EGF对原始生殖细胞来源小鼠胚胎干细胞分离克隆的影响

目的观察表皮生长因子对原始生殖细胞来源的小鼠胚胎干细胞分离克隆的影响。方法以小鼠胎儿成纤维细胞为饲养层,从原始生殖细胞中分离克隆小鼠胚胎干细胞的过程中,在基础细胞培养液中加入不同浓度的表皮生长因子,观察小鼠胚胎干细胞集落形成数和各组的最高传代数。结果表皮生长因子添加与否对原始生殖细胞来源的小鼠胚胎干细胞原代培养无显著的影响,而对后继培养有显著影响。结论在原始生殖细胞来源的小鼠胚胎干细胞分离的过程中,可以不添加表皮生长因子,而在胚胎干细胞的后续传代中,尤其对于较高代细胞的克隆过程中添加表皮生长因子有利于细胞的生长。     

小鼠原始生殖细胞源胚胎干细胞的分离培养和建系

目的 :对小鼠胚胎干细胞分离材料的获取及处理、胚胎干细胞分化抑制培养、细胞系的建立及保存所用技术进行探讨。方法 :取胎鼠生殖嵴及其周围组织 ,采用胎鼠的胚胎干细胞与其成纤维细胞共培养的方式进行。结果 :分离得到大量原始生殖细胞(PGCs)集落。多次克隆传代具有胚胎干 (ES)细胞的诸多特征 ,如有连续传代的能力 (有两组分别传至 3代和 4代 ) ,有典型鸟巢状结构 ,AKP染色阳性 ,体外分化实验具有形成类胚体的能力。结论 :从胎鼠生殖嵴中能够获得大量的ES细胞。采用的胚胎干细胞与其成纤维细胞共培养的方式进行胚胎干细胞的分离培养和建系是可行的     

影响胚胎干细胞分离克隆的因素

目前，世界各国争相研究胚胎干(EmbryonicStem，ES)细胞，并且已经取得很大进展。但迄今为止仅在小鼠上获得真正意义的ES细胞，即具有参与生殖系传递能力的胚胎干细胞。这说明在其它动物及人类ES细胞研究方面，还存在许多有待探讨的问题。本文就目前公认的饲养层、培养基、添加物、胚胎日龄、遗传背景以及获取原始生殖细胞的时间等对ES细胞分离克隆的影响加以系统阐述，以期为今后的研究工作提供相关参考。     

细胞因子对人类胚胎干细胞分离克隆的影响

目的 观察白血病抑制因子、干细胞因子、碱性成纤维细胞生长因子对人类胚胎干细胞分离克隆的影响。方法在基础细胞培养液中加入不同的细胞因子组合，培养后观察人类胚胎干细胞集落形成数和各组的最高传代数。结果 细胞因子添加与否对人类胚胎干细胞原代培养无显著的影响，而对后继培养有显著影响。结论 在人类胚胎干细胞初代培养时可以不添加细胞因子，细胞的克隆过程中添加细胞因子有利于细胞的生长。     

小鼠胚胎原始生殖细胞的体外培养

采用细胞生物学方法和组织培养技术研究小鼠胚胎原始生殖细胞(PGCs)的一般形态学特征及生物学特点.在体外培养条件下,PGCs 按体积大小可分大、中、小3类。本研究发现,中、小型原始生殖细胞在培养的第2、3 d 增多,形态似大型原始生殖细胞。培养中的 PGCs 不贴壁而悬浮生长于培养液中,培养到第6～7 d时开始死亡。体细胞(间充质细胞或间皮细胞)贴壁生长,生长旺盛,与PGCs 同时死亡。     

小鼠胚胎干细胞的培养

ＥＳ细胞的培养应满足促进细胞增殖和抑制细胞分化而保持其高度未分化潜能。我们用胚胎成纤维细胞作为饲养层，培养基ＤＭＥＭ中加白血病抑制因子的方法来培养ＥＳ细胞。培养的ＥＳ细胞呈集落状生长，细胞排列紧密，呈未分化状态。胚胎成纤维细胞作为饲养层是分离培养ＥＳ细胞最普遍使用而且有效的方法。本文还围绕ＥＳ细胞培养中的促进增殖和抑制分化这两个方面的影响因素进行了讨论。     

小鼠胚胎干细胞的分离培养与鉴定

目的:培养、分离和鉴定C57BL/ 6小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell ,ESC).方法:收集小鼠3.5 d 的囊胚进行培养,用小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层,形成的ESC样集落,经两次亚克隆法分离培养成ESC;进行相差显微镜观察,采用阶段特异性胚胎抗原-1 (stage-spesific embryonic antigen,SSEA-1)对培养的ESC进行免疫组化染色. 结果:获得了稳定的ESC集落,传至第12代.ESC呈集落样生长,SSEA-1免疫组化染色强阳性.结论:两次亚克隆法获得的细胞具有ESC主要的生物学特性.     

牛胚胎干细胞分离克隆的研究

目的从牛原始生殖细胞中分离克隆牛胚胎干细胞。方法采用与同源胎儿成纤维细胞共同培养的方法，以高糖DMEM添加0．1mM2-巯基乙醇、犊牛血清为培养基，以4-13周龄牛胎儿为实验材料，从牛原始生殖细胞中分离克隆牛胚胎干细胞。结果参与胚胎干细胞分离克隆的4．0例牛胎儿中，一体长6．5cm的雌性胎儿胚胎干细胞传到15代；分离得到的牛胚胎干细胞，经碱性磷酸酶染色，体外分化实验，核型分析证明其具有胚胎干细胞的诸多特性。结论可以从4-13周龄牛胎儿的原始生殖细胞中分离克隆胚胎干细胞。     

昆明种系小鼠胚胎干细胞的分离培养及特性鉴定

目的 提高昆明小鼠胚胎干细胞（ES细胞）建株的成功率。方法 收集小鼠3．5d的囊胚培养,用小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层,形成的ES细胞样集落,经两次亚克隆分离培养ES细胞;进行相差显微镜观察、碱性磷酸酶染色和体内外分化能力鉴定。结果 获得两个稳定ES细胞集落,传至第11代。ES细胞呈集落样生长,碱性磷酸酶染色强阳性,体外分化的细胞沿拟胚体外向性生长,形态多样,在体分化可形成来源于3个胚层的组织。结论 两次亚克地获得的细胞具有ES细胞主要的生物学性状,有助于提高昆明小鼠ES细胞建株的能力。     

体外诱导小鼠胚芽干细胞分化为肝细胞的实验研究

目的寻找一种诱导小鼠胚芽干细胞向肝细胞定向分化的最佳诱导剂。方法分离提取孕11 d小鼠胚胎的原始生殖细胞,体外培养扩增后,一部分胚芽干细胞接种到6孔培养板中。向不同孔中分别加入不同浓度的碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、表皮生长因子（EGF）、β-神经生长因子（β-NGF）、维甲酸（RA）、肝细胞提取液进行诱导分化。另一部分胚芽干细胞与胎肝组织共培养。将培养12 d的细胞采用靛青绿摄入试验和白蛋白（ALB）免疫细胞化学染色来鉴定原始生殖细胞向肝细胞分化的情况。结果与胎肝组织共培养和添加了β-NGF、肝细胞提取液的胚芽干细胞能够诱导成肝样细胞,这些肝样细胞能够摄取ICG并表达ALB,上述3组细胞ALB阳性细胞数较对照组明显增多（P〈0.05）。bFGF、EGF、RA并无诱导分化作用。结论β-NGF、胎肝组织产生的细胞因子及肝细胞提取液中的细胞因子可诱导小鼠胚芽干细胞向肝细胞分化。     

ISOLATION AND EXPANSION OF HUMAN EMBRYONIC NEURAL STEM/PROGENITOR CELLS IN VITRO

Ｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｉｓａｇｒｏｕｐｏｆｕｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ,ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔｃｅｌｌｓｗｉｔｈｔｈｅｃａｐａｃｉｔｙｏｆｓｅｌｆ -ｒｅｎｅｗａｌａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｎｇｉｎｔｏｎｅｕｒｏｎｓ ,ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓａｎｄｏｌｉｇｏ ｄｅｎｄｒｏｃｙｔｅｓ .Ｔｈｅｙｃａｎｂｅａｃｔｉｖａｔｅｄａｆｔｅｒｃｅｎｔｒａｌｎｅｒ ｖｏｕｓｉｎｊｕｒｙｔｏｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅｔｈｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ[1～ 4 ] .Ｉｔｉｓｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄｔｈａｔｎｅｕｒａｌｓｔ…     

肺泡Ⅱ型细胞的分离培养及年龄对其增殖的作用

目的：建立肺泡Ⅱ型细胞的分离培养方法，研究年龄对其增殖的影响。方法：应用梯度离心和贴壁培养分离大鼠肺泡Ⅱ型细胞，比较幼年、中年和老年大鼠培养肺泡Ⅱ型细胞的增殖能力。结果：证明该分离方法最终每只鼠可收获（１．１±０．６）×１０７个细胞，细胞活力９４．１％，肺泡Ⅱ型细胞纯度为（９１．６±２．４）％。肺泡Ⅱ型细胞的增殖能力均呈现幼年组＞中年组＞老年组的变化。结论：成功地建立肺泡Ⅱ型细胞的分离培养方法。老年大鼠肺泡Ⅱ型细胞增殖能力下降。     

白细胞介素-3对小鼠淋巴瘤细胞生长的影响

用小鼠IL-3分泌细胞株WEHI-3和IL-3依赖细胞株32-D,获取了IL-3并对其活性进行了鉴定。在此基础上,选用国内实验性T-S-Z白血病系统中的一株小鼠淋巴瘤细胞克隆SAC-ⅡB_2,观察了IL-3对其增殖和分化的影响。结果表明,IL-3对SAC-ⅡB_2细胞有一短暂的刺激增殖作用;IL-3作用的SAC-ⅡB_2细胞未见成熟形态迹象出现,未见成熟T或B细胞表面标志Thy-1、Smlg的表达,也未显示成熟T、B细胞的功能。     

Mitomycin C对小鼠腹水肝癌细胞膜脂的作用

本实验用1,6-二苯基-1,3,5-已三烯(DPH)作荧光探剂,应用荧光偏振技术研究Mitomycin C(MC)对小鼠腹水肝癌细胞膜脂的作用。结果表明,MC使细胞膜脂区流动性降低,呈明显的量效关系。薄层液相色谱分析,MC改变了膜脂的Rt值。但MC不改变膜的相变温度。     

叶酸对胎鼠心肌细胞Cx43表达的影响

目的:观察叶酸对胚胎大鼠心肌细胞Cx43表达的影响,探讨叶酸预防先天性心脏畸形作用的可能机制。方法:受孕大鼠随机分为两组,实验组给予叶酸(2mg/kg/d)灌胃,对照组灌服等量生理盐水。选择ED13.5和ED16.5的胚胎大鼠作为研究对象,SP免疫组织化学染色法观察Cx43在心肌细胞的表达。结果:免疫组织化学染色显示各组胎鼠心肌细胞均可见Cx43阳性表达,阳性产物以颗粒形式散在分布于细胞质内,或呈短线状、链状排列在细胞侧-侧连接处。实验组胎鼠心肌Cx43阳性细胞数明显高于同胎龄对照组(P0.01)。结论:叶酸可增强胎鼠心肌细胞Cx43的阳性表达。     

丁酸钠对小鼠乳腺癌细胞的生物学效应

3mM丁酸钠可抑制MA782/5s—8101细胞生长,同时使其表面微绒毛减少,细胞形态发生改变;可促进GR细胞和MA782/5s-8101细胞内微管组装。2mM丁酸钠可明显降低MA782/5s-8101细胞生长时间—热功率曲线。以上结果表明了酸钠对MA782/5S-8101细胞具有一定的表型逆转作用。     

维甲酸诱导分化小鼠淋巴瘤SACIIB_2克隆细胞的作用和机理

研究了ＲＡ对ＳＡＣＩＩＢ２克隆细胞的促分化作用。结果表明，受ＲＡ处理后，ＳＡＣ－ＩＩＢ２克隆细胞形态的改变及生长抑制不因培养液中去除ＲＡ而立即消失，瘤细胞酸性非特异性酯酶（ＡＮＡＥ）染色阳性率明显升高，细胞内嘌呤核苷磷酸化酶（ＰＮＰ）活性明显升高，而腺苷脱氨酶（ＡＤＡ）活性明显降低，末端脱氧核苷酰转移酶（ＴｄＴ）的表达有所减弱，而ＲＡ处理前后瘤细胞乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）同工酶谱型无明显改变，提示ＲＡ对ＳＡＣＩＩＢ２克隆细胞有一定程度的诱导分化作用。对ＲＡ处理前后ＳＡＣＩＩＢ２，细胞３－ｆｏｓ基因表达情况也作了初步观察和分析。