过表达Rip2对人胰腺癌细胞Panc-1凋亡的影响

目的:观察受体相互作用蛋白2(Rip2)对人胰腺癌细胞Panc-1凋亡的影响。方法:采用Jet PRIME试剂分别将pEGFP-C2和pEGFP-Rip2质粒转染入Panc-1细胞,实验分为对照组、pEGFP-C2组和pEGFP-Rip2组。转染后培养细胞48 h,采用流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞Rip2水平及凋亡相关蛋白Bax、胞浆细胞色素c(Cyt-c)和Bcl-2蛋白表达;比色法检测细胞caspase-3的活性。结果:转染pEGFP-Rip2细胞Rip2蛋白表达明显增加。流式细胞术检测表明,p EGFP-Rip2组的细胞凋亡率明显高于对照组和pEGFP-C2组。与对照组和pEGFP-C2组相比,pEGFP-Rip2组的Bax和胞浆Cyt-c蛋白表达明显升高,而Bcl-2蛋白水平则显著降低。并且,pEGFP-Rip2组细胞caspase-3活性明显高于对照组和pEGFP-C2组。结论:过表达Rip2能诱导Panc-1细胞凋亡,其作用机制可能与Rip2上调Bax以及胞浆Cyt-c蛋白表达,下调Bcl-2蛋白水平,增加caspase-3活性,从而激活内源性凋亡途径有关。     

臭灵丹中黄酮类化合物对人喉癌细胞Hep-2凋亡的影响及机制

目的:探讨中药臭灵丹中黄酮类化合物诱导人喉癌细胞Hep-2凋亡的机制。方法:MTT法检测分离自臭灵丹的黄酮类化合物3,5-二羟基-6,7,3',4'-四甲氧基黄酮(HTMF)对2种正常细胞的毒性和对3种肿瘤细胞株的增殖抑制作用;采用流式细胞仪检测化合物对Hep-2细胞凋亡率的影响;Western blotting法检测凋亡蛋白caspase-3和caspase-9的变化。结果:HTMF显著抑制Hep-2细胞的增殖并呈浓度、时间双重依赖性关系,但对正常细胞Vero和EVC304的毒性较小,对A549和HepG2细胞抑制作用小。流式细胞仪检测结果显示HTMF对Hep-2细胞有促凋亡作用并呈明显的量效、时效关系。Western blotting结果显示HTMF可诱导Hep-2细胞中caspase-3和caspase-9蛋白的活化,并呈时间依赖性关系。结论:HTMF对人喉癌细胞Hep-2的生长有显著的抑制作用,其机制可能通过激活caspase-9进而活化caspase-3诱导Hep-2细胞凋亡。     

基因沉默ILK对胰腺癌细胞Panc-1细胞增殖、凋亡与侵袭的影响

目的探讨基因沉默整合素连接激酶(ILK)对胰腺癌细胞(Panc-1)细胞增殖、凋亡与侵袭的影响。方法培养胰腺癌Panc-1细胞,构建ILK-specific shRNA慢病毒载体后对Panc-1细胞进行转染,qPCR与Western Blot方法验证干扰基因片段的有效性,MTT实验检测转染后胰腺癌细胞增殖能力的变化,流式细胞仪检测转染后胰腺癌细胞周期的变化,Transwell实验检测转染后胰腺癌细胞侵袭能力的改变。结果成功构建siRNA-ILK慢病毒载体,转染组细胞的ILK mRNA及蛋白表达明显低于空病毒组及阴性对照组。基因沉默ILK的胰腺癌Panc-1细胞增殖能力显著降低,停滞在G0/G1的细胞数显著增多,G2/M期细胞数明显减少,侵袭能力显著降低(P0.01)。结论基因沉默ILK能抑制胰腺癌细胞Panc-增殖与侵袭能力,并促进凋亡。     

研究不同光敏剂诱导的光动力疗法对人白血病细胞的杀伤作用

目的 研究并比较3种卟啉类光敏剂——血卟啉衍生物(HpD)、癌光啉(PsD007)和血卟啉 单甲醚(HMME)诱导的光动力疗法(PDT)对白血病细胞K562的杀伤效应.方法 以人白血病细胞K562为研究对象,分为对照组和PDT组,以梯度浓度的光敏剂与K562细胞共同孵育,经不同能量光照后,用噻唑蓝(MTT)法测定PDT对K562细胞的杀伤作用.结果 与对照组相比,PDT对K562细胞有明显杀伤作用,并随着光敏剂浓度的增加和光照能量的增大,效果增强.PsD007-PDT和HMME-PDT的效果都明显优于HpD-PDT(P＜0.05);而当光敏剂质量浓度较大(25 μg/ml)或能量密度较大(7.2 J/cm2)时,PsD007-PDT的作用效果优于HMME-PDT.结论 PDT对人白血病细胞K562具有明显的杀伤作用,其对细胞的抑制率具有显著的剂量效应关系;PDT对K562的杀伤效应与光敏剂种类有关,HpD-PDT的杀伤效果不如PsD007和HMME;在较高能量密度和较大光敏剂浓度的条件下,PsD007-PDT的效果优于HMME-PDT.     

HMME介导的光动力对兔血管平滑肌细胞生长抑制及诱导细胞凋亡的作用

目的：观察原代培养的兔血管平滑肌细胞在HMME-PDT作用下生长的变化及其死亡方式。方法：常规台盼兰染色观察HMME-PDT作用后6h和24h对细胞的杀伤作用，HMME的浓度为10μg／ml，激光剂帚为2．4～9．6J／cm^2；HE染色法观察PDT后24h细胞形态的变化；流式细胞仪Annexin V／PI双染法检测细胞死亡方式；共聚焦品微镜观察HMME在线粒体的定位。结果：台盼兰法检测结果娃示随着PDT能量密度的增加细胞的存活率逐渐下降，光镜下可见大部分细胞呈死亡或凋亡样改变，Annexin V／PI法检测显示PDT 24h后凋亡率可达50．5％．共聚焦显微镜观察到HMME在线粒体内有分布。结论：HMME-PDT能显著抑制兔血管平滑肌细胞的生长．并使其发生明显的凋亡。     

塞来昔布联合血卟啉单甲醚-光动力疗法对人鼻咽癌CNE-2细胞作用的初步研究

目的:探讨环氧化酶-2抑制剂塞来昔布联合血卟啉单甲醚(HMME)光动力对鼻咽癌细胞的作用.方法:实验分对照组、单独PDT组、单独塞来昔布组和联合作用组.光敏剂HMME的剂量为2.5μg/mL,光能量密度分别为0.125 J/cm2、0.25 J/cm2和0.5 J/cm2,MTT法检测各组作用24h后的细胞抑制率,并用金氏公式分析联合效应.HE染色观察细胞形态变化和数量改变.并用Hoechst 33342荧光染色观察细胞核凋亡情况.结果:64 μM和80 μM的塞来昔布对CNE-2细胞的抑制率分别是4.84%和13.23%,2.5μg/mL HMME+0.25 J/cm2 PDT组的抑制率为28.34%,80μM的塞来昔布与2.5μg/mL HMME+0.25 J/cm2 PDT联合组的抑制率为44.57%,金氏公式分析显示在所选的剂量中所有的HMME-PDT与塞来昔布联合处理均有协同或相加效应.HE染色显示,各处理组与对照组相比细胞稀少,形态不规则,部分细胞呈凋亡样改变,联合处理组细胞稀少更明显,死亡细胞更多,Hoechst 33342荧光染色可见细胞核出现明显染色质浓集、核碎裂,核固缩、蓝色荧光强度增加的凋亡现象,联合处理组的细胞死亡更多,凋亡现象更明显.结论:单用塞来昔布或HMME-PDT均能抑制CNE-2细胞的生长,塞来昔布联合HMME-PDT产生相加或协同效应.     

Rip2诱导人胰腺癌细胞自噬和凋亡的交互作用及机制研究

目的:探讨受体相互作用蛋白2(Rip2)诱导人胰腺癌细胞自噬和凋亡的交互作用及其机制。方法:用jetPRIME将pEGFP-C2空质粒和pEGFP-Rip2重组质粒分别转染至人胰腺癌Panc-1细胞。用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)作用于过表达Rip2的细胞,流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测凋亡相关蛋白的表达;比色法检测caspase-8、-9、-3的活性。此外,用caspases抑制剂Z-VAD-FMK作用于过表达Rip2的细胞,Western blot检测自噬相关蛋白及PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白的表达;透射电子显微镜观察自噬体的数量及形态。结果:(1)pEGFP-Rip2组细胞凋亡率显著高于对照组和pEGFP-C2组(P<0. 05),而pEGFP-Rip2+3-MA组细胞凋亡率进一步升高(P<0. 05);与pEGFP-Rip2组比较,pEGFP-Rip2+3-MA组细胞Fas、Bax和胞浆细胞色素c(Cyt-c)蛋白表达水平显著升高(P<0. 05),Bcl-2蛋白表达水平则显著下降(P<0. 05);pEGFP-...     

同型半胱氨酸对人血管平滑肌细胞凋亡及半胱天冬酶-3表达的影响

目的：观察同型半胱氨酸(Hcy)对人血管平滑肌细胞（VSMCs）凋亡以及半胱天冬酶-3（caspases-3）表达的影响。 方法： 采用组织贴块法体外培养人VSMCs，流式细胞术检测人VSMCs细胞凋亡，逆转录-聚合酶链反应法检测caspases-3 mRNA的表达。 结果： 体外培养的人VSMCs在终浓度为500 μmol/L Hcy的培养液中孵育0 h、6 h、12 h、24 h、48 h后的细胞凋亡率分别为2.39％±0.47％、2.45％±0.64％、7.58％±1.02％、13.37％±4.71％、17.69％±3.13％，caspases-3 mRNA与GAPDH扩增条带吸光度(A)比值分别为0.24±0.08、0.29±0.10、0.89±0.26、1.37±0.24、1.82±0.53，表明Hcy呈时间依赖性诱导人VSMCs细胞凋亡和 caspases-3 mRNA的表达上调；在终浓度为0、100、200、500、1 000 μmol/L Hcy的培养液中孵育24 h后的细胞凋亡率分别为2.68％±0.23％、2.79％±0.12％、8.45％±2.41％、13.37％±4.71％、23.75％±5.56％，表明Hcy呈浓度依赖性诱导人VSMCs细胞凋亡。 结论： Hcy诱导人VSMCs凋亡可能是由caspase-3参与的死亡信号通路介导的，诱导人VSMCs凋亡可能是Hcy致动脉粥样硬化作用的机制之一。     

同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞凋亡caspase 3的活化

目的：本研究拟探讨Hcy致内皮细胞凋亡的信号途径。 方法： 以Hcy诱导培养人脐静脉内皮细胞24 h后，通过检测细胞膜磷脂双分子层的改变，DNA ladder的形成确证细胞凋亡，并检测caspase3 及其抑制蛋白c-IAP1/2 mRNA 及蛋白质水平，以及caspase3的活化情况。 结果： Hcy(0.3 mmol/L)即可引起内皮细胞凋亡, 随Hcy浓度升高caspase3酶原含量增加，活化增强；c-IAP2 mRNA 及蛋白质表达降低。 结论： Hcy(0.3-3 mmol/L)可增加细胞内caspase3酶原表达，通过活化caspase3信号途径诱导HUVEC凋亡。在细胞凋亡过程中，凋亡抑制蛋白c-IAP-2表达水平下降。     

Effect of Ezrin overexpression on pancreatic cancer cell line Panc-1

目的 探讨Ezrin过表达对胰腺癌细胞系Panc-1生物学行为的影响.方法 用过表达载体pcb6-Ezrin稳定转染Panc-1细胞,并用流式细胞仪检测细胞周期,CCK-8法检测细胞生长曲线,扫描电镜观察细胞表面形态及表面突起的变化,用未包被及包被Matrigel胶的Transwell小室分别检测细胞的运动和侵袭能力,并用免疫印迹法检测信号相关蛋白Erk1/2的变化.结果 过表达Ezrin后其蛋白的表达明显升高,Panc-1细胞表面的细胞突起、微绒毛数量明显增加,运动及侵袭能力也明显增加,但对细胞的体外增殖和细胞周期无明显的影响.Ezrin的过表达能够激活Erk1/2的表达.结论 Ezrin蛋白对胰腺癌细胞的细胞突起、表面微绒毛的形成、细胞骨架及细胞的运动和侵袭发挥着重要的作用.因此,Ezrin可能在胰腺癌的进展中发挥着重要的作用,Erk1/2信号转导途径在这一过程中发挥着重要的作用.     

Ezrin蛋白过表达对胰腺癌细胞系Panc-1生物学行为的影响

目的探讨Ezrin过表达对胰腺癌细胞系Panc-1生物学行为的影响。方法用过表达载体pcb6-Ezrin稳定转染Panc-1细胞,并用流式细胞仪检测细胞周期,CCK-8法检测细胞生长曲线,扫描电镜观察细胞表面形态及表面突起的变化,用未包被及包被Matrigel胶的Transwell小室分别检测细胞的运动和侵袭能力,并用免疫印迹法检测信号相关蛋白Erk1/2的变化。结果过表达Ezrin后其蛋白的表达明显升高,Panc-1细胞表面的细胞突起、微绒毛数量明显增加,运动及侵袭能力也明显增加,但对细胞的体外增殖和细胞周期无明显的影响。Ezrin的过表达能够激活Erk1/2的表达。结论 Ezrin蛋白对胰腺癌细胞的细胞突起、表面微绒毛的形成、细胞骨架及细胞的运动和侵袭发挥着重要的作用。因此,Ezrin可能在胰腺癌的进展中发挥着重要的作用,Erk1/2信号转导途径在这一过程中发挥着重要的作用。     

Manumycin通过诱导细胞凋亡抑制人胰腺导管癌细胞Panc-1活性

目的：观察manumycin对人胰腺导管癌细胞Panc-1的抑制效应，并探讨其诱导细胞凋亡是否经p38MAPK介导。 方法： 用MTT法检测manumycin对Panc-1细胞的抑癌作用。用caspase-3活性检测试剂盒定量检测manumycin诱导细胞凋亡的水平及评估特异性的p38MAPK抑制剂SB203580对它的影响。 结果： 经manumycin(6 μmol/L、18 μmol/L、54 μmol/L)处理Panc-1细胞24 h,对Panc-1细胞生长具有明显的抑制作用，其抑制率分别为8.9%、21.9%和67.0%，其中后二者的细胞活性与对照组相比有显著差异(P<0.01)，呈量效关系。用药24 h的IC50为34.7 μmol/L。同时，此药物可明显增加caspase-3的活性，且这一效应可部分地被p38抑制剂SB203580阻断。 结论： Manumycin可通过诱导Panc-1细胞凋亡而产生抑癌作用，p38MAPK是manumycin诱导细胞凋亡的通路之一。     

Bafilomycin A1 induces apoptosis in the human pancreatic cancer cell line Capan-1

Bafilomycin A₁, a specific inhibitor of vacuolar type H⁺-ATPase, can inhibit the growth of a variety of cultured cells in a dose-dependent manner, but its mechanism is unclear. The aim of this study was to examine whether bafilomycin A₁ inhibits the growth of Capan-1 human pancreatic cancer cells through apoptosis. The effect of bafilomycin A₁ on tumour growth in vitroand in vivowas examined using an MTT assay and an in vivotumour model. The presence or absence of apoptosis was determined by morphology and DNA analysis of tumour cells. The concentration of bafilomycin A₁ for 50 per cent inhibition of cell viability during 72 h by the MTT assay was 5 nm. In DNA analysis, a ladder of fragmented DNA was detected in Capan-1 cells treated with bafilomycin A₁ at concentrations greater than 10 nm for 24 h. Nude mice bearing a xenografted Capan-1 cell line tumour received 4 weeks of bafilomycin A₁ (1·0 mg/kg per day). This treatment significantly inhibited tumour growth compared with controls after 21 days (P<0·05). Histopathological examination of tumour cells in the treated group demonstrated signs of apoptosis with chromatin condensation and cell shrinkage. These observations suggest that bafilomycin A₁ inhibits the growth of Capan-1 human pancreatic cancer cells through apoptosis. © 1998 John Wiley & Sons, Ltd.     

双氢青蒿素对人胰腺癌细胞系增殖和凋亡的影响

目的探讨双氢青蒿素对人胰腺癌细胞(PANC-1)增殖活性及凋亡的影响,及其作用机制。方法30、60、120、240和480μmol/L双氢青蒿素作用PANC-1 48 h后,采用MTT法检测双氢青蒿素对PANC-1增殖活性的影响,流式细胞术检测其细胞周期和凋亡的变化,Western blotting检测细胞内周期相关蛋白cyclin B1、Cdk1、p21及凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax,Caspase-3,Caspase-9和细胞色素C(Cyto C)蛋白表达变化。结果 MTT实验结果表明,30~480μmol/L双氢青蒿素对PANC-1增殖活性具有明显的抑制作用(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,双氢青蒿素可以使PANC-1细胞周期阻滞于G2/M期,并诱发PANC-1细胞发生凋亡,且随药物浓度呈现升高趋势(P<0.05)。Western blotting结果显示,双氢青蒿素作用后周期相关蛋白Cdk1和Cyclin B1蛋白表达降低,而P21蛋白表达升高。凋亡相关蛋白Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,Bax/Bcl-2蛋白表达比例升高,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9和Cyto C蛋白表达升高。结论双氢青蒿素能抑制PANC-1增殖并诱发细胞凋亡,其凋亡机制可能与线粒体途径相关。     

慢病毒介导的SEMA3G过表达对人胰腺癌细胞系PANC-1的作用

目的通过体外实验探讨过表达SEMA3G对人胰腺癌细胞PANC-1细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法将携带SEMA3G的慢病毒载体转染人胰腺癌PANC-1细胞系,利用real-time PCR和Western blot分别检测mRNA和蛋白质水平。CCK-8法检测细胞增殖,transwell实验检测细胞侵袭和细胞划痕试验检测细胞的迁移。结果成功建立稳定转染SEMA3G胰腺癌PANC-1细胞系。SEMA3G病毒感染组与空白对照组和阴性对照组相比细胞的增殖能力显著降低(P0.05),SEMA3G病毒感染组的细胞侵袭和迁移能力明显低于两组对照组(P0.05)。结论 SEMA3G慢病毒载体能有效过表达人胰腺癌PANC-1细胞中内源性SEMA3G蛋白,进而抑制细胞增殖、侵袭和迁移。     

Anion channels in a human pancreatic cancer cell line (Capan-1) of ductal origin

Transepithelial solute transport and bicarbonate secretion are major functions of pancreatic duct cells, and both functions are thought to involve the presence of chloride channels in the apical membrane of the cell. After being isolated from a human pancreatic adenocarcinoma, the Capan-1 cell line conserves most of the properties of ductal cells and thus constitutes a useful system for investigating the role of chloride channels. Using patch-clamp techniques, we identified three different chloride-selective channels in the apical membrane of confluent Capan-1 cells. Two were non-rectifying chloride channels with low (50 pS) and high (350 pS) unitary conductances. Both channels were active in cell-attached recordings, and they were consistently located together in the same patch. Maxi Cl^– channels displayed multiple subconductance states, and were reversibly inactivated by either positive or negative voltage changes, which indicates that they were optimally opened at the cell resting potential. The third was an outwardly rectifying chloride channel with a unitary conductance of 38 pS and 70 pS at negative and positive potentials respectively. Rectifying Cl^– channels were clustered in discrete loci. They were silent in situ, but became active after patch excision. In inside-out excised patches, the three channels displayed a high selectivity for Cl^– over monovalent cations (Na⁺ and K⁺) and gluconate. They were blocked by 20–200 M 4,4-diisothiocyanatostilbene-2,2-disulfonic acid (DIDS) and were insensitive to changes in the Ca²⁺ concentration. Our results show that the apical membrane of Capan-1 cells contains a high density of chloride channels; these channels may provide pathways for transepithelial solute transport as well as for bicarbonate secretion.     

SFRP5基因沉默促进人类胰腺癌细胞系PANC-1增殖与迁移

目的探讨慢病毒介导短发夹RNA(shRNA)沉默SFRP5基因对人类胰腺癌细胞系PANC-1细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法构建靶向SFRP5基因特异性shRNA慢病毒载体并转染人胰腺癌PANC-1细胞系,以空白质粒转染阴性对照组,未处理细胞做为空白对照组。用real-time PCR及Western blot检测转染前后SFRP5 RNA以及蛋白的表达;CCK-8实验检测细胞体外增殖能力;使用Transwell小室实验分析细胞侵袭能力;细胞划痕实验分析细胞迁移能力。结果成功建立稳定转染shRNA-SFRP5胰腺癌PANC-1细胞株。SFRP5病毒转染组与阴性对照组及空白对照组相比细胞的增殖能力明显增加(P0.01);SFRP5病毒转染组的细胞侵袭、迁移能力明显高于阴性对照组及空白对照组(P0.01)。结论 SFRP5慢病毒干扰载体能有效抑制SFRP5基因在人胰腺癌PANC-1细胞中的表达,进而促进细胞的增殖、侵袭和迁移。     

重组人源TNC诱导胰腺癌细胞系PANC1的EMT及迁移和侵袭

目的构建人肌腱蛋白C(TNC)真核表达质粒,利用稳定过表达TNC的胰腺癌细胞系以及探索TNC在胰腺癌转移中的作用及分子机制。方法采用独特的引物设计方法构建TNC表达质粒,经转染和G418筛选获得稳定过表达TNC的胰腺癌PANC1细胞系。通过RT-qPCR和Western blot对细胞系中TNC的表达进行鉴定。采用Transwell小室法和Western blot检测TNC对细胞迁移、侵袭能力以及上皮间质转化(EMT)相关分子表达的影响。结果成功构建TNC质粒,稳定过表达TNC的PANC1细胞迁移、侵袭能力显著增强(P<0. 05),上皮标志物E-cadherin表达减少而间质标志物N-cadherin表达增加(P<0. 05)。结论 TNC真核表达质粒以及TNC稳定表达胰腺癌细胞系的建立,可用于TNC对细胞EMT、迁移和侵袭等方面的机制研究,也是研究TNC生物学功能和胰腺癌发生发展机制的基础。