结核分枝杆菌感染T细胞斑点试验对淋巴结结核的辅助诊断价值研究

目的 探讨评价结核分枝杆菌感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）对淋巴结结核的辅助诊断价值.方法 本研究募集北京胸科医院2011年7月至2013年12月收治住院的淋巴结肿大患者185例,最终分为确诊结核性淋巴结组（51例）、非结核性淋巴结疾病组（105例）,其余诊断不明确或临床诊断淋巴结结核患者予以剔除.所有患者均行外周血T-SPOT.TB及免疫印迹法检测结核分枝杆菌抗体.采用SPSS 17.0进行统计学分析,非正态分布的计量资料数据用中位数（上下四分位数）[M（P25,P75）]表示,两组间斑点形成个数（SFCs）数据比较采用Mann WhitneyU检验,组间样本率的比较采用x2检验,以P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 T-SPOT.TB和免疫印迹法检测结核分枝杆菌抗体的敏感度分别为92.2％（47/51）和60.8％（31/51）,特异度分别为79.0％（83/105）和77.1％（81/105）,T-SPOT.TB敏感度显著高于免疫印迹法检测结核分枝杆菌抗体方法,差异有统计学意义（x2=13.95,P＜0.01）.结核分枝杆菌特异抗原刺激下结核性淋巴结组SFCs中位数为242个（57,621个）/106外周血单个核细胞（PBMCs）,非结核性淋巴结疾病组SFCs中位数为0个（0,20个）/106 PBMCs,结核性淋巴结组SFCs数量显著高于非结核性淋巴结疾病组,应用Mann Whitney U检验,两组间差异具有统计学意义（U=472.0,P＜0.01）.在T-SPOT.TB结果阳性的69例患者中,47例结核性淋巴结患者SFCs的M（P25,P75）为280个（98,684个）/106 PBMCs,显著高于对照组22例非结核性淋巴结疾病患者SFCs的M（P25,P75）52个（35,93个）/106 PBMCs（U=146.5,P＜0.01）.结论 T-SPOT.TB方法在淋巴结结核的诊断中有着较高的敏感度,有可能成为淋巴结结核辅助诊断的一项重要手段.     

ADA、IFN-γ及结核分枝杆菌抗体联合检测对结核性胸膜炎的诊断价值

目的探讨ADA活性、IFN-γ含量和结核分枝杆菌抗体联合检测对结核性胸膜炎的诊断价值。方法检测56例已经经组织病理学或病原学明确诊断的结核性胸膜炎患者,20例经细胞学或组织病理学明确诊断的恶性胸腔积液患者,以及12例其他渗出性胸腔积液患者的胸液和血清中的ADA活性和IFN-γ含量以及抗结核分枝杆菌抗体阳性率,经统计学处理后,评价各项指标对结核性胸膜炎诊断的灵敏度、特异度及临床诊断符合率。结果结核性胸液中ADA活性、IFN-γ含量分别为（50.98±13.07）U/L、（139.46±70.43）pg/ml,结核分枝杆菌抗体阳性率60.7%,与恶性胸液组和其他组比较差别有统计学意义,P<0.05。以45U/L为临界值,ADA对结核性胸膜炎诊断的灵敏度为80.4%,特异度96.9%,临床诊断符合率为86.4%;IFN-γ以100pg/ml为临界值对结核性胸膜炎诊断的灵敏度为83.9%,特异度93.8%,临床诊断符合率为87.5%;胸液中结核分枝杆菌抗体检测对结核性胸膜炎诊断的灵敏度为 60.7%,特异度为87.5%,临床诊断符合率为70.5%。以3项指标联合检测任何2项阳性对结核性胸膜炎诊断的灵敏度为 92.9%,特异度100%,临床诊断符合率为95.5%。结论ADA活性、IFN-γ含量和结核分枝杆菌抗体联合检测可极大地提高结核性胸膜炎的诊断效能。     

结核分枝杆菌IFN-γ酶联免疫斑点检测的建立和初步应用

目的建立结核分枝杆菌特异性IFN-γ酶联免疫斑点（Elispot）检测技术,初步评价其在诊断结核分枝杆菌感染的敏感性和特异性。方法采用以早期分泌抗原靶6kDa蛋白（ESAT-6）抗原为主的重组蛋白库、多肽库为抗原,建立结核分枝杆菌特异性IFN-γElispot检测技术（简称Elispot）;应用该技术对32例肺结核病患者、205例健康对照者和18例肺部其他疾病对照的外周血结核菌特异性IFN-γ水平进行检测;结核病人和部分健康对照同时采用全血干扰素试剂（Quantiferon-TB-Gold,QFT-G）进行平行检测。结果采用Elispot检测,结核患者的阳性率最高（75.0%）,显著高于健康对照（7.3％）和其他肺部疾病患者（11.1%）,结核患者反应水平与其他两组比较均差异有统计学意义（P<0.05,P<0.05）。采用QFT-G在结核病人中的IFN-γ应答阳性率为78.1%,与Elispot检测结果进行配对比较无显著性差别（χ²=1.6,P>0.05）。 结论建立了结核菌特异性IFN-γ Elispot检测技术,该技术在诊断结核菌感染的初步应用显示出较好的特异性和敏感性,但仍需进一步扩大样本数观察。     

两种结核血清诊断试剂盒敏感性和特异性的比较研究

目的评价美国Active TbDctcet ELISA System诊断试剂盒诊断活动性肺结核的敏感性,特异性和重复性。方法采用Active酶联免疫诊断试剂盒对51例结核病人和70例健康对照的血清标本进行检测,同时与国产试剂进行平行比较分析。结果采用Active试剂,检测结核病人的敏感性为76．5％,特异性为64、3％。与国产试剂进行平行比较,敏感性和特异性方面无显著性的差别。不同实验室对相同标本的检测结果显示,Active试剂盒具有很好的重复性。结论Active试剂盒对诊断活动性肺结核有一定作用,临床应结合其他检验结果进行综合分析。     

rRNA扩增方法对结核分枝杆菌临床诊断作用的评估

目的 评价rRNA扩增方法 在临床应用的效果。 方法 选取到北京胸科医院、山东省胸科医院、河南疾控中心结核病防治所3个机构就诊的肺结核可疑症状者及健康志愿者的痰标本为研究对象,共纳入551例痰标本,对每例痰标本均进行涂片显微镜检查、罗氏培养、rRNA扩增试验以及实时荧光定量PCR。与罗氏培养方法 比较分析rRNA扩增方法 的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值以及与实时荧光定量PCR扩增方法 的一致性。 结果rRNA扩增方法 的敏感性为98.5%,特异性为95.0%,阳性预测值为95.0%,阴性预测值为98.5%,rRNA扩增方法 在涂阳标本和涂阴标本间的敏感度和特异度差异均有统计学意义（χ²=9.60,P=0.002;χ²=79.80,P<0.01）。与PCR检测结果的一致性为93.8%,涂阳和涂阴标本中2种方法 的一致性差异有统计学意义（χ²=4.45,P=0.035）。 结论 rRNA扩增方法 的敏感度和特异度均较好,且能明显缩短诊断时间,该方法 是一种较有前景的结核病实验室诊断方法 。     

γ干扰素释放试验在肺结核和非结核分枝杆菌肺病鉴别诊断中的应用价值

目的 探讨结核分枝杆菌特异性γ干扰素释放试验（interferon gamma release assays,IGRAs）在鉴别诊断肺结核和非结核分枝杆菌（non-tuberculous mycobacteria,NTM）肺病中的应用价值.方法 选择深圳市第三人民医院2011年1月至2013年5月334例收住于肺科住院部感染了分枝杆菌的肺病患者.采用反向斑点杂交技术对334例分枝杆菌感染的肺病患者痰培养分离的分枝杆菌进行菌种鉴定;采用IGRAs测定患者外周血结核分枝杆菌抗原特异性γ干扰素（IFN-γ）应答;采用结核分枝杆菌特异性荧光定量PCR技术检测痰标本中结核分枝杆菌DNA.结果 在334例分枝杆菌感染的患者中,240例的菌株为结核分枝杆菌,94例为NTM; 240例肺结核患者中痰结核分枝杆菌DNA PCR检测阳性率为74.58％（179/240）,IGRAs检测阳性率为77.08％（185/240）;94例NTM肺病患者中,结核分枝杆菌DNA PCR检测阳性率为10.64％（10/94）,IGRAs检测阳性率为20.21％（19/94）.结核分枝杆菌DNA PCR和IGRAs检测鉴别诊断肺结核和NTM肺病的敏感度分别为74.58％（179/240）、77.08％（185/240）,特异度分别为89.36％（84/94）、79.79％（75/94）;两种方法联合检测肺结核的敏感度为%.75％（225/240）、特异度为77.66％（73/94）.结论 IGRAs对于鉴别肺结核和NTM肺病具有较好的应用价值,联合应用结核分枝杆菌DNA PCR和IGRAs可以显著增加鉴别诊断的准确性,对于早期抗结核药物的选择具有重要的指导意义.     

结核分枝杆菌感染T细胞斑点试验的临床应用价值

目的 寻找一种敏感度和特异度都较高的临床诊断方法,以提高结核病的确诊率.方法 搜集110例经实验室与临床诊断确诊的患者,采用结核分枝杆菌感染T淋巴细胞斑点试验(T-SPOT.TB),检测其诊断结核病的敏感度和特异度.同时行PPD试验的患者104例.结果 66例结核患者中56例T-SPOT.TB检测阳性,敏感度为84.85％；66例中61例作PPD试验,42例为阳性结果,敏感度为68.85％,两者比较差异有统计学意义(x2=7.76,P＜0.05)；44例非结核性疾病患者中39例T-SPOT.TB检测阴性,特异度为88.64％；44例中43例作PPD试验,31例阴性,特异度为72.09％,两者比较差异有统计学意义(x2=4.72,P＜0.05).T-SPOT.TB检测在敏感度、特异度上均显著优于临床常用的PPD.T-SPOT.TB阳性预测值91.80％(56/61). PPD试验阳性预测值76.36％(42/55).结论 T-SPOT.TB试剂盒在检测结核病诊断方面具有很高的应用价值.     

γ-干扰素释放试验（IGRA）对于诊断结核分枝杆菌感染的应用

目前世界上有三分之一的人有结核分枝杆菌感染,而且其中大约10％会发展成活动性结核。但是没有一种试验可以做为诊断结核分枝杆菌感染的金标准。     

免疫层析法试剂盒快速鉴别结核与非结核分枝杆菌临床菌株的应用价值

目的评估免疫层析法试剂盒快速鉴别结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌临床菌株的试剂盒应用价值。方法用免疫层析法试剂盒检测240株分枝杆菌菌株和50株其他微生物菌株,包括38株细菌、12株真菌、65株NTM,175株结核分枝杆菌临床菌株。结果结核分枝杆菌株检测阳性为173株,灵敏度为98.9%;115株其他微生物菌株检测结果均为阴性,特异性100%。结论免疫层析法试剂盒能快速、准确鉴别结核与非结核分枝杆菌临床菌株,无需其他设备。     

环介导等温扩增法检测临床标本中结核分枝杆菌的系统评价

目的采用Meta分析的方法评价环介导等温扩增法（LAMP）检测临床标本中结核分枝杆菌的准确性。方法通过检索PubMed、Embase、WebofScience、CochraneLibrary、CNKI、万方、维普数据库广泛收集文献,根据QUADAS质量评价标准评价纳入文献的质量,最终纳入16篇相关文献,共计18项研究。应用Meta—Disc软件对环介导等温扩增法检测临床标本中结核分枝杆菌的敏感度、特异度、诊断比值比进行合并分析,对纳入的研究绘制受试者工作特征曲线。对纳入的研究进行异质性检验,采用Meta回归分析异质性的来源。Meta回归会生成相对诊断比值比（relativediagnosticoddsratios,RDOR）。当RDOR〉1．0,表明某个研究特征比没有这个特征的诊断准确性要高。结果最终纳入16篇文献,共计18项研究综合分析所有数据,合并敏感度为0．91（95％CI：0．90～0．93）;合并特异度为0．97（95％CI：0．96～0．97）;合并诊断比值比为283．02（95％CI：157．37～509．00）;受试者工作曲线曲线下面积为0．9829。研究间异质性来源与结果判断相关,紫外灯判读试验的精确性比肉眼判读试验的精确性高5．66倍（RDOR--5．66,95％CI：1.32-24．22,P=0．0225）。结论对纳入的研究分析证实,环介导等温扩增法检测临床标本中的结核分枝杆菌的敏感度和特异度很高,表明该方法在结核病的快速诊断方面具有优势。     

罗氏COBAS HCV RNA定量一代和二代检测试剂对556例丙型肝炎患者HCV RNA定量检测结果的比较

目的评估两代HCV核酸定量检测试剂的临床应用。方法收集南京市第二医院住院和门诊HCV感染者556例,采用罗氏COBAS HCV核酸定量一代和二代检测试剂检测其标本,其中HCV RNA阴性血浆93份;HCV RNA阳性血浆350份;血清血浆配对标本52份;干扰样本61份。将阳性血浆样本分为3组,低浓度(3次方及以下)61例、中浓度(4、5次方组)191例和高浓度89例(6次方及以上)。采用线性分析法,计算相关系数和回归方程,比较各组之间的关系。结果总体分析2种HCV RNA定量检测试剂的结果具有相关性(r=0.948,P0.05)。低浓度组的线性回归方程y=0.9809x+0.1359,r2=0.8047,P0.05;中浓度组的线性回归方程y=0.8130x+1.0727,r2=0.6956,P0.01;高浓度组的线性回归方程y=0.6746x+1.8914,r2=0.3088,P0.01。血清血浆有效对比检测结果的相关性良好(r2=0.9698,P0.05),线性回归方程y=0.9368x+0.4469。结论两代HCV RNA定量检测试剂符合程度较好,在低浓度组中具有良好的相关性,更适用于临床HCV RNA低浓度的检测。     

荧光定量PCR技术在肺结核诊断中的临床应用研究

目的评价荧光定量PCR技术在肺结核病诊断中的应用价值。方法采用荧光定量PCR、金胺O染色荧光镜检和培养法同时检测860例肺结核患者的痰标本,对检测结果进行比较。结果荧光定量PCR检测灵敏度可达10~100 cfu/ml,重复性好,对其他呼吸道病原体检测结果均为阴性。肺结核患者痰标本荧光定量PCR检测阳性率要高于金胺O染色荧光镜检和培养法的阳性率,差异有统计学意义(P0.01)。结论应用荧光定量PCR方法检测结核杆菌,具有特异、灵敏、简便、快速的特点,可作为结核病诊断的方法之一。     

结核抗体lgG/lgM检测在肺结核和肺外结核中的诊断价值

目的 探讨异种血清抗体检测技术在结核病诊断中的应用价值。方法 采用IgG/IgM抗体试剂盒分别检测102例结核病患者(包括73例肺结核和29例肺外结核)、223例其他肺部疾病患者和100例对照者结核感染情况,以临床诊断为标准评价该方法的敏感度和特异性,同时分别与痰菌培养及痰涂片平行检验的结果作比较,统计学分析采用χ²检验。结果 结核抗体IgG/IgM检测结核病患者的敏感度为74.51%、特异度为91.64%。结核抗体IgG/IgM检测肺结核和肺外结核的敏感度分别为82.19%、55.17%,肺内和肺外结核的敏感度差异有统计学意义(P＜0.05),结核抗体lgG/IgM检测结核患者阳性检出率明显高于痰培养法和痰涂片法(P<0.05)。102例结核病患者年龄段分组分析,少年组和老年组检出率分别为58.33%、36%,远低于青年组和中年组的96.15%和89.74%。不同年龄组间进行卡方比较分析显示,P＜0.05,差异有统计学意义。425例标本中,共发现8例非结核分枝杆菌,其中6例胞内分枝杆菌, 2例脓肿分枝杆菌,lgG/lgM抗体检测均为阴性。结论 IgG/IgM血清抗体检测肺内、外结核具有快速方便、经济和较高的敏感度,适合用于临床结核筛查。     

结核分枝杆菌抗体检测试剂及相关问题的探讨

结核分枝杆菌抗体检测试剂在结核病辅助诊断中的作用已写入相关指南。WHO对结核抗体检测试剂在临床的应用价值提出了质疑。作者分析了结核分枝杆菌抗体检测试剂在中国的注册现状并剖析了可能的原因;同时,对结核抗体检测试剂注册申报中的主要原材料、分析性能,以及临床试验中的重点问题进行了阐述。     

耐多药结核病快速诊断试剂盒检测耐药结核分枝杆菌的评价

目的 评价用耐多药结核病快速诊断(GenoType MTBDRplus)试剂盒检测耐利福平、异炳肼MTB的效果.方法 选取75株MTB临床分离株,采用耐多药结核病快速诊断试剂盒检测其中的耐药MTB,评价其敏感度和特异度及可重复性,并与常规的药物敏感性试验方法相比较.结果 耐多药结核病快速诊断试剂盒对上海地区的MTB临床分离株中耐利福平和耐异烟肼菌株的敏感度分别为98.0%和86.5%,对敏感菌株的特异度为100%.而在重复性试验中,耐多药结核病快速诊断试剂盒多次结果完全一致,重复性达到100%.结论 耐多药结核病快速诊断作为快速检测耐药MTB的试剂盒,对耐利福平和耐异烟肼菌株具有较高的敏感度和特异度,在上海地区有较好的应用前景.     

TB-SA基因检测在结核病诊断的临床应用研究

目的　研究结核分枝杆菌特异性基因(Tuberculosis-Specific AntigenTB-SA)在结核病诊断中的应用价值。方法 选择2004年4—9月期间在成都市结核病防治院的住院结核病患者371例。其中肺结核307例;肺外结核64例(结核性胸膜炎47例、结核性腹膜炎7例、结核性脑膜炎10例);非结核病的呼吸系统疾病患者61例(肺炎4例、肺癌9例,急性支气管炎7例、慢性支气管炎14例、哮喘10例,COPD12例、肺间质纤维化1例、支气管扩张3例、矽肺1例);同时选择无结核疾患健康志愿者40例,全部选例均知情同意。入选肺结核病例和健康选择痰液、肺外结核病例选择胸腔积液、腹腔积液、脑脊液等标本进行抗酸杆菌浓缩集菌,结核杆菌培养和TB-SA基因扩增(PCR)。结果 307例肺结核患者中PCR检测TB-SA阳性259例,敏感性为84.4%(259/307);细菌学培养阳性193例,敏感性62.9%(193/307);痰浓缩集菌镜检阳性95例,敏感性30.9%(95/307)。64例肺外结核患者中,TB-SA阳性35例;敏感性54.7%(35/64);核杆菌培养阳性5例,敏感性7.8%(5/64)。61例非结核呼吸系统病患者中,TB-SA阳性2例,特异性96.7%(59/61)痰涂片无阳性病例。40例健康志愿者,TB-SA及痰涂片均无阳性出现,特异性达100%(40/40)。结论 TB-SA基因检测的特异性及敏感性都取得了满意的效果。操作也较为简单。     

结核感染T细胞斑点实验临床检测研究

目的探讨结核感染T细胞斑点实验（T-SPOT.TB）在临床快速诊断结核病中的应用价值。方法利用T-SPOT.TB方法检测外周血中结核感染特异的效应T淋巴细胞的频率。同时与涂片抗酸染色、BACTEC960培养及实时定量PCR方法做比对。结果164例结核病患者中,155例T-SPOT.TB阳性,提示方法敏感度为94.5％（155/164）,显著高于其他方法。60例非结核呼吸道疾病对照组中有5例阳性,20例健康对照均为阴性,方法的特异度为93.8％（75/80）。结论T-SPOT.TB方法敏感度和特异度均非常高,可用于结核病的快速诊断,尤其是对于结核病和非结核分枝杆菌病的早期鉴别。     

脂阿拉伯甘露聚糖的提纯及其对肺结核的诊断价值

目的 初步建立提取纯化结核分枝杆菌（M .TB）脂阿拉伯甘露聚糖（lipoarabinomanan,LAM）的方法 ,并将其用于血清标本检测,评价其对肺结核的诊断价值。 方法 M .TB菌体经冰浴超声破碎,乙醇回流,DNase I 酶RNase酶除去DNA和RNA, 热酚水法去蛋白,氯仿甲醇去酚和脂质,得到粗制的脂多糖。经Sephacryl-100凝胶过滤层析分离纯化,得到LAM。将其作为抗原,通过免疫金渗滤法检测涂阳肺结核和对照血清标本中的LAM抗体。 结果 所得LAM经SDS-PAGE银染,与对照标准品大小一致,为37 kDa。血清LAM抗体检测对肺结核诊断的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、和涂片符合率分别为91.7%、87.8%、92.7%、86.2%、90.2%。 结论 成功提取到LAM抗原,用其检测血清结核抗体显示出理想的敏感性和特异性,有望成为结核病血清学快速诊断方法之一。