups. Conclusion NGF at a rational dose can promote the proliferation and differentiation of human NSC. Low dose of NGF mainly facilitates the proliferation of NSCs, and high dose of NGF shows obvious influence on proliferation of NSC.     

ATP对兔骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的影响

摘要：目的 探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)在ATP诱导下体外分化成神经细胞的可行性：方法抽取兔骨髓,淋巴细胞分离液密度梯度分离单个核细胞,体外培养传代,第3代时加入ATP,观察MSCs分化为神经细胞的形态学变化,并行诱导细胞的组织化学染色。结果MSCs在体外可以扩增,住ATP诱导下向神经样细胞分化,行巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)及胶质纤维酸性蛋白(cFAP)抗体免疫反应染色,阳性数分别约为Nestin30％、NsE：32％、GFAP15％。结论ATP能够诱导兔骨髓间充质干细胞向神经细胞分化。     

The effects of GM1 and bFGF synergistically inducing adultrat bone marrow stromal cells to form neural progenitor cells and their differentiation

Objective: To investigate the effects of GM1 on inducing adult rat bone marrow stromal cells (MSCs) to form neural progenitor cells and their differentiation. Methods: Purified MSCs were induced by different components of basic fibroblast growth factor (bFGF) alone, GM1 alone or combination of bFGF with GM1. After 3 days‘ incubation, fibronectin and collagen I were detected with immunocytochemistry, and nestin was detected with immunofluorescence. Neuron-specific enolase ( NSE ), glial fibrillary acidic protein ( GFAP ) and galactose cerebroside ( GalC ) were detected with immunocytochemistry after 7 days‘ incubation. Results: After induction with bFGF alone or combination of bFGF and GM1, some MSCs exhibited the pbenotypes of neural progenitor cells, and then neurons and astrocytes. In these two groups, the positive cells for fibronectin and collagen I decreased markedly after 3 days‘ induction. At the same time, the positive cells for nestin increased markedly. After 7 days‘ induction, NSE and GFAP-positive cells increased significantly. Furthermore, the addition of bFGF and GM1 caused the maximal variation. However, addition of GM1 alone had no inductive effects. Conclusions: Combination of bFGF with GM1 may synergistically promote the transformation of MSCs and differentiation into neurons and astrocyte-like cells. The results suggest a promising route for the application of MSCs.     

黄芪诱导人脐带间充质干细胞分化为神经样细胞的实验研究

目的 研究原代人脐带间充质干细胞(UCMSCs)的生物学特性及其体外向神经细胞诱导分化的条件,为组织化人工神经的制备提供干细胞资源.方法 无菌条件下从人脐带华尔通胶(Wharton jelly)分离并贴壁培养人UCMSCs,免疫组化技术检测UCMSCs表面特异标志物表达;四组细胞分别加入单纯培养液空白对照组(A组)、单纯生长因子诱导组(B组)、单纯黄芪诱导组(C组)和黄芪联合生长因子诱导液(D组),倒置显微镜下观察其形态并检测NSE、NF和GFAP的阳性表达,结果进行统计学分析.结果 人UCMSCs表面标记CD29、CD44、CD105强阳性,CD106弱阳性,CD34、CD45阴性,符合人UCMSCs的特征;人UCMSCs经黄芪诱导后细胞表面GFAP、NSE均为强阳性表达.结论 人UCMSCs可以在体外采用组织块贴壁培养法培养成功,黄芪可将人UCMSCs成功的诱导为神经样细胞,为组织化人工神经的制备和周围神经缺损的治疗提供了新的方法.

Abstract：

Objective To investigate the biological characteristics of human umbilical cord derived mesenchymal stem cells(UCMSCs) and inducing them to differentiate into neurons in vitro,in order to provide stem cell resource for the tissue engineering artificial nerve. Methods UCMSCs were cultured from Wharton jelly of human umbilical cord in the condition of sterilitas,surface antigens of UCMSCs were detected by immunohistochemistry.The frist group of cells were added by virgin nutrient,the second group of cells were induced by merely growth factors,the third of cells were induced by merely astragalus mongholicus and the fourth by the astragalus mongholicus with growth factor,observed the morphology of the cells of the two groups under inverted microscope,and determine the positive expression rate of nerve cells' markers,such as NSE,NF and GFAP.The results were statistically analyzed.Results UCMSCs were strongly positive for CD29,CD44,CD105,weakly positive for CD105 and negative for CD34,CD45.After induced by Astragalus mongholicus,UCMSCs were strongly positive for GFAP,NSE. Conclusion UCMSCs can be successfully cultured from the adherent tissue pieces,Astragalus mongholicus can successfully induce them to differentiate into neurons in vitro,to provide a new method of making the tissue engineering artificial nerve and treat theperipheraly nervus defect.     

不同相对分子质量透明质酸对兔骨髓来源间充质干细胞成软骨分化的影响

目的 观察不同相对分子质量透明质酸(HA)对兔骨髓来源间充质干细胞(MSCs)向软骨方向定向分化的影响.方法 取P3代未诱导的骨髓来源间充质干细胞,培养液中分别添加不同相对分子质量透明质酸做诱导剂,分为3个实验组,A组:相对低分子质量组(基础培养基+ HA 0.1 g/L,相对分子质量约1000×103),B组:相对中分子质量组(基础培养基+HA0.1 g/L,相对分子质量约1800×103),C组:相对高分子质量组(基础培养基+HA 0.1 g/L,相对分子质量约2000×103).同时设立阳性对照组[基础培养基+ 10 μg/L转化生长因子-β3( TGF-β3)]及空白对照组(基础培养基),观察细胞形态及增殖情况,分别于诱导后第7、14、21天行甲苯胺蓝染色检测蛋白聚糖表达,另外采用免疫组织化学染色及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测细胞Ⅱ型胶原表达.结果 经添加软骨诱导剂后,干细胞细胞增殖速度放缓,形态逐渐改变,细胞外基质呈甲苯胺蓝异染性,Ⅱ型胶原免疫组织化学染色阳性.RT-PCR检测示实验组Ⅱ型胶原mRNA表达阳性,诱导至21 d可见各实验组Ⅱ型胶原基因相对表达量分别为0.64±0.06、0.72±0.03、0.75±0.01,与阴性对照组(0.09±0.03)、阳性对照组(0.96±0.15)比较差异均有统计学意义,但B、C组间Ⅱ型胶原表达相似.结论 不同相对分子质量外源性HA诱导兔MSCs向软骨细胞分化的能力存在差异,相对高分子质量的HA的诱导能力较相对低分子质量HA的诱导能力强.证明透明质酸的相对分子质量与MSCs的软骨分化有关联性,但均比TGF-β3的诱导能力弱.     

大鼠脐血来源单个核细胞诱导为内皮祖细胞的免疫荧光检测

目的脐血（umbilical cord blood,UCB）中含有大量内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）,内皮祖细胞（EPCs）是血管内皮细胞的前体细胞,有分化为血管内皮细胞的能力,为骨组织工程血管化带来新的途径。本实验研究大鼠脐血来源的单个核细胞体外诱导为EPCs的可能性。方法分离大鼠脐血单个核细胞,血管内皮诱导液（添加10％胎牛血清,1％青霉素,1％链霉素,VEGF20ug／L,IGF-12ug／L,bFGF2ug／L,EGF20ug／L）培养分化,于3周、6周进行免疫荧光染色检测贴壁细胞CD34、CD133、Flk-1、vWF表面标志。结果培养三周单个核细胞CD34、CD133、Flk-1、vWF抗体免疫荧光检测均为阳性;六周免疫荧光染色可见CD34、Flk-1、VWF组为阳性,CD133组部分为阳性,阴性对照组未发现阳性细胞。结论大鼠脐血来源的单个核细胞在体外诱导3周可以分化为EPCs,6周部分细胞分化为成熟血管内皮细胞。