电转入IL—6受体基因在大鼠急性髓细胞白血病模型中的表达

应用平方波脉冲电转法将编码人ＩＬ－６受体的ｃＤＮＡ转入不表达ＩＬ－６Ｒ的ＢＮＭＬ大鼠急性早幼粒细胞白血病ＩＬ１２细胞中，转染细胞经含６００μｇ／ｍｌ的Ｇ４１８半固体－液体二步法培养，筛出Ｇ４１８抗性细胞；ＦＡＣＳ检测显示该细胞与ＦＩＴＣ标记的抗ＩＬ－６Ｒ单抗呈显的荧光强度，＾１２５Ｉ－ＩＬ－６受体结合实验表明，ｋｄ＝４．７ｎｍ，每个细胞ＩＬ－６Ｒ数为４０００左右，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ－Ｂｌｏｔ发现该     

人IL—3的表达与调控机理研究进展

IL－3是具有广泛而重要生物学活性的细胞因子，尤其对造血起着重要调控作用。它特异性地表达于激活的T淋巴细胞、NK细胞，其表达在转录和转录后水平受到精细的调节。近年来对调节IL－3表达有关的顺式作用元件：ACT－1、AP－1、NIP以及与之相互作用的反式作用元件进行了大量深入研究。本文综述了影响IL－3基因表达的调控因素及其相关机制的研究进展。     

SV2A基因真核表达质粒构建及其在HEK293T细胞中的表达

目的构建鼠突触囊泡蛋白2A(SV2A)基因的真核表达质粒,并瞬时转染至人胚肾细胞(HEK293T)中,对其表达进行鉴定。方法以APP/PS1双转基因小鼠海马组织的cDNA为模板,扩增得到长2239 bp的SV2A基因编码序列,将此序列插入到真核表达载体p3×Flag-CMV-10多克隆位点区域中,得到真核表达质粒p3×Flag-CMV-10-SV2A,转化后挑取单克隆菌落经双酶切鉴定后送公司测序,将构建成功的重组质粒转染至HEK293T细胞中,利用蛋白质印迹法(Western blot)检测SV2A基因的表达情况。结果成功构建p3×Flag-CMV-10-SV2A重组质粒,并在转染至HEK293T细胞后,验证了相应蛋白表达。结论利用分子克隆技术成功构建了p3×Flag-CMV-10-SV2A真核表达质粒并在HEK293T细胞中正确表达,为后续实验奠定了基础。     

IL—4及其受体对造血细胞的调节作用

ＩＬ－４及其受体是对细胞生长分化有重要调节作用的细胞因子及受体之一，它不仅对淋巴细胞有重要影响，且近年研究表明，ＩＬ－４及其受体对正常人及白血病患者髓系造血细胞增殖分化亦产生直接或／和间接的促进或／和抑制作用。     

IL—6基因转染的白血病细胞不同条件下小鼠体内外分泌IL—6水…

为了解白细胞介素６（ＩＬ－６）基因转染的高分泌ＩＬ－６的ＦＢＬ－３红白血病细胞（ＦＢＬ－３－ＩＬ－６）株体内外的生物学特性，动态观察在不同剂量＾６０Ｃｏγ射凰其ＩＬ－６的分泌水平，同时动态观察经腹腔、局部皮下注射途径将其移植入Ｃ５７ＢＬ／６小鼠体内后，血清和局部细胞培养上清液中ＩＬ－６含量。结果表明，ＦＢＬ－３－ＩＬ－６细胞以８Ｇｙ照射剂量为制备瘤苗的最佳照射剂量。照射后２周内一直保护较高水平的Ｉ     

人白细胞介素-29 cDNA克隆及其在大肠杆菌系统的表达

目的：克隆人细胞因子IL-29全长cDNA及其在大肠杆菌中表达,制备抗IL-29多克隆抗体。方法：分离外周血单核细胞;VSV感染后,提取总RNA,通过一步RT-PCR获得IL-29全长cDNA。DNA测序正确后,将IL-29cDNA的编码框序列构建到原核表达载体pET28a(+)中。卡那霉素平板筛选及PCR鉴定,挑出阳性克隆进行扩增、转化大肠杆茵进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE、Western blotting鉴定,亲和层析分离纯化得到Mr为23000组氨酸标签重组人IL-29融合蛋白。纯化的IL-29免疫家兔制备抗IL-29多克隆抗体。结果：成功获得人IL-29全长cDNA,并以包涵体形式表达于大肠杆茵中。免疫家兔后获得特异抗IL-29的多克隆抗体。结论：获得rhlL-29细胞因子及其多克隆抗体,为其进一步研究及应用奠定基础。     

急性淋巴细胞白血病患者血清IL—3、IL—6、IL—8水平的测定及其临床意义

目的 探讨IL－3、IL－6、IL－8在急性淋巴细胞白血病（AIL）中的意义。方法 采用酶联免疫法（ELISA）测定45例急性淋巴细胞白血病患者血清IL－3、IL－6、IL－8水平。结果 AIL初诊患者血清IL－3水平明显低于正常对照组（P＜0．05）,血清IL－6、IL－8水平明显高于正常对照组（P＜0．05、P＜0．001）,经治疗AIL CR期患者IL－3、IL－6、IL－8水平恢复正常;AIL NR组与初诊组相比无显著性差异（P＞0．05）。结论 检测IL－3、IL－6、IL－8水平的变化有助于判断AIL患者病情的变化,并可作为监测治疗反应的辅助指标。     

35例急性白血病细胞IL—2受体α的基因表达的检测分析

为研究ＩＬ－２受体α链基因在急性白血病（ＡＬ）细胞的表达，对１９例ＡＬＬ和１６例ＡＭＬ患者治前白血病细胞用逆转录＝聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）及芝光素标记单抗ＩＬ－２Ｒ１流式细胞分析，分别进行了ＩＬ－２Ｒα基因ｍＲＮＡ和蛋白质水平表达的检测。３５例ＡＬ患者白血病细胞ＩＬ－２ＲαｍＲＮＡ和Ｐ阳性表达者分别为５例和１４例，前者阳性表达明显高于后者，１４例ＡＬ患者白血病细胞ＩＬ－２ＲαｍＲＮＡ表达阳性，     

人白细胞介素—7基因克隆及表达

在人骨髓基质原代培养细胞ｍＲＮＡ中，利用ＲＴ－ＰＣＲ和克隆技术，获得了白细胞介素－７基因的编码区片段，经测序证实此克隆片段包含了完整的ＩＬ－７编码区基因共５３８个碱基。使原核表达技术，已使该基因在大肠肝菌中得到了初步表达。     

人TLR4胞外段真核表达质粒的构建及其在HEK293 细胞中的表达

目的 构建人Toll—like receptor 4（TLR4）胞外段真核表达质粒并观察其表达。方法 通过PCR扩增人TLR4胞外段基因，将其克隆入真核表达质粒pcDNA3．1（＋），重组质粒peDNA3．1（＋）-eTLR4转染入人胚肾293细胞（HEK293 细胞）中，RT-PCR检测TLR4胞外段的表达。结果 测序结果表明，成功构建人TLR4胞外段真核表达质粒pcDNA3．1（＋）-eTLR4，并在HEK293细胞中获得表达。结论 TLR4胞外段能在HEK293细胞中获得正确表达，为TLR4信号通路的进一步研究打下了基础。     

人核心蛋白聚糖基因靶向肺癌细胞特异性表达载体的构建及其表达

目的构建调控人核心蛋白聚糖基因特异性在肺癌细胞A549内表达的基因表达载体,为进一步应用该基因进行肺癌靶向治疗的研究奠定实验基础。方法应用PCR技术从人外周血基因组中扩增肺癌细胞特异性表达的人分泌型白细胞蛋白酶抑制剂的启动子,利用基因重组技术将该启动子插入真核细胞表达载体pcDNA3.1（＋）,替换该载体的CMV启动子与增强子序列,从而构建成由人分泌型白细胞蛋白酶抑制剂基因的启动子启动基因表达的基因表达载体。将人核心蛋白聚糖基因通过基因重组技术插入到上述载体人分泌型白细胞蛋白酶抑制剂基因启动子的下游。PCR产物通过测序鉴定核苷酸序列。重组载体通过限制性酶切进行鉴定。结果 PCR扩增的人分泌型白细胞蛋白酶抑制剂的启动子片段长度为1 250 bp;该启动子经测序获得的核苷酸序列与Genebank上该基因上游5′末端转录调控区的序列完全一致;重组载体的酶切鉴定结果显示（1）该启动子成功插入到pcDNA3.1（＋）载体,并替换CMV启动子与增强子序列,（2）人核心蛋白聚糖基因成功插入该载体。结论成功构建由人分泌型白细胞蛋白酶抑制剂基因启动子调控人核心蛋白聚糖基因表达载体,该载体实现调控人核心蛋白聚糖基因在肺癌细胞内特异性表达。     

一期和二期梅毒患者血清IL—2、IL—4含量的测定及意义

梅毒在临床上表现出活动期与静止期交替出现的复杂过程 ,患者的免疫应答亦发生复杂的变化。本研究通过对一期和二期梅毒患者血清ＩＬ 2、ＩＬ 4含量的测定 ,探讨梅毒患者病程中免疫应答的变化。一、材料和方法取病情活动的梅毒患者血清 4 0份 ,以梅毒的临床表现为分期依据 ,其中一期 2 2份 ,二期 17份。采用ＥＬＩＳＡ(由意大利ＳＯＲＩＮＤＩＡＧＮＯＳＴＩＣＳｓ、ｒ、ｉ公司生产 )抗ＴＰ特异性抗体确诊。采用双抗体夹心ＡＢＣ ＥＬＩＳＡ法分别测定梅毒患者血清ＩＬ 2、ＩＬ 4的含量 (试剂盒购于上海森雄科技实业有限公司 )。统计学分析…     

香菇多糖对人淋巴细胞IL—2分泌及IL—2R表达的双向调节…

以佛波酸和卡西霉素Ａ２３１８７协同刺激正常人血淋巴细胞，用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶桥联酶标染色法观察香菇多糖对白细胞介素－２（ＩＬ－２）分泌及ＩＬ－２受体（ＩＬ－２Ｒ）表达的影响。Ｌｅｎ单独无刺激淋巴细胞ＩＬ－２分沁及ＩＬ－２Ｒ表达的作用，低浓度Ｌｅｎ与ＰＭＡ和Ａ３２１８７有明显协同促进ＩＬ－２分沁及ＩＬ－２表达的作用，随深度增高，这种促进作用逐渐减弱，高浓度度Ｌｅｎ则出现抑制作用。提示Ｌｅｎ对人淋     

人血小板生成素在大肠杆菌中的表达

血小板生成素(thrombopoietin,TPO)是血液学界寻找已久的,但只是在1994年才被克隆成功的造血调控因子。由于它具有特异刺激巨核细胞-血小板生成的作用,人们普遍预期它对于治疗各种原因引起的血小板减少症会具有显著效果,可能是继G-CSF、EPO之后的又一重要药物。     

人小分子量尿激酶基因表达质粒的构建及其在哺乳动物细胞中的表达

人小分子量尿激酶基因表达质粒的构建及其在哺乳动物细胞中的表达崔宁，宋后燕，韩琴琴，陈灏珠尿激酶（ＵＫ）是目前我国治疗血栓性疾病应用较广的药物。正在开发的小分子量尿激酶（ｍＵＫ）具有更大的优越性。用基因工程技术可望生产出高纯度的重组ｍＵＫ，将ｍＵＫｃＤ...     

人IL-12基因与糖基化磷脂酰肌醇信号肽序列融合基因真核双表达质粒的构建及表达

目的将糖基化磷脂酰肌醇（GPI）信号肽序列与人白细胞介素12（hIL-12）基因拼接成融合基因,构建该融合基因的真核双表达质粒,并检测融合基因在肾癌细胞的表达。方法将人胎盘碱性磷酸酶-1（hPLAP-1）C末端信号肽序列与hIL-12的P40亚基基因进行拼接,亚克隆至真核双表达质粒pBudCE4．1,再将IL-12的P35亚基基因亚克隆至pBudCE4.1的另一个多克隆位点。酶切及测序鉴定质粒。将质粒转染肾癌细胞株RC-2,激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测其表达。结果分别成功扩增出IL-12 P40基因987bp和P35基因762bp,合成hPLAP-1C末端信号肽序列117bp,并将GPI信号肽序列与P40基因成功拼接,成功构建了真核表达载体pBudCE4．1／IL-12A／IL-12B-GPI（命名为pBIG）,经酶切及测序鉴定正确。激光共聚焦显微镜观察带锚定蛋白的IL-12在肾癌细胞膜上高表达,并能被磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C洗脱。结论真核双表达载体pBIG的构建及表达,为进一步制备肾癌疫苗奠定了基础。     

小鼠Wnt-3a基因真核表达载体的构建及其在cos-7细胞中的表达

目的：克隆小鼠胚脑中Wnt-3a基因片段，构建pSecTag2／Hygrn B—Wnt3a真核表达载体，观察其在cos-7细胞中的表达，为基因治疗脊髓损伤提供实验依据。方法：实验于2004-09／2005-03在安徽医科大学分子生物学实验室完成。选取清洁级孕13．5d的KM小鼠1只，脱颈处死，冰冷条件下迅速取出胚鼠，解剖显微镜下剥离胚脑，在无RNA酶污染的条件下迅速提取胚脑总RNA。利用反转录聚合酶链方法扩增小鼠胚脑Wnt-3a基因片段，将该基因片段克隆入T载体，聚合酶链反应法筛选并测序，双酶切后构建重组真核表达载体pSecTag2／Hygro B—Wnt3a。转染并筛选稳定表达的COS-7细胞，Western blot鉴定重组Wnt-3a蛋白的表达。结果：①反转录聚合酶链反应获得目的基因小鼠Wnt-3a cDNA：自胚鼠脑组织总RNA经反转录聚合酶链反应扩增后，凝胶电泳可见约1．1kh的特异性扩增片段，与预期获得产物大小相符。②pMD18-T／Wnt3a克隆质粒聚合酶链反应初步筛选与测序：测序报告所克隆的Wnt-3a为1058bp．通过Blast同源性分析，与GeneBank收录的序列一致，克隆小鼠Wnt-3a基因获得成功。③真核表达载体pSecTag2／Hygro B—Wnt3a的双酶切及测序：随机挑选10个克隆，聚合酶链反应扩增筛选出阳性克隆5个。经XhoⅠ和HindⅢ双酶切鉴定、测序及Blast分析鉴定重组质粒构建成功。④Western Blot鉴定重组小鼠Wnt-3a蛋白在cos-7细胞中的表达：脂质体转染cos-7后48h，Western Blot鉴定出在细胞内存在Wnt-3a蛋白的表达，转染pSecTag2／Hygro B—Wnt3a的COS-7细胞裂解液在45KD处出现阳性条带，而培养上清中未能检测到蛋白的表达。结论：小鼠胚脑Wnt-3a基因的真核表达载体pSecTag2／Hygro B—Wnt3a构建成功，转染COS-7细胞后能够表达重组Wnt-3a蛋白。