黄曲霉菌株的分离、鉴定及产毒能力分析

对几株从发霉粮食中分离出的黄曲霉菌菌株进行形态学和分子生物学鉴定,并进行发酵培养和产毒能力的HPLC测定。结果表明:试验分离菌株均为黄曲霉菌株且含有黄曲霉毒素产生的关键基因aflR;黄曲霉菌株之间产毒能力差异巨大:黄曲霉菌株3.4408产毒量最高,黄曲霉菌株HDWS产毒量最低,黄曲霉菌株3.2572甚至不产生黄曲霉毒素;产生黄曲霉毒素菌株中部分黄曲霉菌株产生4种黄曲霉毒素AFB1、AFB2、AFG1、AFG2,黄曲霉菌株HDWH只产生黄曲霉毒素AFB1、AFB2。     

黄曲霉菌株的筛选和产毒能力鉴定

本研究从发霉粮食中分离出数株黄曲霉菌菌株,并进行了形态学和分子生物学鉴定。为了探究分离菌株与黄曲霉标准菌株之间产毒能力的差异,通过对分离菌株和黄曲霉标准菌株进行发酵培养和HPLC测定,分析确定产毒能力。结果表明黄曲霉菌株之间产毒能力差异巨大：黄曲霉菌株3.4408产毒量很高,黄曲霉菌株HDWH产毒量很低,黄曲霉菌株3.2572甚至不产生黄曲霉毒素;产生黄曲霉毒素菌株中部分黄曲霉菌株产生四种黄曲霉毒素AFB1、AFB2、AFG1、AFG2,黄曲霉菌株HDWS只产生黄曲霉毒素AFB1、AFB2。     

非脱羧勒克菌wt16对黄曲霉菌生长与产毒的抑制作用

黄曲霉菌及其毒素严重威胁农产品质量安全,本文旨在探寻非脱羧勒克菌对黄曲霉菌及其毒素污染防控效果。从湖北黄陂分离筛选出一株非脱梭勒克菌wt16,将其与黄曲霉菌在液体培养基中共培养后测定非脱羧勒克菌wt16菌株对黄曲霉菌生长及产毒的抑制率。结果表明,在沙氏液体培养基中,非脱羧勒克菌wt16能明显抑制黄曲霉菌的生长及产毒,对其菌丝生长的抑制率为77%~92%,对其产毒的抑制率为90%~96%。通过扫描电子显微镜观察发现,非脱羧勒克菌wt16能改变黄曲霉菌丝的形态,使得黄曲霉菌丝体由规则的球体聚集成不规则形状,单个菌丝会由细长型断裂成小截形态,菌丝表面也变得更为光滑;并且发现wt16在花生粉及未受机械损伤的花生颗粒上对黄曲霉菌的生长及产毒均表现出很强的抑制作用。进一步研究发现,非脱羧勒克菌wt16菌株发酵上清液中含有能抑制黄曲霉毒素合成的有效成分,且该发酵上清液的制备以培养4 d以上为最佳,培养温度为15~40 ℃。     

香菇纤维素衍生物抑制黄曲霉菌产毒的研究

黄曲霉毒素具有诱导突变、抑制免疫和致癌作用。控制黄曲霉毒素污染一直是世界性难题,也是近年来的研究热点之一。实验研究了香菇纤维素衍生物GPX抑制黄曲霉菌产毒活性,初步探究了GPX抑制黄曲霉菌产毒的作用机制。结果表明,10、50μg/mL的GPX对黄曲霉菌产毒的抑制率分别达到70%、95%,而100、250、500、750、1000μg/mL的GPX对黄曲霉菌产毒的抑制率均可达到100%,抑制活性极其明显。GPX离体抗氧化能力很低,但是能够缓解黄曲霉菌丝的氧化胁迫。此外GPX促进了黄曲霉细胞内囊泡过早与大液泡的融合,该现象能够抑制黄曲霉毒素的产生。      

茶多酚对黄曲霉生长及产毒能力的影响

基于氧化应激与黄曲霉毒素生物合成的持续相关性,研究了天然抗氧化剂茶多酚对黄曲霉生长及产毒的影响,并通过扫描电镜观察茶多酚对黄曲霉菌丝体形态的影响,旨在寻找一种安全、高效、环境友好型的抑菌剂来控制食品中黄曲霉毒素的污染。结果表明:茶多酚对黄曲霉菌落生长有一定抑制作用,在10 mg/m L浓度下,抑制率达到48.41%,使黄曲霉菌落生长速率为(5.57±0.16)mm/d,延滞期为(1.32±0.13)d;而茶多酚对黄曲霉产毒抑制效果显著,在1,5和10 mg/m L浓度下,茶多酚对AFB1生物合成的抑制率分别达到了60.15%,87.12%和97.48%;且茶多酚可严重破坏黄曲霉菌丝体的超微结构。因此,茶多酚可作为天然抑菌剂应用于食品与饲料中,控制黄曲霉毒素的污染。     

湘派卤制品卤汁中黄曲霉毒素产毒菌的筛选鉴定及其产毒能力测定

以湘派卤制品卤汁为研究对象,对其贮存过程中产黄曲霉毒素的微生物(产毒菌)进行筛选鉴定并对产毒能力进行测定。采用平板稀释涂布法和紫外荧光法对湘派卤汁进行产毒菌的初筛;对初筛菌株的ITS序列进行PCR扩增、测序,测序结果经NCBI同源性对比、MEGA6.0软件构建系统发育树进行分子生物学鉴定;应用HPLC-MS/MS检测各产毒菌培养液中黄曲霉毒素(aflatoxin, AFs)含量,确定各产毒菌的产毒能力。经平板稀释涂布法、紫外荧光法和分子生物学共筛选鉴定出5株产毒菌株,其中有4株是黄曲霉(Aspergillus flavus),1株为寄生曲霉(Aspergillus parasiticus);经HPLC-MS/MS法确定4株黄曲霉均不产生AFs,寄生曲霉产生黄曲霉毒素B₁(AFB₁)和黄曲霉毒素G₁(AFG₁)。AFB₁在第3天和第7天的含量分别为6.92、8.08μg/L,AFG₁在第3天和第7天的含量分别为5.80、7.24μg/L;湘派卤汁由于贮存条件...     

低温等环境条件对黄曲霉菌产毒的影响研究

目的研究黄曲霉的产毒条件,预测影响毒素产生和积累的主要环境条件。方法选取接种量、温度、通氧量、pH值作为参考指标,根据单因素实验结果研究环境条件对黄曲霉毒素产生量的影响。结果培养条件各因素影响程度由高到低分别为:pH值温度转速接种量。结论通过改变储藏环境条件控制产毒菌产毒是一个高效易行的方法,较低的温度和良好的通风,即凉爽干燥的储藏环境,加上弱碱性条件可以有效降低黄曲霉毒素的产生。     

辣椒粉中黄曲霉菌生长及其产毒规律的预测模型构建

为掌握黄曲霉菌在辣椒粉基质中的生长及产黄曲霉毒素规律,检测温度为20、28、37、45 ℃,水分活度为0.85、0.90、0.93、0.97及pH值为4.5、5.0、5.5环境因子条件下菌株生长及毒素累积数据。采用Baranyi and Roberts模型估计速率菌落最大径向生长（μmax,mm/d）,采用修正的二阶多项式模型、Arrhenius模型及三阶多项式模型描述环境对μmax的综合影响。同时构建环境、时间与黄曲霉毒素含量的二阶多项式模型。结果表明对黄曲霉生长,修正的二阶多项式模型拟合效果最优,决定系数（R2）＞0.99,偏离因子（Bf）、精确因子（Af）分别为1.077 0和1.131 9。对黄曲霉毒素累积量也达到了较优预测,R2＞0.97。研究结果可为辣椒粉的安全储藏及加工提供可借鉴的基础数据,并为延长辣椒粉货架期提供理论依据。     

利用监测CO_2方法预警储藏玉米中黄曲霉菌产毒

本文研究了玉米储藏期间真菌产生二氧化碳(CO2)气体的特点,试验结果表明,当灰绿曲霉等干生性真菌生长时,储藏容器中CO2浓度恒速升高;具有快速生长或产毒特点的真菌生长时则出现CO2产气率加速的过程,如玉米中以黄曲霉菌为优势菌时,储藏10 d后产生CO2气体的速率提高4.6倍。进一步研究玉米储藏期间不同原始优势菌、不同真菌生长速率及温度对产生CO2的影响,结果表明,在不同原始优势菌的玉米中均可出现黄曲霉菌的生长和产毒,黄曲霉菌为原始优势菌的AFB1产生量比其他试验组高3~7倍,它们均表现产气速率加速的特征;真菌生长速率及温度可影响储藏玉米中CO2和AFB1的产生量,但在产生AFB1的玉米中,均有CO2产气速率加速的现象。将储藏玉米中CO2产气速率变化与检出AFB1的时间相比,发现前者可提前7 d以上。因此,利用玉米储藏中真菌产生CO2的特征可预警黄曲霉毒素的污染。     

黄曲霉菌在蜜饯、水果罐头上生长及其产毒能力的试验

<正>黄曲霉菌能在花生玉米和其他许多农产品上产生黄曲霉毒素(AFT),引起人和动物的急慢性中毒,并具有明显的致癌力,国内外有关报导甚多,已为人们所熟知。一般食品在制备、储藏、运输和销售过程中,不可避免地受环境中的菌丛,甚至产毒菌株所污染。由于霉菌的生活力强,对高     

Effect of Soybean Volatile Compounds on Aspergillus flavus Growth and Aflatoxin Production

ABSTRACT:  Soybean homogenates produced volatile compounds upon exposure to lipase. These induced volatiles were identified by SPME. Seventeen volatile compounds identified by SPME were chosen for determination of their ability to inhibit Aspergillus flavus growth and aflatoxin B₁ (AFB1) production in a solid media assay. These volatiles included aldehydes, alcohols, ketones, and furans. Of the tested compounds, the aldehydes showed the greatest inhibition of fungal growth and AFB1 production. These compounds inhibited up to 100% of the observed growth and AFB1 production as compared to the controls. The greatest activity by the aldehydes to disrupt growth was ranked as follows: 2,4 hexadienal > benzaldehyde > 2-octenal > ( E )-2-heptenal > octanal > ( E )-2-hexenal > nonanal > hexanal. The greatest activity by the aldehydes to reduce AFB1 was ranked as follows: ( E )-2-hexenal > 2,4 hexadienal > ( E )-2-heptenal > hexanal > nonanal. ( E )-2-hexenal and ( E )-2-heptenal were tested further in an A. flavus -inoculated corn kernel assay. Both compounds prevented colonization by A. flavus and eliminated AFB1 production when exposed to compound volumes < 10 μL as also shown in the solid media assay. The results suggest that soybeans react to lipase by production of potent antifungal volatiles.     

吲哚对黄曲霉生长及产毒的抑制作用

本文研究了吲哚对黄曲霉的生长以及产毒的抑制作用。通过96孔板微量法发现吲哚能够抑制黄曲霉的生长,其最小抑制浓度(MIC)为100μg/m L;进而采用差量法测定了吲哚对黄曲霉菌丝生长量的抑制作用,结果表明200μg/m L的吲哚处理可以完全抑制黄曲霉的菌丝生长。此外,通过高效液相色谱分析发现吲哚浓度达到50μg/m L时,尽管对菌丝生长量没有明显影响,但是可以有效地抑制黄曲霉毒素B1的产生。这些结果说明吲哚抑制毒素产生并不是通过抑制生长来实现的。为了进一步了解吲哚对毒素产生的抑制机制,本研究通过RT-PCR分析了吲哚对黄曲霉产毒相关基因表达的影响。结果显示吲哚对产毒调控基因afl R的影响与其对毒素的作用趋势相同,同时吲哚还能够下调其他一些产毒相关基因afl K和alf D的表达。我们的研究结果表明吲哚具有很高的开发价值应用于粮食和饲料中黄曲霉毒素污染的控制。     

云南大叶种晒青毛茶提取物对产毒黄曲霉生长及产毒的影响

普洱茶在发酵过程中,微生物组成十分复杂,尤其是黑曲霉等霉菌起到主要作用,因此一些消费者担心普洱茶在发酵过程中受到黄曲霉毒素(AFS)的污染。本文通过测定菌落直径、孢子萌发及菌丝体干重等方法研究云南大叶种茶提取物对产毒黄曲霉AS3.4408生长的影响;采用紫外荧光法和HPLC法研究云南大叶种茶提取物对产毒黄曲霉AFS生物合成的影响;并将产毒黄曲霉AS3.4408接种到云南大叶种茶叶中,检测茶叶中的AFS含量,以求对普洱茶的安全性进行评估。研究表明,云南大叶种茶提取物对产毒黄曲霉AS3.4408菌落的生长及产毒均具有显著的抑制作用,且存在明显的剂量依赖关系;将产毒黄曲霉AS3.4408接种到云南大叶种茶叶中,菌株生长良好,但茶叶基质经HPLC检测,未检测到黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2,表明云南大叶种茶中的某种(些)成分对黄曲霉毒素的生物合成具有抑制作用。     

真菌黄曲霉对氟磺胺草醚的最佳降解条件研究

采用高效液相色谱法测定真菌黄曲霉在不同条件下对氟磺胺草醚的降解效率,确立降解菌株黄曲霉(TZ1985)对氟磺胺草醚的最佳降解条件。结果表明:在不调节反应液pH条件下,当氟磺胺草醚的浓度为10mg/L、黄曲霉接种量为3%的菌悬母液、温度为25℃、振荡培养5d时,真菌黄曲霉菌株可以降解92.5%以上的氟磺胺草醚。      

粮油食品中黄曲霉毒素去除方法研究进展

黄曲霉毒素广泛存在于粮油食品中,给全球农作物生产造成巨大经济损失。黄曲霉毒素具有极强的毒性和致癌性,严重威胁着人类的健康,迫切需要寻找一种有效、安全、环保控制黄曲霉生长或降解黄曲霉毒素的方法。对物理方法、化学方法和生物方法抑制黄曲霉生长或降解黄曲霉毒素的研究进行了综述。     

Streptomyces alboflavus TD-1产挥发性抑菌物质对黄曲霉菌生长及其毒素的抑制作用

利用双皿对扣和气相色谱-质谱法,研究白黄链霉菌TD-1（Streptomyces alboflavus TD-1）在不同葡萄糖浓度培养基中的生长和挥发性有机化合物（volatile organic compounds,VOCs）代谢规律,通过荧光显微镜、扫描电子显微镜及高效液相色谱等方法,研究1-辛烯-3-醇对黄曲霉菌的抑菌机制。结果表明,高浓度葡萄糖（500 mmol/L）培养条件下,白黄链霉菌TD-1的初始生长速率与VOCs产生能力受到明显抑制,当葡萄糖浓度降至50 mmol/L左右,抑制得到解除。利用气相色谱-质谱分析发现,白黄链霉菌TD-1所产生的有效抑菌VOCs包括己醛、1-辛烯-3-醇、2-正戊基呋喃、2-甲基异冰片和苯乙酮等。其中,食品级VOCs 1-辛烯-3-醇在用量15 μL/L时可完全抑制黄曲霉的生长,对黄曲霉菌丝体和孢子形态具有明显的致畸作用,可破坏线粒体膜,抑制黄曲霉毒素B1合成速率至31.98%。说明葡萄糖浓度会影响白黄链霉菌TD-1生长和VOCs产量;1-辛烯-3-醇具有抑制黄曲霉菌生长和黄曲霉毒素B1合成的作用。     

Inhibitory effect of Aspergillus niger on the growth of Aspergillus ochraceus and Aspergillus flavus,and on aflatoxin formation

Aspergillus ochraceus and A flavus were grown on synthetic media (SM) supplemented with 50 or 200 ml litre^?1 SM on which A niger had been grown previously ( ‘A niger medium’ = ANM). Controls included SM acidified to pH 6.0 or 4.4, SM diluted with 50 or 200 ml litre^?1 water, and diluted-acidified SM. For both fungi, higher growth inhibition was recorded on ANM-containing SM than in the controls. Aflatoxin formation was markedly inhibited on SM to which 20 ml litre^?1 ANM extract (in methanol/chloroform, 2:1 v) had been added, although the growth of A flavus on that medium was almost the same as that in the control. It is concluded that the inhibitory effect of A niger on the growth of fungi should not be attributed merely to pH reduction, but also, mainly, to metabolites produced by the fungus in the growth medium, even at early stages of its growth.     

Use of PCR for Detecting Aspergillus flavus in Maize Treated by Gamma Radiation Process

The aim of this study was to verify the effects of gamma radiation process on the fungal DNA and the application of PCR in the detection of Aspergillus flavus in irradiated maize grains. The samples were inoculated with a toxigenic strain and incubated under controlled conditions of relative humidity, water activity, and temperature for 15 days. After incubation, the samples were treated with gamma radiation with doses of 5 and 10 kGy and individually analyzed. The use of PCR technique showed the presence of DNA bands of Aspergillus flavus in all irradiated samples that showed no fungal growth in agar medium.     

Rapid detection of aflatoxin-producing strains of the Aspergillus flavus group isolated from mixed feed and cereal grain in Spain

A total of 133 samples (mixed feeds and cereal grains) were examined in order to detect the incidence of strains of the Aspergillus flavus group. The ability to produce aflatoxin was tested in all strains isolated on cracked rice, aflatoxin-producing-ability (APA) medium and glucose-yeast extract agar (GYA) medium. Ten out of the 67 isolations were aflatoxin-producing strains in rice and GYA medium; only three of them were aflatoxin-positive on the APA test. Of those isolated 95% were identified as A. flavus. The GYA medium is the most efficient and easiest way to detect B₁, B₂, G₁ and G₂ aflatoxin-producing-strains.