吡格列酮保护缺氧复氧诱导乳鼠心肌细胞凋亡的离子通道机制

目的观察吡格列酮对缺氧复氧大鼠心肌细胞凋亡的保护作用,并探讨保护作用与ATP敏感性钾通道开放的关系。方法原代培养的SD乳鼠心肌细胞,分为8组:溶媒组、缺氧复氧组、0.1μmol/L吡格列酮组、1 μmol/L吡格列酮组、2μmol/L吡格列酮组、2μmol/L吡格列酮+30μmol/L HMR-1098组、2μmol/L吡格列酮+0.5mmol/L 5-羟基葵酸盐(5-HD)组、2μmol/L吡格列酮+30μmol/L HMR-1098+0.5 mmol/L 5-HD组。利用膜联蛋白-V与碘化丙啶双染法及Hoechst 33258染色法检测心肌细胞凋亡。结果缺氧复氧组乳鼠心肌细胞发生明显凋亡,经吡格列酮预处理后减少心肌细胞凋亡(P<0.05);与0.1μmol/L、1μmol/L及2μmol/L吡格列酮组比较,5-HD削弱吡格列酮抑制心肌细胞凋亡的作用(P<0.05),HMR-1098无作用(P>0.05)。结论吡格列酮对缺氧复氧乳鼠心肌细胞凋亡具有保护作用,线粒体ATP敏感性钾通道的开放可能介导了吡格列酮的保护作用。     

过氧化物酶体增殖物激活受体与心肌缺血再灌注损伤

过氧化物酶体增殖物激活受体作为核受体超家族的一员,其作用广泛,它涉及脂质和脂蛋白代谢,葡萄糖代谢,细胞增值分裂和凋亡。其中,过氧化物酶体增殖物激活受体与心肌缺血再灌注损伤中也起着重要的作用,现就此作一综述。     

缺血预处理对大鼠心肌中过氧化物酶体增殖物激活受体α表达的影响

目的:探讨缺血预处理(IPC)对实验性大鼠缺血再灌注(IR)心肌梗死(MI)面积及过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)表达的影响。方法:Wistar大鼠70只随机分为3组:对照组(24只),IR组(24只),IPC组(22只)。采用鼠心冠状动脉左前降支结扎法制作体内IR模型,观察MI范围,运用半定量RT-PCR方法对心肌PPARαmRNA的表达情况进行分析,运用Western-blotting方法检测PPARα蛋白表达情况。结果:IPC组梗死面积显著减少(P<0·05),并且心肌PPARαmRNA及蛋白表达水平显著上调(P<0·05)。结论:IPC可显著减少实验性大鼠IR MI面积及并使心肌中PPARα显著上调。     

匹格列酮对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨过氧化物酶体增生物激活受体γ激动剂匹格列酮对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用及作用机制。方法成年Wistar大鼠50只,制作肝脏缺血再灌注模型,随机分为两组。对照组缺血前1h腹膜内注射5％土温-80（10ml／kg）,实验组缺血前1h腹膜内注射匹格列酮（10mg／kg）。两组分别在缺血前、再灌注1、3、6、12h取血测丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）和乳酸脱氢酶（LDH）,取肝脏标本作组织病理学检查。结果实验组与对照组比较,再灌注1、3、6、12h的ALT浓度降低,差异有统计学意义（P均〈0．01）。肝脏组织形态学检查显示实验组较对照组肝脏细胞损伤明显减轻。结论匹格列酮可以减轻大鼠肝脏缺血再灌注后肝组织损伤,并有助于缺血再灌注损伤后肝功能的恢复。     

肝细胞癌组织中PPARα mRNA的表达规律及其意义

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体α(pemxisome proliferator activated receptor α,PPARα)mRNA在肝细胞癌(HCC)中的表达规律及其临床意义.方法 通过荧光定量PCR法测定22例患者HCC组织及相对应的癌旁组织PPARα mRNA表达变化.结果 79.4%(17/22)HCC组织PPARα mRNA表达显著低于癌旁组织(P＜0.05).结论 HCC组织中PPARα mRNA表达下调,这种变化可影响肝细胞的脂质代谢过程,与HCC的发展可能有关,可作为判断HCC预后的一种预测性指标.     

苦参碱对H9c2细胞缺氧复氧损伤的保护作用及机制

目的探讨苦参碱对H9c2细胞缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法建立H9c2细胞缺氧复氧模型,用苦参碱进行干预。取对数生长期细胞,采用随机数字表法随机分成4组:(1)对照组:不作任何处理;(2)缺氧复氧组:将细胞放入缺氧箱中缺氧12 h,再复氧6 h;(3)和(4)苦参碱处理组:分别用含10μmol/L和30μmol/L苦参碱的DMEM完全培养基预处理细胞12 h,然后进行缺氧复氧处理。处理后用MTT方法检测细胞存活率,收集细胞上清,检测丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性,Annexin V-FITC/PI双标法和Tunnel法检测细胞凋亡水平,流式细胞术检测细胞中活性氧(ROS)含量变化,Western Blot检测凋亡信号调节激酶1(ASK1)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)及B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白表达量的变化。结果 (1)细胞生存率:与缺氧复氧组(47.7%±3.4%)比较,苦参碱低剂量组(59.3%±3.1%)和高剂量组(70.6%±2.7%)显著提高(均为P<0.05);(2)细胞凋亡率:与缺氧复氧组(67.4%±6.8%)比较,苦参碱低剂量组(34.6%±4.2%)和高剂量组(18.5%±1.9%)明显降低(均为P<0.05);(3)细胞上清中MDA含量:与缺氧复氧组[(2.17±0.19)nmol/mgprot]比较,苦参碱低剂量组[(1.14±0.21)nmol/mgprot]和高剂量组[(0.83±0.14)nmol/mgprot]显著降低(均为P<0.05);(4)SOD活性:与缺氧复氧组[(128.45±9.34)U/mgprot]比较,苦参碱低剂量组[(147.54±6.47)U/mgprot]和高剂量组[(179.76±5.85)U/mgprot]明显增加(均为P<0.05);(5)ROS含量的荧光值:与缺氧复氧组(935±73)比较,苦参碱低剂量组(1 165±75)和高剂量组(1 535±123)明显增加(均为P<0.05);(6)JNK蛋白表达量:与缺氧复氧组(0.212±0.015)比较,苦参碱低剂量组(0.408±0.027)和高剂量组(0.729±0.085)明显增加(均为P<0.05);(7)ASK1蛋白表达量:与缺氧复氧组(0.343±0.025)比较,苦参碱低剂量组(0.428±0.027)和高剂量组(0.759±0.067)明显增加(均为P<0.05);(8)Bcl-2蛋白表达量:与缺氧复氧组(0.821±0.055)比较,苦参碱低剂量组(0.597±0.047)和高剂量组(0.329±0.037)明显降低(均为P<0.05)。结论苦参碱可以通过影响细胞氧化应激及JNK信号通路,对细胞缺血再灌注损伤起到保护作用。     

PPARγ激活物对缺氧缺血性脑损伤大鼠神经行为学功能的影响

目的探讨激活过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ对缺氧缺血性脑损伤(HIBI)大鼠神经行为学功能的影响。方法 80只成年SD大鼠随机分为假手术组、HIBI组、曲格列酮(TGZ,PPARγ激动剂)组和GW9662(PPARγ抑制剂)组。采用RICE法制备HIBI模型后,TGZ组和GW9662组分别于HIBI后腹腔注射20 mg/kg TGZ或10 mg/kg GW9662。采用早期神经反射分析术后2、4、7 d的悬崖调转、阴性趋地性反射和步态时间,步迹分析术后14 d手术同侧、对侧的步长和趾间距,Morris水迷宫分析术后21 d的游泳距离和逃避潜伏期,干湿质量法测定术后2、4、7 d的脑组织含水量,免疫组化检测术后28 d损伤脑组织中脑神经相关生长蛋白(GAP)-43表达。结果与假手术组比较,HIBI组早期神经反射相关时间指标均延长,手术对侧步长和趾间距及Morris水迷宫的游泳距离、逃避潜伏期和站台所在象限停留时间均缩小,脑组织含水量升高,且GAP-43阳性细胞减少(P0.05)。TGZ可改善HIBI大鼠的以上异常指标(P0.05),但与假手术组仍有显著差异(P0.05);HIBI大鼠以上异常指标经GW9662处理后进一步恶化。结论激活PPARγ可改善HIBI导致的大鼠神经行为学功能异常,减轻脑水肿并促进损伤脑细胞的恢复。     

麦冬皂苷D对大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用及机制研究

目的:探讨麦冬皂苷D对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用及机制.方法:体外培养心肌细胞H9c2,实验分为心肌细胞未行任何干预的对照组、缺氧复氧组(H/R组)、缺氧复氧+麦冬皂苷D组(H/R+OpD组)、缺氧复氧+麦冬皂苷D+磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)过表达组(H/R+OpD+PI3K组)、缺氧复氧+麦冬皂苷D+pcDN...     

甘丙肽受体2激动剂后处理对人胃黏膜上皮细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制研究

胃缺血再灌注损伤常导致胃黏膜细胞钙超载、自由基产生过量、白细胞浸润、微循环障碍。缺氧后处理能有效减轻缺氧/复氧(H/R)造成的损伤。甘丙肽受体2(GaIR2)主要分布于消化系统和神经系统,对许多内分泌活动具有调节作用。目前关于GalR2对预防胃黏膜上皮细胞H/R损伤的作用尚未明确。目的:探讨GalR2激动剂后处理对人胃黏膜上皮细胞H/R损伤的保护作用及其机制。方法:以人胃黏膜上皮细胞GES-1制备H/R损伤模型。实验分为正常对照组(N组)、H/R组、M1145(GalR2激动剂)后处理组(M组)、SB203580(p38MAPK信号阻断剂)+M1145后处理组(S+M组)、DMSO溶剂对照组(D组)。以MTT检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;Hoechst染色法观察细胞凋亡情况;ELISA法检测乳酸脱氢酶(LDH)含量;实时定量PCR检测Bcl-2、Bax、p38MAPK表达水平。结果:H/R组细胞存活率显著低于N组和M组(P0.05);H/R组细胞凋亡率显著高于N、M、S+M组(P0.05),M组凋亡率显著低于S+M组(P0.05);H/R组LDH含量显著高于M组和S+M组(P0.05);N组、M组Bcl-2表达水平显著高于H/R组、S+M组以及D组(P0.05);H/R组Bax表达水平显著高于N、M、S+M组(P0.05);H/R组、S+M组p38MAPK表达水平显著低于M组(P0.05)。结论:GalR2激动剂M1145能有效减轻H/R引起的胃黏膜GES-1细胞损伤,且可能通过p38MAPK途径发挥作用。     

PPARγ激动剂对心肌缺血再灌注损伤的作用

过氧化物酶体增殖剂活化受体γ是胰岛素抵抗的细胞核内靶点,其激动剂作为胰岛素增敏剂临床已用于治疗2型糖尿病。新近研究显示,缺血再灌注时,过氧化物酶体增殖剂活化受体γ激动剂同时具有减轻心肌炎症反应,减少细胞凋亡,减轻心肌缺血再灌注损伤的作用。     

粉防己碱对缺氧和复氧损伤心室肌细胞内Ca2+超载的作用

目的 :研究粉防己碱 (Tet)对培养大鼠心室肌细胞缺氧和复氧损伤时细胞内 Ca2 超载的作用。方法 :采用荧光探针 Fura- 2 / AM结合计算机图像处理技术测定单个心室肌细胞内 Ca2 浓度。结果 :对照组心室肌细胞在缺氧和复氧过程中出现 2次细胞内 Ca2 浓度明显上升 ,维拉帕米 (Ver)处理组 (10μmol/ L )心室肌细胞出现 2次细胞内 Ca2 浓度轻度上升 ;Tet处理组 (30 0μmol/ L )心室肌细胞未出现细胞内 Ca2 浓度上升。两处理组分别与对照组比较均有极显著性差异 (P<0 .0 1) ,两处理组间比较亦有显著性差异 (P<0 .0 5 )。结论 :Tet对缺氧和复氧损伤心室肌细胞内 Ca2 超载有较强的阻抑作用     

4,4’-二异硫氰基芪-2,2’-二磺酸对大鼠缺血再灌注损伤的影响及机制

目的探讨广谱氯离子通道阻滞剂4,4’-二异硫氰基芪2,2’-二磺酸(DIDS)对大鼠缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法雄性SD大鼠36只随机分为3组:缺血再灌注组(A组)、DIDS处理组(B组)和LY294002预处理组(C组)。伊文兰和TTC染色测定心肌梗死范围,TUNEL方法定性和定量检测心肌细胞凋亡指数,Western blot测定蛋白激酶B(Akt)的表达。结果与A组比较,B组心肌梗死范围和心肌细胞凋亡指数明显降低[(38.8±7.7)% vs (54.2±10.8)%,(8.9±1.8)% vs (17.6±3.5)%.P<0.01];磷酸化Akt表达水平明显增加(P<0.01)。与A组比较,C组梗死面积、凋亡指数无明显减小,磷酸化Akt水平无明显变化(P>0.05)。结论 DIDS能够抑制大鼠缺血再灌注所致的心肌细胞损伤,可能是通过信号分子磷脂酰肌酶三羟基激酶/Akt的调节。     

原代培养的大鼠皮质神经元缺氧复氧时神经源性丝氨酸蛋白酶抑制物和组织型纤溶酶原激活物表达的动态变化

目的 探讨原代培养的大鼠皮质神经元在缺氧复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)时神经源性丝氨酸蛋白酶抑制物(neuroserpin,NSP)和组织型纤溶酶原激活物((tissue plasminogen activator,tPA))表达的动态变化.方法 原代培养取自生后24 h内的大鼠大脑皮质神经元,建立原代培养的大鼠皮质神经元H/R模型.采用免疫荧光双标染色和Western印迹法检测培养神经元NSP表达.采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测tPA表达.结果 氧-葡萄糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)1.5 h后NSP蛋白表达轻度上调,复氧6 h时达高峰(P<0.05),然后缓慢下降,复氧24 h时基本恢复至缺氧前水平.OGD 1.5 h时,细胞表达少量tPA(P<0.05),随着复氧时间的延长tPA含量逐渐增高,复氧6 h时较OGD前显著增高(P<0.01),随后逐渐降低,复氧24 h时基本恢复至复氧前水平.结论 NSP和tPA在神经元H/R时表达均显著上调,并且两者的动态变化基本一致.     

大黄素对原代培养小鼠肝细胞非酒精性脂肪变的影响

[目的]观察大黄素对原代培养小鼠肝细胞非酒精性脂肪变的影响。[方法]采用改良的胶原酶原位灌流法分离小鼠肝细胞,以含50%胎牛血清的1640培养液造成肝细胞脂肪变,加入不同浓度大黄素,检测培养上清液肝酶活性并观察细胞形态学变化。[结果]以50%胎牛血清的1640培养液培养的肝细胞明显脂肪变性,大黄素干预组培养上清液丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸转氨酶(AST)、谷氨酰转肽酶(GGT)、乳酸脱氢酶(LDH)活性较模型组显著降低,苏木精-伊红染色显示肝细胞脂肪变性减轻。[结论]大黄素可明显减轻原代培养小鼠肝细胞的脂肪变性。     

X染色体连锁凋亡抑制蛋白对缺氧-复氧诱导的新生大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的:采用X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)对缺氧-复氧诱导心肌细胞凋亡模型进行干预,以探讨脂质体介导XIAP基因转染对缺氧-复氧诱导的新生大鼠心肌细胞凋亡的影响.方法:体外培养新生大鼠心肌细胞,分为4组,①XIAP组:将pDsRed2-XIAP以脂质体转染到心肌细胞48 h后进行缺氧2 h-复氧1 h;②预处理组:先将心肌细胞进行缺氧预处理,然后进行缺氧2 h-复氧1 h;③单纯缺氧-复氧组:将心肌细胞直接进行缺氧2 h-复氧1 h;④常氧组:将心肌细胞在CO2孵箱中培养3 h.各组最后用流式细胞仪Annexin V FITC检测心肌细胞凋亡率结果组间差异.结果:①pDsRed2- XIAP可以通过脂质体转染的方式转染到心肌细胞;②与单纯缺氧-复氧组比较,XIAP组和预处理组心肌细胞凋亡率明显减低,P<0.01;③XIAP组与预处理组比较二者心肌细胞凋亡率相似,P>0.05.结论:以物理性的缺氧2 h-复氧1 h的方式能诱导所培养的心肌细胞发生凋亡;XIAP能明显减少缺氧-复氧诱导新生大鼠心肌细胞的凋亡;XIAP抑制凋亡的效应与缺氧预处理抑制凋亡的效应相似.     

Effects of ethanol and its metabolites on collagen synthesis by cultured rat liver cells

The effects of ethanol and its metabolites on collagen synthesis in cultured rat Ito cells and hepatocytes were studied. In cultured Ito cells, collagen synthetic ability reached peak values after incubation for 24 h and after 8 h in cultured hepatocytes. The distribution patterns of 14C-activity in each collagen fraction were quite different between the two cell types. About 80% of the activity was found in the degraded collagen fraction in the cultured hepatocytes, indicating a rapid turn-over of collagen protein in this cell type. In the Ito cells, the activity in the intact collagen was about 50%. Ethanol and its metabolites added to the incubation medium did not stimulate collagen synthesis in either cell type; rather, they inhibited it. Collagen metabolism in the cells to which ethanol or its metabolites had been added was slower than in the control medium. These results indicate that the pathogenesis of alcoholic liver fibrosis is not simple and that interaction or modulation of cell function in different types of cells should be considered when examining the mechanisms of fibrogenesis in alcoholic liver fibrosis.     

Relationship between cellular ATP content and cellular functions of primary cultured rat hepatocytes in hypoxia

The importance of oxygen in maintaining the functional integrity of hepatocytes has been well established in a variety of experimental models, such as in vivo , perfused liver and isolated hepatocytes. However, one of the shortcomings of these systems is their short life span. Therefore, we have examined the effects of long-term hypoxia on cellular adenine nucleotide content and cellular functions, such as albumin production, urea production and DNA synthesis, in adult rat hepatocytes in primary culture. Hepatocytes were cultured at a density of 11 × 10⁴ and 5 × 10⁴ cells/0.18 mL per cm² for the study of albumin and urea production and DNA synthesis, respectively, at various oxygen tensions (20, 12, 8 and 5%) for 24 h. Cellular ATP content in cultured hepatocytes in hypoxia gradually declined, corresponding to the decrease in oxygen tension, and the cellular ATP level at 5% oxygen was approximately 20% of that at 20% oxygen. Albumin production also decreased in parallel with the decrease in cellular ATP content in cultured hepatocytes in hypoxia. However, even when cellular ATP content gradually declined corresponding with the decrease in oxygen tension in cultured hepatocytes in hypoxia, such as at 8 or 5% oxygen, urea production remained at a high level; in contrast, DNA synthesis was completely suppressed. These results suggest that the cellular ATP content decreases in cultured hepatocytes during long-term hypoxia in relation to oxygen tension and that the relationship between decreased ATP levels and liver function in cultured hepatocytes during hypoxia differs for albumin production, urea production and DNA synthesis.     

FGF1和PD98059对成年大鼠肝细胞FGFR2表达的影响

在体外培养过程中观察生长因子FGF1和MEK特异性阻滞剂PD98059二者对原代培养的成年SD大鼠肝细胞表面与FGF1结合的胞膜受体FGFR2表达量的影响.采用两步法原位灌注取肝细胞,培养到一定时间,加FGF1和PD98059,继续培养一段时间后流式细胞仪检测细胞增殖周期比例和受体FGFR2的表达.对照组和实验组肝细胞,均大量的表达FGFR2,表达量之间没有差异,均在90%左右.FGF1和PD98059对成年SD大鼠肝细胞表面FGFR2的表达没有反馈调节及阻抑作用.     

糖基化终产物对单核细胞源性巨噬细胞过氧化物酶体增殖物激活型受体γ表达的影响

目的研究糖基化终产物(AGEs)对单核细胞源性巨噬细胞过氧化物酶体增殖物激活型受体γ(PPARγ)表达的影响。方法将AGEs-牛血清白蛋白(AGEs-BSA)与佛波酯(PMA)诱导分化72h后的巨噬细胞共同孵育,按加入AGEs-BSA的浓度不同分为A组(50mg/L)、B组(100mg/L)、C组(200mg/L)、D组(400mg/L),另外仅加100mg/L BSA的为对照组,各组分别处理细胞24h,另用200mg/L AGEs-BSA分别于0、12、24、36和48h时处理细胞,运用RT-PCR和Western blot方法检测细胞PPARγmRNA和蛋白的表达。结果细胞PPARγmRNA和蛋白的表达量A组为0.727±0.041和1.260±0.033、B组0.655±0.029和1.059±0.047、C组0.527±0.032和0.899±0.036、D组0.353±0.026和0.415±0.025;较对照组明显降低(P<0.05)。不同时相点作用下,细胞PPARγmRNA和蛋白表达量12h为0.918±0.048和2.830±0.063、24h为0.718±0.023和1.288±0.006、36h为0.567±0.028和0.876±0.037、48h为0.367±0.019和0.455±0.009;较0h时相点比较明显降低(P<0.05)。结论AGEs可抑制单核细胞源性巨噬细胞PPARγmRNA和蛋白的表达,呈浓度和时间依赖性。     

Dose-dependent biphasic effects of phenobarbital on growth and differentiation of primary culture rat hepatocytes

The actions of phenobarbital, a liver tumour promoter, on growth and differentiation of primary culture normal rat hepatocytes change biphasically as a function of its concentration. At low concentrations of 0.5–2 mmol/L, phenobarbital enhances DNA synthesis of normal adult rat hepatocytes in the presence of epidermal growth factor (EGF) and/or dexamethasone. This is also true for normal suckling (1–2-week-old) rat hepatocytes, without added growth factor(s), in serum-free primary culture. Contrarily, phenobarbital at high concentrations (3–4 mmol/L) suppresses DNA synthesis of suckling rat hepatocytes. Furthermore, phenobarbital inhibits DNA synthesis of transforming growth factor-a-stimulated primary hepatocytes from normal adult rats in a dose-dependent manner within a concentration range of 3–6 mmol/L. When normal adult rat hepatocytes are led to undergo multiple proliferative cycles upon stimulation with hepatocyte growth factor (HGF) and EGF in the chemically defined hepatocyte growth medium (HGM), 3 mmol/L phenobarbital also remarkably suppresses DNA synthesis. Phenobarbital at 3 mmol/L effectively keeps these hepatocytes morphologically differentiated and accelerates restoration of the expression of markers characteristic of differentiated cells after the initial cellular growth phase. In addition, phenobarbital efficiently supports prolonged survival of the hepatocytes.