ELISA法研究聚乙二醇重组人生长激素注射液单次给药人体药代动力学

目的 建立ELISA方法研究聚乙二醇重组人生长激素(PEG-rhGH)注射液单次给药人体药代动力学.方法 将30名健康受试者随机分成4组(其中两组为自身对照),分别单次皮下注射PEG-rhGH注射液(0.1 mg·kg-1、0.2 mg·kg-1、0.4 mg·kg-1)、注射用重组人生长激素(rhGH)(0.067mg· kg-1).ELISA法测定不同时间点PEG-rhGH、rhGH的血药浓度,并计算药代动力学参数.结果 PEG-rhGH、rhGH血药浓度分别在0.312 5～40.0000 ng·ml-1、0.312 5～10.0000 ng· ml-1范围内线性关系良好,最低检测性均为0.312 5ng· ml-1,批间、批内RSD均＜15％. PEG-rhGH(0.1、0.2、0.4 mg·kg-1)、rhGH(0.067mg· kg-1)的t1/2分别为:(31.70±4.70)h、(32.19±4.58)h、(30.39±5.93)h、(1.95±0.44)h,Tmax为:(22.20±9.82)h、(29.40±10.75)h、(40.80±8.39)h、(3.20±1.10)h,Cmax:(105.24±45.37)ng·ml-1、(379.09±109.61)ng·m1-1、(920.69±293.21)ng·ml-1、(30.17±3.20)ng·m1-1,CL/F:(26.97±13.86) ml· kg-1· h-1、(9.21±4.05) ml· kg-1· h-1、(6.29±2.87) ml· kg-1· h-1、(284.26±43.47)ml· kg-1· h-1,AUC0→∞:(4657.70±2337.30) ng· m1-1·h、(25279.58±9407.63) ng· ml-1·h、(74438.89±29 007.81) ng·ml-1·h、(240.97±39.40) ng·ml-1·h.结论 PEG-rhGH体内过程符合线性动力学特征,与rhGH相比,明显推迟达峰时间、延长半衰期、减慢清除率,具有长效特征.     

用夹心酶联免疫法研究hGM-CSF在大鼠体内的药物代谢动力学

用灵敏的夹心酶联免疫法(ELISA)建立了检测重组人hGM-CSF药代动力学的方法。此方法hGM-CSF在12.5～0.39ngml^-1范围内,检测呈线性相关。最低检测灵敏度为0.4ngml^-1。本方法不受血清中潜在干扰因素的影响,检测具高度特异性。大鼠schGM-CSF50,100,200μgkg^-1后15min,血中即有较高浓度的hGM-CSF,1h左右达峰浓度,以后快速下降。皮下给药,尿中可检测到原型hGM-CSF,但累积排泄率较低。本研究为临床合理用药提供依据。     

ELISA法研究新型重组人肿瘤坏死因子在小鼠体内的药代动力学

目的研究新型重组人肿瘤坏死因子(nrhTNFα)在小鼠体内的药代动力学。方法给小鼠分别im和ivnrhTNFα后,按不同时间点采血,分离血清,采用双抗体夹心ELISA法测定血清中nrhTNFα的浓度,用DAS药动学软件进行曲线拟合并计算参数。结果nrhTNFα5.51μg·kg-1、24.60μg·kg-1小鼠im后药动学特征符合一室开放模型,呈一级动力学消除。nrhTNFαim给药能迅速吸收入血,Tmax分别为0.17h和0.33h。T1/2分别为1.25h和0.73h,AUC随剂量增加而成比例增加。nrhTNFα5.51μg·kg-1小鼠iv后符合二室开放模型,呈一级动力学消除,T1/2β为0.37h,AUC为771.24ng·L-1·h-1。结论nrhTNFαim和iv的药动学行为在小鼠体内分别符合一室和二室开放模型,均呈一级动力学消除。im给药的生物利用度为48.84%,可考虑作为替代iv的一种安全给药途径。     

用ELISA法进行神经生长因子（NGF）在大鼠体内的药代动力学研究

目的：研究神经生长因子（ＮＧＦ）在大鼠体内的药代动力学，方法：双抗体夹心法酶联免疫吸附实验，结果：大鼠ｉｖ３２μｇ．ｋｇ＾－１体内的务药浓度－时间曲线符合二室开放模型，ｔ１／２α为０．３３０ｈ，ｔ１／２α为１．５４ｈ，ｉｍ３２μｇ．ｋｇ＾－１其体内的血药浓度－时间曲线符合一室一级吸收，ＮＧＦ达峰时间３．９９ｈ，ｔ１／２（Ｋｅ）为４．０４ｈ，２４ｈ吸收百分率为６９．７％。     

重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素3融合蛋白在大鼠体内的药代动力学研究

研究重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素3融合蛋白(GM-CSF/IL-3,MX)在大鼠体内的药代动力学。方法:实验采用同位素示踪技术结合HPLC分析,建立了MX在大鼠血浆中的测定方法,并测定了MX皮下注射3个剂量水平和静脉注射中剂量水平在大鼠体内的药动学参数。结果:高中低剂量T1/2分别为(1 5.4±2.0),(1 6.1±1.8)h,(1 3.2±2.2)h;AUC分别为(5 8 8±1 2 0),(2 8 6±4 7),(1 4 2±2 0)μg/(L.h),Cmax分别为(3 1.2±8.3),(1 4.8±1.2),(8.3±1.4)μg/L。结论:MX皮下注射给药后,Cmax和AUC与剂量成比例,MX在大鼠体内的代谢和消除是线性的。7 0μg/kg组生物利用度为3 5.6%。     

Y型聚乙二醇重组人粒细胞集落刺激因子注射液Ⅰ期临床药代动力学和药效学研究

目的:在化疗后引起的中性粒细胞减少症的肿瘤患者中评价Y型聚乙二醇重组人粒细胞集落刺激因子(YPEG-rHuG-CSF)注射液的I期临床药代动力学和药效学。方法:入组肿瘤患者接受剂量相同的3个周期化疗方案,第1周期为筛选周期,对于绝对中性粒细胞计数(ANC)<1.5×109.L-1的患者,第2周期化疗药物给药结束后48 h皮下注射1次5个不同剂量[10(预试验组),20,30,45和60μg.kg-1]的YPEG-rHuG-CSF。第3周期为对照周期,于化疗药物开始给药后48 h,随机每日1次皮下注射150或300μg对照药物(特尔津)直到ANC≥5.0×109.L-1。分析YPEG-rHuG-CSF的安全性、有效性及药代动力学特征。结果:共入组30例患者,5个YPEG-rHuG-CSF剂量组的主要药代动力学参数如下:t1/2分别为(88.6±52),(56.9±11),(71.7±23),(73.9±23)和(77.4±14)h;CL_F分别为:(26.7±21),(19.7±5),(19.5±9),(21.6±9)和(12.4±4)mL.h-1.kg-1;AUC0～t分别为(473.2±380),(1 009.8±245),(1 844.8±1 111),(2 342.2±1 029)和(5 332.6±2 120)ng.h.mL-1。本研究在试验药物给药前及给药20 d内未检测到G-CSF抗体。第2周期除预试验组外4个剂量组的ANC最低点均值分别为3.43×109,3.0×109,2.96×109和3.0×109.L-1,均比第1和第3周期有所提高。结论:给药剂量为20～45μg.kg-1时,药物在人体内呈现线性药代动力学特征;在给药剂量增加到60μg.kg-1时,药物在人体内呈现非线性药代动力学特征。YPEG-rHuG-CSF在体内维持药效时间长,1次注射可有效预防中性粒细胞减少症。     

用夹心酶联免疫法研究hGM－CSF在大鼠体内的药物代谢动力学

用灵敏的夹心酶联免疫法（ＥＬＩＳＡ）建立了检测重组人ｈＧＭ－ＣＳＦ药代动力学的方法。此方法ｈＧＭ～ＣＳＦ在１２．５～０．３９ｎｇ·ｍｌ￣（－１）范围内，检测呈线性相关。最低检测灵敏度为０．４ｎｇ·ｍｌ￣（－１）。本方法不受血清中潜在干扰因素的影响，检测具高度特异性。大鼠ｓｃｈＧＭ－ＣＳＦ５０，１００，２００μｇ·ｋｇ￣（－１）后１５ｍｉｎ，血中即有较高浓度的ｈＧＭ－ＣＳＦ，１ｈ左右达峰浓度，以后快速下降。皮下给药，尿中可检测到原型ｈＧＭ－ＣＳＦ，但累积排泄率较低。本研究为临床合理用药提供依据。     

聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的药代动力学与组织分布研究

目的研究聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子（PEG-rhG-CSF）在动物体内的药代动力学与组织分布。方法猕猴给予不同剂量（30、100和300μg/kg）的PEG-rhG-CSF,酶联免疫吸附法（ELISA）测定猕猴血浆中PEG-rhG-CSF浓度;[125I]标记示踪法结合分子排阻色潽法观察PEG-rhG-CSF在Wistar大鼠各组织中的分布情况。结果猕猴单次sc PEG-rhG-CSF后血药浓度及系统暴露随给药剂量呈非线性增加。低、中、高剂量组达峰时间（Tmax）为6.67～12.00h,全身清除率（CL）顺序减小,药-时曲线下面积（AUC）与给药剂量不成正比。sc给药的绝对生物利用度为47.5%。与临床使用剂量的rhG-CSF（10μg/kg）相比,猕猴sc中剂量PEG-rhG-CSF后Cmax、AUC分别为（1671±357）μg/L和（45 156±9407（μg.h）/L,均明显高于rhG-CSF组（P〈0.05）;PEG-rhG-CSF组的T1/2β为（13±3）h,较rhG-CSF组的T1/2β（1.52±0.08）h显著增加（P〈0.05）;而CL为（2.3±0.5）ml/（h.kg）,较rhG-CSF组的CL（19.6±2.4）ml/（h.kg）显著降低（P〈0.01）。大鼠sc[125I]PEG-rhG-CSF后血清、肾、肺等组织放射性较高,2 h血清原形药物浓度达峰,肺、肠道、膀胱等组织在给药后分布较慢,8 h放射性达峰值。尿液中主要为小分子[125I]降解代谢产物;未观察到药物与血浆蛋白的结合。结论将rhG-CSF进行PEG化修饰可以显著降低系统清除率,延长体内半衰期,增加药物暴露,可达到长效目的。药物主要分布于血管床,并代谢为小分子从泌尿系统排泄,不易透过血脑屏障。     

络合钙在小鼠体内的药代动力学研究

目的：测定络含钙在小鼠体内的血药浓度,对其进行药代动力学研究。方法：口服给予高、低两个剂量的络合钙,于给药后不同时间采用原子吸收法测定血钙浓度,并与维丁钙片进行比较,对所得参数用计算机进行房室模型模拟。结果：高、低络含钙组以及维丁钙组小鼠的血钙浓度明显升高,高剂量组的血钙浓度明显高于维丁钙组（P≤0．01）。所得的动力学参数经计算机模拟表明络合钙在体内的药代动力学符合一室模型。结论：络合钙口服可明显提高小鼠的血钙水平。     

Pharmacokinetics of thrombin-like enzyme from venom of Agkistrodon halys ussuriensis Emelianov determined by ELISA in the rat.

A thrombin-like enzyme (TLE) was separated and purified from the venom of a northeast Chinese snake Agkistrodon halys ussuriensis Emelianov. Experiments were performed in rats to determine the pharmacokinetic parameters following an intravenous (i.v.) or a subcutaneous (s.c.) injection of the thrombin-like enzyme. The plasma levels of TLE were estimated by enzyme-linked immunosorbent assay. The method exhibited high reproducibility and accuracy in correlating optical densities with TLE concentrations (0.2–30 ng ml⁻¹, r=0.99). The plasma concentration-time course after i.v. administration of 50 μg kg⁻¹ TLE was well fitted by a two-compartment open model. The half-life of the -phase was 18.0±3.2 min, and that of the β-phase 3.9±0.7 h. The apparent volume of distribution was 1.8±0.5 l kg⁻¹, and clearance was 5.4±0.5 ml min⁻¹ kg⁻¹. When the TLE was injected s.c. at a dose of 0.75 mg kg⁻¹, the changes in plasma concentration were best described by a two-compartment model with a first-order absorption. The maximal plasma level of 51±2.7 ng ml⁻¹ was reached at 5.2±0.5 h. The absorption rate constant was 0.3±0.03 h⁻¹. The area under the plasma concentration-time curve (AUC) was 2.8±0.8 μg h⁻¹ ml⁻¹.     

ELISA法研究聚乙二醇化重组人生长激素小鼠体内的药动学

建立了双抗夹心ELISA法检测小鼠血清中聚乙二醇化重组人生长激素（PEG—GH）的浓度。结果表明，PEG-GH和重组人生长激素（rhGH）浓度均在1～150ng/ml范围内呈良好的线性关系。PEG—GH以静脉注射与皮下注射两种途径给药，所得t/2β分别为静注rhGH的34.8倍和39.8倍，清除率明显下降。表明PEG—GH具有长效作用。     

Pharmacokinetics of thrombin-like enzyme from venom of Agkistrodon halys ussuriensis Emelianov determined by ELISA in the rat

A thrombin-like enzyme (TLE) was separated and purified from the venom of a northeast Chinese snake Agkistrodon halys ussuriensis Emelianov. Experiments were performed in rats to determine the pharmacokinetic parameters following an intravenous (i.v.) or a subcutaneous (s.c.) injection of the thrombin-like enzyme. The plasma levels of TLE were estimated by enzyme-linked immunosorbent assay. The method exhibited high reproducibility and accuracy in correlating optical densities with TLE concentrations (0.2–30 ng ml⁻¹, r=0.99). The plasma concentration-time course after i.v. administration of 50 μg kg⁻¹ TLE was well fitted by a two-compartment open model. The half-life of the α-phase was 18.0±3.2 min, and that of the β-phase 3.9±0.7 h. The apparent volume of distribution was 1.8±0.5 l kg⁻¹, and clearance was 5.4±0.5 ml min⁻¹ kg⁻¹. When the TLE was injected s.c. at a dose of 0.75 mg kg⁻¹, the changes in plasma concentration were best described by a two-compartment model with a first-order absorption. The maximal plasma level of 51±2.7 ng ml⁻¹ was reached at 5.2±0.5 h. The absorption rate constant was 0.3±0.03 h⁻¹. The area under the plasma concentration-time curve (AUC) was 2.8±0.8 μg h⁻¹ ml⁻¹.     

ELISA法对神经生长因子在大鼠体内药代动力学的研究

目的研究神经生长因子（ＮＧＦ）在大鼠体内的药代动力学。方法制备兔抗ＮＧＦ抗体,用双抗体夹心酶联免疫吸附实验（ＥＬＩＳＡ）法测定大鼠血浆ＮＧＦ浓度。结果大鼠ｉｖ３２μｇ·ｋｇ－１后血药浓度 时间曲线符合二室开放模型,Ｔ１／２α为０３３０ｈ,Ｔ１／２β为１５ｈ。大鼠ＮＧＦｉｍ３２μｇ·ｋｇ－１后血药浓度 时间曲线符合一室一级吸收,血浆ＮＧＦ浓度达峰时间为３７１ｈ,Ｔ１／２（Ｋｅ）为４３０ｈ,２４ｈ吸收百分率为６９１％。结论ＮＧＦ肌注吸收良好,血浆ＮＧＦ浓度可在较长时间内维持在有效浓度以上。     

ELISA法对神经生长因子在大鼠体内药代动力学的研究

目的研究神经生长因子（ＮＧＦ）在大鼠体内的药代动力学。方法制备兔抗ＮＧＦ抗体,用双抗体夹心酶联免疫吸附实验（ＥＬＩＳＡ）法测定大鼠血浆ＮＧＦ浓度。结果大鼠ｉｖ３２μｇ·ｋｇ－１后血药浓度时间曲线符合二室开放模型,Ｔ１／２α为０３３０ｈ,Ｔ１／２β为１５ｈ。大鼠ＮＧＦｉｍ３２μｇ·ｋｇ－１后血药浓度时间曲线符合一室一级吸收,血浆ＮＧＦ浓度达峰时间为３７１ｈ,Ｔ１／２（Ｋｅ）为４３０ｈ,２４ｈ吸收百分率为６９１％。结论ＮＧＦ肌注吸收良好,血浆ＮＧＦ浓度可在较长时间内维持在有效浓度以上。     

显色时不同的温育温度及时间对ELISA法检测HBsAg结果的影响

我们观察了ELISA法测定HBsAg显色时的不同温育温度及时间变化,对测定结果有较大影响,随着温度的升高和时间的延长,P值及P/N值逐渐升高。因而在实际工作中,应选择一最适的显色温度和时间,以稳定室内质控的结果。     

SDSPAGE结合125I示踪法与ELISA法测定血中rh-bFGF的比较

目的：比较和评价SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）结合^125I示踪法与ELISA法测定血浆中重组人碱性成纤维细胞生长因子（recombinant human basic fibroblast growth factor,rh-bFGF)。方法：10只大鼠iv^125I-rh-bFGF1600ng/kg,用SDS－PAGE结合放射性计数测定血浆rh-bFGF含量。9只大鼠iv,rh-bFGF 1600ng/kg,用ELISA法测定血浆rh-bFGF含量。结果：两种方法的灵敏度、回收率和重现性好。ELISA法测定血浆rh-bFGF含量较SDS－PAGE结合^125I示踪法低。结论：SDS－PAGE结合^125I示踪法与ELISA均可满足药动学研究的要求。     

大鼠肺炎支原体感染的ELISA实验研究

目的 探讨支原体感染大鼠的血清抗体反应及其间接ELISA检查与诊断方法.方法 将肺炎支原体疫苗分别以滴鼻、腹腔注射、尾静脉注射方式免疫大鼠,收集动物血清,以方阵滴定法和间接法确立ELISA检测实验的最适条件,用间接法检测不同方法与时间免疫动物的血清特异性IgG抗体.结果 ELISA系统的最适工作条件包括抗原包被浓度10×10-4g/ml、血清稀释度1:40、酶结合物1:5000.以该系统检测滴鼻免疫大鼠共21只,免疫6次2只大鼠血清抗体阳性(66.67%),免疫7次后阳性率达100%;腹腔免疫和静脉免疫大鼠各18只,免疫2次后2只大鼠可检出特异性抗体(66.67%),免疫5次后全部动物均为血清抗体阳性(100%).结论 肺炎支原体0.0016g/只以滴鼻、腹腔注射、尾静脉注射的方法均能够使大鼠产生特异性抗体,以间接ELISA检测法检查腹腔免疫组和静脉免疫组大鼠血清免疫2次后即有部分大鼠血清抗体检测即呈阳性,5次后阳性率达100%,而滴鼻免疫组大鼠直至免疫6次后部分血清抗体检测才可呈阳性其阳性率与腹腔免疫和静脉免疫2次阳性率相当.间接ELISA法可有效检测支原体感染动物的血清特异性抗体,是一种具有较高特异性的快速简便方法.