姬松茸多糖抗肿瘤作用研究

目的:研究姬松茸多糖(ABP)对肝癌细胞生长的抑制作用。方法:采用MTT法检测ABP体外与肝癌细胞Bel-7402作用48小时的直接细胞毒作用、ABP与小鼠脾细胞共培养上清(ABP-SL-CM)体外与Bel-7402细胞作用48小时的抑制作用;用流式细胞仪分析诱导肿瘤细胞凋亡情况;腹腔注射给药观察对移植性H22小鼠腹水型肝癌模型的抑瘤率。结果:ABP体外无直接细胞毒作用;不同浓度的ABP-SL-CM体外对Bel-7402细胞生长均有抑制作用,其中低剂量组(ABP-SL-CM-L)作用最显著,抑制率为39.65%;诱导Bel-7402细胞凋亡率为21.68%,DNA直方图上可见到亚二倍体峰;体内实验对肿瘤的生长的抑瘤率为45.83%。结论:姬松茸多糖对肝癌细胞生长有一定的抑制作用,其作用机制不是直接的细胞毒作用,而是通过增强小鼠的细胞免疫功能诱导肿瘤细胞凋亡实现的。     

富硒姬松茸提取物硒蛋白多糖对荷瘤小鼠的影响

目的:提取及分析富硒姬松茸硒蛋白多糖活性成分,初步探讨富硒姬松茸硒蛋白多糖的抗肿瘤作用。方法:分别应用Lowry-酚试剂法、用苯酚-硫酸法和2,3-二氨基萘荧光分光比色法测定蛋白质、多糖及硒含量。建立荷瘤小鼠模型,观察富硒姬松茸硒蛋白多糖的体内抑瘤作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响。结果:富硒姬松茸硒蛋白多糖能明显抑制荷瘤小鼠的肿瘤生长,并显著提高荷瘤小鼠NK细胞活性、淋巴细胞转化率。其活性成分蛋白质、多糖及硒含量分别为16.32%、81.2%、7.01 mg/g。结论:富硒姬松茸提取物硒蛋白多糖具有良好的抗肿瘤生长作用。     

中药多糖抗肿瘤作用与树突状细胞关系研究进展

树突状细胞(dendritic cell,DC)是目前已知的人体内功能最强大的抗原递呈细胞,可摄取、加工处理和提呈抗原,启动特异性免疫应答.DC也是重要的免疫调节细胞,是唯一可以启动初始T细胞介导的免疫反应的一类细胞,其激发T细胞增殖及抗原提呈能力是巨噬细胞和B细胞的100～1000倍,在机体特异性免疫应答中发挥着重要的作用.     

低分子姬松茸多糖对Bel-7402细胞端粒酶-RNA mRNA表达的影响

目的探讨低分子姬松茸多糖(a low molecular weight polysaccharide isolated from Agaricus blazei,LMPAB)对人肝癌细胞Bel-7402端粒酶-RNA mRNA表达的影响。方法5,10和20μg.ml-1浓度的LMPAB处理体外培养的Bel-7402细胞48 h后,采用原位杂交法检测端粒酶-RNAmRNA表达。结果LMPAB下调体外培养Bel-7402端粒酶-RNAmR-NA的表达,呈剂量依赖性。与空白对照组比较,端粒酶-RNA mRNA的表达差异具有统计学意义(P<0.01)。结论LMPAB具有下调端粒酶-RNA mRNA表达的作用,进而降低端粒酶活性,抑制肿瘤细胞生长。     

低分子量姬松茸多糖提取分离及抗肿瘤活性筛选的研究

姬松茸(agaricus blazei murill,ABM)是一种药食兼用的真菌,其抗癌作用被认为居抗癌真菌之首[1-3]。多糖是发挥抗肿瘤作用的主要活性成分,目前,对姬松茸粗多糖研究较多,对分子量在10万以下的多糖研究很少。笔者认为,低分子量多糖也含有活性集团,应该具有药理活性,具有深入研究价值。本实验对姬松茸粗多糖进行分离纯化,得到4种低分子量多糖,通过脾淋巴细胞增殖实验和对肿瘤细胞抑制实验,筛选出抗肿瘤活性高的多糖ABMⅡ。材料1·取材姬松茸粗提物,购于浙江庆元博瑞药业有限公司(多糖含量为46·7%)。2·仪器和药品、试剂UV-2550型紫外分光…     

姬松茸多糖的分离纯化与理化性质研究

姬松茸Agaricus blazei Murill又叫巴西蘑菇,是一种珍贵的药食兼用真菌[1],其子实体中含有多种具有高抗肿瘤活性[2~5]和刺激T细胞作用[6]的多糖。但热水浸提得到的是各种多糖组分的混合物,而不同的多糖的生物活性是不同的,为了研究各种多糖组分的性质,本研究采用分级醇沉、凝胶     

姬松茸多糖对大鼠胸腺细胞凋亡和线粒体膜电位的影响

目的:观察姬松茸多糖对地塞米松(dexamethasone,DEX)诱发大鼠胸腺细胞凋亡和线粒体膜电位的影响.方法:Wistar大鼠随机分为4组:正常组,模型组,姬松茸多糖低、高剂量组,每组10只.正常组和模型组灌胃(ig)生理盐水,姬 松茸多糖低、高剂量组ig姬松茸多糖溶液(60,120 mg·kg-1),1次/d,连续7d.模型组和姬松茸多糖低、高剂量于第7日腹腔注射DEX(0.02 g·kg-1).3h后处死各组动物,迅速无菌取胸腺,采用显微观察、流式细胞技术观察胸腺细胞形态学改变,胸腺细胞凋亡、脱氧核糖核酸(DNA)断裂百分率及线粒体膜电位变化,胸腺组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的变化.结果:与模型组比较,姬松茸多糖组大鼠胸腺细胞线粒体嵴肿胀明显减轻;姬松茸多糖组大鼠胸腺细胞凋亡率[低、高剂量(5.96±1.14)％,(5.07±1.02)％],DNA断裂率[低、高剂量(3.67±0.49)％,(3.24±0.45)％]及胸腺组织MDA含量[低、高剂量(1.87±0.25),(1.72±0.23)μg·mg-1]均明显低于模型组[(7.14±1.62)％,(4.25±0.86)％,(2.16±0.38) μg·mg-1];姬松茸多糖组大鼠胸腺细胞线粒体膜电位(荧光指数:低剂量38.57±6.29,高剂量41.36±7.18)及胸腺组织SOD活性量[低、高剂量(25.78±3.94),(27.36 ±4.21)U.mg-1]明显高于模型组(32.76 ±5.48)荧光指数,(21.45±3.52) i g· mg-1.结论:姬松茸多糖可阻断胸腺细胞DNA断裂和线粒体膜电位的下降,有效抑制DEX诱导的胸腺细胞凋亡,其作用机制与姬松茸多糖提高胸腺组织抗氧化功能有关.     

姬松茸菌丝体多糖体外抗肿瘤活性的研究及结构初探

姬松茸(Agaricus blazei Murill,ABM),又名巴西蘑菇,是近年来在日本、美国和我国各地区掀起栽培热潮的一种重要的药食兼用菌种[1]。近些年来,姬松茸作为抗癌剂、免疫调节剂、抗突变剂和抗菌物质引起了人们的极大关注。国内外学者已经证明姬松茸中丰富的多糖是发挥抗肿瘤作用的最主要的成分之一[2~4]。深层发酵获得的菌丝体多糖的生理活性接近于子实体多糖[2,3],并且由于深层发酵具有生产工艺简便、培养材料易得、生产成本低、易于实现工业化等优点,从而成为开发姬松茸活性多糖的一种有效手段。对于姬松茸多糖发挥抗肿瘤作用的机制,目前尚…     

姬松茸多糖通过增强小鼠脾淋巴细胞功能诱导Bel-7402细胞凋亡

目的：探讨姬松茸多糖（ABP）对Bel-7402细胞凋亡的影响及其机制。方法：制备ABP与小鼠脾淋巴细胞共培养上清（ABP-SL-CM），作用于Bel-7402细胞，流式细胞仪分析诱导凋亡情况以及p53基因的蛋白表达；透射电子显微镜观察细胞形态学变化。结果：不同浓度的ABP-SL-CM能诱导Bel-7402细胞凋亡，流式细胞仪检测凋亡率高达21.68%，DNA直方图上可见到亚二倍体峰，透射电子显微镜显示细胞凋亡的典型形态学变化；p53蛋白的荧光强度值组间比较无显著性差异（P〉0.05）。结论：ABP通过增强小鼠脾淋巴细胞活性诱导Bel-7402细胞凋亡，但其诱导凋亡机制未见与p53基因蛋白表达有关。     

姬松茸多糖对HT-29细胞与内皮细胞侵袭、 黏附的影响和作用

目的:探讨低分子量姬松茸多糖(LMPAB)对肿瘤细胞与内皮细胞侵袭和黏附的影响和作用。方法:不同剂量的LMPAB(5,10,20 mg.L-1)分别作用于人结肠癌细胞(HT-29)和人脐静脉内皮细胞(HUVECs)48 h,采用MTT法检测LMPAB对HT-29和HUVECs增殖的影响、采用分光光度法检测LMPAB对HT-29细胞与HUVECs黏附的影响、采用Transwell双层小室观察LPMPAB对HT-29迁移穿过单层HUVECs的影响。结果:不同剂量LMPAB(5,10,20 mg.L-1)对HT-29和HUVECs增殖无显著性作用;使HT-29黏附于单层HUVECs的数量得到了明显的抑制,抑制率分别为26.96%,23.60%,27.66%;对HT-29迁移穿过HUVECs也具有抑制作用,抑制率分别为23.96%,23.59%,41.36%。结论:低分子量姬松茸多糖通过抑制HT-29肿瘤细胞与内皮细胞的黏附以及肿瘤细胞迁移穿过内皮细胞而发挥其抗肿瘤转移作用。     

地龙蛋白和姬松茸多糖的药理研究

现代研究表明中药地龙除具有定惊、清热、通络、平喘、利尿的传统功效外,其主要有效成分地龙蛋白还具有抗血栓、溶栓和改善血液循环、抗肿瘤、调节免疫、抗辐射、降压、抗心律失常及镇痛消炎等多种现代药理作用;姬松茸多糖具有降血糖、抗肿瘤、抗突变、抗辐射,提高免疫力等主要药理活性。二者都能增强机体免疫功能,对辐射引起的细胞损伤,免疫力低下等不良反应,具有改善作用。     

姬松茸多糖对树突状细胞Dectin-1、Syk及CARD9基因表达和T淋巴细胞增殖的影响

目的:探讨低相对分子质量姬松茸多糖(low molecular weight polysaccharide isolated from Agaricus blazei Murill,LMPAB)对树突状细胞C型植物血凝素1(Dectin-1),脾酪氨酸激酶(Sky)和胱天蛋白募集域蛋白9(CARD9)基因表达和T淋巴细胞增殖的影响。方法:体外培养ICR小鼠骨髓来源的树突状细胞;通过流式细胞术检测树突状细胞表面CD11c和CD86分子的表达;采用WST方法检测LMPAB增强树突状细胞对T淋巴细胞的增殖作用;应用实时定量PCR方法检测Dectin-1,Sky和CARD9 mRNA的表达水平。结果:树突状细胞表面CD11c表达98.6%,CD86表达96.97%;与正常组(4.84±0.21)比较,LMPAB+OVA组(6.59±0.19)可增强树突状细胞对T淋巴细胞的增殖作用(P<0.05);与正常组Dectin-1(6.13±0.27),Sky(0.36±0.11)和CARD9(1.85±0.20)比较,LMPAB+OVA组Dectin-1(8.25±0.19),Sky(1.63±0.16)和CARD9(4.40±0.19)明显升高,统计学具有显著意义(P<0.05)。结论:所培养的髓系细胞为树突状细胞;LMPAB可通过调控树突状细胞Dectin-1,Sky和CARD9 mRNA的表达增强树突状细胞的免疫效能。     

膜法分级纯化姬松茸子实体多糖的研究

目的通过微滤和超滤对姬松茸子实体粗多糖分级纯化,获得最佳试验操作条件,考察各级相对分子质量范围内的多糖分布情况及所得制品的纯度。方法使用微滤和不同截留相对分子质量的超滤串联工艺。结果试验按相对分子质量将其分成>3×105、3×105~8×104,8×104~1×104以及<1×1044个级别,所得多糖质量分布比例约为5∶1∶3∶1。试验确定操作条件为室温,操作压力0.08~0.1MPa,微滤和各级超滤分别将各级多糖最高浓缩至45、35和25g/L。在低温下干燥制备的姬松茸多糖制品,质量分数高于70%,多糖总回收率高达83.7%。结论该工艺简单可行,姬松茸子实体多糖相对分子质量主要分布于>3×105和8×104~1×105。     

姬松茸多糖的分离纯化及其初步鉴定

目的：从姬松茸中分离纯化多糖并对其进行初步鉴定。方法：将姬松茸粗多糖配成均匀的5％糖溶液反复冻融离心,Sevage法除蛋白,H2O2脱色,DEAE-纤维素和Sepharose CL-4B凝胶柱色谱,酚-硫酸法检测糖峰的存在。采用苯酚-硫酸法和考马斯亮蓝G-250法对多糖和蛋白质含量进行测定。结果：从姬松茸粗多糖分离得到AB-Ⅰ、AB—Ⅱ-b和AB-Ⅲ-b3个组分,分别为淡黄色、黄色、褐色粉末,经鉴定后均为单一分子量组分,总糖含量分别为91．8％,90．4％,89．2％,蛋白质含量分别为7．1％,8．8％,9．3％。结论：有效分离纯化出姬松茸多糖单一组分,这为姬松茸多糖的应用奠定了一定的实验基础。     

姬松茸多糖对肥大细胞脱颗粒的影响

目的:观察姬松茸多糖(Agaricus blazei polysaccharides,ABP)的抗过敏作用并探讨其可能的作用机制。方法:通过IgE诱导大鼠被动皮肤过敏反应(PCA)实验,用比色法测定姬松茸多糖在体内对肥大细胞影响。体外实验观察姬松茸多糖对IgE诱导组胺释放、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素6及p38MAPK的影响。结果:体内实验显示,姬松茸多糖高(400mg/kg)、中(200mg/kg)剂量明显抑制大鼠PCA。姬松茸多糖高(100μg/L)、中(50μg/L)剂量了肥大细胞脱颗粒、组胺的释放、以及肿瘤坏死因子-α、白细胞介素6的释放以及p38MAPK、NF-κB p65蛋白的表达。结论:姬松茸多糖抗过敏作用部分可能与抑制p38MAPK、NF-κB p65信号通路有关。     

姬松茸多糖对大鼠肝枯否细胞免疫活性的影响

目的观察姬松茸多糖对大鼠损伤肝枯否细胞的免疫活性的影响。方法将W istar系大鼠肝枯否细胞体外培养,并分为正常组、损伤组和实验组,除正常组以外均以四氯化碳损伤细胞,实验组再加姬松茸水提取物精制多糖。测定枯否细胞的花环形成和吞噬绵羊红细胞能力,计算花环形成率和吞噬率。结果姬松茸多糖可提高损伤肝枯否细胞的花环形成率和吞噬率。结论姬松茸多糖可提高枯否细胞的免疫活性。     

低分子姬松茸多糖对荷瘤小鼠肿瘤组织CD44mRNA表达的影响

目的:观察低分子姬松茸多糖(Low Molecular Weight Polysaccharide Isolated from Agaricus blazei Murill,LM-PAB)对荷瘤小鼠肿瘤组织中CD44 mRNA表达的影响。方法:BALB/c小鼠右侧腋窝皮下接种S180肉瘤,腹腔注射50、100和200 mg/(kg.d)LMPAB,连续7天。给药结束后24h取肿瘤组织,实时定量RT-PCR法检测肿瘤组织CD44 mR-NA表达水平。结果:与模型对照组比较,LMPAB各剂量组50、100和200mg/(kg.d))CD44 mRNAΔCt显著升高(P<0.01),表明CD44 mRNA表达下调,并呈剂量依赖性。结论:LMPAB可能通过降低CD44 mRNA的表达,抑制了流动的肿瘤细胞与内皮细胞的黏附,从而减少肿瘤转移。     

中药多糖抗肿瘤免疫药理研究的新思路——对树突状细胞的影响

机体内存在多种免疫监视机制发挥着抗肿瘤作用 ,而免疫活性细胞致敏、激活和扩增又依赖于抗原提呈细胞 (ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇｃｅｌｌ,ＡＰＣ)提呈相应的抗原多肽以及共刺激信号。树突状细胞 (ｄｅｎｔｒｉｔｉｃｃｅｌｌ,ＤＣ)被确认为是目前发现的功能最强的ＡＰＣ ,它能摄取各类抗原 ,在机体细胞免疫和体液免疫调控中均起着重要作用。ＤＣ的发现和研究进展为中药多糖抗肿瘤免疫药理研究提供了新的视角 ,即中药多糖抗肿瘤的免疫药理学机制是否部分与影响肿瘤机体ＤＣ细胞增殖、成熟、表型及功能的改变有关 ?但目前有关此…     

猪苓多糖通过Toll样受体4对小鼠骨髓来源树突状细胞作用研究

目的研究猪苓多糖(Polyporus umbellatus polysaccharides,PPS)活化小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow dendritic cells,BMDC)功能调节的作用机制,进一步阐明PPS的免疫学活性机制。方法以3H-TdR掺入法、ELISA及流式细胞术检测BMDC表型和功能的各项指标。结果 PPS刺激小鼠BMDC表达CD11c、CD86及白细胞介素-12、-10(IL-12、IL-10)产生,并且具有剂量依赖效应。另外,较阴性对照组,经PPS诱导成熟的BMDC其活化初始T细胞的能力显著提高而吞噬能力显著下降。抗小鼠Toll样受体4(TLR4)单抗可抑制PPS刺激BMDC产生IL-12 p40及阻断荧光标记猪苓多糖(fluorescence-labeled PPS,f-PPS)与BMDC的结合,而抗TLR2及补体受体3(CR3)单抗却无此效应。结论 PPS可经TLR4活化小鼠BMDC发挥免疫调节活性。     

黄芪多糖诱导成熟的树突状细胞肿瘤疫苗体外抗肿瘤作用的实验研究

目的探讨经黄芪多糖（astragalus polysacharin,APS）诱导成熟的树突状细胞（dendritic cell,DC）肿瘤疫苗体外抗肿瘤作用及其机制。方法分离人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,制备DC细胞,加入营养液体外诱导为未成熟的DC细胞,培养第5天,黄芪多糖组加入终浓度为100μg/mL的黄芪多糖,细胞因子组加入终浓度为20 ng/mL重组人肿瘤坏死因子（rhTNF）-α诱导DC成熟,观察树突状细胞形态及表型变化;成熟DC以SGC-7901肿瘤抗原致敏,与同种异体T细胞共培养,采用MTT法检测T淋巴细胞增殖功能,E LISA法检测共培养上清IL-12、IFN-γ水平;经DC激活的细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic lymphocyte,CTL）细胞与SGC-7901肿瘤细胞共培养,采用LDH释放法检测CLT对靶细胞特异性杀伤能力。结果黄芪多糖诱导的DC经形态学观察和表型鉴定,符合成熟DC的特征。黄芪多糖诱导成熟的DC能刺激同种异体T淋巴细胞增殖,T细胞增殖指数随刺激细胞与效应细胞比值的增加而增加（P〈0.05）;DC与T细胞共培养上清IL-12、IFN-γ的水平显著增加且呈时间依赖性（P〈0.05）;经致敏DC激活的CTL能显著杀伤肿瘤细胞,随着效靶比的增加,杀伤作用增强。结论黄芪多糖可在体外诱导DC成熟,并促进其抗原递呈能力,有效活化CTL,增强机体抗肿瘤功能。