延胡索总生物碱抗心肌缺血作用的实验研究

1　实验材料1 1　动物　昆明种小鼠 ,体重 18～ 2 2ｇ ;ＳＤ大鼠 ,体重 2 5 0ｇ～ 30 0ｇ,由南京中医药大学动物中心提供。1 2　试剂　盐酸异丙肾上腺素由上海禾丰制药有限公司生产 ;肌酸激酶 (ＣＫ) ,试剂盒购自南京建成生物制品公司。三乙醇胺 ,醋酸 ,硫酸铜 ,棕榈酸均为分析纯产品。延胡索总生物碱本室自制。2　方法与结果2 1　对小鼠缺氧存活时间的影响　小鼠随机分为 3组 :正常组 ,模型组及延胡索总生物碱组。ｉｇ给药 ,连续 3ｄ ,最后 1次给药 15ｍｉｎ后 ,ｓｃＩｓｏ15ｍｇ/ｋｇ(正常组除外 ) ,15ｍｉｎ后放入 2 5 0ｍｌ底部有 7 5…     

延胡索总生物碱对急性心肌缺血大鼠心功能下降影响的研究

目的：观察延胡索总生物碱对异丙肾上腺素（Isoprenaline,Iso）诱导急性心肌缺血大鼠心功能下降的影响.方法：本实验室自己提取延胡索总生物碱,并给予大鼠2次/日灌胃,然后腹腔注射Iso致心肌缺血,第4天经左侧颈动脉插入心导管,记录给药及造模前后左心室内压变化曲线并进行数据分析.结果：观察心功能曲线表明,延胡索总生物碱高剂量组（2.0mg/kg）、总生物碱中剂量组（1.0mg/kg）具有缓解Iso导致的大鼠心功能下降的趋势,统计数据表明两组的LVSP、LVEDP、＋dp/dtmax、-dp/dtmax与模型组比较具有显著性差异（P＜0.05）.结论：延胡索总生物碱高剂量、中剂量具有缓解Iso所致心肌缺血大鼠心功能下降的作用.     

延胡索总生物碱对犬急性心肌缺血保护作用及机制研究

目的通过研究延胡索总生物碱(TAC)对犬急性心肌缺血的保护作用,探讨TAC对心肌缺血的作用机制。方法取比格犬,分为模型组、TAC高、中、低剂量组和阳性组。采用结扎犬左冠状动脉前降支制备心肌缺血模型,于结扎前、后及给药后取血,测量血压和心外膜电图,探究TAC对心肌缺血药效学作用。检测抗氧化反应、血管内皮活性物质等指标探究机制。结果TAC可抑制心肌梗死面积和范围。与模型组比较,TAC各组对血压、心率及血液相关指标具有明显药效学作用。结论TAC可抑制血压、升高心率,降低心肌缺血程度和梗死面积。作用机制是多靶点的,可增强心肌抗氧化能力,改善血液流变性,防止血液高凝和血栓形成。     

延胡索总生物碱对急性心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的:观察延胡索总生物碱对急性心肌缺血模型大鼠心肌细胞凋亡和凋亡相关基因表达的影响.方法:采用左冠状动脉前降支结扎法复制急性心肌缺血大鼠模型,比较各组缺血区心肌细胞凋亡及bcl-2、bax和caspase-3基因表达的变化.结果:模型组的心肌细胞凋亡阳性率增多,与正常组比较P＜0.05:延胡索总生物碱高、中、低剂量组心肌细胞凋亡阳性率减少,与模型组比较P＜0.05.模型组bcI-2基因相对表达量减少,bax和caspase-3基因相对表达量增多,与正常组比较P＜0.01;延胡索总生物碱高、中、低剂量组bcl-2基因相对表达量增多,bax和caspase-3基因相对表达量降低,与模型组比较P＜0.05.结论:延胡索总生物碱高、中、低剂量具有抗急性心肌缺血模型大鼠心肌细胞凋亡作用,该作用与调节凋亡相关基因的表达有关.     

酸性染料比色法测定延胡索总生物碱的含量

目的探讨延胡索中总生物碱含量测定的方法。方法采用酸性染料比色法测定延胡索中总生物碱含量。结果酸性染料比色法的显色条件为pH 4.4缓冲液12.0 mL,溴甲酚绿液3.0 mL,氯仿9mL萃取一次,振摇2 min,静置40 min。生物碱在1.33μg/mL～11.56μg/mL范围内呈线性关系,回收率平均值100.4%,,RSD=1.01%(n=6)。结论本含量测定方法操作简单,灵敏度高,准确度好,重现性好,可用于测定延胡索总生物碱的含量。     

延胡索总生物碱对慢性低灌注脑损伤大鼠神经保护的作用研究

目的:本研究通过建立永久性双侧颈总动脉结扎复制慢性低灌注大鼠动物模型,探讨延胡索总生物碱(TAC)对脑慢性低灌注损伤的改善作用。方法:选取雄性Wistar大鼠随机分成假手术组、TAC组、阳性对照组和模型组,采用双侧颈总动脉永久性结扎建立动物模型。通过走平横木实验和Morris水迷宫实验,检测精细运动和认知能力;苏木素-伊红染色法观察TAC对脑海马CA1区组织形态学变化;免疫组织化学法检测TAC对脑海马CA1区血管内皮生长因子的表达。结果:与模型组相比,TAC组大鼠精细运动能力和认知功能显著升高(P<0.01),海马CA1区神经元损伤程度减轻,血管内皮生长因子阳性细胞数显著增加(P<0.01)。结论:TAC可明显改善慢性脑低灌注大鼠的学习记忆能力,减轻神经元损伤,提高血管内皮生长因子的表达,对脑神经元有保护作用。     

延胡索抗心肌缺血有效部位化学成分研究

目的:研究延胡索抗心肌缺血有效部位的化学成分。方法:用各种现代色谱分离方法分离延胡索有效部位中的化学成分;用波谱技术(IR、UV、MS、D和D-NMR)鉴定结构。结果:分离并鉴定了9个生物碱类化合物,分别为四氢非洲防己碱(1)、降氧化北美黄连次碱(2)、corunine(3)、脱氢延胡索碱(4)、dehydrocorybulbine(5)、非洲防己碱(6)、黄连碱(7)、巴马汀(8)和小檗碱(9)。结论:化合物2、3、5为首次从该植物中分出。本文还对化合物(3)的NMR谱数据进行了归属。     

延胡索中的生物碱成分

目的:研究延胡索Corydalis yanhusuo块茎60%乙醇提取物的生物碱成分.方法:采用多种色谱学方法进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构.结果:从延胡索块茎60%乙醇提取物的氯仿可溶部分分离得到9个生物碱,分别鉴定为7-醛基脱氢海罂粟碱(1),O-甲基南天竹碱(2),(+)-O-甲基球紫堇碱(3),d-紫堇碱(4),四氢黄连碱(5),8-氧黄连碱(6),巴马亭(7),四氢巴马亭(8)和去氢紫堇碱(9).结论:化合物1为首次从生物样品中获得,首次报道了其核磁数据,化合物3为首次从罂粟科植物中分离得到,化合物6为首次从该植物中分离得到.     

延胡索总生物碱的提取纯化实验研究

目的确定延胡索总生物碱的最佳提取及纯化工艺。方法以延胡索乙素为总生物碱的考察指标,以正交试验优选延胡索总生物碱的最佳提取方法,考察树脂纯化延胡索总生物碱提取液的工艺条件。结果延胡索总生物碱的最佳提取工艺为6倍量80%的乙醇提取3次,每次1.5小时。树脂纯化的最佳工艺为D-101大孔树脂,去离子水洗脱杂质,洗脱体积为7BV,95%的乙醇洗脱总生物碱,洗脱体积为7BV。结论采用此种提取纯化方法,可以较好地提取纯化延胡索中总生物碱。     

延胡索与不同药物配伍中总生物碱含量测定的临床意义

目的测定延胡索和不同药物进行亘己伍后总生物碱的含量,以指导临床的合理用药。方法应用水煎煮法来提取延胡索、白芷与延胡索、当归与延胡索配伍后总生物碱,再以盐酸滴定法提取出其游离生物碱以及生物碱盐类,并调节其pH值,使其于碱性条件下能够用有机溶剂进行萃取,之后将其生物碱提取出并以硫酸的消耗来测定其总生物碱。对比延胡索的配伍中其总生物碱的含量差异。结果所测不同配伍中的延胡索、白芷同延胡索、以及当归同延胡索的总生物碱其含量分别为1．79mg·g-1、2．41mg·g-1、2.01mg·g-1。结论总生物碱其含量最高的为白芷同延胡索的配伍,其次为当归同延胡索的配伍,而延胡索中的总生物碱含量在三者中则最少,为指导临床的合理用药提供初步的根据。     

延胡索生物碱溶出规律的研究

目的 考察延胡索药材在醇提、水煮、人工胃液浸出三种情况下炮制与否对总生物碱溶出的影响。方法 紫外分光光度法。结果 醋制品较生品有利于总生物碱的溶出，醇提对总生物碱的溶出明显优于其它两种方法。结果 传统的醋制工艺对延胡索的制剂具有较广泛的合理性，并且在条件允许的条件下，对延胡索尽可能采用醇提工艺。     

延胡索碱预处理对大鼠心肌缺血再灌注心律失常的干预作用

目的观察延胡索碱预处理对大鼠心肌缺血再灌注心律失常的干预作用。方法将清洁级成年SD大鼠60只随机分为6组(延胡索碱高、中、低剂量预处理组,经典缺血预处理组,注射用水组和假手术组),结扎左冠状动脉前降支近段30min后再灌注60min,用心电图机监测大鼠心电变化,记录再灌注心律失常的出现时间、持续时间以及发生率,同时记录再灌注20min及60min的ST段变化。结果延胡索碱中、高剂量组的室速和室颤的发生率显著降低,与模型组比较差异有显著性(P0.05,P0.01)。延胡索碱低、中、高剂量组心律失常的出现时间明显推迟、持续时间明显缩短,与模型组比较差异有显著性(P0.01)。与模型组比较,缺血预处理组和延胡索碱预处理各剂量组ST段抬高幅度无显著性差异(P0.05),但能明显减慢心率,差异有显著性(P0.01)。结论延胡索碱预处理可减慢大鼠心肌缺血再灌注损伤后增快的心率,还可推迟再灌注心律失常的出现时间,缩短其持续时间,降低室速和室颤的发生率。     

延胡索炮制前后生物碱含量测定及镇痛作用的对比研究

采用酸碱滴定法和电位滴定法分别测定了延胡索生品及两种炮制品水液和氯仿提取液中总生物碱含量,并对各种样品进行了小白鼠镇痛实验的比较。结果表明：醋煮、醋炒延胡索均能提高其水煎煮液和氯仿提取液中总生物碱的含量,并能增强其止痛作用。其中醋炒较醋煮作用显著,氯仿提取法较水煎煮法好。     

流动注射-化学发光法分析延胡索总生物碱

目的:建立检测中药材延胡索总生物碱含量的流动注射-化学发光(CL-FIA)分析法。方法:在酸性环境中,基于延胡索总生物碱对Ce4+-Rhodamine B(罗丹明B)化学发光体系的强烈增强作用,筛选出Ce4+-罗丹明B体系用于CL-FIA检测延胡索总生物碱,并开展干扰试验、方法学验证以及HPLC检测对比。结果:在优化条件下,体系的相对发光强度与延胡索总生物碱在0.014 24~0.227 84μg·m L-1(r=0.996 4)呈良好的线性关系,检出限为0.009 06μg·m L-1,RSD=1.39%(n=11);延胡索总生物碱平均得率为0.597%。结论:该方法分析速度快、成本低、灵敏度较高,为延胡索总生物碱的分析检测提供了另一新途径,具有实际的应用价值。     

基于GSE-1细胞相关活性评价体系的延胡索总生物碱萃取纯化工艺研究

目的通过体外抗溃疡活性来评价延胡索总生物碱有机溶剂萃取的纯化工艺。方法采用酸性染料比色法,以延胡索总生物碱纯度为指标,考察大孔吸附树脂结合有机溶剂萃取纯化的总生物碱纯度,并采用MTT法测定GSE-1细胞相关活性评价,对总生物碱纯度和药效进行相关性分析。结果最佳纯化工艺为1 mol/L的HCl溶解树脂纯化物,1倍药液体积的三氯甲烷除杂,药液加氨水碱化,以1倍药液体积的有机溶剂,按照三氯甲烷-乙酸乙酯-正丁醇的顺序分段综合萃取,合并有机溶剂层。结论所建立的纯化工艺稳定可行,总生物碱纯度>90%,体外抗GSE-1溃疡量效关系明确。     

延胡索的组织培养和生物碱产生

培养基成分的正交设计和单因子试验表明:蔗糖、维生素、NH₄⁺K⁺、H2po^-和植物激素对延胡索愈伤组织生长和生物碱产生有明显影响。提示筛选合适培养基是促进细胞生长和生物碱产生的重要途径之一。定性定量分析表明,来源于块茎,地下茎和花瓣愈伤组织,都有产生生物碱的能力,愈伤组织在分化情况下,其生物碱组成与生药基本一致。     

大孔吸附树脂纯化延胡索总生物碱工艺研究

目的确定大孔吸附树脂纯化延胡索总生物碱的工艺条件。方法以酸性染料比色法测定延胡索总生物碱,HPLC法测定延胡索中盐酸巴马汀、脱氢紫堇碱、延胡索乙素及延胡索甲素;以延胡索总生物碱和4种生物碱的吸附率、洗脱率及质量分数为指标,利用静态吸附和动态吸附实验相结合的方法,对6种大孔吸附树脂进行筛选。通过考察上样量、体积流量、除杂溶剂和体积、洗脱溶剂和体积等因素,优选延胡索总生物碱纯化工艺条件,以5、10倍放大试验考察纯化工艺的稳定性。结果选取D141型大孔树脂用于延胡索总生物碱纯化,纯化工艺为生药0.6 g/m L的上样液,加入径高比1∶5~1∶9的D141大孔吸附树脂柱,以体积流量2 BV/h上样2 BV,1.3 BV纯水除杂,6 BV 95%乙醇以2 BV/h体积流量洗脱。纯化后延胡索总生物碱质量分数高达68.19%,盐酸巴马汀、脱氢紫堇碱、延胡索乙素及延胡索甲素的质量分数分别为1.95%、11.74%、4.93%、6.36%。经5、10倍放大试验得到的延胡索总生物碱质量分数能达到65%以上。结论该工艺经验证试验,总生物碱质量分数能达到65%以上,且延胡索总生物碱及4种生物碱单体的转移率均能达到85%以上,表明D141型大孔吸附树脂能有效纯化延胡索中总生物碱,且适用于工业大生产。     

洋金花总生物碱抗氧化作用的实验研究

本文探讨了洋金花总生物碱对家犬肠缺血再灌注模型的影响。结果表明，洋金花总生物碱能提高内源性ＳＯＤ活力；抑制体内脂质过氧化物的生成，使血液和肠组织ＭＤＡ含量显著降低，亦使肠组织损伤减轻。提示洋金花总生物碱具有明显的抗氧化作用。     

延胡索炮制前后生物碱含量测定及镇痛作用的对比研究

采用酸碱滴定法和电位滴定法分别测定了延胡索生品及两种炮制品水煎液和氯仿提取液中的总生物碱含量 ,并对各种样品进行了小白鼠镇痛实验的比较。结果表明 :醋煮、醋炒延胡索均能提高其水煎煮液和氯仿提取液中总生物碱的含量 ,并能增强其止痛作用。其中醋炒较醋煮作用显著 ,氯仿提取法较水煎煮法好     

延胡索中生物碱成分的研究

目的:建立高速逆流色谱结合半制备高效液相色谱法分离纯化延胡索中生物碱的方法。方法:延胡索生物碱经高速逆流色谱法分离,以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(2∶3∶3∶2)为溶剂系统,上样量300 mg,得到1个混合物和2个生物碱单体。混合物再以半制备高效液相色谱分离,得到2个生物碱单体,所得产物采用ESI-MS,NMR进行结构鉴定。结果:分离得到4个高纯度的生物碱单体:海罂粟碱(125 mg,1)、四氢巴马亭(40.5 mg,2)、d-紫堇碱(23.5 mg,3)、四氢小檗碱(10 mg,4),其纯度分别为96.5%,97.54%,98.3%,97.3%。结论:HSCCC结合半制备高效液相色谱是一种有效的分离制备延胡索生物碱的方法。