胰岛素对人成骨肉瘤MG-63细胞胰岛素受体底物-2基因表达的影响

目的观察胰岛素对人成骨肉瘤MG-63细胞胰岛素受体底物-2（IRS-2）基因mRNA表达的影响。方法用胰岛素干预人成骨肉瘤MG-63细胞，半定量RT-PCR检测细胞IRS-2基因mRNA的表达量。结果10^-10mol/L～10^-6mol/L胰岛素上调细胞IRS-2基因mRNA的表达（P＜0．05），且具有剂量依赖性。胰岛素的调节还存在时效依赖性，10^-8mol/L胰岛素干预12h可下调细胞IRS-2基因mRNA的表达（P＜0．05），干预24h～48h上调细胞IRS-2基因mRNA的表达（P＜0．05）。结论胰岛素可影响人成骨肉瘤MG-63细胞IRS-2基因mRNA的表达，胰岛素可能对1型糖尿病患者骨质疏松的发生和发展起着重要的作用。     

多囊卵巢综合征胰岛素抵抗患者的子宫内膜胰岛素受体底物1的表达

目的:研究多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)患者其子宫内膜胰岛素受体底物(insulin receptor substrate IRS)1表达。方法:所有研究对象于月经周期第1天刮取子宫内膜,其中P-COS患者51例,合并胰岛素抵抗者28例,非胰岛素抵抗者23例,对照组非PCOS妇女19例,行病理切片观察及免疫组化染色,计算机图像分析系统分析子宫内膜IRS-1的表达。结果:PCOS IR组、PCOS非IR组和对照组IRS-1表达的灰度值分别为(131.94±18.39)、(78.16±6.87)和(74.76±4.78),PCOS IR组与PCOS非IR组和对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),PCOS非IR组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PCOS合并IR患者子宫内膜组织的IRS-1表达降低,可能是子宫内膜发生胰岛素抵抗机制之一。     

胰岛素受体底物和酪氨酸磷酸酶在 2 型糖尿病大鼠肌肉组织中的蛋白表达及其意义

目的研究2型糖尿病对胰岛素产生抵抗的分子机制。方法用Western杂交检测2型糖尿病模型(OLETF大鼠)肌肉组织内IRS-1及SH-PTP2的蛋白表达水平,并以同种属的Wistar大鼠做比较。结果OLETF糖尿病大鼠的空腹和餐后血糖水平较对照组明显增高(P<0.05);Western杂交显示OLETF大鼠肌肉组织内IRS-1蛋白表达较对照组减少(P<0.05);而SH-PTP2的蛋白表达则较对照组增加(P<0.05)。结论IRS-1及SH-PTP2蛋白表达的异常改变,可能是引起2型糖尿病产生胰岛素抵抗的分子机制之一。     

镉诱导人胚肾细胞金属硫蛋白基因亚型的表达

为了研究镉对人胚肾细胞（HEK293T）金属硫蛋白（MT）各基因亚型表达的影响。研究人员使用10μmol／L CdCl2染毒HEK293T0、2、4、8、12、16、20、24h,2．5、5、10、20、40μmol／L CdCl2染毒HEK293T24h后,MTT法测定HEK293T增殖活性;RT-PCR检测镉对HEK293TMT-1A,MT-1B,MT-1E,MT-1F,MT-1G,MT-1H,MT-1X及MT-2AmRNA表达的变化。     

人子宫内膜中Ang-1和Ang-2及其受体Tie-2的不同表达

血管生成是正常月经周期和胚胎种植的一个重要环节。目前对血管生成的生长因子之一——促血管生成素(Angiopoietin，Ang)在人子宫内膜的表达了解甚少。研究旨在检测月经周期中子宫内膜中Ang—1、—2和受体Tie—2的mRNA表达的相对水平，及其细胞分布和蛋白质的表达。     

表达人CD137配体重组腺病毒的构建及其抗肿瘤免疫作用的研究

目的构建并制备表达人CD137L蛋白的5型重组腺病毒(Ad5-CD137L), 并初步研究其在小鼠中的抗肿瘤免疫效果。方法将密码子优化CD137L蛋白的表达基因插入pDC316穿梭质粒,并与pBH-GloxΔE1,3Cre腺病毒骨架质粒, 共同转染HEK293细胞, 构建Ad5-CD137L种子。扩增并纯化后, 对所得Ad5-CD137L重组腺病毒的插入目的基因与蛋白表达情况进行鉴定。检测Ad5-CD137L在C57BL/6小鼠体内的特异性细胞免疫和抗肿瘤免疫水平。结果成功地构建了Ad5-CD137L, PCR和测序结果表明插入目的基因与构建理论值相符。免疫荧光法鉴定Ad5-CD137L能在HEK293细胞中表达目的蛋白, 经Western印迹法鉴定该目的蛋白的相对分子质量约为25 000, 与理论值相符。与空腺病毒相比, Ad5-CD137L能显著诱导小鼠特异性IFN-γ(t=6.315, P=0.003), 抗肿瘤免疫效果更显著(t21 d=8.275, t29 d=4.492;t39 d=5.101, P均<0.001)。结论成功构建了Ad5-CD137L, 该重组病毒具有...     

内毒素血症诱导的HIV共受体CXCR4表达的下调

[目的]细菌LPS在体内可抑制单核细胞内HIV的复制.目的是为了检测LPS对HIV感染的共受体CXCR4表达的影响.[方法]24只小鼠静脉注射LPS (10mg,/kg),通过流式细胞仪检测CD4淋巴细胞表面的CXCR4蛋白表达水平,RT-PCR检测CXCR4的mRNA表达.[结果]LPS可诱导外周血单个核细胞CXCR4的mRNA升高,但可降低细胞表面的蛋白表达(P<0.001).[结论]体内全血刺激,LPS下调PBMC表面的CXCR4表达(P<0.05).因此,暴露于微生物的单个核细胞可通过HIV共受体效应而抵抗HIV的病毒复制.     

SAH抑制内皮细胞增殖和ER-α表达作用

目的 探讨胞内S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)升高抑制血管内皮细胞增殖和雌激素受体-α(ER-α)表达变化的关系.方法 以永生化的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为研究对象,经不同浓度的S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(SAHH)强效抑制剂3-deazaadenosine(DZA)处理24,48,72 h.利用细胞计数法、流式细胞仪和脱氧核糖核酸转移酶缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞的增殖凋亡能力,蛋白印迹法检测ER-α蛋白的表达,荧光定量-PCR(qRT-PCR)检测其mRNA表达,甲基化特异PCR法(MSP)检测ER-α基因启动子甲基化状态.结果 经DZA处理后,HUVEC增殖能力降低(主要受阻于G1/G0期),细胞凋亡率增加(P<0.05),ER-α mRNA和蛋白的相对表达量降低(P<0.05),但其启动子甲基化不发生改变.结论 胞内SAH升高抑制HUVEC的增殖能力与ER-α的表达变化有关,但这种作用不是通过改变ER-α基因启动子的甲基化而实现.     

不同年龄大鼠胰腺组织中胰岛素受体与磷脂酰肌醇3激酶表达水平的研究

目的：探讨大鼠胰腺组织中胰岛素受体与磷脂酰肌醇3激酶（P13K）的表达随增龄的变化。方法：35只健康sD大鼠按月龄分为五组,分别为1月龄组7只,6月龄组7只,12月龄组7只,18月龄组7只,24月龄组7只。提取胰腺组织蛋白后用Western-Blot方法检测胰岛素受体和P13K的蛋白水平,应用免疫组化方法检测胰岛素受体的分布。结果：（1）胰腺组织内胰岛索受体集中分布在胰岛细胞表面,腺泡细胞也有表达。（2）1月龄组及18月龄组大鼠胰腺组织中的胰岛素受体蛋白表达量与6月龄组比较差异有统计学意义。1月龄组P13K蛋白质表达量与6月龄组比较差异有统计学意义。结论：进入老年期,大鼠胰腺组织中胰岛素受体及P13K的表达升高。     

钛微粒对成骨细胞护骨素基因表达的调控

目的探讨磨损微粒引起假体周围骨溶解过程中的骨形成能力，为人工关节假体松动的机制及预防研究打下基础。方法MG-63细胞在无酚红的MEM培养基中单层培养，采用不同浓度细胞可吞噬钛微粒（粒径小于3um）对其进行24小时干预或采用0．05％钛微粒干预0h、12h、24h、36h及48h，半定量RT-PCR观察其对护骨素（OPG）基因表达的影响。结果随着钛微粒浓度及刺激时间逐渐增加，OPG mRNA表达上调逐渐增加。结论在假体松动病理过程中，骨形成能力增加，虽然其增加程度不及骨溶解，但为干预假体松动提供了基础。     

胰岛素受体底物2在2型糖尿病大鼠肌肉、脂肪、肝脏中的蛋白表达及其意义

目的探讨2型糖尿病胰岛素抵抗的分子机制。方法用Western杂交检测自发发病的2型糖尿病模型（OLETF大鼠）肌肉、脂肪、肝脏内IRS-2（胰岛素受体底物2）的蛋白表达水平；并以同种属的Wistar大鼠做比较。结果OLETF大鼠肌肉组织内IRS-2的蛋白表达较对照组增加（P〈0．05），而脂肪、肝脏组织内IRS-2的蛋白表达与对照组比较，差别无统计学意义（P〉0．05）。结论IRS-2蛋白表达异常可能是引起2型糖尿病高胰岛素血症及胰岛素抵抗的因素之一；IRS-2在OLETF大鼠不同组织内的表达不完全一致；可能引起各组织对胰岛素抵抗的程度也不同。     

糖皮质激素诱导胰岛素抵抗的分子机理

目的：探讨糖皮质激素以原代培养老鼠脂肪细胞的糖转运活动及胰岛素信号肽的信号,方法：分离的老鼠脂肪细胞在5mmol浓度葡萄糖加塞米松0．3μmol分别孵育2h,8h,16h,和24h,然后测定糖的转运活动;Western blotting测定细胞内胰岛素受体底物（IRS）1／2、肌醇磷脂－3－激酶85亚单位（p85)和蛋白激酶B（PKB）的蛋白表达。结果：地塞米松治疗抑制了基础的和胰岛素刺激的葡萄糖转运活动,产生最大抑制作用时间分别为2h和24h ,对IRS1的3蛋白表达的抑制作用与培养的时间长短成正比,同时,它也削弱了P85和PKB的蛋白表达,但对IRS2呈现上高作用。结论：糖皮质激素可以抑制葡萄糖的转运活动,诱导胰岛素抵抗。其机理可能与改变胰岛信号肽的表达等因素有关。     

2型糖尿病患者正常糖耐量一级亲属红细胞膜胰岛素受体变化及与胰岛素抵抗的相关性

目的探讨2型糖尿病患者正常糖耐量一级亲属(NFDR)红细胞膜胰岛素受体变化及与胰岛素抵抗的相关性。方法102例2型糖尿病患者正常糖耐量一级亲属作观察组,60例无糖尿病家族史的非糖尿病患者作对照组,测定空腹血糖(FPG)、胰岛素(FINS)、血脂、餐后2 h血糖(2 h PG)、2 h胰岛素(2 h INS),并检测高、低亲和力红细胞膜胰岛素受体数目(R1、R2)和高、低亲和力常数(K1、K2),同时计算胰岛素抵抗指数(IRI)。结果2型糖尿病患者正常糖耐量一级亲属R1、R2明显低于对照组;2 h PG、三酰甘油、低密度脂胆白胆固醇水平高于对照组,差别有统计学意义(P<0.05,P<0.01);FINSI、RI高于对照组,差别有统计学意义(P<0.05)。多元线性逐步回归分析结果显示,体质指数、三酰甘油、R1、R2是影响2型糖尿病患者正常糖耐量一级亲属胰岛素抵抗独立的危险因素。结论2型糖尿病患者正常糖耐量一级亲属存在明显胰岛素抵抗,且与红细胞膜胰岛素受体数目的减少有一定关系。     

全长人雌激素受体cDNA的克隆及酵母表达载体的构建

目的 建立环境雌激素基因重组酵母测评系统,将全长人雌激素受体cDNA在酵母中克隆并表达。方法 用EcoRI和SacI从pSG5/HEG0质粒上切下hER cDNA,定向插入pUC18克隆载体中,构建成重组质粒pUC－hER;再用EcoRI和BamHI切下hER cDNA,将其连接到pGAD424酵母表达载体上。结果 构建成功重组酵母表达载体pGAD-hER ,序列分析表明插入处接头和读框完全正确。结论 本文构建成功全长人雌激素受体cDNA的酵母表达载体pGAD-hER,为进一步建立环境雌激素基因重组酵母测评系统奠定了基础。     

非肥胖2型糖尿病胰岛素抵抗的病机研究

目的　探讨胰岛素受体数目及其 β亚基自身磷酸化程度改变在 2型糖尿病患者胰岛素抵抗发生中的作用。 方法　 14例非肥胖型 2型糖尿病患者和 12例正常对照者 ,用放射配基结合法测定完整红细胞膜上胰岛素受体数目及其亲和常数 ,按Comi等人所述方法制备红细胞膜蛋白 ,用胰岛素及γ -3 2PATP促发磷酸化反应 ,反应结束后进行不连续垂直板凝胶电泳 ( 0 1%SDS～ 7%5 %PAGE)分离蛋白质 ,并进行放射自显影 ,测定 95KD蛋白质的吸光度。结果　非肥胖型 2型糖尿病患者 ,每个红细胞上胰岛素高亲和力位点数目为 2 1± 13 ,亲和常数为 ( 1 70± 0 93 )× 10 -9LM-1 ,低亲和力位点数目为 95 5± 42 7,亲和常数为 ( 1 44± 0 86)× 10 -7LM-1 ,与正常对照组相比 ,差异无显著性 ;非肥胖型 2型糖尿病患者红细胞膜上 95KD蛋白的磷酸化程度为 8 0 2± 5 60△A/mg蛋白 ,明显低于对照组 2 8 3 8± 15 2 4△A/mg蛋白。结论　胰岛素受体 β亚基自身磷酸化程度的降低可能是非肥胖型 2型糖尿病患者胰岛素抵抗产生的主要因素 ;胰岛素受体数目及其与胰岛素亲和力的改变可能与非肥胖型 2型糖尿病胰岛素抵抗的产生无关     

雄激素受体在雄性激素源性脱发患者的表达观察

目的：了解雄激素受体（AR）在雄性激素源性脱发（AGA）患者顶部表皮、毛囊、皮脂腺、汗腺中的表达情况。方法：选取26例雄性激素源性脱发患者顶部、枕部以及10例非脱发者的顶部头皮标本,用免疫组织化学检测表皮、毛囊、皮脂腺、汗腺中AR的表达。结果：脱发患者头顶部毛囊、皮脂腺、汗腺AR表达均明显强于枕部和非脱发者枕部,差异均有统计学意义（P〈0.05）;脱发患者枕部毛囊、皮脂腺、汗腺AR表达与非脱发者顶部AR表达比较差异均无统计学意义（P〉0.05）;所有标本表皮中AR均为阴性。结论：AR在AGA患者头顶部毛囊、皮脂腺、汗腺的高表达,可能是AGA重要原因之一。