一种简单快速的血清HBV－DNA模板的制备方法

一种简单快速的血清ＨＢＶ－ＤＮＡ模板的制备方法党双锁，徐仓宝，歧天茂，顾晓慧（医学分子生物学研究室西安７１００６１）ＰＣＲ技术已被广泛用于检测血清乙肝病毒（ＨＢＢ）ＤＮＡ［１］，以便确定是否有ＨＢＶ感染和有无传染性。在ＰＣＲ中，模板制备至关重要，优质...     

聚合酶链反应检测弓形虫核酸的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，设计了一对寡核苷酸引物，对弓形虫Ｂ１基因的保守序列进行体外扩增，显示该引物只对弓形虫核酸扩增，可对４个或４个以上弓形虫扩增出明显条带，检测弓形虫核酸的最低量为２．５ｐｇ。该ＰＣＲ对急性感染弓形虫的小鼠，于４８ｈ后就可从部分小鼠（２／５）的外周血中检测到弓形虫核酸，９６ｈ后全部小鼠（５／５）外周血中均检测到弓形虫核酸，而感染２４ｈ后可从其肝、脾、肾等组织中扩增到弓形虫核酸。对３４例孕妇外周血分别用ＥＬＩＳＡ及ＰＣＲ平行检测，ＥＬＩＳＡ测ＩｇＭ阳性者３例，ＰＣＲ扩增阳性者６例（其中３例ＩｇＭ亦阳性），表明ＰＣＲ具有较高的敏感性和特异性。     

散发性帕金森病α—synuclein基因突变的检测

目的 探讨α－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ基因右突变与散发性帕金森病人的关系。方法 分离ＰＤ组和对照组的外围血基因组ＤＮＡ，采用α－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎｘ基因特异引物对其第四外显子进行ＰＣＲ扩增，扩增产物用Ｔｓｐ４５Ⅰ酶切鉴定。结果 两组ＰＣＲ均可扩增出２１６ｂｐ的片段，ＰＣＲ产物不能被Ｔｓｐ４５Ⅰ酶切。结论α－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ基因已知点突变与散发性帕金森病可能无明确关系。     

纸层析发校法检测结核杆菌PCR扩增产物

目的 建立一种新的快速纸层析杂交技术，用于特异性检测带有生物素标记的合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增产物。方法 将特异性捕获探针固定在聚酯砜膜上，扩增产物置膜一端，经毛细作用，带有生物素标记的特异性ＤＮＡ分子固定于反应区，非特异性分子被洗脱，杂交物通过链霉亲和素硷性磷酸酶偶联物及底物（ＢＣＩＰ－ＮＢＴ）显色后判断结果，结果 这一技术允许在２５ｍｉｎ内交将结核杆菌经ＰＣＲ扩增后的ＤＮＡ１０ｐｇ检出，结论     

胎儿SRY基因用于产前诊断的初步研究

采用ＰＣＲ技术，对５０例胎儿组织ＤＮＡ进行了Ｙ染色体特异的ＳＲＹ基因扩增。扩增片段长度为２５０ｂｐ。结果显示：３２例早孕绒毛ＤＮＡ中，有１７例扩增出特异性片段．１５例未扩增出特异性片段，有、无特异性片段比例为１．１３３：１，接近胎儿自然出生性别之比；１８例中孕引产胎盘ＤＮＡ中８例阳性，１０例阴性，与引产胎儿实际性别完全一致。因ＰＣＲ扩增胎儿ＳＲＹ基因特异性强、灵敏度高，可用于早期胎儿性别的产前诊断。     

用PCR法检测胸液中结核杆菌DNA

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了３２例结核性渗出性胸膜炎和２０例非结核性疾病患者胸液中结核杆菌的６５ＫＤａ抗原蛋白编码基因的特异ＤＮＡ片段。结果表明，其检出率为７８．１３％，并具高度特异性。提示ＰＣＲ扩增ＤＮＡ技术对结核性渗出性胸膜炎是高度敏感和特异的早期、快速诊断方法。     

孕妇外周血PCR技术用于胎儿产前性别诊断的可靠性分析

采用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术，以Ｙ染色体特异重复序列Ｙ１．１、Ｙ１．２和ＳＲＹ基因编码区Ｐ１、Ｐ２为引物，分析了用孕妇外周血进行胎儿性别诊断的可靠性，并与绒毛样本进行了对比。结果表明：用孕妇外周血时，Ｙ１．１，Ｙ１．２引物的诊断符合率为７５％；Ｐ１、Ｐ２引物不能扩增出Ｙ特异ＤＮＡ序列。而用绒毛样本时，两种引物的诊断符合率均为１００％。结果提示：孕妇外周血ＰＣＲ技术用于胎儿性别诊断尚有待改进，而采用绒毛样本进行胎儿性别诊断更为可靠。     

套式RT-PCR检测肾综合征出血热病毒方法的建立及应用

针对汉坦病毒（Ｈａｎｔａｎｖｉｒｕｓ,ＨＶ）中国代表株（Ａ９、Ｒ２２）Ｍ基因片段设计分型引物（Ⅰ、Ⅱ型）,采用改进的异硫氰酸胍酚一步法（胍酚法）提取汉坦病毒ＲＮＡ,套式ＲＴ－ＰＣＲ检测稀释病毒上清,模拟病人血清和２０例急性期（１～７ｄ）血清样本。结果：能检测到模拟血清中少至几个ＰＦＵ病毒ＲＮＡ,敏感性５～１０ｆｇ。检测过程可在５ｈ内完成。２０例急性期患者血清检测阳性率为１００％,并能进行临床分型。扩增产物经打点杂交证实其特异性。而正常及非ＨＦＲＳ患者血清结果均为阴性。提示：套式ＲＴ－ＰＣＲ基因诊断技术优于传统的ＭａｃＥＬＩＳＡ、ＩＦＡＴ和ＲＰＨＩ诊断法。     

微量PCR法快速鉴定重组质粒

微量ＰＣＲ法快速鉴定重组质粒郭晏海，赵君庸，苏成芝，闫小君，肖乐义（西安生物化学教研室西安７１００６１）在分子生物学技术中，应用菌落原位杂交筛选目的基因的重组ＤＮＡ，由于它敏感而且特异性较高，已逐渐成为一种较为普遍的方法。但是该方法费时而且步骤繁琐，...     

PCR介导化学合成广谱细胞生长因子基因半分子

建立一种通过ＰＣＲ介导的单链法人工合成基因的新方法。方法采用固相亚磷酰胺法，化学合成广一长因子基因５’端半分子各寡核苷酸片段，其间按搭桥方式相接，通过重叠ＰＣＲ扩增的方法以获得全长半分子基因，再通过带酶切位点的两端引物扩增，以获得大量特异的半分子基因。     

PCR测定沙门氏菌,霍乱弧菌和副溶血弧菌的研究

从沙门氏菌鞭毛素基因序列，副溶血弧菌耐热溶血素基因序列和霍乱弧菌肠毒素基因序列中分别选择并合成一对引物，其ＰＣＲ扩增产物２６４Ｂｐ，２９３ｂｐ和２９２ｂｐ。对这三种菌的标准株，临床株及无关菌株的ＰＣＲ测定及酶切鉴定，均显示良好的特异性。     

血清Ⅲ型前胶原和甘氨胆酸联合检测对慢性肝病的诊断意义

血清Ⅲ型前胶原和甘氨胆酸联合检测对慢性肝病的诊断意义苌新明，薛挥，段仲壁，贾爱琳，冯新莉（西安第一临床医学院内科学教研室西安７１００６１）肝纤维化是引起肝功能障碍和肝硬化的重要病理基础。本文用放免法测定各种肝病患者血清Ⅲ型前胶原（ＰＣⅢ）和甘氨胆酸（...     

W基因组织表达的特异性

Ｗ基因是利用周转神经髓鞘蛋白ＰＭＰ－２２基因的编码区５’－及３’－序列引物，藉ＰＣＲ方法自人脑胶质瘤ｃＤＮＡ文库中扩增的一个基因片段，本实验研究Ｗ基因组织表达的特性性。方法搜集不同组织来源的肿瘤及正常脑组织标本，行ＲＴ－ＰＣＲ及ＲＮＡ斑点杂交检测。     

溶脲脲原体双相一步培养与PCR技术的临床应用

用溶脲脲原体双相一步培养法和ＰＣＲ方法同时测定５０例非淋球菌性尿道炎病人标本。双相一步培养法有２４例阳性，阳性率为４８％，ＰＣＲ测定有２０例阳性，阳性率４０％，两者无显著差异。２４例培养阳性，ＰＣＲ有５例阴性，２６例培养阴性中，ＰＣＲ有１例阳性。本文说明Ｕｕ双相一步培养法具有快速，准确，阳性经高，不易污染等优点，对于Ｕｕ的临床检测具有重要意义；ＰＣＲ方法更快速简便，并直接能从样品中测定Ｕｕ的特异核     

逆转录—聚合酶链反应测定血透病人的HCV—RNA

以丙型肝炎病毒的５‘非结构区设计了两对引物并建立了巢式ＲＴ／ＰＣＲ直接检测血表中ＨＣＶ ＲＮＡ方法。进一步检测了２５份血透病人的血清标本和２０份透析液标本，结果提示ＲＴ／ＰＣＲ是直接检测ＨＣＶ ＲＮＡ的可行方法，能为判断现型肝炎感染提供有利依据。     

大鼠视觉相关脑区表达序列标签的克隆与鉴定

目的 分析视觉相关脑区基因的差异表达并获取新的表达序列标签。方法 利用差异显示反转录ＰＣＲ（ＤＤＲＴ－ＰＣＲ）技术分析大鼠外侧膝状体与视皮层基因差异表达情况，并筛选差异表达基因片段。结果 经ＤＤＲＴ－ＰＣＲ筛选并通过反Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交法除假阳性，最终获得１个差异表达基因片段。对其进行克隆、测序和同源性比较发现，该片段为一新的表达序列标签，并与心肌集钙蛋白的ｍＲＮＡ具有７４％的同源性。结论 视觉     

中间件在远程调用技术的研究及在TreeSV中的应用

简单介绍了中间件的种类及其各自的特点,着重讨论了基于ＲＰＣ的中间件工作机制,并对在事务代理服务器ＴｒｅｅＳＶＲ中如何利用ＲＰＣ技术进行了分析和研究。ＴｒｅｅＳＶＲ在医疗保险信息系统已经得到了具体应用。     

应用PCR方法检测人乳头瘤病毒的E_7转化基因

应用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）检测５４份子宫颈癌活检标本中人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ－１６）Ｅ７转化基因的存在情况，结果显示阳性率为７２．２％（３９／５４）。ＨＰＶ－１６Ｅ７转化基因在人子宫颈癌组织中的高检出率，证实该转化基因与其发生关系密切。本研究同时证明，ＰＣＲ方法具有敏感、特异、快速和实用特点，值得推广。     

自人脑胶质瘤cDNA文库克隆与鼠SH2—B同源基因片段

自人脑胶质瘤文库克隆新的表达序列标签。方法以人脑胶质瘤文库为模板,利用生长休止特异基因的５’特异引物与载体特异引物组合进行ＰＣＲ扩增,对目的片段进一步克隆,测序。结果扩增出一个３２８ｂｐ的片段,同源性分析发现该片段与鼠ＳＨ２－Ｂ有８６％的同源性。     

用PCR技术标记双链DNA探针

利用ＰＣＲ技术制备生物素或地高辛标记的ＤＮＡ探针，经原位杂交试验及敏感性和特异性检测，均取得满意效果。ＰＣＲ标记法具有经济、快速、简易和标记量大等优点。实践中发现Ｂｉｏ／Ｄｉｇ－１１－ｄＵＴＰ的质量、ｄＴＴＰ和Ｂｉｏ／Ｄｉｇ－１１－ｄＵＴＰ的比例及起始ＤＮＡ模板浓度是标记成败的关键。